正、反义组织金属蛋白酶抑制剂1基因转染对肾小球系膜细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨正、反义组织金属蛋白酶抑制剂1（TIMP－1）对肾小球系膜细胞凋亡的影响。方法 利用前期工作中克隆出的人TIMP－1全长cDNA,分别构建出表达正义及反义TIMP－1的重组真核表达载体pcDNA3-TIMP-1(PTs),pcDNA3-ATIMP-1(PTas),并将上述重组质粒转染至大鼠的肾小球系膜细胞中,Northern杂交检测正、反义TIMP－1的表达。无血清诱导大鼠系膜细胞凋亡,利用DNA缺口末端标记（TUNEL）分析、DNA电泳技术在无血清后的不同时间点检测细胞凋亡,RT－PCR的方法检测凋亡相关基因的表达。结果 转染PTas的大鼠系膜细胞可以高效表达反义TIMP－1,无于血清诱导12h开始发生凋亡;无外源基因转染及空载体转染的大鼠系膜细胞在无血清48h发生凋亡;而转染正义TIMP－1的大鼠系膜细胞可高效表达正义TIMP－1,在无血清4d时才发生凋亡。TIMP－1的高表达或低表达可引起大鼠系膜细胞bax的下调或上调,但并不影响bcl-2的表达。结论 TIMP－1可以抑制无血清诱导的大鼠系膜细胞的凋亡,反义TIMP－1对之则有促进作用。这提示TIMP－1在肾脏除了抑制细胞外基质的作用外还具有新的功能。     

利用RNA干扰技术研究PTX1在鼻咽癌中的功能

目的: 探讨位于鼻咽癌高频扩增区 12p12-p11的PTX1基因在鼻咽癌中的表达及生物学功能.方法:用RT-PCR和荧光定量RT-PCR检测PTX1在36例鼻咽癌及8例慢性鼻咽炎中的表达.构建发夹状pSUPER-shPTX1干扰载体,转染鼻咽癌细胞系6-10B.mRNA水平检测PTX1基因的干扰效果,采用细胞周期及细胞凋亡检测PTX1被干扰后对鼻咽癌细胞6-10B细胞生物学特性的影响.结果:RT-PCR和荧光定量RT-PCR显示PTX1在鼻咽癌中高表达(P＜0.05).RNA干扰PTX1能抑制鼻咽癌细胞系的细胞增殖,诱导凋亡.结论: RNAi对 PTX1的表达阻断改变了鼻咽癌细胞系6-10B的生物学特性,提示鼻咽癌12p12-p11扩增区获得的PTX1基因可能通过促进细胞的增殖和减少凋亡双途径来参与鼻咽癌的发生发展.     

保肝中药复方对肝星形细胞组织金属蛋白酶抑制剂表达及凋亡的干预

目的观察保肝中药复方药物血清对传代肝星形细胞组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)表达及凋亡的影响,以探讨其抗肝纤维化的作用靶点.方法采用大鼠肝星形细胞分离培养,免疫组化ABC法检测肝星形细胞TIMP-1表达与药物血清的干预,经图像分析定量;Giemsa染色和TUNEL染色计算凋亡细胞百分比.结果药物血清组的肝星形细胞TIMP-1阳性反应物吸光度与对照组比P＜0.05;细胞凋亡率为10.3%.结论保肝中药复方药物血清能抑制肝星形细胞TIMP-1的表达,并促进活化的肝星形细胞凋亡.     

