乙酰肝素酶诱导大鼠移植动脉硬化的作用

目的探讨乙酰肝素酶在同种异体血管移植中的作用及其与移植动脉硬化的关系。方法实验分为两组,实验组:以Wistar大鼠为供者,SD大鼠为受者,取供者肾下腹主动脉(长约1 cm),正位替换受者同部位主动脉,建立腹主动脉移植模型。对照组:仅将SD大鼠相应的腹主动脉切断后再行原位吻合。术后60 d时,应用逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学法和计算机图像分析方法分别检测各组腹主动脉的乙酰肝素酶水平、炎性细胞浸润程度(ED1、CD4细胞)、腹主动脉内膜厚度及管腔面积。结果实验组移植的腹主动脉中乙酰肝素酶表达较对照组明显增加;实验组ED1及CD4细胞阳性表达率分别为(44.8±12.5)%和(37.6±7.9)%,对照组分别为(8.9±3.7)%和(10.3±5.6)%,两组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。实验组移植腹主动脉内膜厚度增加,管腔面积减少,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论免疫炎性细胞可通过激活乙酰肝素酶介导移植的腹主动脉损伤,促进动脉硬化形成。     

一氧化氮、诱导性一氧化氮合酶在实验性大鼠腹主动脉瘤中的作用

目的:探讨一氧化氮(NO)和诱导性一氧化氮合酶(iNOS)在实验性大鼠腹主动脉瘤形成中的作用和机制.方法:建立大鼠腹主动脉瘤灌注模型,对照组予以生理盐水腹主动脉灌注,余下予以猪胰弹性蛋白酶灌注制作腹主动脉瘤模型,并分为实验组(术后腹腔注射生理盐水)、药物组(术后腹腔注射氨基胍),观察各组大鼠血清NO、腹主动脉瘤壁组织学和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、iNOS的变化.结果:生理盐水灌注组大鼠术前术后血清NO无明显变化,iNOS、MMP-9表达弱阳性或阴性,动脉壁炎性细胞浸润轻、弹性蛋白降解少;实验组血清NO显著升高,iNOS及MMP-9表达强阳性,炎性细胞浸润重、弹性蛋白几乎完全降解;应用氨基胍后iNOS变化不明显,而NO显著降低,MMP-9表达显著减弱,炎性细胞浸润和弹性蛋白降解明显减轻.结论:iNOS、MMP-9的表达和血清NO水平在实验组均显著升高.iNOS及其合成的NO能促进腹主动脉壁炎性细胞的浸润、中膜基质的降解和MMPs的表达,从而导致了腹主动脉瘤的生成.     

大鼠腹主动脉瘤发生与骨桥蛋白及核因子-κB表达的关系

目的 构建大鼠腹主动脉瘤模型并观察大鼠腹主动脉瘤中骨桥蛋白(OPN)及核因子-κB(NF-κB)的表达,探讨大鼠腹主动脉瘤发生的分子机制.方法 将30只大鼠分为3组,每组10只,用酶灌注法灌注30 min构建大鼠腹主动脉瘤模型;测量动脉直径;苏木素-伊红(HE)染色及特殊染色检测主动脉的结构改变及炎性细胞浸润;免疫组织化学技术、Western blot法检测动脉组织中OPN、NF-κB及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达.结果 成功构建大鼠腹主动脉瘤模型;腹主动脉瘤组术后直径扩张率明显高于对照组(P＜0.01),并且中层弹力蛋白明显减少,炎性细胞浸润程度显著增高;免疫组织化学结果显示OPN、NF-κB及MMP-2在腹主动脉瘤组中的表达均明显增加(P＜0.05).Western blot结果同样显示OPN、NF-κB及MMP-2在腹主动脉瘤组中的表达均明显增加(P＜0.01),OPN、NF-κB及MMP-2呈正相关.结论 在大鼠腹主动脉瘤模型中,OPN可能通过NF-κB途径上调MMP-2的表达,进而加速细胞外基质的降解,最终导致主动脉瘤的发生发展.     

