二甲双胍抑制IL-6诱导的LNCaP增殖及上皮-间质转化

目的 初步探讨二甲双胍抑制前列腺癌发展的作用.方法 使用慢病毒感染构建IL-6过表达细胞株LNCaP-IL-6(IL-6过表达病毒转染)和LNCaP-ctr(空病毒转染),运用激光共聚焦扫描确定转染效果,ELISA检测LNCaP、LNCaP-IL-6和LNCaP-ctr细胞IL-6分泌水平,倒置显微镜观察细胞形态.实验分为LNCaP-ctr组、LNCaP-IL-6组、LNCaP-ctr+二甲双胍组和LNCaP-IL-6+二甲双胍组,MTT技术检测相对细胞数量,流式细胞技术检测二甲双胍对细胞周期的影响.实验分为LNCaP-IL-6和LNCaP-IL-6+二甲双胍组,运用细胞迁移实验检测两组细胞迁移速度,Western blot技术检测两组细胞TWIST和E-Cadherin表达水平.结果 激光共聚焦扫描和ELISA检测证明IL-6过表达细胞株LNCaP-IL-6构建成功,LNCaP-IL-6细胞IL-6分泌水平约为LNCaP-ctr的5 000倍.MTT实验显示第5天LNCaP-IL-6相对细胞数量约为LNCaP-ctr的1.4倍,处理组的LNCaP-IL-6相对细胞数量约为LNCaP-ctr的1.6倍;流式细胞仪检测显示二甲双胍阻滞LNCaP的细胞周期为S期.细胞形态学观察和Western blot检测证实IL-6诱导LNCaP发生上皮-间质转化,细胞迁移实验显示二甲双胍可抑制LNCaP-IL-6细胞的迁移,Western blot进一步证实二甲双胍降低LNCaP-IL-6 TWIST表达及升高E-Cadherin表达.结论 二甲双胍能够抑制IL-6诱导的LNCaP细胞的上皮-间质转化.     

二甲双胍通过干预上皮-间质转化逆转尼古丁诱导的 肺癌吉非替尼耐药

目的：探讨尼古丁（nicotine,NIC）诱导EGFR敏感突变PC-9肺癌细胞株吉非替尼耐药及二甲双胍对其作用。方法：PC-9分成4组：空白组、尼古丁组、二甲双胍组、尼古丁和二甲双胍组,利用定量反转录聚合酶连锁反应（quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测E-cadherin和Vimentin信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid,mRNA）的表达,Western blot检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达,细胞计数试剂盒（cell counting Kit-8,CCK-8）检测不同分组细胞对吉非替尼药物敏感情况。Transwell小室实验检测细胞侵袭迁移。结果：尼古丁诱导PC-9细胞上皮间质转化呈时间浓度依赖,在10 μmol/L尼古丁处理72 h后,发生E-cadherin下调和Vimentin上调最明显,故选该条件做以下实验。CCK-8提示,相比空白组,尼古丁组PC-9细胞对吉非替尼敏感性减弱,在吉非替尼浓度为0.05 μmol/L最明显（P=0.000）。Matrigel侵袭实验提示尼古丁组穿膜细胞数较空白组明显增多[（15.70±1.53）个/高倍视野 vs. （32.70±2.08）个/高倍视野,F=75.406,P=0.000,P=0.000];迁移实验的结果与之相似。与空白组相比,尼古丁组E-cadherin mRNA 表达水平明显降低[（0.932±0.100） vs. （0.459±0.024）,F=25.924,P=0.000,P=0.000）],Vimentin mRNA表达水平明显升高[（1.200±0.200） vs. （1.973±0.129）,F=20.998,P=0.000,P=0.000]。蛋白水平变化与之相同。尼古丁＋二甲双胍组可以增加尼古丁作用PC-9对吉非替尼的敏感性,在吉非替尼浓度为0.05、0.10、0.50、1.00、5.00 μmol/L时有统计学意义。尼古丁＋二甲双胍组可以减弱尼古丁组的穿膜数[（17.00±2.00）个/高倍视野vs. （32.70±2.08）个/高倍视野,F=75.406,P=0.000,P=0.000],迁移实验呈现相同的结果。相比于尼古丁组,尼古丁＋二甲双胍组上调E-cadherin mRNA[（0.459±0.024） vs. （0.838±0.058）,F=25.924,P=0.000,P=0.000）],下调Vimentin mRNA[（1.973±0.129） vs. （1.467±0.115）,F=20.998,P=0.000,P=0.003）]。结论：尼古丁通过上皮间质转化诱导PC-9细胞吉非替尼耐药,二甲双胍可以逆转上述现象。     