Effects of (-)-epigallocatechin-3-gallate on expression of matrix metalloproteinase-1 and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 in fibroblasts irradiated with ultraviolet A

Skinphotodamage,aresultofultravioletirradiation,ismainlyduetotheimpairmenttostructuralproteinsofthedermisandthebasementmembraneHistologicalanalysisindicatesthatmajormodificationsincludedegenerationofcollagenfibersandmatrixmetalloproteinase(MMP)inducedchangesintheratiosofdifferenttypesofcollagen1　()Epigallocatechin3gallate(EGCG)isthemajorandmosteffectiveantioxidantingreenteaandcanofferprotectionagainsttheultravioletinduceddepletionofantioxidantenzymesandtheinductionofepidermallipidperoxidati…     

Tissue inhibitor of metalloproteinase-1 counteracts glucolipotoxicity in the pancreatic β-cell line INS-1

Background  Glucolipotoxicity might play an important role in the β cell decompensation stage during the development of obesity-associated type 2 diabetes. Tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1) inhibits matrix metalloproteinase (MMP) activity and regulates proliferation and apoptosis of a variety of cell types, including pancreatic β-cells. In the present study, we investigated whether TIMP-1 counteracts glucolipotoxicity in the pancreatic β-cell line INS-1.

Methods  INS-1 cells were incubated in normal or high glucose, with or without palmitate (0.4 mmol/L), in the presence of TIMP-1 or MMP inhibitor GM60001. In some experiments, cells were pretreated with phosphatidylinositol-3 (PI-3) kinase inhibitor, LY294002 or wortmannin. The amount of dead INS-1 cells was determined by HO342 and propidium iodide staining. Akt phosphorylation was evaluated by Western blotting analysis to investigate a possible mechanism of TIMP-1’s action.

Results  TIMP-1 protected INS-1 cells from glucolipotoxicity independent of MMP inhibition. TIMP-1 stimulated Akt phosphorylation. Inhibition of the PI-3 kinase pathway abolished the survival effect of TIMP-1.

Conclusion  TIMP-1 may counteract glucolipotoxicity induced β-cell death via a PI-3 kinase pathway.

     

大鼠肾小球系膜细胞活性氧簇JAK2/STAT5通路与TIMP-1之间的关系及对其凋亡的影响

目的:探讨高糖(HG)条件下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)活性氧簇(ROS)、JAK2/STAT5信号通路与金属蛋白酶1组织抑制剂(TI MP-1)之间的关系及对其凋亡的影响。方法:在HG培养条件下的RMC中,根据是否使用DPI(NADPH氧化酶特异性抑制剂,可抑制ROS产生)和AG490(JAK2特异性抑制剂)刺激24 h,将RMC分为HG组、HG+AG490组、HG+DPI组和HG+AG490+DPI组四组。采用流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,RT-PCR检测各组RMC Bcl-xl、Cyclin D1、P27kip1、JAK2和TI MP-1 mRNAs的表达,Western blot检测胞浆中JAK2、STAT5及相应磷酸化蛋白的表达。结果:HG组、HG+AG490组、HG+DPI组和HG+AG490+DPI组的细胞总凋亡率分别为:(10.69±0.26)%、(20.52±0.51)%、(24.56±0.36)%和(26.01±0.28)%;加入AG490和(或)DPI后RMC总凋亡率明显升高(P<0.01),Bcl-xl、Cyclin D1、JAK2和TI MP-1 mRNAs表达显著减少,P27k...     

基质金属蛋白酶1及其抑制剂在舌癌浸润性转移中的作用

目的检测舌癌黏膜固有层组织中基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的表达,揭示它们在舌癌浸润和转移中的作用。方法应用ABC免疫组织化学染色方法分别检测舌癌标本及正常组织各取材部位中MMP-1、TIMP-1的免疫学定位及表达情况。结果舌癌组织的MMP-1和TIMP-1的阳性表达率与对照组相比,差异有高度统计学意义（P〈0.01）;舌癌组织中的MMP-1和TIMP-1的表达与舌癌大小无关（P〉0.05）,而与舌癌分化程度、有无转移、病理分级等具有差异（P〈0.05或P〈0.01）。结论 MMP-1和TIMP-1在舌癌黏膜固有层组织中的表达关系,有助于判断舌癌的侵袭和转移及病理分期。     