二甲双胍对血管紧张素Ⅱ诱导的ApoE~(-/-)小鼠腹主动脉瘤形成的影响

目的:研究二甲双胍对血管紧张素Ⅱ诱导的ApoE基因敲除小鼠腹主动脉瘤形成的炎性机制的影响。方法:8~10周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠随机分为Control组,AAA组,AAA+MET3组,采用皮下埋置AngⅡ胶囊渗透压泵的方式构建小鼠腹主动脉瘤动物模型。28d后取材,检测腹主动脉最大直径以及AAA发生率。HE以及免疫组织化学染色分析炎症细胞浸润情况,qPCR技术检测腹主动脉中ICAM-1表达,WesternBlot技术检测腹主动脉中NF-κB表达变化。结果:AAA+MET组腹主动脉最大直径以及AAA发生率均低于AAA组;AAA+MET组炎症细胞以及巨噬细胞浸润少于AAA组;应用二甲双胍后,小鼠腹主动脉瘤动物模型中ICAM-1表达以及NF-κB表达均显著降低。结论:二甲双胍可以抑制组织中NF-κB信号通路激活,下调ICAM-1的表达,并进一步抑制巨噬细胞聚集,减轻血管壁炎症反应,从而抑制AAA发展。     

他莫昔芬对大鼠腹主动脉瘤形成的抑制作用

目的 观察他莫昔芬对大鼠腹主动脉瘤(AAA)形成的影响及作用机制.方法 40只雄性Wistar大鼠随机分成2组,实验组他莫昔芬预给药7 d(每天15 mg/kg体重),建立A从灌注模制.术后7 d切取腹主动脉.一计算腹主动脉直径变化率,苏木素-伊红(HE)染色观察动脉壁炎性细胞浸润,Verhoff染色观察动脉壁弹性纤维,免疫组织化学观察动脉壁基质金属蛋白酶(MMP)-2,9及巨噬细胞的表达.结果 他莫昔芬明显抑制AAA的形成,抑制率95%～99%.动脉壁内炎性细胞浸润明显减少,弹力纤维破坏受到抑制,MMP-2,9及巨噬细胞的表达受到抑制.结论 他莫昔芬通过抑制大鼠腹主动脉壁内早期的炎症反应和MMPS的表达,抑制大鼠AAA的形成.     

腺病毒介导TIMP-2基因转染抑制大鼠腹主动脉细胞外基质降解的实验研究

目的利用大鼠腹主动脉瘤模型，在腹主动脉局部灌注携载基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）基因的腺病毒溶液，应用形态学及组织病理学手段评价其对血管壁基质降解的影响。方法建立大鼠腹主动脉瘤弹力蛋白酶灌注模型，将通过基因重组技术构建成功的腺病毒质粒AdTIMP-2灌注至主动脉局部。2周后处死大鼠，取动脉标本行多聚甲醛灌注固定，常规石蜡包埋，对标本进行大体观察、组织病理学常规及特殊染色观察。结果灌注后14d AdCMV组和PBS组腹主动脉直径分别为（3．52±0．11）mm和（3．43±0．09）mm，明显大于AdTIMP-2组的（2．33±0．06）mm，P〈0．05；腹主动脉直径增加百分比AdTIMP-2组为（48±4）％，明显低于AdCMV组的（120±6）％和PBS组的（118±5）％，P〈0．05；AdTIMP-2组的8只大鼠均未见腹主动脉瘤形成，而AdCMV组和PBS组8只大鼠均见主动脉形成瘤样扩张；AdTIMP-2组中层弹力纤维及胶原纤维保存较完整，破坏较轻，在动脉外膜可见炎症细胞浸润。结论腺病毒介导的TIMP-2基因转染可以恢复由蛋白溶解酶引起的细胞外基质降解，阻止动脉瘤的形成，为治疗腹主动脉瘤提供了新的策略。     