二甲双胍抗肿瘤作用机制

二甲双胍是目前治疗2型糖尿病的一线用药,近年来,国内外大量研究发现,二甲双胍在发挥其降血糖作用之外,还具有抗肿瘤作用,可抑制肝癌、胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌等恶性肿瘤的增殖及生长,延缓肿瘤的发生、发展,但其抗肿瘤机制尚不明确。目前,国内外关于二甲双胍抗肿瘤机制的实验室及临床研究相继开展。本文对二甲双胍抗肿瘤作用机制的相关研究进行综述。     

前列腺癌上皮-间质转化研究进展

上皮-间质转化是上皮细胞向间质细胞转变的过程,其与肿瘤侵袭、转移等恶性行为密切相关,近年受到广泛关注。前列腺癌是老年男性发病率较高的肿瘤,上皮-间质转化在前列腺癌转移过程中具有重要作用。本文对前列腺癌上皮-间质转化研究进展作一综述,为深入了解前列腺癌转移机制及防治提供思路。     

二甲双胍抗肿瘤作用的研究进展

近期大量流行病学研究提示传统降耱药二甲双胍可降低2型糖尿病患者恶性肿瘤的发生率和死亡率,而体外细胞实验及体内动物模型实验多提示二甲双胍具有显著抑制肿瘤生长作用,其可能机制是通过调节胰岛素/IGF-1轴及AMPK通路发挥抗肿瘤作用,并通过诱导miRNA表达发挥抗肿瘤干细胞效应,提示二甲双胍为恶性肿瘤的防治提供了新的可能.     

二甲双胍抗肿瘤作用机制研究进展

近年来大量研究表明一线降糖药物二甲双胍在肿瘤治疗领域表现出较为明显的作用。其抗肿瘤的主要机制为:二甲双胍能够有效抑制肿瘤细胞的增殖,促进肿瘤细胞的凋亡,改善肿瘤细胞微环境等。此外,二甲双胍还能够降低肿瘤的转移潜能及增强肿瘤细胞对化疗反应的敏感度等。从以上这些方面可以看出二甲双胍具有很大研究潜力及广阔的应用前景。本文总结了近10年的研究成果,总结二甲双胍在抗肿瘤方面的作用机制,为将二甲双胍或者双胍类药物应用于抗肿瘤治疗方面奠定了良好的理论基础。     

Hedgehog信号通路调控胰腺癌细胞上皮间质转化的作用机制

目的 观察特异性阻断hedgehog(Hh)信号通路对胰腺癌Panc-1细胞上皮间质转化(EMT)过程的影响,探讨其分子机制.方法 设计并合成针对Smoothened (SMO)基因特异性的RNA干扰靶点,运用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默SMO基因表达以阻断人胰腺癌Panc-1细胞Hh信号通路.应用Matrigel/Transwell法检测阻断Hh信号通路后胰腺癌细胞侵袭能力的变化,应用实时PCR及Western印迹方法检测阻断Hh通路后Panc-1细胞EMT标志物E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Vimentin、Fibronectin等的表达变化;并检测EMT调控因子Snail、Slug等的表达变化.结果 稳定干扰SMO基因表达阻断Hh信号通路后,人胰腺癌Panc-1细胞侵袭能力明显降低,p=0.020;上皮表型标志物E-cadherin表达明显上调,而间质表型Vimentin、Fibronectin、N-cadherin等的表达水平显著下调,P值分别为0.020、0.001、0.031和0.022;与对照组相比,SMO干扰组细胞中转录因子Snail、Slug的表达水平均显著下调,P值分别为0.018和0.016.结论 应用慢病毒介导的RNA干扰技术特异性沉默SMO基因阻断人胰腺癌细胞中Hh通路活性,可显著抑制Panc-1细胞EMT过程,其机制与下调转录因子Snail及Slug表达有关.     

