深圳市罗湖区禽畜肉中空肠弯曲菌的流行状况及分子分型

目的 了解深圳罗湖区市售不同肉类来源的空肠弯曲菌流行分布状况及分子分型结果。方法 采集2016年—2021年4月、6月、10月深圳市罗湖区各大超市、农贸市场生禽肉及生畜肉样品共280份作为研究对象,采用双孔滤膜法对空肠弯曲菌进行分离培养及荧光PCR法鉴定,通过脉冲场凝胶电泳对目标菌进行分子分型。结果 2016年—2021年280份食品样本共有52份样本中检出空肠弯曲菌,阳性率为18.57%,其中136份生禽肉类样本中有49份检出空肠弯曲菌,阳性率为36.03%;144份生畜肉类样本中有3份检出空肠弯曲菌,阳性率为2.08%,生禽肉类的阳性率高于生畜肉类（χ2=53.30,P<0.01）。62株菌株PFGE分子分型得到57种带型。结论 罗湖区生禽肉和生畜肉均存在空肠弯曲菌污染的风险,其中禽肉类污染高于畜肉类,PFGE分子分型溯源结果显示菌株污染来源呈现多态性。     

鸡胴体中空肠弯曲菌的分离鉴定及分子分型研究

目的对5省份屠宰场鸡胴体中分离的空肠弯曲菌进行鉴定和分子分型,为建立空肠弯曲菌食物中毒的追踪溯源数据库提供科学数据。方法采用生化和分子生物学方法筛检和鉴定鸡专项监测网报送的鸡胴体中分离株。利用属特异16S rRNA基因和种特异的MapA、CeuE基因引物,建立多重PCR反应,鉴定空肠弯曲菌;参照国际认可的PFGE方法,选用内切酶SmaⅠ和KpnⅠ分别进行单酶切,并利用BioNumerics软件对分离株的电泳指纹图谱进行聚类分析,所得结果收入溯源数据库。结果对81株屠宰场鸡胴体分离株进行生化和PCR鉴定,确证72株为空肠弯曲菌,9株为结肠弯曲菌;脉冲场凝胶电泳分子分型结果表明,这72株空肠弯曲菌共产生48种带型。通过聚类分析,按照63.9%相似度将这些菌株分为A~M共13个群。每群包含1~11个带型,72株菌的带型分布具有完全地域同源性,即同一带型的菌株均来自同一省份。结论采用SmaⅠ和KpnⅠ单酶切进行PFGE分型,结合聚类分析,可提高PFGE分型的分辨率,增加菌株分型的准确性和溯源的可信性。     

鸡胴体中空肠弯曲菌的分离鉴定及分子分型研究北大核心CSCD

目的对5省份屠宰场鸡胴体中分离的空肠弯曲菌进行鉴定和分子分型,为建立空肠弯曲菌食物中毒的追踪溯源数据库提供科学数据。方法采用生化和分子生物学方法筛检和鉴定鸡专项监测网报送的鸡胴体中分离株。利用属特异16S rRNA基因和种特异的MapA、CeuE基因引物,建立多重PCR反应,鉴定空肠弯曲菌;参照国际认可的PFGE方法,选用内切酶SmaⅠ和KpnⅠ分别进行单酶切,并利用BioNumerics软件对分离株的电泳指纹图谱进行聚类分析,所得结果收入溯源数据库。结果对81株屠宰场鸡胴体分离株进行生化和PCR鉴定,确证72株为空肠弯曲菌,9株为结肠弯曲菌;脉冲场凝胶电泳分子分型结果表明,这72株空肠弯曲菌共产生48种带型。通过聚类分析,按照63.9%相似度将这些菌株分为A^M共13个群。每群包含1~11个带型,72株菌的带型分布具有完全地域同源性,即同一带型的菌株均来自同一省份。结论采用SmaⅠ和KpnⅠ单酶切进行PFGE分型,结合聚类分析,可提高PFGE分型的分辨率,增加菌株分型的准确性和溯源的可信性。     

