两种不同消化方法对表皮细胞表面抗原α6整合素和转铁蛋白受体表达的干预

目的采用单纯胰酶和中性蛋白酶联合胰酶两种不同的消化方式,观察表皮细胞表面抗原α6整合素和转铁蛋白受体CD71表达的变化,为荧光激活细胞分选术分选表皮干细胞选择合适的消化方法.方法选取中山大学附属第一医院外科门诊包皮环切手术患者的皮肤标本10份,患者均知情同意,年龄14～22岁.每份标本均分为2份,分别用胰酶、中性蛋白酶联合胰酶进行消化,共20份,分为胰酶组、中性蛋白酶联合胰酶组,10份/组.胰酶组将皮条放入质量浓度为2.5g/L的胰酶中,4℃消化过夜.次日撕除表皮角质层,以弯镊轻刮皮肤上皮面,获得表皮基底层细胞;中性蛋白酶联合胰酶组将皮条放入质量浓度为2.5g/L的中性蛋白酶中,4℃消化过夜.次日轻撕下皮肤表皮层,将其剪成1 mm×1 mm大小的碎块,以质量浓度为2.5g/L的胰酶消化5 min,获得表皮基底层细胞.分别取两组细胞悬液300 μL,加入碘化丙啶标记死亡细胞,流式细胞仪检测死亡细胞百分率,计算细胞活力.以荧光标记的α6整合素和CD71抗体标记细胞表面抗原,通过流式细胞术检测抗原表达.剩余细胞以表皮细胞培养液重悬,移入预先铺有100 mg/LⅣ型胶原的培养瓶中,接种密度为5×104/cm2,3 d换液1次,观察两组细胞的生长情况.结果实验纳入包皮环切手术患者的皮肤标本10份,每份标本分别用胰酶、中性蛋白酶联合胰酶进行消化,共20份,全部进入结果分析.①不同酶消化后两组细胞活力的比较中性蛋白酶联合胰酶组细胞活力明显高于胰酶组[(86±1.81)%,(82±1.48)%,P＜0.01].②不同酶消化后两组细胞抗原的表达胰酶组α6briCD71dim细胞占(8.00±1.69)%,α6briCD71bri细胞占(36.00±18.03)%,α6dim细胞占(40.00±10.08)%;中性蛋白酶联合胰酶组3种细胞所占比例依次为(30.00±8.59),(8.00±1.63),(38.00±8.72)%,两组各抗原的表达基本相似(P＞0.05).③不同酶消化后两组细胞形态学观察结果胰酶组细胞贴壁及伸展较中性蛋白酶联合胰酶组稍迟0.5～1.0 h,此后培养过程中生长增殖情况无明显差异,一般7 d左右接近融合,传代.培养第7天,表皮细胞体积小,核浆比例大,可见夹杂有成纤维细胞.中性蛋白酶联合胰酶组细胞30 min内基本贴壁,并有少量细胞伸展,60 min后大部分细胞伸出短小伪足,胞质展开,折光率减低.培养第7天,表皮细胞体积小,核浆比例大,未见夹杂有成纤维细胞.结论从对表面抗原表达影响的角度来看,单纯胰酶消化与中性蛋白酶联合胰酶消化后α6briCD71 dim,α6briCD71bri,α6dim这3种表皮细胞的检出率基本相似,两种消化方法可根据习惯选用.但中性蛋白酶联合胰酶消化对细胞活力影响小,消化时机容易掌握,对细胞损伤相对小,适用于荧光激活细胞分选术分选表皮干细胞.     