二甲双胍与胃癌细胞的增殖、迁移及上皮-间充质转化之间的关系

目的 探讨二甲双胍在胃癌细胞的增殖、迁移及上皮间质转化之间的作用。方法 用不同浓度（0、10、20、40 mmol/L）的二甲双胍处理胃癌细胞,将细胞分为对照组、二甲双胍处理组（10、20、40 mmol/L）。采用CCK8试剂检测不同浓度二甲双胍处理的胃癌细胞的增殖活性。划痕实验及Transwell实验检测二甲双胍对胃癌细胞迁移和侵袭的影响。采用Western blot 检测上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白水平。结果 CCK8检测结果显示,与对照组比较,二甲双胍处理组随浓度增加增殖活性显著降低,呈浓度依赖（F=22.65,P=0.0003）。划痕实验结果显示,与对照组比较,二甲双胍处理组随浓度增加迁移率显著降低,呈浓度依赖（F=27.22,P＜0.0001）。Western blot结果显示,二甲双胍处理组E-cadherin蛋白水平均高于对照组(F=64.82,P＜0.0001）,vimentin蛋白水平均低于对照组（F=11.28,P=0.003）。结论 二甲双胍能够抑制胃癌细胞增殖、迁移,其在胃癌转移中发挥抑制作用,可能与抑制上皮-间充质转化相关。     

二甲双胍对甲状腺未分化癌侵袭转移的影响及机制研究

目的：研究二甲双胍对甲状腺未分化癌侵袭转移能力的影响,初步探讨其作用机制。方法：以不同浓度的二甲双胍处理甲状腺未分化癌细胞株SW1736,分别通过琼脂滴法及Transwell侵袭迁移实验,对比观察二甲双胍组与对照组SW1736细胞的侵袭转移能力,real-time PCR方法检测细胞中与上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程密切相关的分子,包括波形蛋白(vimentin)、E-钙黏素(E-cadherin)、转录因子Snail1及Slug mRNA表达变化。结果：琼脂滴法及Transwell侵袭迁移实验均发现二甲双胍可降低SW1736细胞体外侵袭迁移能力,且随二甲双胍浓度的增高,其抑制作用增强;二甲双胍可显著下调甲状腺未分化癌细胞中vimentin及转录因子Slug和Snail1表达,促进上皮细胞表型E-cadherin表达。结论：二甲双胍可通过下调Snail1和Slug的表达促进E-cadherin 的表达,从而抑制EMT过程,降低甲状腺癌细胞侵袭迁移能力,为甲状腺癌的治疗提供新思路。     

炎性相关刺激因子诱导乳腺癌上皮间质转分化的机制

目的乳腺癌的高转移率是威胁患者预后的主要因素。文中探讨炎性相关刺激因子肿瘤坏死因子α．（tumorneerosis factor-α,TNF—α）和活性氧（reactive oxygen species,ROS）诱导乳腺癌细胞MCF-7发生上皮间质转分化（epithelial—mesenchymal transition,EMT）的分子机制,为预防乳腺癌转移提供新思路。方法检测乳腺癌细胞MCF-7在TNF-α和过氧化氢（H2O2）作用下侵袭能力发生的改变。根据不同的处理方法将细胞分成对照组、TNF组、H2O2组、TNF＋氮-乙酰半胱氨酸（N—acety—L—cysteine,NAC）组、H2O2＋阿司匹林组和TNF＋阿司匹林组。用RT—PCR以及Westernblot方法,检测EMT相关因子Snail和上皮细胞E-钙黏蛋白（E—cadherin）在不同处理下的活性变化。结果TNF-α可促进MCF-7细胞发生EMT。在MCF-7细胞中,TNF-α可通过核因子-κB（nuclear factor—κB,NF—κB）依赖通路增加转录因子Snail的表达上调,促进细胞发生EMT。而ROS引起的E-钙黏蛋白减少以及细胞发生的EMT,仅被NF-κB抑制剂轻度抑制。结论炎性相关刺激因子TNF-α和ROS在诱导EMT时存在不同机制,TNF-α在促进肿瘤细胞发生转移中是通过NF—κB的作用上调转录因子Snail,进而降低E-钙黏蛋白的表达实现。ROS在促进细胞转移时NF—κB仅有次要作用。     

Modulatory effect of aquaporin 5 on estrogen-induced epithelial-mesenchymal transition in prostate epithelial cells