白藜芦醇与紫杉醇联合应用对肺癌细胞PC9的杀伤效应

目的:探讨白藜芦醇(RES)联合紫杉醇(PTX)对人肺癌细胞PC9的凋亡作用及其机制。方法:不同浓度的RES和PTX单用和联合作用于PC9细胞后,分别采用四甲基偶氮唑蓝法测定其对PC9的增殖抑制作用,流式细胞术检测其对细胞周期分布和凋亡的影响,Western blot法检测Caspase-3蛋白、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡Bax表达的变化。结果:10、20、30 μmol/L的RES和0.001、0.01、0.1 μmol/L的PTX均以时间和浓度依赖方式抑制PC9细胞的增殖,RES联合PTX的抑制率高于RES和PTX单用组(P<0.01)。单用RES和PTX均能诱导PC9细胞发生凋亡和G₀/G₁期阻滞,两者联合应用,诱导细胞凋亡和G₀/G₁期阻滞作用显著增强(P<0.01)。Western blot法检测显示在RES和PTX联用之后,Caspase-3蛋白、Bcl-2、Bax的改变显著大于单药作用。结论:RES、PTX均可抑制人肺癌PC9细胞增殖、诱导其凋亡、阻滞细胞G₀/G₁期、伴随Caspase-3活性上调,且两者联合应用具有协同作用,可显著促进细胞凋亡,其机制可能与上调凋亡蛋白Bcl-2、下调抗凋亡蛋白Bax有关。     

脱氢表雄酮对白细胞介素-1β诱导的人骨关节炎软骨细胞退变的影响

目的:研究脱氢表雄酮(DHEA)对白细胞介素(IL-1β)诱导的人骨关节炎软骨细胞退变的影响。方法:分离人骨关节炎软骨细胞传代培养并加入IL-1β,分别将50,25和12.5μmol/L的DHEA作用于该软骨细胞。其后检测细胞增殖、上清液糖胺聚糖(GAG)和NO含量、细胞凋亡以及质金属蛋白酶-1及其组织抑制剂-1(MMP-1和TIMP-1)含量。结果:50,25和12.5μmol/L的DHEA均能促进软骨细胞增殖和GAG合成(均P<0.01),抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡(均P<0.01)以及MMP-1合成(均P<0.01);50和25μmol/L的DHEA可抑制IL-1β诱导的软骨细胞NO形成(均P<0.01),还可抑制软骨细胞自身的凋亡(均P<0.01)和MMP-1合成(均P<0.05),其效应呈浓度依赖性;50μmol/L的DHEA还可改善IL-1β对骨关节炎软骨细胞TIMP-1合成的抑制作用(P<0.05)。结论:脱氢表雄酮能在一定程度上对抗IL-1β诱导的人骨关节炎软骨细胞退变。     

低频超声联合微泡造影剂通过激活内质网应激逆转前列腺癌紫杉醇耐药

目的 探讨低频超声联合微泡造影剂辅助紫杉醇逆转前列腺癌耐药的作用和机制.方法 筛选超声辐照紫杉醇耐药前列腺癌细胞株PC-3R的非毒性照射时间;将PC-3R细胞随机分为对照组、紫杉醇组(PTX组)、低频超声组(LFUS组)、紫杉醇和低频超声组(PTX+LFUS组),以及紫杉醇和低频超声联合微泡剂组(PTX+ LFUS+ UCA组),分别进行干预.AnnexinV-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡;q-PCR法检测各组细胞Bcl-2和多耐药基因表达变化;Western blot检测各组细胞GRP78和c-jun蛋白表达.GRP78 siRNA转染PC-3R细胞,微泡和低频超声联合处理后,Western blot检测GRP78蛋白表达,Annexin V-FITC/PI双染法检测凋亡情况.结果 低频超声照射频率1 MHz,强度1.2 W/cm2,非毒性照射时间为10 s.与单纯应用紫杉醇相比低频超声辅助紫杉醇处理前列腺耐药细胞可显著提高细胞凋亡率(P＜0.01),联合微泡剂照射后,凋亡率进一步提高(P＜0.01),并下调Bcl-2和多耐药基因的表达.PTX+ LFUS+UCA组内质网应激相关蛋白GRP78的表达较PTX组和PTX+LFUS组升高,c-jun的表达下降(P＜0.01).应用siRNA干扰GRP78基因表达后,细胞凋亡率下降(P＜0.01).结论 低频超声联合微泡造影剂通过激活内质网应激,抑制其下游JNK/c-jun通路下调多耐药基因及凋亡抑制基因的表达,提高化疗药物诱导细胞凋亡的作用,逆转肿瘤细胞的耐药性.     