电针大鼠胃经后血清对其胃黏膜细胞表皮生长因子受体表达的影响及浓度效应

目的：观察不同稀释度电针胃经后血清对大鼠胃黏膜细胞表皮生长因子受体表达的影响及其浓度效应相关性。方法：实验于2005-07／08在湖南中医药大学针灸基础实验室完成。①选择健康SD大鼠48只，随机分为1／2稀释度血清组、1／5稀释度血清组、1／10稀释度血清组和1／20稀释度血清组，每组12只。②随机选4只大鼠作为血清供体，采用华兴邦动物穴位谱并结合模拟人体经穴法进行取穴，足三里：膝关节后外侧，在腓骨小头下约5mm处。梁门：腹正中线与乳头线之间的中线上，脐上4寸。四白：眶下缘正中。电针刺激用G6805型电针仪，疏密波，电针频率疏波4Hz，密波20Hz，强度以肌肉微颤为度，电针时间30min。将针刺后大鼠行颈动脉取血，离心后吸取血清，将同组4只大鼠血清混合。③另8只大鼠不进行干预。利用链霉蛋白酶消化法分离大鼠胃黏膜细胞。④各组分别用1／2，1／5，1／10，1／20稀释度的血清孵育胃黏膜细胞，采用免疫细胞化学法检测胃黏膜细胞表皮生长因子受体表达水平。结果：纳入动物48只，均进入结果分析。1／2，1／5，1／10和1／20稀释度血清组大鼠胃黏膜细胞表皮生长因子受体均有较强表达，其中1／10稀释度血清组大鼠胃黏膜细胞表皮生长因子受体表达的平均灰度值和面积百分比与1／2，1／5，1／20稀释度血清组比较差异有显著性[平均灰度值：145．43&;#177;5．28，166．35&;#177;9．62，161．38&;#177;6．11，156．53&;#177;4．15；面积百分比：（21．62&;#177;2．08）％，（15．85&;#177;1．35）％，（18．07&;#177;1．28）％，（19．60&;#177;1．10）％，P〈0．05-0．01]。结论：电针胃经后血清可增强胃黏膜细胞表皮生长因子受体的表达，并且存在一定的浓度-效应相关性。     

角质形成细胞的培养及其表皮生长因子受体表达

目的:在成功分离人皮肤角质形成细胞的基础上,观察表皮生长因子受体在人皮肤角质形成细胞中的表达情况。方法:实验于2006-3/10在北京大学深圳医院中心实验室进行。采用dispase Ⅱ-trypsin两步消化法获取表皮基底层细胞,用小鼠皮肤成纤维母细胞滋养层和黄素腺嘌呤二核苷酸培养液进行培养。小鼠皮肤成纤维母细胞的预处理:向对数生长期的小鼠皮肤成纤维母细胞培养液中加入丝裂霉素C至终浓度为4mg/L,37℃下培养4h,弃去培养液,用D-Hank’s液洗3次,加入浓度为0.25g/L的胰蛋白酶消化,分离出细胞,离心(200g,5min),用黄素腺嘌呤二核苷酸培养液悬浮细胞,计数,以5.0×104/cm2的密度种于培养皿内,37℃、体积分数0.05的CO2培养箱下培养。角质形成细胞的培养:将分离的角质形成细胞悬浮在黄素腺嘌呤二核苷酸培养液中,以2.0×104/cm2的密度接种在前1天经丝裂霉素C处理的小鼠皮肤成纤维母细胞滋养层上,37℃、体积分数0.05的CO2培养箱下培养。24h换液,以后每3d换1次液。采用免疫细胞化学的方法检测表皮生长因子受体的表达,采用复合逆转录聚合酶链反应检测角质形成细胞中表皮生长因子受体mRNA的表达。结果:采用dispaseⅡ消化法分离了真皮和表皮,获得较多的角质形成细胞,可以避免真皮成纤维细胞的污染。人皮肤角质形成细胞在黄素腺嘌呤二核苷酸培养液中培养5d可见明显的集落,约10d可长满单层。免疫细胞化学显示表皮生长因子受体在细胞表面有明显的表达,复合逆转录聚合酶链反应显示表皮生长因子受体mRNA有明显的表达。结论:用小鼠皮肤成纤维母细胞滋养层和黄素腺嘌呤二核苷酸培养液可以较好地培养原代人皮肤角质形成细胞,表皮生长因子受体在细胞表面有明显的表达,这些结果为与表皮生长因子受体相关的皮肤病(如银屑病)的研究奠定了基础。     