上海市2014年腹泻患者弯曲菌分离、毒力基因检测及分子分型结果

[目的]了解上海市2014年腹泻患者中弯曲菌感染现状,并分析弯曲菌的毒力基因及分子分型特征。[方法]采用膜过滤法对2014年上海市2 235例腹泻患者肛拭标本进行弯曲菌检测,并用常规生化试验和PCR方法鉴定分离菌株。采用PCR检测弯曲菌分离株的6种毒力相关基因,包括鞭毛蛋白基因fla A,细胞溶涨毒素cdt基因簇cdt A、cdt B、cdt C,p Vir质粒vir B同源性基因vir B11,外膜蛋白基因cad F。采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)法对弯曲菌分离株进行分子分型。[结果]2 235例腹泻患者的肛拭标本中共检出弯曲菌43株,阳性率为1.9%。其中空肠弯曲菌占95.3%(41/43),结肠弯曲菌占4.7%(2/43)。毒力相关基因检测显示,100.0%(43/43)的弯曲菌菌株fla A基因和cad F基因阳性,93.0%(40/43)的弯曲菌菌株cdt A基因和cdt B基因阳性,88.4%(38/43)的弯曲菌菌株cdt C基因阳性,只有7.0%(3/43)的弯曲菌菌株vir B11基因阳性。43株弯曲菌经PFGE分型,共分为6个聚类。[结论]上海市腹泻患者中分离的弯曲菌普遍存在fla A和cad F基因,cdt A、cdt B、cdt C基因携带率高,vir B11携带率略低。弯曲菌分子分型呈多样化和复杂化特征,其引起的腹泻以散发为主。     

长沙市沙门菌表型特征及PFGE分子分型研究

目的研究长沙市沙门菌的血清型分布、耐药特点及分子流行病学特征。方法对分离自长沙地区食源性疾病粪便标本及市售食品中的70株沙门菌,用玻片凝集试验确定血清型,微量肉汤稀释法检测14种抗生素的敏感性,脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分子分型。结果鼠伤寒沙门菌为优势血清型,占51.43%,其次是肠炎沙门菌,占7.15%。在抗生素敏感性测试中,对氨苄青霉素、磺胺嘧啶和氯霉素的耐药率较高,分别为68.57%、61.43%和57.14%。62.86%（44/70）的沙门菌呈多重耐药,且鼠伤寒沙门菌的多重耐药率比其他血清型高（χ²=7.068,P≤0.01）,差别有统计学意义。PFGE分型结果显示69株沙门菌按照100%的相似度可分为57个PFGE型,36株鼠伤寒沙门菌可分为4个聚类,相似度在58.1%~100%之间。结论本市的沙门菌以鼠伤寒和肠炎沙门菌为主,PFGE分型结果显示可能存在沙门菌的流行株,且菌株耐药形势严峻。     

食品中沙门氏菌血清及PFGE分型研究

目的了解吉林省食品中分离的沙门氏菌血清型与脉冲场凝胶电泳（PFGE）基因分型,探索沙门氏菌的分子多态性。方法将从市售鸡肉、鸡胴体、中式凉拌菜及婴儿配方奶中分离出的10株沙门氏菌进行血清学分型、PFGE分子分型,BioNumerics version软件分析比较同源性。结果 10株沙门氏菌血清型分别为4株肠炎沙门氏菌,3株里定沙门氏菌,2株阿贡纳沙门氏菌和1株雷摩沙门氏菌。PFGE聚类分型结果主要分为4型：1型4株,相似度超过95%;2型3株,又分2个亚型,亚型间的相似度为78%;3型2株,相似度为100%;4型1株。结论吉林省食品中沙门氏菌具有不同血清学及PFGE型别,相同来源和血清型的菌株PFGE型别显示高度同源性。     