益气活血中药对心力衰竭大鼠MMP-1、TIMP-1影响的实验研究

[目的]观察益气活血复方对慢性心力衰竭大鼠心肌组织基质金属蛋白酶1(MMP-1)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达的影响。[方法]选用雄性SD大鼠,采用冠状动脉结扎术配合饥饿、游泳等方法造成慢性心力衰竭的动物模型。将造模成功的大鼠随机分为3组:模型组、中药组和西药对照组;中药干预6周后,将动物处死,取其心肌组织,利用实时定量荧光聚合酶链反应(PCR)技术和蛋白印迹分析法(Western blot)分别检测心肌组织中MMP-1、TIMP-1基因表达和蛋白表达。[结果]与对照组比较,大鼠模型组MMP-1的表达高于正常组(P<0.01),而TIMP-1的表达明显低于正常组(P<0.01);中药组和西药组MMP-1的表达均低于模型组(P<0.01),TIMP-1的表达明显高于模型组(P<0.01)。[结论]益气活血中药可以下调MMP-1的表达,增加TIMP-1的表达,从而阻止MMP-1对心肌细胞外基质结构的破坏作用,延缓心肌重塑,改善心脏功能,从而阻止CHF的发展。     

基质金属蛋白酶组织抑制因子-1在肝硬化组织中的表达及意义

目的:了解基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在肝硬化组织中的表达和分布状态.方法:采用免疫组化法(S-P)检测52例肝硬化患者肝组织中TIMP-1的表达.结果:52例肝硬化患者肝组织中TIMP-1蛋白表达的阳性率为100%,而正常肝组织未见阳性表达,差异有统计学意义(P＜0.01).TIMP-1表达的阳性信号均位于肝细胞胞浆中,细胞核中无表达.结论:(1)肝硬化患者肝细胞中存在TIMP-1的表达,其表达强度与肝组织病理改变相关.(2)检测TIMP-1的表达可对肝硬化病变从分子水平进行评估,也可作为早期诊断及临床治疗和判断预后的分子病理学指标.     

肝纤维化大鼠TGF-β1与TIMP-1 mRNA的表达及补肾柔肝方的治疗作用

目的:探讨中药复方补肾柔肝方对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)诱导大鼠肝纤维化后肝脏组织金属蛋白酶抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)和转化生长因子β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)的影响,以了解其对肝纤维化的治疗作用和分子机制.方法:雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、模型组和治疗组,对模型组和治疗组运用DMN诱导大鼠肝纤维化.治疗组在造模4周后给予补肾柔肝方灌胃,剂量10 g·kg-1·d,共治疗4周.第8周末处死全部大鼠,对肝组织进行HE和天狼猩红染色观察,并采用RT-PCR半定量方法,检测大鼠肝组织TIMP-1及TGF-β1mRNA的表达水平.结果:肝组织病理学研究结果显示DMN可以成功诱导大鼠肝纤维化,模型组肝组织TIMP-1和TGF-β1mRNA表达明显增强,中药复方治疗组与模型组相比明显减弱,而正常对照组表达较少.结论:TIMP-1与TGF-β1mRNA的表达与肝纤维化的发生密切相关,中药复方补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TIMP-1及TGF-β1具有明显的抑制作用,可达到抗肝纤维化的作用.     

