白血病相关原癌基因在氢醌处理TK6细胞中的表达

目的探索氢醌(hydroquinone,HQ)致DNA整体低甲基化的后续结果。方法用磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组为对照组,分别以2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L HQ染毒TK6细胞为处理组。应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测白血病相关原癌基因MPL、BRAF、ERBB2、MYB、MYC和RAF1的表达水平。结果与对照细胞相比,HQ处理细胞MPL和RAF1的mRNA表达量都随HQ剂量增加而上升,其中20μmol/L HQ对原癌基因表达的影响最为明显,分别上升了80%(P0.05)和35%(P0.05);MYB、MYC和ERBB2基因的mRNA表达量随HQ的剂量上升而下降。结论 MPL的转录活化很有可能与HQ导致的DNA整体低甲基化有关。     

氢醌对骨髓间充质干细胞PARP-1和DNA甲基转移酶基因和蛋白表达的影响

目的探讨氢醌(HQ)诱导DNA甲基化改变的分子机制。方法用磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以PBS处理组作为对照,采用实时荧光定量-聚合酶链反应和蛋白质免疫印记法检测2.5、5.0、10.0、20.0μmol/L HQ染毒骨髓间充质干细胞(BMMSCs)聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)和DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3a和DNMT3b基因和蛋白的表达。结果 PARP-1、DNMT1基因和蛋白表达水平均随HQ染毒剂量的增加而升高,呈剂量-效应关系,基因表达的回归方程分别为y=0.030 x+1.283,y=0.075 x+1.088,蛋白表达的回归方程分别为y=0.025 x+1.234,y=0.043 x+1.097,DNMT3a基因和蛋白表达水平随剂量增加而降低,呈剂量-效应关系,基因和蛋白表达的回归方程分别为y=-0.040 x+1.151;y=-0.012 x+1.021。结论 HQ暴露导致基因组DNA甲基化的改变可能与DNA甲基转移酶表达异常有关,且PARP-1可能参与了HQ暴露致DNA低甲基化的过程。     

CpG岛甲基化结合蛋白在氢醌致骨髓增殖性白血病病毒原癌基因转录激活中的作用

目的深入揭示氢醌(HQ)致MPL转录激活的表观遗传学机制。方法以磷酸盐缓冲液(PBS)溶解HQ,以正常TK6细胞、PBS处理细胞为对照组,分别以2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L HQ染毒TK6细胞为染毒组。应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测甲基化CpG结合蛋白1~5(MBD1~5)的表达。结果与对照细胞相比,MBD1~4的mRNA表达量在所有的HQ处理细胞中全部下降,20.0μmol/L HQ对MBD2和MBD4表达的抑制效果最为明显,抑制率分别为50%和32%(P<0.05);而10.0μmol/L HQ对MBD1和MBD3表达的抑制效果最明显,抑制率分别为36%和33%(P<0.05);MBD5表达无统计学意义(P>0.05)。在MPL的CpG岛内有3个MBD1序列特异性结合位点。结论 HQ致MPL的转录激活可能与MBD1表达异常有关。     