福建省志贺菌PFGE分型研究

目的了解福建省志贺菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型情况,描述基因群的流行及分布特征,探讨优势血清群的变迁规律。方法收集2005-2010年志贺菌96株,分离自临床患者。选择NotⅠ进行酶切,H9812作为脉冲场凝胶分子量标准。采用脉冲场凝胶电泳技术分析电泳酶切指纹图谱,运用BioNumer-ics软件进行聚类分析。结果按照100%的相似度可将34株福氏志贺菌酶切图谱分为27种PFGE型别;将62株宋内志贺菌酶切图谱分为43种PFGE型别。根据TENOVER原则,福氏志贺菌有2个优势基因群G1-G2,宋内志贺菌有4个优势基因群GI-GIV。优势基因群集中分布于7～10月,其他PFGE型别分布比较分散,无明显时间和地区的聚集性。结论福建省志贺菌分子分型呈现多样性,宋内和F4c的某些基因群可能逐渐演变为福建省优势且稳定的志贺菌流行菌株。     

2021年长沙市食源性疾病沙门菌血清分型及PFGE分子分型分析

目的 了解长沙市食源性疾病沙门菌的血清分型和PFGE分子分型情况,为食源性疾病防控提供依据。 方法 按《食源性疾病监测工作手册》收集长沙市4所哨点医院食源性疾病病例粪便标本,从中分离沙门菌,并对沙门菌进行血清分型和凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE),通过Bionumerics 7.6 软件对电泳图谱进行分析。 结果 全年共监测528份标本,检出沙门菌50株,检出率为9.47%,阳性病例主要集中在5岁及以下年龄段,占74.00%(37/50),发病主要在夏秋5—9月,占全年的76.00%(38/50)。血清型共有12种,主要血清型是鼠伤寒沙门菌占60.00%(30/50),其次为斯坦利沙门菌4株占8.00%,肠炎沙门菌3株占6.00%。 50株沙门菌PFGE分型为41种带型,相似度为55.7％～100％,呈现多态性,主要分成两个簇,有8组相似度 100％ 的菌株,共17株(占34.00%,17/50),主要是鼠伤寒沙门菌;有10簇相似度90%以上的克隆系,包含32株沙门菌。 结论 长沙市2021年食源性疾病沙门菌感染的优势血清型是鼠伤寒沙门菌,沙门菌PFGE分子分型带型呈多态化,PFGE分型可识别共同感染来源的病例,可用于暴发疫情识别和控制。     

上海市闵行区鼠伤寒沙门菌病原学与PFGE分型研究

目的了解2015年-2017年闵行区腹泻病监测点鼠伤寒沙门菌的病原学及脉冲场凝胶电泳(PFGE)特征。方法按照《上海市腹泻病综合监测实施方案》进行沙门菌分离鉴定;药物敏感试验采用纸片扩散法(K-B法);PFGE参照Pulse Net China沙门菌PFGE分子分型标准操作规程。结果鼠伤寒沙门菌在2015年-2017年检出率呈逐年增长趋势;鼠伤寒沙门菌对10种抗生素耐药率为四环素56.32%、萘啶酸31.03%、氯霉素20.69%、复方新诺明17.24%、头孢噻肟8.05%、头孢呋辛8.05%、庆大霉素5.75%、环丙沙星3.45%、头孢西丁1.15%、诺氟沙星1.15%,存在多重耐药。PFGE将87株鼠伤寒沙门菌分为62个带型,每个带型含1株~5株菌,分为A、B两大聚类,相似度为57.2%~100%。结论经过多种抗生素共同作用筛选得到的菌株成为鼠伤寒沙门菌扩散的主要来源,在PFGE优势克隆系中能体现。PFGE技术为聚集性病例的追踪溯源提供了分子生物学依据。     