大鼠肝纤维化基质金属蛋白酶抑制剂-1 mRNA表达与弥散加权成像表观扩散系数的相关性

目的：探讨大鼠肝纤维化不同分期肝表观扩散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)与基质金属蛋白酶 抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1) mRNA表达的相关性。方法：采用猪血清腹腔注射联合高脂饮 食建立肝纤维化大鼠模型。给药4周后开始,取实验组大鼠48只和对照组大鼠12只行磁共振弥散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)检查,计算b值=800 s/mm2时的ADC值。DWI检查后快速处死大鼠,行病理检查,采用RT-PCR 检测TIMP-1 mRNA表达。成模大鼠按肝纤维化病理分期结果又分为S0期组(n=4)、S1期组(n=11)、S2期组(n=12)、S3期 组(n=10)和S4期组(n=9),比较肝纤维化各组ADC值及TIMP-1 mRNA的表达,并分析两者的相关性。结果：对照组、 肝纤维化S1~4期组大鼠肝ADC值及TIMP-1 mRNA表达差异有统计学意义(分别F=46.54和53.87,均P<0.05),ADC值除 对照组与肝纤维化S1期组、S1期组与S2期组、S2期组与S3期组比较差异无统计学意义(均P>0.05)外,其余各组间比较 均有统计学意义(均P<0.05);各组TIMP-1 mRNA除肝纤维化S1期组与S2期组、S3期组与S4期组比较差异无统计学意义 (均P>0.05)外,其余各组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。秩相关分析显示肝ADC值与TIMP-1 mRNA表达的变化呈 负相关(r=–0.76,P<0.01)。结论：随大鼠肝纤维化进程不断加深,ADC值逐渐减低,TIMP-1 mRNA表达逐渐升高,二 者呈负相关。     

基质金属蛋白酶组织抑制因子-1在大肠癌中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）在大肠癌中的表达及临床意义。方法 采用免疫组化S-P法对54例大肠癌组织的TIMP-1进行检测,结合临床资料进行分析。结果 TIMP-1主要表达于大肠上皮细胞膜和细胞浆,正常大肠组织表达率为100％,在大肠癌组织的表达率为59．6％（31／52）,且淋巴结转移大肠癌组表达低于无淋巴结转移组（P〈0．05）。结论 TIMP-1的表达程度与大肠癌淋巴结转移呈负相关,TIMP-1的表达程度降低在大肠癌病程演进中可能发挥一定的作用。     

病理性瘢痕组织中基质金属蛋白酶-1、金属蛋白酶组织抑制剂-1、血小板源性生长因子、增殖细胞核抗原的表达

目的:探讨病理性瘢痕组织中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、血小板源性生长因子(PDGF)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及意义.方法:采用免疫组织化学方法检测58例病理性瘢痕、16例正常皮肤及16例非病理性瘢痕组织中MMP-1、TIMP-1、PDGF及PCNA的表达情况.结果:病理性瘢痕组织中MMP-1、TIMP-1、PDGF阳性表达率及PCNA指数均高于非病理性瘢痕及正常皮肤组织(P均＜0.05).病理性瘢痕组织中TIMP-1与PDGF、MMP-1、PCNA及PDGF与PCNA表达均呈正相关(P均＜0.05).结论:病理性瘢痕的形成与MMP-1、TIMP-1、PDGF及PCNA相互作用失衡有关.     

醛固酮对人肾小管上皮细胞MMP-1/TIMP-1基因表达和合成分泌纤维连接蛋白的影响

目的 探讨醛固酮(ALD)对人肾小管上皮细胞基质金属蛋白酶1(MMP-1)和金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)基因表达,以及合成分泌纤维连接蛋白(FN)的影响.方法 人肾小管上皮细胞(HK-2)培养于含5％ FCS的DMEM/F12培养液中,以不同浓度的ALD (10-11、10-10、10-9、10-8mol/L)刺激HK-2细胞48h后,应用半定量RT-PCR法检测细胞中MMP-1、TIMP-1和FN的基因表达,ELISA法测定培养上清液中纤维连接蛋白(FN)的含量.结果 ALD呈剂量依赖性地下调HK-2细胞中MMP-1的基因表达,上调TIMP-1和FN的基因表达,MMP-1/TIMP-1比值降低(P＜0.05).ALD呈剂量依赖性地增加培养上清液中FN的含量(P＜0.05).结论 ALD通过调控HK-2细胞中MMP-1和TIMP-1的基因表达,促进其合成分泌FN,导致肾间质纤维化的进展.     