炎性细胞在腹主动脉瘤形成中的作用

目的研究炎性细胞在腹主动脉瘤（ａｂｄｏｍｉｎａｌａｏｒｔｉｃａｎｅｕｒｙｓｍ,ＡＡＡ）组织中的浸润情况及其作用。方法２０例ＡＡＡ患者的动脉瘤组织及４例正常人腹主动脉组织,分别行弹力纤维和胶原纤维的特殊染色、单抗白细胞共同抗原（ＣＤ４５阳性）和巨噬细胞（ＣＤ６８阳性）的免疫组化染色,了解纤维组织的变化及炎性细胞的浸润程度;原位杂交方法观察ＡＡＡ组织中基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ）之ＭＭＰ９的ｍＲＮＡ表达。结果ＡＡＡ组织均有不同程度的炎性细胞浸润,炎性细胞浸润程度与基质弹力纤维的损伤程度呈平行趋势,正常腹主动脉组织无炎性细胞浸润;原位杂交结果显示２０例ＡＡＡ组织中的巨噬细胞和淋巴细胞均出现ＭＭＰ９ｍＲＮＡ的阳性表达,１３例（６５％）ＡＡＡ组织中的平滑肌细胞出现ＭＭＰ９ｍＲＮＡ的阳性表达。正常腹主动脉组织无ＭＭＰ９ｍＲＮＡ的阳性表达。结论炎性细胞在ＡＡＡ形成中通过复杂的生化、细胞及免疫等过程参与并促进了ＡＡＡ的形成。     

大鼠腹主动脉瘤形成过程中T细胞及CD4+CD28-T细胞的动态变化及意义

目的 探讨T淋巴细胞及其亚群在腹主动脉瘤发病中的作用.方法 50只Wistar大鼠随机分成A、B、C、D、E5组,每组10只,A组为正常对照组,B、C、D、E组分别为术后3、7、14、28 d组,运用猪胰弹力酶灌注法建立腹主动脉瘤模型.免疫组化方法检测上述各组大鼠腹主动脉局部T、B淋巴细胞及巨噬细胞的表达水平,流式细胞术检测各组大鼠外周血中CD4+ CD28-T淋巴细胞亚群的分布变化.结果 大鼠腹主动脉局部T、B淋巴细胞及巨噬细胞表达的变化:术后7dT细胞显著升高(40±15,P＜0.05),B细胞及巨噬细胞有升高,但差异无统计学意义(P＞0.05);术后14 d,3种细胞表达升高最为显著(P＜0.05);术后28 d,3种细胞的表达较术后14 d明显下降.术后各组大鼠外周血CD4+、CD28-T细胞均有升高(P＜0.05),以术后7d比例最高(8.1％±2.1％,P＜0.05).结论 T淋巴细胞是腹主动脉瘤形成过程中最重要的炎症细胞之一,T淋巴细胞的浸润及其亚群分布变化所致的免疫及炎症反应在腹主动脉瘤形成早期可能起着重要的触发及调节作用.     

巨噬细胞浸润在腹主动脉瘤发病中的作用

腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm，AAA)是一种主动脉局限性扩张性疾病。虽然临床上能通过主动脉重建手术或腔内隔绝术对其进行有效治疗，但因为其发病机制尚未完全清楚，将直接影响对AAA的早期防治效果。目前在AAA的病因学研究中，炎性细胞浸润与AAA发病的关系正受到国内外学者的广泛重视。本文对炎性细胞中的一种主要成分——巨噬细胞参与AAA形成的各种作用作一概述。     