一起空肠弯曲菌引起的食源性疾病事件的病原学检测结果分析

目的 对绍兴市某学校一起空肠弯曲菌引起的食源性疾病事件进行病原学研究，为食源性疾病突发事件的应急处置提供依据。方法 采集该事件患者肛拭子、食堂工作人员肛拭子、留样食品样品和环境样品共46份，采用快速多重病原基因检测系统筛查病原体，锁定目标病原后，将病原菌分离鉴定与实时荧光PCR同步检测，采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)探究菌株同源性，采用琼脂稀释法检测菌株耐药情况。结果 采集的46份样品中，分离鉴定出空肠弯曲菌4份，均来自患者。PFGE聚类分析结果显示，4株空肠弯曲菌同源性为100.0%。药敏结果显示，4株菌对萘啶酸、环丙沙星、氟苯尼考和四环素4种抗生素均耐药。结论 这是绍兴市首次由空肠弯曲菌感染引起的食源性聚集疫情，建议加强学校食堂卫生管理、在校学生和教职员工的健康教育，养成良好的卫生习惯。     

一起中学弯曲菌食源性疾病暴发事件的病原学检测结果

目的 分析苏州市某中学一起弯曲菌食源性疾病暴发事件的病原学检测结果,为弯曲菌食源性疾病暴发事件致病因子识别提供参考.方法 收集该事件病例肛拭子18份、食堂工作人员肛拭子10份、留样食品43份、饮用水样品2份、食品原材料2份和环境涂抹样品31份,采用胃肠道感染测试条快速筛查病原体,采用双孔滤膜法分离培养病原菌,采用脉冲场...     

应用PFGE及SPA-typing基因分型技术对金葡菌食物中毒溯源分析

目的建立金黄色葡萄球菌（金葡菌）的脉冲场凝胶电泳（PFGE）和SPA基因序列分析技术（SPA-typing）,应用于金葡菌引起的食物中毒准确溯源。方法按照GB/T4789-2003对样品进行菌株分离和生化鉴定。对同一起食物中毒分离的金葡菌株,分别用PFGE和SPA-typing技术进行分析。结果在食物中毒调查中共7份样品分离出金葡菌。该批菌株经PFGE分型呈现为一致的带型,相似性系数为100%。SPA-typing分型均为t 5593型。结论 PFGE和SPA-typing均显示患者、剩余食品和加工环境来源菌株均为同一克隆群。这是一起由于加工环境污染金葡菌引起的食物中毒。PFGE和SPA-typing分型技术均显示了良好的分型效果。     

杭州地区1998—2005年志贺菌分子分型及变异研究

脉冲场凝胶电泳(PFGE)是一种重复性好、分辨率高的细菌分子分型方法,已被广泛应用于病原性细菌的分子流行病学研究。作者利用PFGE分子分型方法对1998-2005年杭州地区分离到的116株志贺菌进行分子分型,以探索志贺菌的PFGE型别变异情况。1.材料与方法:①菌株来源:试验菌株由杭州市和所辖县(市、区)疾病预防控制中心(CDC)提供,所有菌株均分离于腹泻患者的粪便。②PFGE分型:按照2005年美国CDC公布的宋内志贺菌PFGE标准化方法操作,Marker为沙门菌Braenderup血清型H9812株。电泳条件:电压6V,脉冲参     

单核细胞增生李斯特菌PFGE分型与血清学分型的联合分析

目的:采用国际标准化的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析方法对单核细胞增生李斯特菌(Lm)进行基因分型,同时进行血清学分型,比较分析两种分型方法的优劣和之间的关系。方法:按照标准化的Lm-PFGE方法对17株Lm进行PFGE分型,分别用限制性内切酶ApaI和AscI酶对菌株进行酶切,通过脉冲场凝胶电泳获得电泳图谱,利用B ioNum erics软件对图谱进行聚类分析。同时对上述菌株进行血清学分型。结果:17株Lm被内切酶ApaI分为13种带型,被内切酶AscI分为14种PFGE型。17株Lm分为5种血清型。结论:Lm-PFGE分型方法是一种高分辨力、稳定可靠的技术。PFGE的分辨力高于血清学分型,两种分型方法密切相关。聚类分析结果显示ApaI酶切分型与H抗原密切相关。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PFGE分型与医院感染暴发的分子流行病学研究