心肝宝对在糖尿病大鼠肾脏MCP-1、TIMP-1表达的影响

目的研究糖尿病大鼠中MCP-1、TIMP-1等细胞因子的表达以及心肝宝对糖尿病大鼠肾脏MCP-1、TIMP-1表达的影响。方法选取雄性Wistar大鼠36只,行右肾切除术后两周,随机分成正常对照组(A组),糖尿病大鼠对照组(B组)和糖尿病大鼠治疗组(C组)。采用HE、PAS染色,行肾脏组织形态学分析,用Real time FQ-PCR检测MCP-1、TIMP-1等细胞因子的mRNA表达情况。结果糖尿病组大鼠肾脏MCP-1、TIMP-1的mRNA表达均明显升高。治疗组大鼠肾脏MCP-1、TIMP-1的mRNA表达均有不同程度下调。结论DN大鼠肾脏MCP-1、TIMP-1炎症相关的细胞因子表达水平显著升高DN大鼠肾脏肥大、系膜ECM沉积以及UAER增加均与肾脏MCP-1、TIMP-1细胞因子的高表达有关。提示炎症参与了DN肾脏病理改变和肾功能损害的发生和发展。心肝宝可下调肾脏MCP-1、TIMP-1等细胞因子mRNA的表达,从而减少ECM沉积、抑制肾脏肥大、降低尿蛋白,防止DN的发生发展。心肝宝可通过非特异性抗炎作用对DN产生保护作用。另外,心肝宝对DN脂代谢紊乱有显著调节作用。并且心肝宝对肾脏TIMP-1表达的...     

子宫内膜异位症中TIMP-1基因表达的研究

目的研究TIMP-1基因在子宫内膜异位症发生中的作用。方法采用免疫组织化学SP法研究25例内异症和22例正常子宫内膜组织中TIMP-1的蛋白表达情况;采用RT-PCR方法研究33例内异症的异位子宫内膜组织和30例正常子宫内膜组织中TIMP-1基因的mRNA表达情况。结果子宫内膜异位症组中的TIMP-1的蛋白表达水平和mRNA表达水平与正常子宫内膜对照组相比,无显著性差异(P>0.05)。结论TIMP-1主要是以一种与MMPs保持平衡的状态来维持正常子宫内膜环境,只有与MMPs的比例失去平衡时,才可能会导致子宫内膜异位症。     

MMP-9及TIMP-1在支气管扩张症患者气道中的表达

目的研究基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其天然抑制因子金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在支气管扩张症患者气道中的表达情况,并分析TIMP-1/MMP-9比值失衡情况与支气管扩张症发病及病情进展的关系。方法本实验采用病例对照研究,分设支气管扩张症组、肺炎组及正常对照组,而支气管扩张症组又分为轻、中、重3个亚组。收集支气管肺泡灌洗液,ELISA法检测其中MMP-9及TIMP-1的浓度,并计算TIMP-1/MMP-9比值,同时取气管内膜组织,免疫组化法检测其中MMP-9及TIMP-1的表达。结果 MMP-9在支气管扩张症组的支气管肺泡灌洗液中明显升高(P=0.000),但TIMP-1却无明显升高,TIMP-1/MMP-9比值明显低于肺炎组及正常对照组(均为P=0.000);MMP-9在支气管扩张症患者中随严重程度的增加其浓度亦升高,但TIMP-1却无同步上升,TIMP-1/MMP-9比值重度组较轻度组有明显下降(P=0.005)。结论BE患者中存在TIMP-1/MMP-9比值失衡,且随着病情进展,该比值的失衡情况逐渐加重,提示TIMP-1/MMP-9比值失衡在BE的疾病发生及病情进展中有着重要作用。