99mTc标记的新型肺癌多肽分子探针及其生物学分布

目的探讨99mTc标记特异性靶向肺癌小分子多肽的标记方法,观察99mTc-多肽在正常动物体内的动力学特性及体内生物学分布特点。方法采用NHS-MAG3双功能螯合法进行99mTc标记小分子多肽(cNGQGEQc),纸层析法测定标记率,通过体外稳定性实验、半胱氨酸置换实验及血清蛋白结合实验评价99mTc-多肽的放化特性,测定标记物静脉注射后在新西兰大白兔不同时相血液放射性清除曲线;分别测定经尾静脉注射7.4 MBq标记物后的小鼠体内各脏器质量数和放射性计数,计算各脏器每克组织百分注射剂量率(%ID/g);经耳缘静脉注射37 MBq标记物,应用SPECT显像法观察标记物在大白兔体内的放射性动态分布变化。结果99mTc标记多肽的标记率>90%,室温下和血清中37℃下放置12 h放化纯度分别为91%和85%;半胱氨酸置换率<7%;血清蛋白结合率<5%。99mTc标记多肽在兔体内血放射性清除迅速;在小鼠体内清除较快,主要通过肾脏排泄,其余脏器内放射性均较低(P<0.05)。结论99mTc标记基于肺癌特异性靶向多肽的标记方法简单,标记率高,具有良好的体内外稳定性,具有比较理想的体内分布动力学特性。     

~(99)Tc~m-MAG_3-K237的制备及其在健康动物体内的药代动力学和分布研究

目的探讨99Tcm标记血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2,KDR)小分子拮抗肽K237的方法,研究标记物在健康动物体内的药代动力学特性及体内分布特点。方法化学方法合成制备MAG3-K237,并用99Tcm标记;鉴定标记物的理化性质;测定标记物经新西兰大白兔静脉注射后不同时相血液放射性浓度,得出最佳房室模型与药代动力学参数;分别测定经尾静脉注射7.4MBq标记物后的昆明小鼠各器官质量和放射性计数,经参考源校正后计算各脏器每克组织百分注射剂量率(%ID/g);经耳缘静脉注射37MBq标记物,在SPECT下观察其在兔体内的动态分布。结果99Tcm-MAG3-K237的放化纯度为(97.98±0.76)%,比活度为(3.54±0.03)TBq/mmol;室温(25℃)下保存8h后放化纯度为(96.15±0.37)%;半胱氨酸置换率为0.2%～0.37%;不与血清蛋白结合;兔体内动力学过程符合权重为1/c2的三室模型,快分布相半衰期(t1/2α)、慢分布相半衰期(t1/2β)及消除相半衰期(t1/2γ)分别为(4.00±3....     

锝99m标记抗曲霉单克隆抗体的制备及在小鼠体内的分布

目的探讨锝99m(99mTc)标记抗烟曲霉单抗Mab-WF-AF-1的方法,观察标记物体外特性以及在正常小鼠体内生物学分布的特点。方法采用间接标记方法进行标记,薄层层析法检测标记物的标记率和稳定性,体外实验对标记物免疫活性进行鉴定。正常小鼠尾静脉注射3.7 MBq标记物,注射后40 min、2 h、4 h、7 h后取各器官称重后测放射性计数,评价标记物在正常小鼠体内生物分布特性。结果99mTc-WF-AF-1标记率达到95%以上,在磷酸盐缓冲液和血清中稳定性较高。标记物与烟曲霉的结合显著高于金黄色葡萄球菌[(10.32±0.21)%比(1.88±0.45)%,P0.05]和白假丝酵母菌[(10.32±0.21)%比(1.67±0.29)%,P0.05]。加入过量未标记蛋白后,标记物与烟曲霉孢子的结合显著降低。生物分布实验表明,标记物主要分布在肝、脾和肾,40 min和7 h的血池放射活性分别为(2.51±0.23)%ID/g和(0.53±0.13)%ID/g。结论99mTc标记Mab-WF-AF-1制备方法简便,标记率和放化纯度较高,稳定性好,标记物在小鼠体内主要通过肝脏和肾脏代谢,血液清除较快。     