电针大鼠胃经后血清对其胃黏膜细胞表皮生长因子受体表达的影响及浓度效应

目的:观察不同稀释度电针胃经后血清对大鼠胃黏膜细胞表皮生长因子受体表达的影响及其浓度效应相关性。方法:实验于2005-07/08在湖南中医药大学针灸基础实验室完成。①选择健康SD大鼠48只,随机分为1/2稀释度血清组、1/5稀释度血清组、1/10稀释度血清组和1/20稀释度血清组,每组12只。②随机选4只大鼠作为血清供体,采用华兴邦动物(位谱并结合模拟人体经(法进行取(,足三里:膝关节后外侧,在腓骨小头下约5mm处。梁门:腹正中线与乳头线之间的中线上,脐上4寸。四白:眶下缘正中。电针刺激用G6805型电针仪,疏密波,电针频率疏波4Hz,密波20Hz,强度以肌肉微颤为度,电针时间30min。将针刺后大鼠行颈动脉取血,离心后吸取血清,将同组4只大鼠血清混合。③另8只大鼠不进行干预。利用链霉蛋白酶消化法分离大鼠胃黏膜细胞。④各组分别用1/2,1/5,1/10,1/20稀释度的血清孵育胃黏膜细胞,采用免疫细胞化学法检测胃黏膜细胞表皮生长因子受体表达水平。结果:纳入动物48只,均进入结果分析。1/2,1/5,1/10和1/20稀释度血清组大鼠胃黏膜细胞表皮生长因子受体均有较强表达,其中1/10稀释度血清组大鼠胃黏膜细胞表皮生长因子受体表达的平均灰度值和面积百分比与1/2,1/5,1/20稀释度血清组比较差异有显著性眼平均灰度值:145.43±5.28,166.35±9.62,161.38±6.11,156.53±4.15;面积百分比:(21.62±2.08)%,(15.85±1.35)%,(18.07±1.28)%,(19.60±1.10)%,P<0.05～0.01演。结论:电针胃经后血清可增强胃黏膜细胞表皮生长因子受体的表达,并且存在一定的浓度-效应相关性。     

MEL细胞系中铁对转铁蛋白受体mRNA和铁螯合酶mRNA表达的调节

目 的通过对ＭＥＬ细胞在二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）诱导分化前后和不同的铁状态,观察转铁蛋白受体（ＴｆＲ）ｍＲＮＡ和铁螯合酶ｍＲＮＡ含量的变化。方法 ＭＥＬ细胞体外培养,加ＤＭＳＯ向红系诱导分化,同时以未诱导细胞为对照,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＴｆＲ ｍＲＮＡ和铁螯合酶ｍＲＮＡ含量,观察加入转铁蛋白、去铁胺或抗ＴｆＲ单抗和Ｅｐｏ后的作用。结果和结论（１）未诱导的ＭＥＬ细胞,随着细胞的增殖,Ｔｆ     

人雌激素和孕激素受体的流式细胞术检测及几种不同抗体的应用

目的　建立人类雌激素受体 (ER)和孕激素受体 (PR)的流式细胞术检测方法 ,并比较几种不同抗体的应用情况。方法将乳腺癌细胞株MCF 7、T 4 7d用不同方法固定处理 ,比较它们与抗体特异性结合的差异 ,挑选最佳细胞固定方法。同时 ,以与MDA MB 2 31(MM2 31)细胞反应阳性率不大于 5 %为标准 ,对不同浓度的ER抗体 1D5和MA1 310、PR抗体 1A6和PgR6 36的反应特异性进行分析比较 ,并用于临床样本的检测。结果　经 0 .2 5 %多聚甲醛 (PFA)预固定、75 %乙醇固定、核分离液处理后的细胞 ,与抗体特异性反应的荧光强度最大 ;在 1～ 4 μg/ 10 0 μl浓度范围内 ,1D5与MM2 31反应阳性率低于 5 % ,与MCF 7反应阳性率大于 95 %。同浓度的MA1 310与MM2 31和MCF 7反应时的阳性细胞率相当 ;1A6 1∶10 0稀释 ,PgR6 36 1∶10～ 1∶2 0 0稀释 ,与MM2 31反应阳性率低于 5 % ,与T 4 7d反应阳性率大于 95 % ;用 1D5 (2 μg)、1A6和PgR6 36 (1∶10 0 )对 12例临床乳腺癌样本ER、PR检测结果分别为 (6 4 .36± 2 7.92 ) %、(5 3.95± 2 8.17) %和 (5 5 .6 3± 2 6 .93) %。结论　细胞经 0 .2 5 %PFA预固定、75 %乙醇固定、核分离液处理后 ,用一定浓度范围的 1D5、1A6和PgR6 36可分别对ER、PR进行流式细胞术定量检测。本研究方法可用于     