白血病相关长链非编码RNA在氢醌诱导TK6恶性转化细胞中的表达及其调控机制

目的探讨氢醌(hydroquinone,HQ)对白血病相关长链非编码RNA(lncRNA)的表达影响及其相关的调控机制。方法以磷酸盐缓冲液(PBS)处理的TK6细胞为PBS对照组,以10.0μmol/L HQ诱导的TK6恶性转化细胞为HQ染毒组;在调控机制探讨中以10.0μmol/L HQ诱导的TK6恶性转化细胞为对照,同时设10.0μmol/L HQ+5μmol/L 5-氮杂胞苷(5-Aza C,DNA甲基转移酶酶抑制剂)组和10.0μmol/L HQ+200 nmol/L曲古抑菌素A(TSA,蛋白去乙酰化酶抑制剂)组。以反转录实时荧光定量-聚合酶链反应(q RT-PCR)检测白血病相关lncRNA表达量以及Tet1、Tet2、Tet3的mRNA表达量。以蛋白免疫印迹检测Tet1、Tet2蛋白表达水平。结果与PBS对照组相比,HQ诱导的TK6恶性转化细胞中lncRNA HOTAIRM1、lncRNA BCO35666和lncRNA NEAT1表达下降,lncRNA HOTAIRM1表达下降最为显著,lncRNA NELT1、lncRNA ANKR036BP1、lncRNA LUNAR1、lncRNA SENCR和lncRNA UCA1表达上升,UCA1的表达升高最为明显;Tet1、Tet2、Tet3的mRNA表达下降,Tet2、Tet3的下降均有统计学意义(P0.05),Tet1、Tet2的蛋白表达下降。与HQ染毒组比较,经5-Aza C与TSA处理的HQ诱导的TK6恶性转化细胞lncRNA HOTAIRM1和lncRNA NEAT1表达上升,而lncRNA BCO35666表达下降;Tet1、Tet2、Tet3 mRNA在HQ+5-Aza C处理组中表达均升高,Tet1、Tet2升高均有统计学意义(P0.05),而在HQ+TSA处理组中Tet1表达升高(P0.05),Tet3表达下降(P0.05);Tet1、Tet2的蛋白表达与mRNA结果一致。结论在HQ诱导的TK6恶性转化细胞中,DNA甲基化与DNA去甲基化可能相互作用共同调控lncRNA HOTAIRM1、lncRNA NEAT1的表达。     

缺锌致海马神经细胞损伤的表观遗传机制初探

目的观察锌缺乏致原代培养的大鼠海马神经细胞损伤中DNA甲基化及组蛋白去乙酰化相关酶的变化,对缺锌致海马神经细胞损伤的表观遗传机制进行初探。方法将原代培养的大鼠海马神经细胞随机分为对照(control);缺锌[四吡啶甲基乙二胺,N,N,N',N'-tetrakis(2-pyridylmethyl)ethylenediamine,TPEN];补锌5和50μmol/L(TPEN+5μmol/L Zn SO_4,TPEN+50μmol/L Zn SO_4)4组,除对照组不加任何处理外,其余3组分别在培养液中加入2μmol/L TPEN,补锌组则对应加入5和50μmol/L Zn SO_4,作用24h。MTT法检测细胞存活率;免疫酶学法检测HDAC活性;RT-PCR法检测DNA甲基转移酶(DNMT3a、DNMT3b)及组蛋白去乙酰化酶HDACs(HDAC1、HDAC2、HDAC3)的m RNA表达水平。结果与对照组比较,(1)缺锌组海马神经存活率明显降低(P0.05);5μmol/L补锌和50μmol/L补锌均可显著抑制TPEN诱导的细胞存活率降低(P0.05)。(2)缺锌组海马神经细胞内DNMT1 m RNA的表达明显上调,DNMT3a m RNA的表达明显下调(P0.05),而5μmol/L补锌组或50μmol/L补锌组均能够显著抑制TPEN诱导的DNMT1 m RNA和DNMT3a m RNA表达异常(P0.05)。与对照组比较,缺锌组海马神经细胞内DNMT3b m RNA的表达无明显变化(P0.05),与对照组比较,50μmol/L补锌后,DNMT3b m RNA表达明显上调(P0.05)。(3)缺锌组海马神经细胞内HDAC活性及HDAC2的m RNA表达明显升高(P0.05),HDAC1及HDAC3 m RNA的表达无明显变化(P0.05);补锌能显著抑制TPEN诱导的HDAC活性及HDAC2 m RNA表达异常(P0.05)。结论细胞内缺锌诱导海马神经细胞损伤,造成DNA甲基化和组蛋白去乙酰化修饰的改变。     