BackgroundEstrogen is involved in the pathophysiological process of benign prostatic hyperplasia (BPH), in which epithelial-mesenchymal transition (EMT) plays an important role. Upregulation of aquaporin (AQP) 5, which is directly activated by estrogen, has been reported to promote EMT in multiple cells. This study aimed to examine the effects of AQP5 on estrogen-induced EMT in the prostate.MethodsNormal prostate (NP) tissue samples without any histopathological changes and BPH tissue samples with pathologically confirmed hyperplasia were obtained. An EMT cell model was subsequently established by adding estradiol (E2) to RWPE-1 cells, after which AQP5 knockdown was performed. Tissue morphological and immunohistochemical features were examined using hematoxylin-eosin and immunohistochemical staining. Western blot analysis was performed to determine the expression of AQPs, estrogen receptors, and EMT-related proteins. Cell proliferation was assessed and supernatants were collected for enzyme-linked immunosorbent assay to determine transforming growth factor-β1 (TGF-β1) concentrations. Immunofluorescence staining was performed to assess protein expressions in RWPE-1 cells.ResultsBPH tissues exhibited greater EMT (TGF-β1: 1.362 ± 0.196 vs. 0.107 ± 0.067, P = 0.003; vimentin: 1.581 ± 0.508 vs. 0.221 ± 0.047, P < 0.001; E-cadherin: 0.197 ± 0.188 vs. 1.344 ± 0.088, P < 0.001), higher AQP5 (1.268 ± 0.136 vs. 0.227 ± 0.055, P < 0.001) and estrogen receptor (ER) α (1.250 ± 0.117 vs. 0.329 ± 0.134, P < 0.001) expression but lower ERβ (0.271 ± 0.184 vs. 1.564 ± 0.130, P < 0.001) expression than NP tissues. E2-stimulated cells had higher AQP5 expression (1.298 ± 0.058 vs. 1.085 ± 0.104, P = 0.049), increased cell proliferation (1.510 ± 0.089 vs.1.000 ± 0.038, P < 0.001), and EMT (TGF-β1 concentration: 0.352 ± 0.021 ng/mL vs. 0.125 ± 0.014 ng/mL, P < 0.001; vimentin: 1.641 ± 0.120 vs. 0.188 ± 0.020, P = 0.002; E-cadherin: 0.075 ± 0.030 vs. 0.843 ± 0.046, P < 0.001) than controls. E2-stimulated cells with AQP5 knockdown exhibited decreased EMT (TGF-β1 concentration: 0.223 ± 0.041 ng/mL vs. 0.352 ± 0.021 ng/mL, P = 0.016; vimentin: 0.675 ± 0.056 vs. 1.641 ± 0.120, P = 0.001; E-cadherin: 0.159 ± 0.037 vs. 0.075 ± 0.030, P = 0.040) than E2-stimulated cells with non-related small interfering RNA (siRNA).ConclusionOur findings suggest that estrogen induces BPH possibly by promoting AQP5 expression. Hence, AQP5 might be a novel target for modulating EMT in prostate epithelial cells.     

ETS基因重排在前列腺癌中的特征分析

目的 确定前列腺癌人群中ETS家族常见成员基因ERG、ETV1、ETV4和ETV5重排的发生频度;分析ERG基因重排与常见临床及分子病理学指标的关联;验证ERG过表达是否促进前列腺癌细胞上皮间质转化(EMT).方法 荧光原位杂交技术(FISH)检测128例前列腺癌患者肿瘤组织中ERG、ETV1、ETV4和ETV5基因的重排和PTEN基因的缺失;免疫组织化学PV-9000二步法检测前列腺癌组织中雄激素受体(AR)及转录因子SOX4的表达;采用siRNA、Real-time PCR和Western blot检测ERG与前列腺癌细胞EMT的关联.结果 ERG在前列腺癌人群中重排发生率为23％ (25/108),其中60％(15/25)的ERG重排患者伴有ERG 5’端的缺失.ETV1、ETV4和ETV5的重排发生率分别为2％ (2/109)、1％(1/103)和0％.ERG基因重排与肿瘤远处转移呈正相关(P＜0.05),但与Gleason评分、术前PSA水平及肿瘤临床分期等无关联.ERG基因重排与PTEN基因的缺失、SOX4蛋白的表达均呈正相关(P＜0.05),但与AR的表达未见相关性;体外实验显示,干扰ERG的表达可抑制前列腺癌Vcap细胞EMT的发生.结论 ERG基因重排在我国前列腺癌患者中的发生频率较西方国家低.ERG基因重排与EMT相关,并可能与其他基因协同发挥促癌作用.     