表皮生长因子受体和转化生长因子受体α对前列腺增生和癌变组织及其预后判断的影响

目的:检测表皮生长因子受体(EGFR)和转化生长因子(TGFα)在前列腺增生(benignprostatichyperplasia,BPH)和前列腺癌中的表达情况,探讨前列腺增生和前列腺癌的病因和发病机制。方法:实验于2004-08/09在沈阳医学院病理教研室完成。应用免疫组织化学SP法检测40例前列腺增生症及40例前列腺癌中EGFR和TGFα表达情况。结果:正常和增生组织中EGFR和TGFα分别表达在上皮细胞和基质细胞中。两者在前列腺癌中的共同表达率为65%,二者密切相关(r=0.524),且与前列腺癌的分期有关(P<0.01),此类患者的生存时间也明显小于二者阴性表达者(P<0.01)。结论:EGFR和TGFα的异常表达在前列腺增生和癌变的发病中起重要的作用。它们可以作为判断前列腺癌临床分期和预后的重要指标。     

黄芪建中汤干预脾虚型慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜表皮生长因子含量、诱导型一氧化氮合成酶和表皮生长因子受体基因的表达

目的:观察黄芪建中汤对造模脾虚型慢性萎缩性胃炎大鼠的治疗作用及机制,并且为临床应用提供试验依据。方法:实验于2003-12/2005-09在河南中医学院实验动物中心和郑州大学细胞分子生物学研究中心完成。雄性Wistar大鼠30只,体质量(170±10)g,饲养1周后按体质量编号完全随机法分为4组,即正常对照组6只:不做任何处理;慢性萎缩性胃炎组8只:以2%的水杨酸钠灌胃8周造成胃黏膜损伤,后4周结合饥饱失常、劳倦过度使大鼠致虚;维酶素组8只:造模后,给予7.9%维酶素2mL灌胃,1次/d,连续21d;黄芪建中汤组8只:造模后,给予2.5kg/L黄芪建中汤水箭剂2mL灌胃,1次/d,连续21d。末次给药后所有大鼠再逐只处死,平行胃小弯取小块胃窦部胃壁组织,手工制成胃黏膜组织芯片,用原位杂交的方法检测诱导型一氧化氮合成酶-mRNA和表皮生长因子受体-mRNA的表达量。从剩余胃黏膜组织中精确称取2g,置于玻璃匀浆器中研磨制成组织匀浆,按放免试剂盒说明测定其表皮生长因子含量。结果:纳入大鼠30只,造模过程中死亡1只,造模结束后抽样处死5只,24只进入结果分析。①原位杂交结果:诱导型一氧化氮合成酶-mRNA和表皮生长因子受体-mRNA基因表达的阳性部位呈现紫蓝色颗粒,前者以慢性萎缩性胃炎组显色最强,后者主要以胃小凹底部和胃腺中上部显色突出。②与正常对照组大鼠相比,慢性萎缩性胃炎组大鼠胃黏膜组织的上述指标均显著增高[(333.00±56.71),(453.67±68.25);(0.73±0.21)(3.14±0.77)μg/L;(124.36±26.13),(318.42±45.38),(P<0.01,P<0.05)],经黄芪建中汤治疗21d后,恢复至接近正常水平,其中对诱导型一氧化氮合成酶-mRNA和表皮生长因子受体-mRNA表达量的恢复作用显著优于维酶素。结论:黄芪建中汤对慢性萎缩性胃炎有良好的治疗作用,其机制与下调慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜表皮生长因子含量、诱导型一氧化氮合成酶-mRNA及表皮生长因子受体-mRNA的表达有关,其疗效优于维酶素。     