胃癌组织乙酰肝素酶mRNA表达及其意义

目的　探讨胃癌组织中乙酰肝素酶mRNA表达状况与其病理特征的关系。方法　应用原位杂交技术 ,检测正常胃黏膜 11例、萎缩性胃炎伴肠上皮化生组织 10例和 5 2例胃癌组织中乙酰肝素酶mRNA的表达 ,分析其表达状况与胃癌组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移和器官转移的关系。结果　乙酰肝素酶mRNA阳性表达在胃癌组高于正常胃黏膜和萎缩性胃炎伴肠上皮化生组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。乙酰肝素酶mRNA阳性率在胃癌浸润浆膜层组与无浆膜层浸润组分别为 5 8.1%和 0 ,两组间差异有非常显著性 (P <0 .0 0 5 ) ;在胃癌有淋巴结转移组与无淋巴结转移组分别为 5 8.5 %和 9.1% ,两组间差异有非常显著性 (P <0 .0 0 5 )。结论　乙酰肝素酶mRNA阳性表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移有关 ,乙酰肝素酶可作为反映胃癌生物学行为的客观指标     

直肠癌术前动脉插管化疗后手术时机的选择

探讨直肠癌患者术前动脉管化疗后的手术时机。方法对２７例Ｄｕｋｅｓ’Ｂ－Ｃ期直肠癌患者,选择肠系膜下动脉或左髂内动脉,以５－氟脲嘧啶６００ｍｇ／ｍ＾２、丝裂霉素１５ｍｇ／ｍ＾２、表阿霉素３０ｍｇ／ｍ＾２、丝裂霉素１５ｍｇ／     

药物诱导联合流出道缩窄构建兔腹主动脉瘤模型的实验研究

目的：探讨药物诱导联合腹主动脉流出道缩窄构建兔腹主动脉瘤（AAA）模型的可行性与有效性。 方法：将24只雌性新西兰大白兔随机均分为4组,其中两组分别采用含CaCl2（0.75 mol/L）或胰蛋白酶（0.04 g/mL）溶液的棉条包裹浸润血管30 min诱导AAA,另两组分别在CaCl2或胰蛋白酶浸润的基础上行腹主动脉流出道缩窄术（缩窄50%~60%）造模。术后使用兽用彩超诊断仪监测受累血管管径变化,术后2周,收集损伤段腹主动脉制作组织切片行HE与EVG染色。用计算机模拟评估流出道缩窄对AAA形成的影响。 结果：术后2周,超声检查显示,两个单纯药物浸润组受累血管扩张不明显,均未达到AAA形成标准,两个药物联合缩窄组受累血管明显扩张,其中CaCl2+缩窄组成瘤率66.67%（4/6）,血管平均扩张1.61倍;胰蛋白酶+缩窄组成瘤率83.33%（5/6）,血管平均扩张1.89倍。与正常腹主动脉比较,CaCl2浸润的血管内膜厚度明显增加（均P<0.05）,而胰蛋白酶浸润后的血管内膜厚度变化不明显（均P>0.05）;各组中膜厚度均明显增加,弹力纤维面积百分比均明显降低,其中CaCl2+缩窄组的变化最为明显（均P<0.05）。计算机数值模拟结果显示,流出道缩窄后血管壁应力增大,成瘤率增加。 结论：药物损伤联合腹主动脉流出道缩窄能成功构建兔AAA模型,缩短造模时间,且胰蛋白酶浸润损伤联合腹主动脉流出道缩窄造模方法优于CaCl2联合腹主动脉流出道缩窄造模方法。     

腹主动脉瘤发病机理的实验研究 Ⅱ.基质金属蛋白酶-9在大鼠腹主动脉瘤模型中的动态表达

目的 :检测MMP 9在大鼠正常动脉及动脉瘤模型组织中的动态表达 ,以探讨其在腹主动脉瘤发病机制中的作用。方法 :Wistar大鼠 5 4只 ,随机均分为 1组正常对照组、4组灌注对照组和 4组实验组。实验组腹主动脉灌注弹力蛋白酶 (2 5U ml) 2ml,灌注对照组灌注生理盐水 2ml,分别于术前、术后即刻、2d、7d、14d测量腹主动脉直径 ,并采用免疫组织化学和分子原位杂交技术动态检测腹主动脉组织中MMP 9的表达。结果 :正常及灌注对照组腹主动脉组织中均未发现MMP 9,而实验组弹力蛋白酶灌注后2～ 14dMMP 9均有不同程度升高 ,第 7d达到高峰 ,第 14d有所回落。结论 :MMP 9分泌的增加可能与炎症反应有关 ,且为腹主动脉瘤形成中不可或缺的一步。     