肺癌特异性靶向小分子多肽的131I标记及其在兔体内的动态显像

目的建立肺癌特异性靶向小分子多肽cNGQGEQc的131I标记方法,并通过SPECT动态显像以研究131I-cNGQGEQc在兔
体内的放射分布特性。方法采用氯胺-T法对N-端连接有酪氨酸的小分子多肽cNGQGEQc进行131I标记,利用纸层析法测定
131I-cNGQGEQc的标记率与放化纯度,并观察131I-cNGQGEQc在生理盐水（NS）和正常人血清中于37 ℃孵育24 h后的体外稳定
性及其脂水分配系数。应用SPECT对经耳缘静脉注入131I-cNGQGEQc的新西兰白兔进行显像,结合感兴趣区时间-放射性曲线
分析,观察家兔体内放射性动态分布变化。结果131I-cNGQGEQc 的标记率为90%,经HPLC 纯化后放化纯度为95%;
131I-cNGQGEQc在NS和正常人血清中其放化纯度分别为（93.12±1.18）%和（88.34±5.43）%。131I-cNGQGEQc的脂水分配系数
lg P（正辛醇∕生理盐水）为-1.75,提示所制备的标记多肽是水溶性的。兔SPECT动态显像示：l min双肾即显影,5 min心、肝影开
始减弱,膀胱显影,随后膀胱影持续增强,30 min后软组织影逐渐减弱;胆囊未显影,腹部呈持续低放射分布;甲状腺区及胃未见
明显核素浓聚;各组织器官T-A曲线均随时间逐渐下降。结论131I-cNGQGEQc的制备方法简便,标记率高（>90%）,在体外具有
良好的稳定性;131I-cNGQGEQc为水溶性,主要经泌尿系统排泄,具有比较理想的体内分布特性。本实验结果为进一步的肺癌
荷瘤裸鼠放射性标记多肽的靶向定位诊断与治疗提供实验基础。
     

~(99)Tc~m标记VEGFR-3高亲和融合多肽在荷人卵巢癌裸鼠体内的分布和显像研究

目的 研究~(99)Tc~m标记VEGFR-3高亲和融合肽(phage-SHSWHWLPNLRHYAS)在荷人卵巢癌裸鼠体内分布和放射免疫定位显像.方法 用NHS-MAG3为双功能鳌合剂,固相法合成多肽.~(99)Tc~m预亚锡直接标记法进行标记,纸层析法测定标记率.经尾静脉注射于荷瘤鼠体内,取不同时相进行SPECT显像,测定标记物在体内的分布情况并进行分析.结果 融合多肽的~(99)Tc~m标记率为95.27%,放射化学纯度为96%,放射性浓度24.6 MBq/ml.经鼠尾静脉注射后1 h,植瘤部位开始出现放射性浓集,肾脏、肝脏及膀胱组织也可见显像;注射后3 h肿瘤显像最清晰,每克组织注射百分剂量率(%ID/g)为(30.20±6.89).其余大部分脏器的T/NT值均达最高,最高为肌肉(13.13);注射后4 h肿瘤部位显像逐渐消退.对照组裸鼠的肿瘤部位始终未见显像.结论 筛选获得的VEGFR-3高亲和融合肽能够靶向荷瘤鼠体内肿瘤组织,实现肿瘤的靶向受体显像.     

磺胺嘧啶亲人鼻咽癌CNE2特性的实验研究

目的 验证磺胺嘧啶的亲人鼻咽癌CNE2特性。方法 磺胺嘧啶通过双功能螯合剂二乙撑三氨五乙酸标记放射性核素99mTc，放射性纸层析测定标记率。制作荷人鼻咽癌CNE2裸鼠动物模型，将放射性标记物通过尾静脉注入动物体内，6h后测定各主要脏器及肿瘤组织的放射性，计算肿瘤组织/非肿瘤组织（T/NT）放射性比。结果 在生理盐水层析液中，标记率为90.41%；在正丁醇：乙醇：水层析液中，标记率为90.63%。99mTc标记的磺胺嘧啶经尾静脉注射6h后在荷人CNE2鼻咽癌裸鼠体内的分布与游离99mTc对照组比较，肝脏、脾脏、骨髓的放射性明显减少（P﹤0.05），肿瘤组织的放射性明显增加（P﹤0.01），除了肾脏外，肿瘤组织的放射性高于其他组织、器官，肿瘤组织/非肿瘤组织比值在3.27：1 - 4.53：1。结论 磺胺嘧啶具有亲人鼻咽癌CNE2的特性，有作为载体对鼻咽癌进行靶向治疗的潜能     

