丙戊酸对前列腺癌PC3细胞自噬的影响

目的 观察丙戊酸(VPA)诱导前列腺癌PC3细胞发生自噬性死亡的现象,初步探讨其发生的可能机制。方法 VPA作用前列腺癌PC3细胞后, 应用CCK-8试剂盒检测细胞生存率,透射电子显微镜及细胞免疫荧光测定仪观察细胞超微结构及自噬水平, Western-blotting检测PC3细胞内自噬特异性蛋白-Ⅱ(LC3-Ⅱ)及p-Akt蛋白的表达水平。结果 经VPA处理后,前列腺癌PC3细胞活性短期内(≤4d)未受到明显抑制。透射电子显微镜观察可见,前列腺癌PC3细胞质内有大量自噬体和自噬溶酶体,其自噬水平随VPA作用时间的延长逐渐增强。Western-blotting检测表明,前列腺癌PC3细胞LC3-Ⅱ表达水平随VPA作用时间的延长明显升高,而p-Akt表达水平则明显降低。结论 VPA可诱导前列腺癌PC3细胞发生自噬,其诱导前列腺癌PC3细胞发生自噬的机制可能与阻断Akt/mTOR信号转导通路有关。     

丙戊酸钠诱导人结肠癌细胞HT-29自噬及其机制研究

目的对丙戊酸钠诱导人结肠癌细胞HT-29发生自噬性死亡的过程进行观察,并初步探讨其可能的机制。方法用不同浓度、不同作用时间的丙戊酸钠处理人结肠癌细胞系HT-29,用细胞计数试剂盒CCK8法观察其对细胞增殖的抑制作用,丹酰戊二胺染色法观察细胞自噬,荧光测试仪检测自噬水平,荧光定量PCR法检测以下基因表达水平的变化：微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3-Ⅱ）、自噬相关基因Beclin-1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）和磷酸化核糖体蛋白S6激酶（p-p70S6K）。结果随着丙戊酸钠处理浓度的递增及作用时间的延长,其对人结肠癌细胞HT-29的增殖抑制率逐渐提高,呈剂量依赖性及时间依赖性（P均﹤0.01）;同时,随着药物浓度的增加,细胞中自噬泡数量增多,荧光强度增强,与对照组比较,差异有统计学意义（P均〈0.05）。经丙戊酸钠处理后,自2 mmol/L浓度始,人结肠癌细胞系HT-29自噬相关基因LC3-Ⅱ和Beclin-1表达水平明显升高（P均〈0.01）,而mTOR、p-Akt和p-p70S6K表达水平明显降低（P均〈0.01）。结论丙戊酸钠可诱导结肠癌细胞发生自噬,其诱导结肠癌细胞发生自噬的机制可能与阻断mTOR-Akt信号转导通路及激活Beclin-1信号转导通路有关。     

末端结合蛋白1 (EB1)在宫颈组织中的表达及其对自噬标志蛋白表达的影响

 目的  探讨末端结合蛋白1 (end binding protein 1,EB1)在宫颈组织中的表达及其对自噬标志蛋白LC3和p62/SQSTM1蛋白表达的影响。方法  免疫组织化学检测EB1在宫颈癌、宫颈息肉和慢性宫颈炎组织中的表达;siRNA干扰方法抑制EB1基因表达,并采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测此时宫颈癌Siha细胞自噬标志蛋白LC3和p62/SQSTM1基因的表达。结果  EB1的表达部位主要集中在细胞核外周的胞质中。EB1在宫颈癌和宫颈息肉中的阳性表达率显著低于宫颈慢性炎性组织(P<0.05),但在阳性表达的宫颈癌组织中,绝大多数间质细胞表现为阴性;EB1在中、低分化宫颈鳞癌组织中的阳性表达率显著低于高分化宫颈鳞癌组织(P<0.05)。当EB1基因表达在宫颈癌Siha细胞中的表达被抑制时,无论是在mRNA还是在蛋白水平,自噬标志蛋白p62/SQSTM1和LC3的表达均显著增加(P<0.05)。结论  EB1在自噬发生较低的宫颈癌组织中阳性表达率低于自噬发生较高的宫颈慢性炎性组织;抑制EB1在宫颈癌Siha细胞中的表达,则自噬标志蛋白p62/SQSTM1和LC3表达改变,这一发现充分证明EB1在宫颈癌的自噬过程中发挥着一定的生物学效应。     