Aortic wall cell proliferation via basic fibroblast growth factor gene transfer limits progression of experimental abdominal aortic aneurysm

OBJECTIVE: Our previous study demonstrated that high flow conditions stimulated cell proliferation in the aortic wall in a rat model of abdominal aortic aneurysm (AAA), and we speculated that there is a possible relation between medial cell density and aortic wall integrity. In the present study we delivered the basic fibroblast growth factor (bFGF) gene to the aortic wall of a rat AAA model and evaluated the effects of growth factor-enhanced smooth muscle cell (SMC) proliferation on aneurysm progression. METHODS: AAA was induced in rats by means of infusion of porcine pancreatic elastase. Immediately after elastase infusion the abdominal aorta was filled with an expression plasmid vector containing the bFGF gene (bFGF group) or LacZ gene (control group); then gene transfer to the aortic wall was carried out with an in vivo electroporation method. The animals were killed 7 days after treatment, and the aneurysm was measured. The numbers of SMCs, macrophages, and endothelial cells were counted with immunostaining, and cell replication was evaluated with bromodeoxyuridine (BrdU) staining. RESULTS: Aneurysm diameter in the bFGF group was significantly smaller than that in the control group (4.6 +/- 0.3 mm vs 6.5 +/- 1.4 mm; P <.01). The numbers of medial SMCs and BrdU-incorporated cells in the bFGF group were significantly greater than those in the control group (SMC, 101 +/- 34 per high-power field [hpf] vs 80 +/- 31/hpf; P <.05, BrdU, 107 +/- 63/hpf vs 50 +/- 33/hpf; P <.05), whereas no difference was detected in the numbers of macrophages and endothelial cells between the 2 groups. CONCLUSIONS: Delivery of bFGF to the aortic wall induced significant enhancement of medial SMC proliferation, without an increase in inflammatory infiltration, then successfully limited aneurysm enlargement. These findings suggest that increased medial cellularity inhibits aneurysm formation, which possibly offers a clue for developing a new strategy for treatment of AAAs.     

血红素氧合酶-1在早期腹主动脉瘤中的动态表达

目的探讨早期腹主动脉瘤(AAA)的发病机制。方法建立大鼠腹主动脉瘤模型,于术后3、7、14、28d取材,观察主动脉的扩张情况,弹力纤维染色观察弹力纤维的损伤;原位分子杂交检测动脉壁中血红素氧合酶(HO)1mRNA的动态表达,免疫组织化学染色检测细胞间黏附分子(ICAM)-1及巨噬细胞特异性抗原CD68的蛋白表达。结果在AAA组织中,HO1mRNA表达于3d出现,14d达到高峰,为(33.9±6.9)%,与其他时段相比,差异有统计学意义(P<0.01)。ICAM1及CD68蛋白表达分别于7、14d达到高峰(P<0.01)。结论HO-1在早期腹主动脉瘤组织中表达增强,伴随着弹力纤维损伤和炎性细胞浸润。     