槲皮素及其甲基化产物对大鼠肝细胞DNMTs蛋白表达与活性影响的研究

目的观察槲皮素及其甲基化产物(异鼠李素和柽柳黄素)对DNA甲基转移酶(DNMTs)表达和活性的影响。方法体外培养BRL大鼠肝细胞,以MTT法测定槲皮素甲基化产物和DNMTs活性抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza)对BRL细胞活力的影响;采用HPLC法测定细胞内S-腺苷蛋氨酸(SAM)、S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)的含量;采用试剂盒法检测DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的蛋白表达水平,DNMTs活性及细胞总DNA甲基化水平。结果根据MTT的结果,确定异鼠李素和柽柳黄素的处理浓度为5μmol/L,5-Aza的浓度为20μmol/L,处理时间均为24h。与对照组相比,槲皮素组细胞内SAH含量显著降低(P0.05)。异鼠李素组细胞内SAM含量、SAM/SAH比值显著升高(P0.05),柽柳黄素组细胞内SAM含量显著增加。与对照组比较,槲皮素组DNMT1表达显著降低(P0.05);与槲皮素组和异鼠李素组比较,柽柳黄素组DNMT1则显著增加(P0.05);与异鼠李素组比较,柽柳黄素组DNMT3b表达显著增加(P0.05)。与对照组比较,5-Aza组、槲皮素及其甲基化产物组DNMTs活性均显著降低(P 0.05);与5-Aza组比较,槲皮素组、异鼠李素组DNMTs活性均显著降低(P0.05);与槲皮素组和异鼠李素组比较,柽柳黄素组DNMTs活性显著增加(P0.05)。与其余3组比较,异鼠李素和柽柳黄素组DNA甲基化水平显著增加(P 0.05)结论槲皮素显著抑制DNMTs活性,减少DNMT1的蛋白表达。柽柳黄素提高DNA甲基化水平。槲皮素、柽柳黄素与异鼠李素对DNMTs的作用存在差异。[营养学报,2020,42(3):275-280]     

氢醌对人支气管上皮细胞DNA损伤及细胞周期的影响

目的探讨氢醌(HQ)对体外培养人支气管上皮细胞DNA损伤及细胞周期的影响。方法将HBE细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80、160、320μmo/lL)的氢醌作用24 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定16HBE细胞的相对存活率,用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA的损伤情况,流式细胞术检测细胞周期分布。结果在0～40μmo/lL范围内HQ作用24 h后,16HBE细胞的存活率未见明显变化(P>0.05);当染毒剂量超过80μmo/lL时,细胞存活率明显下降(P<0.01)。SCGE显示随着HQ浓度的升高,16HBE细胞的DNA断裂程度加重。HQ作用浓度在10～320μmo/lL范围内,16HBE细胞的细胞周期表现为G2期阻滞,G1期比例下降。结论 HQ会对16HBE细胞的DNA产生损害,并且引起G2期细胞阻滞。     

香烟烟雾对小鼠卵母细胞染色质构型、DNA甲基化及相关基因表达的影响

目的探讨香烟烟雾暴露对小鼠卵母细胞染色质构型、全基因组DNA甲基化及相关基因表达的影响。方法将清洁级健康ICR雌鼠分成3组(对照组和香烟烟雾低剂量组、高剂量组),分别置于点燃0、1、2支香烟的染毒柜(容积18 L)中,每天2次,每次1 h,共4周。利用Hoechst 33342对细胞核染色,观察卵母细胞质量及染色质构型;间接免疫荧光法分析卵母细胞全基因组DNA甲基化模式,实时荧光定量PCR测定卵母细胞DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMT)1、DNMT3a及DNMT3b基因的mRNA表达水平。结果随着烟雾浓度的升高,去透明带卵母细胞直径显著减小(P0.05),核仁未包围(non surrounded nucleolus,NSN)染色质构型比例明显升高(P0.05)。高剂量组卵母细胞DNA甲基化水平显著下降(P0.05)。随烟雾浓度升高DNMT1表达量降低,DNMT3b在高剂量组中表达水平显著降低(P0.05)。结论香烟烟雾暴露可能通过改变卵母细胞染色质构型,降低DNA甲基转移酶的表达,使DNA甲基化水平下降,从而降低卵母细胞质量。     