99mTC-5-FU免疫纳米粒在荷人胃癌SCID鼠模型体内的分布

目的 探索制备99mTc标记载5-FU抗VEGF单克隆抗体纳米粒(99mTc-5-FU-Ab-NPs)的方法,并观察99mTc-5-FU-Ab-NPs胃癌移植瘤模型体内的分布情况.方法 用改进的Schwarz方法对载5-FU抗VEGF单克隆抗体纳米粒进行99mTc标记,经SephadexG250柱分离纯化,用纸层析法测定标记率与放化纯度;ELISA法和免疫组化法测定标记物的免疫活性;经荷人胃癌鼠静脉注射99mTc-Ab-5-FU-NPs(实验组)及99mTc标记鼠源性多克隆IgG纳米粒(对照组),并于2、6 h行放射免疫ECT显像,用感兴趣区(ROI)技术获得实验组和对照组荷人胃癌鼠全身和肿瘤放射性计数及肿瘤与对侧正常组织(T/NT)的放射性比值;24 h显像后处死鼠,测定体内放射性分布,计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)及T/NT比值.高效液相色谱法检测两组鼠肿瘤组织和血液中5-FU的浓度.结果 制备所得99mTc-5-FU-Ab-NPs标记率为90%～95%,抗体的活性在标记前后无明显下降;荷人胃癌鼠放射免疫显像结果提示静脉注射99mTc-5-FU-Ab-NPs 2 h后肿瘤已显影,随时间延长到6 h更清晰,2和6 h肿瘤组织ID%/g均显著高于对照组;6 h时实验组肿瘤组织ID%/g和肿瘤与血液的放射性比值较2 h时升高;同时,实验组肿瘤组织中5-FU浓度随着时间延长呈持续升高且与对照组5-FU浓度相比有显著性差别.结论 本研究制备所得99mTc-5-FU-Ab-NPs能较好地满足放射免疫显像的要求;抗VEGF单克隆抗体的免疫导向作用可靠,注射后6 h,99mTc-5-FU-Ab-NPs在肿瘤组织中有相对较高的特异性浓聚.     

肝细胞受体显像剂~(99m)Tc-乳糖酸-壳聚糖的制备及在小鼠体内的生物分布分析

[目的]制备99mTc标记的壳聚糖-乳糖酸复合物(99mTc-LA-CS),观察99mTc-LA-CS在正常裸鼠体内的生物分布及去唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)介导的肝细胞靶向作用.[方法]采用氯化亚锡还原法构建99mTc-LA-CS复合物,尾静脉注射给予裸鼠99mTc-LA-CS后分别在10min,60min,2h处死,取血液、肝脏、脾脏、胃、肠、肾脏、肺和肌肉等组织,进行99mTc放射性检测,计算各个脏器每克组织的放射性摄取比率(%ID/g),并进行体内生物分布分析.[结果]99mTc标记率高于93%,生物分布分析结果显示在裸鼠肝脏中有较高的摄取,在60min时,肝脏摄取率高于70%ID/g.[结论]放射性核素99mTc标记的LA-CS在肝细胞中有特异性摄取,提示99mTc-LA-CS可作为ASGP-R介导的肝脏显像剂用于肝细胞成像.     