低频电磁场对两种不同支架培养的表皮干细胞增殖的影响

目的观察低频电磁场（LFEMF）对三维环境中培养的人表皮干细胞(ESCs)增殖的影响,为LFEMF用于皮肤组织工程提供实验依据。 方法取人包皮来源的ESCs作为种子细胞,利用Ⅳ型胶原快速贴壁法体外分离纯化ESCs,并种植于胶原海绵和壳聚糖支架材料,外加LFEMF治疗仪（场强5 mT,频率分别为1 Hz、10 Hz和50 Hz）刺激ESCs（30 min/d）,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）检测支架材料细胞毒性,通过肉眼、HE染色后DAPI荧光核染色后镜下观察及扫描电镜观察ESCs生长情况,并收集培养2,7,10,14 d ESCs的DAPI核荧光染色数据,用显微图像软件分析细胞增殖数目,比较各时间点细胞增殖的区别。 结果LFEMF促进ESCs增殖的作用在不同频率组间的差异和两种支架上培养的ESCs增殖情况的差异均有统计学意义(P<0.01),10 d后胶原海绵支架上细胞增殖较壳聚糖支架上的细胞明显（P<0.05）,各频率组LFEMF刺激均能促进ESCs增殖,频率不同,促增殖的效应不一（P<0.05）。 结论胶原海绵可较好地作为体外培养ESCs的支架,在LFEMF干预下可实现ESCs体外三维环境中较快扩增,LFEMF在皮肤组织工程中具有较大应用潜力。     

吉非替尼对前列腺癌DU145细胞生长增殖及表皮生长因子受体蛋白表达的影响

目的：观察吉非替尼（Gefitinib）对前列腺癌DU145细胞的生长抑制作用及对细胞表皮生长因子受体（EGFR）蛋白表达水平变化的影响。方法：不同浓度的Gefitinib（020μmol／L）分别作用于体外培养的前列腺癌DU145细胞24～120h后,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪测细胞周期分布,蛋白免疫印迹（Westernb1ot）检测细胞EGFR蛋白表达水平。结果：Gefitinib可以显著抑制DU145细胞的生长,呈时间一剂量依赖效应,并且细胞生长多停滞于G0／G1期,细胞EGFR蛋白表达分别下降了10．92％（2．5μmol／L）、43．71％（5μmol／L）、53．53％（10μmol／L）和85．98％（20umol／L）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：Gefitinib能显著抑制前列腺癌DU145细胞的生长,其机制可能与细胞生长在G0／G1期阻滞及EGFR蛋白表达水平下调等因素有关。     

Expression of two alpha chains on the surface of T cells in T cell receptor transgenic mice

CD8+ T cells taken directly from mice expressing a Kb-specific T cell receptor (TCR) transgene expressed the transgenic TCR in a bimodal profile as detected by flow cytometric analysis using a clonotype- specific monoclonal antibody. Those cells expressing the lower density of the transgenic TCR expressed the transgenic beta chain and two different alpha chains on their surface. One alpha chain was the product of the alpha transgene, whereas the other was derived by endogenous rearrangement. This report provides the first demonstration that T cells isolated directly from mice may express two different TCR clonotypes on their surface. The potential consequences of this finding for studies using TCR transgenic mice and for the induction of autoimmunity are discussed.     

甲状腺激素T3影响K562细胞转铁蛋白受体和铁蛋白表达的分子机制研究

目的 探讨甲状腺激素T3对白血病细胞K562转铁蛋白受体(TfR)和铁蛋白(Fn)表达的调控作用及其可能的机制。方法 采用流式细胞术和放射免疫法分别检测TfR和Fn的表达水平，用RNA/蛋白带移动分析法测定铁调节蛋白(IRP)与铁反应元件(IRE)的结合活性。应用RT—PCR方法半定量分析TfR和Fn的mRNA水平。结果 T3对K562细胞TfR的表达无明显作用，而以不同浓度的T3处理细胞后使Fn的表达增加，其中当T3为100nmol/L和200nmol/L时，与空白对照组相比，差异有显性(P＜0．05)。T3能减少IRP/IRE的结合活性，且以T3为50nmol/L时减少最为明显。不同浓度的T3在不同的作用时间内均能提高H—FnmRNA水平，而对TfRmRNA水平无显影响。结论 T3可增加细胞Fn的表达，而对TfR的表达无明显调控作用，其机制除包含转录后的调节外，可能还具有转录水平的调控作用。     

Effects of different transferrin forms on transferrin receptor expression, iron uptake, and cellular proliferation of human leukemic HL60 cells. Mechanisms responsible for the specific cytotoxicity of transferrin-gallium.