短期暴露于纳米SiO_2对HaCaT细胞基因组DNA甲基化的影响

目的探讨纳米SiO2对体外培养细胞基因组总体DNA甲基化水平的影响。方法分别以2.5、5、10μg/ml纳米SiO2溶液和10μg/ml微米级SiO2处理人皮肤表皮细胞系(HaCaT)24h;以3μmol/L DNA甲基化转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷(DAC)处理48 h的10μg/ml组为阳性对照,并设立溶剂对照组。应用高效毛细管电泳(HPCE)定量分析纳米SiO2处理细胞24h后,基因组DNA总体甲基化的变化,用Q-PCR和Western Blot方法检测甲基化相关蛋白mRNA和蛋白的表达变化,并用DNA甲基化转移酶活性试剂盒检测DNA甲基化转移酶的活性。结果 HPCE定量分析结果显示纳米SiO2可引起HaCaT细胞总体甲基化程度降低,呈剂量依赖性关系;与正常细胞相比,微米SiO2以及2.5、5和10μg/ml纳米SiO2组分别降低37.8%、43.9%、54.9%和52.8%,差异有显著性(P<0.05);对照组5-aza-dC处理后使HaCaT细胞甲基化程度减少27.3%。各组酶的蛋白表达与mRNA表达水平及DNMTs活性变化具有相同的变化趋势,经纳米SiO2处理的HaCaT细胞,DNMT1、DNMT3a及MBD2表达随着纳米SiO2剂量的上升而下降,DAC组表达水平最低。结论纳米SiO2能引起HaCaT细胞整体基因组DNA甲基化水平降低,可能与DNA甲基化转移酶的酶活性降低有关。     

急性砷暴露对C57BL/6J和129X1/SvJ小鼠肝脏全基因组DNA甲基化的影响

目的研究常用近交系品系C57BL/6J(B6)和129X1/SvJ(129)小鼠急性砷暴露后肝脏全基因组DNA甲基化的差异。方法将健康成年清洁级雄性野生型B6和129小鼠各18只按体重随机分别分为3组,分别为对照组(生理盐水,24 h),亚砷酸钠(5 mg/kg)染毒后6 h、24 h组,每组各6只。采用一次性灌胃方式进行染毒,采用ELISA法检测肝脏中全基因组DNA甲基化水平,采用Western blot法检测肝脏中DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3b以及砷甲基化相关酶亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10-methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)、甲硫氨酸合成酶(methionine synthetase,MTR)、砷甲基转移酶(CYT19)蛋白的表达水平。结果与对照组相比,亚砷酸钠处理后6 h的129小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平降低,亚砷酸钠处理后24 h的B6小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平升高,差异均有统计学意义(P0.05)。在基础水平下,129小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平高于B6小鼠,差异有统计学意义(P0.05);亚砷酸钠处理后24 h时,129小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平低于B6小鼠,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,亚砷酸钠染毒后24 h的B6小鼠肝脏中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的蛋白表达水平均较高,而亚砷酸钠染毒后6 h的129小鼠肝脏中DNMT1、DNMT3a的蛋白表达水平均较低,差异有统计学意义(P0.05)。基础水平下的129小鼠肝脏中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的蛋白表达水平及亚砷酸钠染毒后24 h的129小鼠肝脏中DNMT3b的蛋白表达水平均高于B6小鼠,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,仅亚砷酸钠染毒后24 h的B6小鼠肝脏中MTHFR、MTR的蛋白表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);而亚砷酸钠染毒129小鼠肝脏中MTHFR、MTR、CYT19的蛋白表达水平均无明显变化。基础水平下的129小鼠肝脏中MTHFR、MTR的蛋白表达水平及亚砷酸钠染毒后6 h的129小鼠肝脏中MTHFR的蛋白表达水平均高于B6小鼠,差异有统计学意义(P0.05)。结论急性亚砷酸钠染毒可升高B6小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平以及DNA甲基转移酶和砷甲基化相关酶蛋白的表达,而降低129小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平以及DNA甲基转移酶和砷甲基化相关酶蛋白的表达。     

氢醌对TK6细胞周期的影响及其相关的调控机制探讨

［目的］ 探讨氢醌（hydroquinone,HQ）对细胞周期的影响及其相关的调控机制。 ［方法］ 磷酸盐缓冲液（PBS）处理人类淋巴母细胞（TK6 细胞）为对照组,20.0 μmol/L HQ为处理组,48 h 后通过碘化丙啶（PI）标记的流式细胞术检测细胞周期分布情况,用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测PTEN（抑癌基因）、p53 基因mRNA表达的改变,流式细胞荧光标记法检测Rb 蛋白的表达。 ［结果］ 与对照组比较,处理组G1 期细胞比例明显增加,S 期细胞比例明显减少,差异均有统计学意义（P 〈 0.05）;HQ作用于TK6 细胞后上调了Rb 的表达,下调了p53 的表达,其差异均有统计学意义（P 〈 0.05）,而对PTEN的表达没有明显影响。 ［结论］ HQ可能通过上调Rb 的表达使细胞阻滞于G1 期。     