99Tcm标记VPAC1配体TP1724及其在动物体内分布与显像研究

目的 制备同位素99Tcm标记血管活性肠肽受体(vasoactive intestinal peptide receptor,VIPR)结合肽TP1724(标记率＞90％),鉴定其理化性质,并探讨其在正常动物体内的生物分布特点、示踪动力学及显像表现.方法 制备G(D) AGG-Aba-VP2 (TP1724);99Tcm间接标记TP1724(SnCl2·2H2O还原法),纸层析法测定标记率和比活度;稳定性实验(体外)、人血浆蛋白结合实验、半胱氨酸置换实验及脂/水分配实验等鉴定标记多肽的理化性质;35只正常小鼠分成7组,每只尾静脉注射3.7 MBq99Tcm-TP1724后于不同时间处死,收集9种组织器官并称取质量、分别测定各种组织器官的放射性,换算为％ ID/g(每克组织百分注射剂量);9只健康家兔各静脉注射37 MBq 99Tcm-TP1724后不同时间取血,测定血液放射性并换算为kBq/L,经DAS 3.1.6软件处理判断最佳房室模型,并得出动力学参数;5只健康家兔分别静脉注射37 MBq 99Tcm-TP1724,SPECT动态显像观察体内放射性分布变化.结果 99 Tcm-TP1724的标记率(96.57±0.71)％,比活度(25.52±0.29) TBq/mmol.室温下隔绝空气放置4h,放化纯度为(93.64±2.25)％;Sephadex G-50柱层析示,99Tcm-TP1724血浆蛋白结合率约为6.61％;99Tcm-TP1724与不同浓度半胱氨酸37℃温育1h后,未结合99Tcm含量无明显变化;脂/水分配系数lg P为-(1.99 ±0.02).99Tcm-TP1724在健康家兔体内的动力学符合权重为1的二室模型,分布半衰期t1/2α为(2.64±1.32) min,消除半衰期t1/2β为(78.36±13.38) min.体内生物分布和/或动态显像示:血液放射性清除迅速;颈部及胃区未见异常放射性聚集,脑部显示低放射性分布;放射性大部分通过肾脏排泄,少量经肝胆分泌.结论 99Tcm-TP1724标记方法简便、标记率和比活度高、稳定性好、体内动力学性质优良.     

99Tcm-TP1093的制备及其在健康动物体内的生物分布及动力学特点

目的 制备标记率符合显像要求的99Tcm-TP1093,探讨其在健康动物体内的生物分布及动力学特点.方法 化学合成G(D) AGG-Aba-ATAQSAYG-NH2(TP1093);氯化亚锡还原法99Tcm标记TP1093,纸层析测定标记率,计算比活度;体外稳定性实验、血清蛋白结合实验及脂/水分配实验鉴定99Tcm-TP1093的理化性质;研究标记多肽在健康家兔体内的示踪动力学和正常小鼠体内生物分布;健康家兔99Tcm-TP1093显像,观察体内放射性动态分布变化,利用感兴趣区(region of interest,ROI)技术分析重要组织器官的时间-放射曲线(time-activity curve,TAC).结果 99Tcm-TP1093的标记率为(97.23±0.87)％,比活度为(15.91±0.62) TBq/mmol.标记多肽室温放置4h,其放射化学纯度为(93.34±0.91)％.标记多肽与血清蛋白无明显结合,脂/水分配系数lgP=-(1.68±0.09).标记多肽在健康家兔体内的动力学过程符合权重为1/c的二室模型,t1/2α为(2.689 ±0.541) min,t1/2β为(69.156±20.342) min,总清除率(CL)为(5.029±4.381)mL/kg.小鼠体内分布和健康家兔显像示:血液放射性清除迅速,软组织放射性消退快;胃区呈放射性缺损,甲状腺区未见异常放射性浓聚,脑呈低放射性分布;体内放射性主要经泌尿系统排泄,少量通过肝胆系统分泌.结论 99Tcm-TP1093标记方法简便,标记率与比活度高,可制备成一步法冻干药盒,具有良好的稳定性、体内生物分布及动力学性质.     