Deletion of CCR2 but not CCR5 or CXCR3 inhibits aortic aneurysm formation

BACKGROUND: Microscopic analysis of abdominal aortic aneurysms (AAAs) demonstrates an abundance of infiltrating leukocytes. The chemokine receptors CCR2, CCR5, and CXCR3 are associated with pathways implicated previously in aneurysm pathogenesis. We hypothesized that genetic deletions of CCR2, CCR5, and CXCR3 would limit leukocyte infiltration and aneurysm formation in a mouse model of AAA. METHODS: CCR2(-/-), CCR5(-/-), CXCR3(-/-), and control mice of the same genetic background were subject to periaortic application of calcium chloride. Aortic diameters were measured before aneurysm induction and at harvest 6 weeks later. Diameters were compared using the Mann-Whitney test. Aortas were stained with H&E and trichrome for histologic analysis. Aortic MMP-2 and MMP-9 activities were measured using zymography. RESULTS: Aneurysm formation was attenuated in CCR2(-/-) mice with the final mean aortic diameter less than that of the control mice (P < .01). Histology revealed preservation of the lamellar architecture and decreased inflammatory cells. Aortic MMP-2 and MMP-9 levels were decreased in CCR2(-/-) mice. CCR5(-/-) and CXCR3(-/-) mice demonstrated no protection from aneurysm formation, which was corroborated by the tissue histology showing similar inflammatory cell infiltration and elastin degradation. CONCLUSIONS: The CCR2 receptor is involved directly in AAA formation, whereas the CCR5 and CXCR3 receptors are not.     

大鼠异种腹主动脉移植形态学重构

目的：研究免疫排斥反应诱导移植血管损伤与重构的形态变化特征以及与腹主动脉瘤的关系。方法：选取豚鼠SD大鼠腹主动脉瘤模型．采用血管特殊染色及计算机图像半定量分析技术，分别于术后1、2、3、4周动态观测和比较移植腹主动脉平滑肌、弹力蛋白和胶原蛋白相对含量、内外径以及腔面积的变化。结果：术后移植腹主动脉各形态学指标均呈渐进性变化，其中术后1周平滑肌及胶原蛋白已明显减少，外径也明显增大；弹力蛋白于术后1周出现减少，至第2周已达最高峰；而内径以及腔面积于术后1周反而减少，3周后才明显增大。并且，弹力蛋白、平滑肌减少与腹主动脉扩张呈现显负相关。结论：异种腹主动脉移植结构重构以平滑肌反应最敏感，弹力蛋白和外径变化最显。可导致腹主动脉呈瘤样扩张。     

A synthetic heparanase inhibitor reduces proteinuria in passive Heymann nephritis

The beta-D-endoglycosidase heparanase has been proposed to be important in the pathogenesis of proteinuria by acting to selectively degrade the negatively charged side chains of heparan sulfate proteoglycans (HSPG) within the glomerular basement membrane (GBM). A loss of the negatively charged HSPG may result in alteration of the permselective properties of the GBM, loss of glomerular epithelial and endothelial cell anchor points, and liberation of growth factors. This study examined the effect of PI-88, a sulfated oligosaccharide heparanase inhibitor, on renal function, glomerular ultrastructure, and proteinuria. Continuous PI-88 infusion at 25 mg/kg per d did not adversely affect animal behavior, growth, or GFR. Cortical tubular vacuolation, however, was observed by light microscopy, and GBM thickness was significantly reduced in these animals (P < 0.0002). Tissue distribution studies using [(35)S]-labeled PI-88 revealed high levels of radioactivity in the kidney after a single subcutaneous injection of 25 mg/kg, suggesting protracted accumulation; moreover, active PI-88 was detected in urine. In passive Heymann nephritis, PI-88 delivered as a continuous infusion at 25 mg/kg per d significantly reduced autologous-phase proteinuria, at day 14 (P < 0.009), in the absence of altered sheep antibody deposition, C5b-9 deposition, and circulating rat anti-sheep antibody titers. Glomerular vascular endothelial growth factor and fibroblast growth factor expression was unaffected by PI-88 administration. However, PI-88 administration significantly prevented glomerular HSPG loss as demonstrated by quantitative immunofluorescence studies (P < 0.0001) in the absence of altered agrin distribution. These data therefore confirm the importance of heparanase in the development of proteinuria.