氢醌作用下L-O2人肝细胞中聚合酶η的表达及其与DNA损伤耐受的关系

目的 研究氢醌(hydmquinone,HQ)对L-O2人肝细胞中跨损伤合成DNA聚合酶η(Pohη)表达及DNA损伤的影响,探讨Polη在DNA损伤耐受过程中的作用及其可能机制.方法 将L-O2人肝细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80和160 μmol/L) 的HQ作用24 h之后,采用噻唑蓝(MTY)比色法测定细胞相对存活率;单细胞凝胶电泳检测DNA损伤情况;实时荧光定量PCR和Western blotting 技术检测Polη在mRNA 和蛋白质水平上的表达.结果 在0～80 μmol/L 的范围内,HQ对L-O2人肝细胞的存活率没有明显的影响;当染毒剂量超过160 μmol/L 时,其存活率则降为(79.20±7.94)%,与对照组(100.00±3.71)%比较,差异有统计学意义(F=17.11,P＜0.01).随着HQ作用浓度的升高,L-O2人肝细胞DNA链的断裂程度也随着逐渐增加.在HQ染毒剂量0～80μmol/L 的范围内,Polη在mRNA水平(相对定量值依次为1.00±0.00、1.20±0.09、2.02±0.19、2.37±0.10、2.67±0.16和4.40±0.18)和蛋白质水平(相对定量值依次为0.22、0.24、0.34、0.44、0.45和1.25)上的表达均有随着剂量的增加而增加的趋势,80 μmol/L 处达到峰值;当HQ的剂量达到160 μmol/L时,Polη的表达则有所降低,mRNA水平和蛋白质水平相对定量值分别为2.32±0.16和1.20,高于对照组.结论 Polη可能参与了HQ所致L-O2 人肝细胞DNA损伤的耐受过程.     

氢醌/Cu2+对小鼠骨髓细胞线粒体氧化损伤的研究

目的 研究在Cu^2 存在的条件下,氢醌（HQ）对小鼠骨髓细胞线粒体的氧化损伤。方法 染毒：（1）在1μmol/LCu^2 存在的条件下,小鼠骨髓细胞用0、10、20和40μmol/LHQ染毒30min;（2）1μmol/LCu^2 存在的条件下,20μmol/LHQ染毒30、60、120min。观察骨髓细胞死亡率（CDR）、活性氧（ROD）生成、线粒体酶活力和线粒体电位（MMP）的改变。结果 在1μmol/LCu^2 存在的条件,HQ正最低剂量组（10μmol/L)和最染毒时间（30min,20μmol/L）即表现出ROS生成增加（为对照组的374％和541％）、CDR增加（为对照组的115％和117％）、线粒体酶活力下降（为对照组的54％和30％）和存在剂量、时间的依赖关系（ROS：r=0.941,r=-0.981;CDR:r=0.886,r=0.886;线粒体酶活力：r=-0.842,r=-0.902;MMP：r=-0.844,r=-0.961),ROS生成与MMP、CDR和线粒体酶活力间相关密切（r分别为－0。902,0。943,－0。977）。结论 在Cu^2 存在的情况下,HQ可导致小鼠骨髓细胞线粒体氧化损伤。细胞内ROS生成增加致线粒体氧化损伤可能是HQ诱导小鼠骨髓细胞毒性的重要途径之一。     

氢醌对人L-02肝细胞泛素连接酶Rad18表达的影响

目的 研究氧醌(hydroquinone,HQ)对人L-02肝细胞中泛素连接酶Pad18表达的影响,探讨Rad18在HQ所致肝细胞毒性中的作用及其可能机制.方法 将L-02肝细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80和160 μmol/L)的HQ作用24 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率;用单细胞凝胶电泳检测DNA损伤情况;实时荧光定量PCR技术检测Rad18在mRNA水平上的表达;Western blot方法检测Pad18在蛋白质水平上的表达.结果 在0-80 μmoFL的范嗣内,HQ对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响,当染毒剂量超过160 μmol/L时,细胞存活率(79.20%)明显下降,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).随着 HQ作用浓度的升高,L-02肝细胞的Olive尾矩也逐渐增加,呈线性正相关关系(r=920,P<0.01).在HQ染毒剂量低于40μmol/L的范围内,Rad18在mRNA和蛋白质水平上的表达均有随着剂量的增加而增加的趋势;当HQ的剂量超过40 μmol/L时,Pad18在mRNA水平上的表达继续增加,而其在蛋白质水平上的表达则无明显变化.结论 HQ可使L-02肝细胞的Rad18表达增加.     