组织因子途径抑制物-2抑制人前列腺癌细胞的上皮间质转化

目的 探讨组织因子途径抑制物-2 ( TFPI-2 )对人前列腺癌细胞上皮间质转化的影响. 方法 将人前列腺癌细胞株PC3M进行培养,并分为3组,分别转染TFPI-2基因真核表达载体、空载体及不转染,细胞划痕实验和细胞侵袭小室实验检测3组细胞的迁移能力和侵袭能力,用转化生长因子-β1(TGF-β1)处理细胞,倒置相差显微镜下观察3组细胞形态,Western blot法和逆转录聚合酶链式反应( RT-PCR)法分别检测转染组、转染空载体组及未转染组上皮间质转化标志物-E钙黏素( E-cadherin )、波形蛋白( vimentin )和 snail在蛋白和mRNA水平上的表达量. 结果 细胞划痕实验和细胞侵袭小室实验结果显示,转染TFPI-2 基因真核表达载体的PC3M细胞迁移率较低(P<0. 05),侵袭细胞数较少(P<0. 05);显微镜下观察显示转染组细胞大多呈上皮型, 转染空载体组及未转染组细胞大多呈间叶型;Western blot法和RT-PCR法检测结果显示,无论在蛋白水平还是mRNA水平,转染组较转染空载体组及未转染组E-cadherin表达产物较多,vimentin和snail蛋白表达产物较少,差异有统计学意义(P<0. 05),转染空载体组及未转染组差异无统计学意义. 结论 TFPI-2可以抑制人前列腺癌细胞的上皮间质转化,这是其抑制前列腺癌细胞侵袭与转移的可能机制之一,为基因及生物靶向治疗前列腺癌提供新的思路和方向.     

靶向干扰叉头框 E1基因对甲状腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的：观察靶向干扰叉头框E1（forkhead box E1,FOXE1）基因对人甲状腺乳头状癌（papil-lary thyroid carcinoma,PTC）TPC-1细胞上皮间质转化（epithelial to mesenchymal transition,EMT）的影响,探讨其促进肿瘤侵袭迁移的作用机制。方法应用慢病毒介导的RNA干扰技术沉默FOXE1基因表达,用定量PCR及Western blot方法检测干扰FOXE1后TPC-1细胞EMT标志物E-cadherin、N-cadherin和Vim-entin的表达改变。 Transwell侵袭实验和划痕实验检测干扰FOXE1基因后PTC细胞TPC-1的运动、侵袭能力变化。结果干扰FOXE1基因表达后,细胞形态出现EMT变化,上皮表型标志物E-cadherin表达明显降低,而间质表型Vimentin表达显著上升,差异有统计学意义（P＜0.01）,实验组细胞的Vimentin mR-NA表达水平为对照组的2.24倍;同时,PTC细胞TPC-1的运动及侵袭能力明显增强,穿过小室的细胞数为对照组的2.11倍。结论特异性沉默FOXE1基因,可能通过EMT增强PTC细胞的侵袭潜能。     