Experimental studies on imaging of infected site with 99mTc-Iabeled ciprofloxacin in mice

Background Bacterial infection can pose a substantial diagnostic dilemma.99mTc-labeled ciprofloxacin (CPF) was developed as a biologically active radiopharmaceutical to diagnose infection.In the present research,we studied the biodistribution and imaging properties of infection tracer 99mTc-CPF in a mouse model of infection.Methods CPF was labeled with 99mTc and the radiochemical purity and labeling rate were measured.A mouse model of infection was established.We then determined the biodistribution of 99mTC-CPF and conducted the whole body scintigraphy of the animal model.Results 99mTc-Ciprotech was stable for at least 6 hours at room temperature.The labeling rate of CPF by 99mTc was over 90%.Clearance of radioactivity mainly occurred in the liver and kidney,and the clearance from blood was rapid.Both biodistribution and imaging results showed higher uptake of 99mTc-CPF at sites of infection.The infectious tissue/normal tissue ratio peak was 4.30 at 4 hours after injection.Conclusions 99mTc-CPF is a sensitive radiopharmaceutical for scintigraphy of infectious lesions and it is easy to prepare.     

Biodistribution and preparation of technetium-99m-labeled D-D3 monoclonal antibody against pro-gastrin-releasing peptide (31-98) in mice

Background We previously reported that iodine-131(131I)-labeled anti-pro-gastrin-releasing peptide (ProGRP(31-98)) monoclonal antibody D-D3 could selectively accumulate in the tumor sites of nude mice ...     

NHS-MAG3为螯合剂的99mTc-寡核苷酸标记特性

目的 探讨以NHS-MAG,作为螯合剂的^99mTc-寡核苷酸(^99mTc-ON)的标记特性。方法将NHS-MAG,与长度为15个碱基的c-myc mRNA的反义(ASON)、正义(SON)和无义寡核苷酸(MON)偶联,进行^99mTc标记,Sephadex G25 柱层析分离纯化,评价^99mTc-ON的标记率、放化纯和稳定性;将ON-MAG,偶联物置-20℃贮存15 d、1月、2月后进行^99mTc标记,观察标记率的变化,评价ON-MAG3的稳定性;用三氯乙酸沉淀法测定^99mTc-ON的血浆蛋白结合率。结果 ^99mTc-ASON、^99mTc-SON和^99mTc-MON的标记率分别为68．41％、66．24％和69．38％,纯化后放化纯分别为96．98％、95．34％和94．62％。三者在室温和血清中均较稳定。ON-MAG3在-20℃保存2月后,标记率未见明显下降。三种^99mTc-ON的血浆蛋白结合率均小于13％。结论以NHS-MAG3作为螯合剂的^99mTc-ON具备优良的标记特性,标记率、放化纯较高,稳定性好,血浆蛋白结合率低,是一种有临床应用潜力的放射性标记药物。     

GLP-1受体激动剂exendin-4的放射性标记及生物分布实验研究

目的 确立131I标记胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体激动剂exendin-4多肽的最佳标记条件,并研究131I-exendin-4在正常小鼠体内的生物分布。 方法 131I标记exendin-4多肽采取氯胺-T方法标记,利用纸层析法计算标记产物的标记率及放化纯度,测定131I-exendin-4的体外稳定性及脂水分配系数,研究131I-exendin-4在注射后的1、3、6、12和24 h时在正常小鼠体内的分布特征,对经尾静脉注入131I-exendin-4的小鼠进行SPECT多时相显像,并观察小鼠体内放射性分布变化。 结果 exendin-4的131I标记率在85%以上,放化纯度大于97%,131I-exendin-4在人血清和生理盐水中仍保持较好的体外稳定性,131I-exendin-4的脂水分配系数为-1.002。正常小鼠静脉注入131I-exendin-4后,双肾的放射性分布明显较其他组织器官的放射性增高,1 h和12 h肾脏的每克组织百分注射剂量率(%ID/g)分别为(51.54±13.51)%ID/g和(11.61±0.94)%ID/g,胃、肺的摄取相对较高,3 h后除肾脏外的其他各脏器器官的放射性均较快下降。正常小鼠静注131I-exendin-4后的SPECT多时相显像示随着时间的延长,双肾及膀胱的放射性浓聚影增加,而其他器官未见明显放射性浓聚影分布。 结论 131I标记exendin-4的标记率较高(大于85%),体外稳定性良好,131I-exendin-4为水溶性物质,可通过泌尿系统排泄,体外分布特性比较理想。      