目的了解医院感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的同源性及院内流行特征,为临床控制MRSA感染、制定合适的预防控制措施提供依据。方法收集2011年6-7月全院患者各类标本中分离出的MRSA 36株,金黄色葡萄球菌鉴定采用法国生物梅里埃公司的VITEK-2全自动微生物分析系统,根据美国CLSI标准用头孢西丁K-B法确认MRSA;运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对医院感染MRSA进行基因分型,并进行流行病学分析。结果临床分离的36株MRSA,PFGE分型为6型8个亚型,其中以A型为主;在研究期间,NICU及ICU发生两次MRSA感染暴发。结论 MRSA在NICU及ICU易发生交叉感染;PFGE是医院感染暴发及流行病学的较好的研究手段。     

湖南省食源性德尔卑沙门菌耐药谱及PFGE分型研究

目的了解湖南省食源性德尔卑沙门菌的耐药谱及分子分型,建立沙门菌指纹图谱数据库。方法运用肉汤稀释法对食源性德尔卑沙门菌进行药敏试验,并采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)进行分子分型。结果 47株德尔卑沙门菌中,有46株对1种以上抗生素耐药(97.87%),有29株多重耐药菌株(61.70%);德尔卑沙门菌分为32种PFGE型,其中有10种PFGE型的菌株数超过1株。结论湖南省食源性德尔卑沙门菌分离株呈高耐药和多重耐药趋势,PFGE分子型别呈多态性,有同源菌株存在,PFGE分型为食源性疾病溯源和预警提供技术基础。     

外膜蛋白SDS-PAGE对空肠弯曲菌的分型研究

用SDS-PAGE技术检测分析不同来源的41株空肠弯曲菌外膜蛋白特征。根据外膜蛋白SDS-PAGE凝胶上六条蛋白带多少的组合和外膜蛋白主带分子量的大小可将其各分为七个和九个型;根据外膜蛋白SDS-PAGE定量聚类分析可将其分为七个型(以95％相似性为水准)。结合此三种方法可更细致地鉴别不同来源的菌株,表明外膜蛋白SDS-PAGE技术是鉴别分型细菌的有效方法。     

2007年四川省鼠伤寒沙门菌PFGE分型及溯源

目的 用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术.研究四川省2007年鼠伤寒沙门菌分子流行病学,查找沙门菌污染源,为预测疫情和制定防治措施提供依据.方法 选择Xba I酶对12株鼠伤寒沙门菌全基因组DNA进行酶切,用PFGE对菌株进行分子分型,Bionumerisc统计软件聚类分析.结果 12株鼠伤寒沙门菌用XbaI限制性酶切后,分成5个PFGE图谱类型,其中1个PFGE图谱类型有7株菌株,其指纹图谱的相似性达到100%,该型别占分析菌株的58.33%.其余4个PFGE图谱类型分别有2株菌和1株菌.含7株菌的PFGE图谱型中,源于成都市的菌株4株,攀枝花、自贡和内江市的菌株各1株.结论 PFGE分子分型与流行病学资料紧密结合可增强对鼠伤寒沙门菌食源性疾病的溯源和预警.     

2007年-2009年山东省生肉中单增李斯特菌的耐药性及分子分型分析

目的:了解山东省生肉中单增李斯特菌的耐药及分子分型特点。方法:药敏实验采用微量肉汤稀释法对15种抗生素进行了耐药检测,分子分型采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)的方法。结果:药敏实验显示14.08%的菌株产生耐药,其中对红霉素、左氧氟沙星、复方新诺明的耐药率较高(2.82%);71株菌用PFGE方法分为17个带型,以3型为主。结论:山东省生肉中单增李斯特菌存在较为严重的耐药现象,应加强菌株的耐药性监测;相同来源的单增李斯特菌来自不同的克隆株,但部分菌株有不同程度的相关性;耐药试验和PFGE分型可以相结合,以更好地预防和控制细菌性传染性疾病的发生。