We have previously shown that human leukemic cells proliferate normally in serum-free media containing various transferrin forms, but the addition of transferrin-gallium leads to inhibition of cellular proliferation. Because gallium has therapeutic potential, the effects of transferrin-gallium on leukemic cell proliferation, transferrin receptor expression, and cellular iron utilization were studied. The cytotoxicity of gallium is considerably enhanced by its binding to transferrin and cytotoxicity can be reversed by transferrin-iron but not by other transferrin forms. Exposure to transferrin-gallium leads to a marked increase in cell surface transferrin binding sites, but despite this, cellular 59Fe incorporation is inappropriately low. Although shunting of transferrin-gallium to another cellular compartment has not been ruled out, other studies suggest that transferrin-gallium impairs intracellular release of 59Fe from transferrin by interfering with processes responsible for intracellular acidification. These studies, taken together, demonstrate that inhibition of cellular iron incorporation by transferrin-gallium is a prerequisite for inhibition of cellular proliferation.     

α整合素表达及与骨肉瘤细胞恶性侵袭的关系

目的：探讨人骨肉瘤MG-63细胞表面纤联蛋白相关的Ot整合素的表达及其在肿瘤侵袭中的作用。 方法：实验于2004-01／08在南方医院中心实验室完成。人骨肉瘤细胞系MG-63在含体积分数为0．1的血清的DMEM培养基中培养。采用免疫细胞化学和流式细胞仪检测MG-63细胞表面α整合素的表达；基质胶／滤膜法检测MG-63细胞的侵袭能力；抗体及短肽RGD封闭法研究不同的纤联蛋白相关的α整合素在骨肉瘤侵袭过程中的作用。 结果：①α4，α5和αV整合素在MG-63细胞表面均有阳性表达。②α5和αV功能封闭抗体对MG-63细胞的侵袭作用无明显影响。③α4表达较弱，但α4封闭抗体和RGD短肽都可明显抑制MG-63细胞的恶性侵袭能力（P〈0．05）。④α4功能封闭抗体和RGD短肽联合应用与RGD单独应用对MG-63细胞侵袭的抑制作用无明显差别。 结论：不同α整合素受体对骨肉瘤细胞恶性侵袭的作用不同，α4整合素对MG-63细胞的恶性转移能力有明显的诱导作用，而α5和αV整合素在此作用中无明显的作用。除α4整合素以外，还有其他细胞表面受体可以通过与纤联蛋白的相互作用而诱导MG-63细胞的侵袭。     

α整合素表达及与骨肉瘤细胞恶性侵袭的关系

目的:探讨人骨肉瘤MG-63细胞表面纤联蛋白相关的α整合素的表达及其在肿瘤侵袭中的作用。方法:实验于2004-01/08在南方医院中心实验室完成。人骨肉瘤细胞系MG-63在含体积分数为0.1的血清的DMEM培养基中培养。采用免疫细胞化学和流式细胞仪检测MG-63细胞表面α整合素的表达;基质胶/滤膜法检测MG-63细胞的侵袭能力;抗体及短肽RGD封闭法研究不同的纤联蛋白相关的α整合素在骨肉瘤侵袭过程中的作用。结果:①α4,α5和αV整合素在MG-63细胞表面均有阳性表达。②α5和αV功能封闭抗体对MG-63细胞的侵袭作用无明显影响。③α4表达较弱,但α4封闭抗体和RGD短肽都可明显抑制MG-63细胞的恶性侵袭能力(P<0.05)。④α4功能封闭抗体和RGD短肽联合应用与RGD单独应用对MG-63细胞侵袭的抑制作用无明显差别。结论:不同α整合素受体对骨肉瘤细胞恶性侵袭的作用不同,α4整合素对MG-63细胞的恶性转移能力有明显的诱导作用,而α5和αV整合素在此作用中无明显的作用。除α4整合素以外,还有其他细胞表面受体可以通过与纤联蛋白的相互作用而诱导MG-63细胞的侵袭。     