LINC01285促进结直肠癌细胞的增殖和转移

目的 探究长链非编码RNA LINC01285在结直肠癌（CRC）中的表达特点及临床意义,阐明潜在的生物学功能及调控机制。方法 基于Starbase生物数据库检索LINC01285在CRC及癌旁组织中的表达量;收集本单位结直肠癌患者的CRC样本及周围正常样本各70例,分组为肿瘤组与非肿瘤组;利用荧光定量PCR实验（RT-qPCR）验证本中心CRC队列、肿瘤细胞中LINC01285的表达量,并分析其与患者临床病理参数及无瘤生存时间的关系。采用脂质体转染技术构建LINC01285低表达细胞株并分为si-Control（对照组）、si-LINC01285-1（敲低组1）、si-LINC01285-2（敲低组2）3个组,采用CCK-8实验、流式细胞学、Transwell 法及蛋白印迹法检测 LINC01285 对结直肠癌细胞的增殖、凋亡及转移能力的影响及潜在的调控机制。结果Starbasev3.0 公共数据库获取 TCGA-COAD 转录组测序数据发现 LINC01285 在癌组织中的表达量明显高于正常组织（P=0.00016）;RT-qPCR结果显示：与非肿瘤组相比,LINC01285在肿瘤组表达水平显著上调（P=0.0002）,其表达量与肿瘤组织学分化程度（P=0.036）、T分期（P=0.000）、淋巴结转移（P=0.001）、TNM分期（P=0.000）、Duke分期（P=0.009）和无瘤生存时间（P=0.0102）密切相关。相比于正常结直肠粘膜细胞,CRC细胞（尤其在SW620和HT-29）内LINC01285的表达水显著高表达（P<0.001）。相比于 si-Control 组,脂质体转染的细胞（si-LINC01285-1、si-LINC01285-2）内 LINC01285 表达量显著下降（P<0.001）。同时相比于si-Control组,LINC01285敲低CRC细胞组的增殖能力明显降低（P<0.001）、早期凋亡、晚期凋亡及总凋亡率明显升高（P<0.05）。相比于si-Control组,LINC01285敲低组的CRC细胞迁移和侵袭能力显著下降（P<0.001）,且上皮-间质转化相关通路的E-钙粘蛋白表达量显著升高（P<0.001、N-钙粘蛋白显著下调（P<0.001）。结论 LINC01285的表达与CRC的预后高度相关,可调节上皮-间质转化通路影响CRC细胞的增殖、凋亡与转移能力。     

前列腺癌中HMBOX1的表达水平及其对细胞上皮间质化的影响*

目的 探究HMBOX1在前列腺癌中的表达水平及其对前列腺癌上皮间质化的影响。方法 选取2015年10月—2017年10月在浙江省立同德医院确诊并行根治性前列腺切除术的68例前列腺癌患者作为研究对象（PC组）,选取同期收治的70例良性前列腺增生患者作为对照（BPH组）,采用免疫组织化学法检测HMBOX1在两组的表达;构建HMBOX1过表达（实验组）和对照组稳定细胞系,采用Western blotting检测HMBOX1、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）的表达;采用划痕实验检测HMBOX1过表达对细胞迁移的影响;采用Transwell检测HMBOX1过表达对细胞迁移能力的影响。结果 PC组HMBOX1蛋白的阳性表达率（19.12%）比BPH组（55.71%）下降（P?<0.05）;实验组细胞中E-cadherin的表达水平高于对照组细胞（P?<0.05）,Vimentin的表达水平较对照组细胞下降（P?<0.05）;与对照组细胞比较,实验组细胞24?h后的划痕创口愈合面积较小,迁移速度降低（P?<0.05）。与对照组侵袭细胞数（421.88±45.70）个比较,实验组侵袭细胞数（172.06±19.25）降低（P?<0.05）。结论 HMBOX1在前列腺癌组织中表达降低,过表达HMBOX1可抑制前列腺癌的上皮间质化及肿瘤侵袭迁移能力。     

miR Let-7a1/f1下调前列腺癌1LNCaP细胞中AMD1蛋白的表达

目的研究let-7a1/f1在前列腺癌LNCaP细胞中对S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AMD1)表达的影响及作用机制。方法以LNCaP细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增let-7a1/f1基因的前体序列,将其克隆到pSilencerTM4.1-CMV neo载体中,构建成let-7a1/f1真核表达载体pSilencer-let7a1/f1。瞬时转染LNCaP细胞后,通过RT-PCR法,检测let-7a1/f1在转录水平的表达,同时通过RT-PCR及Western blot检测AMD1在转录和翻译水平的表达变化。构建AMD1基因3’非翻译区(3’-UTR)荧光素酶报告基因融合质粒(pMIR-AMD1),并与pSilencer-let7a1/f1共转染LNCaP细胞,通过双荧光素酶活性检测,确定let-7a1/f1对AMD1 3’-UTR的作用。结果 pSilencer-let7a1/f1和pMIR-AMD1经酶切电泳及测序鉴定正确,pSilencer-let7a1/f1转染LNCaP细胞后,let-7a1/f1表达明显上升,AMD1在转录水平无变化,在翻译水平明显下降,let-7a1/f1转染后,pMIR-AMD1的荧光素酶活性明显降低。结论 miR Let-7a1/f1可作用于AMD1 3’-UTR靶点,抑制AMD1蛋白的翻译,从而降低LNCap细胞中AMD1蛋白的水平。