直接还原法标记^99mTc与抗人膀胱癌单克隆抗体BDI—1

通过２ － 巯基乙醇直接还原法将抗人膀胱癌单克隆抗体 Ｂ Ｄ Ｉ－ １ 与核素９９ｍ Ｔｃ 进行标记, 制备９９ ｍ Ｔｃ － Ｂ Ｄ Ｉ－ １ ． 优化条件后进行标记并进行一系列检测． 结果： 标记率为７２ ％ , 经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ 柱纯化后标记抗体的放化纯度高于９５ ％ ; 标记抗体的免疫活性分数为８７ ％ , 与 Ｅ－ Ｊ细胞的结合率为９０ ％ ; 无毒、无菌、无热原． 结果表明： ２ － 巯基乙醇直接还原法将抗人膀胱癌单克隆抗体 Ｂ Ｄ Ｉ－ １ 与核素９９ ｍ Ｔｃ 进行标记为进一步进行膀胱癌的放射免疫显像诊断奠定了基础．     

LyP-1肽的131碘标记及其生物分布研究

目的：探讨Na131 I标记LyP-1肽的可能性以及Na131 I标记的LyP-1肽在乳腺癌裸鼠体内的生物分布。方法：包含LyP-1序列的十环肽（YCGNKRTRGC）通过固相合成法合成。在两个半胱氨酸之间形成二硫键以维持肽的环形结构。LyP-1肽通过氯胺-T 法进行Na131 I标记。通过尾静脉途径将Na131 I标记LyP-1肽以及对照肽注射于荷MDA-MB-435乳腺癌裸鼠体内并测量其生物分布情况。结果：LyP-1肽的Na131 I标记率可达80％±5％（n＝5）,放射化学纯度约96％。在37℃新鲜人血清中Na131 I标记 LyP-1肽24h其放射化学纯度仍然达92％。在生物分布研究中,Na131 I标记 LyP-1肽在肿瘤中的聚集水平明显高于其他组织。结论：通过氯胺-T 法可以成功的将131 I标记于LyP-1肽。131 I标记的LyP-1肽在37℃新鲜人血清中24h仍然保持稳定,并可被肿瘤组织高度摄取。     

99Tcm标记反义miR208b 寡核苷酸及其转染离体肥大心肌细胞的实验研究

目的探索用放射性核素99Tcm标记反义miR208b寡核苷酸,并转染离体早期肥大心肌细胞的实验过程及方法。方法合成
针对miR208b 的反义miR寡核苷酸（AMO）,LNA（带锁核酸）修饰AMO,将双功能螯合剂NHS-MAG3（N-羟基琥珀酰亚胺-巯
基乙酰基三甘氨酸）与LNA-AMO偶联后,用99Tcm 标记,然后用Sep-Pak C18反相层析法对NHS-MAG3 -LNA- AMO及其标记
物进行洗脱纯化,前者同时经Gene Quant DNA/RNA calculator测定在260 nm波长处的吸光度;不同检测方法测定纯化后标记
物的标记率、放化纯度、稳定性以及与靶基因杂交的活性;建立由血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的离体心肌肥大细胞模型,检验早
期肥大心肌细胞内miRNA208b的相对表达量以及经脂质体包裹的99Tcm-NHS-MAG3-LNA- AMO在早期肥大心肌细胞内的滞
留率。结果纯化后的标记物标记率>84%,放化纯度>86%,标记物分别在新鲜人血清、生理盐水中孵育12 h后,放化纯度均大于
80%,并具有与靶向基因杂合的能力。离体心肌肥大模型成功建立,测得早期心肌肥大细胞内miRNA208b表达升高,且最终标记
物转染细胞后6 h滞留率大于20%。结论在双功能螯合剂NHS-MAG3以及LNA的介导下,成功将放射性核素99Tcm标记于NHSMAG3-
LNA- AMO,最后将反义探针顺利转染早期离体肥大心肌细胞,这为后续的在体心肌肥大核素显像提供重要实验基础。