不同抗原修复方法对cyclin B1在肿瘤中表达的比较

cyclin B1是参与细胞周期G2／M转换的重要调节因子，在部分恶性肿瘤中呈过表达且与预后有关。在免疫组化染色中，cyclin B1定位于细胞核，但在实验过程中，如果按试剂说明采用高温修复方法，cyclinB1多定位于细胞质，核表达率较低，影响其在肿瘤中表达的阳性率。本实验采用不同抗原修复方法比较cyclin B1在膀胱癌和乳腺癌的表达情况，以探讨最佳抗原修复方法。     

The N terminus of the human alpha1D-adrenergic receptor prevents cell surface expression

We previously reported that truncation of the N-terminal 79 amino acids of alpha(1D)-adrenoceptors (Delta(1-79)alpha(1D)-ARs) greatly increases binding site density. In this study, we determined whether this effect was associated with changes in alpha(1D)-AR subcellular localization. Confocal imaging of green fluorescent protein (GFP)-tagged receptors and sucrose density gradient fractionation suggested that full-length alpha(1D)-ARs were found primarily in intracellular compartments, whereas Delta(1-79)alpha(1D)-ARs were translocated to the plasma membrane. This resulted in a 3- to 4-fold increase in intrinsic activity for stimulation of inositol phosphate formation by norepinephrine. We determined whether this effect was transplantable by creating N-terminal chimeras of alpha(1)-ARs containing the body of one subtype and the N terminus of another (alpha(1A)NT-D, alpha(1B)NT-D, alpha(1D)NT-A, and alpha(1D)NT-B). When expressed in human embryonic kidney 293 cells, radioligand binding revealed that binding densities of alpha(1A)-or alpha(1B)-ARs containing the alpha(1D)-N terminus decreased by 86 to 93%, whereas substitution of alpha(1A)- or alpha(1B)-N termini increased alpha(1D)-AR binding site density by 2- to 3-fold. Confocal microscopy showed that GFP-tagged alpha(1D)NT-B-ARs were found only on the cell surface, whereas GFP-tagged alpha(1B)NT-D-ARs were completely intracellular. Radioligand binding and confocal imaging of GFP-tagged alpha(1D)- and Delta(1-79)alpha(1D)-ARs expressed in rat aortic smooth muscle cells produced similar results, suggesting these effects are generalizable to cell types that endogenously express alpha(1D)-ARs. These findings demonstrate that the N-terminal region of alpha(1D)-ARs contain a transplantable signal that is critical for regulating formation of functional bindings, through regulating cellular localization.     

小鼠肾小管发育过程中纤维粘连蛋白与整合素α5的表达

背景:纤维粘连蛋白-整合素α5 相互作用影响肾小管发育的体内研究较少.目的:观察小鼠肾小管发育过程中纤维粘连蛋白及其受体整合素α5 的表达.方法:选取胚龄(E)12,14,16,18 d 和生后日龄(P)1,3,7,14,21,28,40 d 的小鼠.结果与结论:免疫组织化学染色结果显示纤维粘连蛋白于E12 d时即表达于输尿管芽的基底膜处,随后表达于发育各个时期的肾小管基膜;整合素α5 于E12 d 时开始表达,表达部位是肾小管的上皮细胞.体视学测量结果显示纤维粘连蛋白表达的面密度值和整合素α5 表达的体密度值都随肾脏的发育逐渐增大.Western blot 结果显示纤维粘连蛋白和整合素α5 蛋白的水平都随肾脏的发育逐渐增加.可见纤维粘连蛋白和整合素α5 在小鼠肾小管的发育和成熟过程中的表达具有一定的时空性,对肾小管的发育起一定的作用.