氢醌对人胚肺成纤维细胞中DNA及细胞核的影响

目的　研究氢醌 (HQ)对人胚肺成纤维细胞 (HLF)DNA及细胞核的损伤作用 ,探讨其遗传毒性。方法　分别用 0、10、2 0、4 0和 80 μmol/L的HQ染毒HLF细胞 3h ,用彗星试验检测DNA损伤。再用相同剂量组HQ染毒HLF细胞 1h ,继续培养 2 4h后进行微核试验。结果　彗星试验结果表明 ,各剂量组细胞DNA拖尾率分别为 12 %、19%、4 2 %、79%和 95 % ,彗星尾长分别为 7 87、9 35、11 0 3、19 2 8和 2 3 32 μm ,有明显的剂量效应关系 ,其中 2 0、4 0和 80 μmol/L剂量组的拖尾率和彗星尾长明显增加 ;且随着HQ剂量的升高 ,高度、重度DNA损伤的比例也逐渐增加。HQ也可致微核、核异常形成 ,各剂量组的微核率分别为 2 %、3%、10 %、9%和 15 % ,核异常率分别为 6 %、7%、16 %、2 7%和 2 8% ,剂量效应关系显著 ,其中 2 0、4 0和 80 μmol/L剂量组的微核率和核异常率显著增加。结论　HQ可致HLF细胞DNA和细胞核损伤 ,产生遗传毒性作用。     

氢醌对A549细胞人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶基因mRNA表达的影响

目的 观察不同浓度氢醌(hydroquinone,HQ)对人肺腺癌A549细胞活性氧(reactiveoxygen species,ROS)、脂质过氧化损伤产物丙二醛(malonaldehyde,MDA)、抗氧化酶活性以及氧化损伤修复酶人8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(human 8-oxo-guanine DNA glyeoslase,hOGG1)基因mRNA表达的影响,探讨HQ毒作用的分子机制.方法 不同浓度HQ作用于A549细胞,噻唑兰(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法测定细胞存活率,荧光探针检测细胞内ROS的变化,比色法测定MDA含量和过氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及谷胱甘肽过氧物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力,逆转录聚合酶链反应(reverse transeription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术分析hOGG1基因mRNA的表达.结果 随着HQ浓度的增加,各实验结果为:(1)A549细胞的吸光度值(A值)下降,160 μmol/L和320 μmoL/L浓度组[(0.584±0.098)、(0.328±0.066)]与对照组(0.989±0.150)相比差异有统计学意义(q值分别为5.56、9.07,P值均<0.05),且两组细胞存活率均低于80%;(2)A549细胞内ROS生成增多,40 μmol/L和80 μmoL/L浓度组A值[(39.80±4.15)、(101.99μ9.45)]与对照组(5.71±0.50)相比差异有统计学意义(q值分别为10.74、30.32,P值均<0.05);(3)SOD、GSH-Px活性下降,活性值在80 μmol/L时[(22.93±0.56)U/mg prot、(25.60±2.31)U/mg prot]均低于对照组[(25.62±0.28)U/mg prot、(38.97±2.61)U/mg prot],差异有统计学意义(q值分别为12.17、8.78,P值均<0.05);MDA含量升高,在40 μmol/L和80 μmol/L[(1.07±0.01)nmol/mg prot、(1.19±0.08)nmol/mg plot]时高于对照组[(0.77±0.04)nmol/mg prot],差异有统计学意义(q值分别为10.90、15.49,P值均<0.05);SOD(r=-0.95,F=20.00,P=0.04)与GSH-Px(r=-0.99,F=115.48,P=0.01)活力的下降和MDA(r=0.96,F=21.31,P=0.04)含量的升高均与HQ浓度的变化具有剂量-反应关系;(4)RT-PCR结果显示:HQ作用后,A549细胞hOGG1 mRNA的表达呈下降趋势,80 μmoL/L浓度组hOGG1 mRNA的表达(0.478±0.017)与对照组(0.715±0.038)相比降低较明显(q=11.70,P<0.05).结论 HQ可以诱导细胞活性氧增加和hOGG1基因mRNA表达水平下降,提示氧化损伤是HQ毒作用的重要机制.     

氢醌对人L-02肝细胞泛素结合酶Rad6B表达的影响

目的研究氢醌(HQ)对人L-02肝细胞中泛素结合酶Rad6B表达的影响。方法将L-02肝细胞用不同浓度(0、5、10、20、40、80和160μmol/L)的HQ处理24h之后,采用实时荧光定量PCR技术检测Rad6B在mRNA水平上的表达;采用Western blot方法检测Rad6B在蛋白质水平上的表达。结果在0～160μmol/L的范围内,HQ可诱导Rad6B在mRNA和蛋白质水平上表达的增加,具有随着剂量的增加而升高的趋势;并且各染毒剂量组(5、10、20、40、80和160μmol/L组)肝细胞Rad6B在mRNA和蛋白质水平上的表达均明显地高于对照组(0μmol/L组)(P<0.01);当HQ的作用浓度达到160μmol/L时,Rad6B的表达水平达到最大值,其mRNA和蛋白质表达的相对定量值分别为4.35和0.85。结论HQ可使L-02肝细胞的Rad6B表达增加。     

氢醌诱导下肝细胞XPV基因mRNA表达规律的研究

目的研究氢醌(HQ)对L-02肝细胞XPV基因mRNA表达的影响及其规律,探讨XPV基因在HQ所致肝细胞毒性过程中分子作用机制。方法体外培养的L-02肝细胞经40μmol/L的HQ诱导后,采用实时荧光定量PCR法检测不同时间点(6、12、24和48h)XPV基因mRNA的表达;并检测不同剂量(0、5、10、20、40、80和160μmol/L)HQ诱导24h后,各浓度组XPV基因mRNA的表达。结果在24h的时间范围内,XPV基因在mRNA水平上的表达无论是染毒组(40μmol/L)还是正常对照组,均具有随时间的延长而增加的趋势;到24h时,相对表达量达到最大值,当培养时间达到48h时,该基因的表达则有所下降;此外,在各时间处理组(6h、12h、24h和48h)中,染毒组L-02肝细胞内XPV基因在mRNA水平上的表达均高于正常对照组。各剂量HQ作用24h后,L-02肝细胞内XPV基因mRNA的表达在0～80μmol/L范围内随着剂量的增加而增加,以正常对照组XPV基因的相对表达量为1,各染毒剂量组内XPV基因mRNA的相对表达量分别增至1.20、2.02、2.37、2.67、4.40和2.32倍;80μmol/L时其相对表达量达到峰值,160μmol/L的HQ作用后,其表达却有所下降,但仍高于正常对照组。结论HQ可以诱导XPV基因mRNA的表达变化,并且呈现一定的时间和剂量依赖性,提示XPV基因可能参与了肝细胞对HQ的应答过程。     

hOGG1基因低表达对氢醌的细胞毒性及遗传毒性的影响

目的 探讨hOGG1基因低表达对氢醌(HQ)的细胞毒性及遗传毒性的影响.方法 0、5、10、20、40、80μmol/L浓度的(HQ)染毒A549细胞和hOGG1基因低表达的A549-R细胞,噻唑蓝比色法检测2种细胞存活率,荧光法测定2种细胞内活性氧(ROS)含量,微核试验分析2种细胞染色体损伤,彗星试验观察细胞的DNA损伤和修复.结果 随着HQ染毒浓度的增加,2种细胞的存活率均下降,A549-R细胞和A549细胞IC50分别为160.49和228.42 μmol/L,且差异有统计学意义(P＜0.05).0、5、10、20、40、80 μmol/L HQ染毒组A549-R细胞ROS含量、微核率均明显高于A549细胞,差异有统计学意义(P＜0.05);各浓度HQ染毒组A549-R细胞拖尾率和Olive尾距(OTM)值均明显大于A549细胞,并有剂量-反应关系,差异有统计学意义(P＜0.05).hOGG1基因低表达的A549-R细胞比A549细胞对HQ引起的DNA损伤修复更慢,修复2.0 h后才出现拖尾率和OTM值的明显降低,3.0 h后仍未完全修复.结论 氧化损伤可能是HQ毒作用的机制之一,hOGG1基因低表达可增加A549-R细胞对HQ的敏感性.