大鼠急性肾损伤后自噬相关蛋白Beclin-1的表达

目的研究自噬相关蛋白Beclin-1在大鼠急性肾损伤伤后肾组织中的表达情况,并探讨其意义。方法选用24只雄性大鼠sD大鼠,体重250±30g,按随机数字表法分为两组,假手术组（Sham组）和缺血-再灌注组（I／R组）;各组于再灌注后12、24、48h3个相应时间点收获肾脏标本。HE染色观察肾脏病理变化,免疫组化法测定自噬相关蛋白Beclin-1的表达情况,透射电镜观察。肾脏组织自噬现象。结果与假手术组比较,大鼠急性肾损伤48h,肾小管细胞Beclin-1蛋白的表达最强（P〈0．05）,再灌注损伤后48h,自噬体数量显著增多,细胞内出现染色质块状边集,核形态不规则的明显凋亡现象。结论大鼠急性肾损伤后自噬相关蛋白Beclin-1的表达上调,说明大鼠肾急性。肾损伤后肾脏组组织自噬活性上调。     

Claudin-1蛋白的表达对食管癌细胞的自噬影响

目的 检测Claudin-1蛋白在食管癌细胞中的表达,并探讨其对食管鳞癌癌细胞的的自噬的影响。方法采用western blot检测Claudin-1在食管癌各细胞株的表达情况。SiRNA干扰Claudin-1蛋白的表达后,western blot检测干扰效果。mRFP-GFP-LC3腺病毒转染SiR组及NC组后,用激光共聚焦显微镜分析siR组与NC组的细胞自噬情况。结果 细胞株KYSE 150的Claudin-1蛋白表达量最高,Si-RNA干扰Claudin-1的表达后siR组的自噬水平显著高于NC组(P<0. 05)。结论 Claudin-1蛋白的表达增多对食管癌细胞的细胞自噬有促进作用。     

自噬基因Beclin-1在前列腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨自噬基因Beclin-1在前列腺癌组织中的表达及其相关临床意义,并分析其与根治性前列腺切除术后生化复发的相关性.方法 采用免疫组化Super Vision两步法检测132例前列腺癌组织及癌旁组织中Beclin-1的表达,并分析其与相关临床因素的关系.结果 在前列腺癌组织及癌旁组织中Beclin-1的表达率分别为38.6％及54.5％,差异有统计学意义(P=0.01).Beclin-1在Gleason评分中表现为评分越高,阳性表达率越低(P=0.011).前列腺癌组织中Beclin-1的表达与不同年龄(P=0.138)、家族史(P=0.686)及是否患者前列腺炎病史(P=0.895)等临床因素比较,差异无统计学意义.但在有无淋巴结转移(P =0.017)、有无骨转移(P =0.002)及行根治性前列腺切除术后有无生化复发(P =0.024)间差异均有统计学意义.结论 自噬基因Beclin-1在前列腺癌组织中表达下调,并与淋巴结转移、骨转移及生化复发有关,其表达下调可能参与前列腺癌的发生、发展.     

冬凌草甲素诱导前列腺癌PC-3细胞自噬作用的实验观察

目的 观察冬凌草甲素(ORI)诱导前列腺癌PC-3细胞自噬,探讨ORI抗前列腺癌的可能机制.方法 实验应用MTT检测细胞存活率、扫描电镜和透射电镜观察细胞超微结构变化、AO染色法观察细胞胞质中酸性泡囊(acidic vesicular organells,AVO)、Western印迹检测MAPI-LC3蛋白水平、RT-PCR技术检测自噬基因beclin 1 mRNA水平.结果 MTT结果显示ORI能有效抑制PC-3细胞增殖,并呈现显著的剂量和时间依赖效应,15 μmol/LORI作用细胞24 h,增殖抑制率达(39.95±3.05)%,48 h后达(51.28±2.91)%.浓度增加至25 μmol/L,抑制率达到(67.94±4.78)%.ORI处理细胞24 h,扫描电镜下观察到细胞缩小变圆,表面微绒毛消失.透射电镜发现细胞核固缩,染色质边集,且胞质中出现大量双层膜包裹形成的自噬体,内含细胞器或胞质.AO染色可见胞质中AVO的形成.Western印迹结果显示ORI促进LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化,ORI处理后LC-Ⅱ蛋白水平升高,LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值下降.RT-PCR结果显示自噬抑制剂3-MA能阻止ORI引起的beclin 1 mRNA水平上调.结论 冬凌草甲素能抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,并通过上调beclin 1的mRNA水平诱导细胞发生自噬.本课题为冬凌草甲素抗肿瘤机制研究提供了新思路.     

HMGB1对LPS诱导A549细胞自噬表达的调控作用

目的 明确脂多糖(LPS)对A549细胞自噬的影响,初步探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对LPS诱导的A549细胞自噬表达的影响.方法 CCK-8实验检测不同剂量的LPS对A549细胞存活率的影响,取最低毒性剂量的LPS诱导A549细胞构建急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺上皮细胞损伤模型;采用流式细胞术和透射电镜检...     

食管鳞状细胞癌组织中自噬基因Beclin 1蛋白的表达

目的:探讨食管鳞状细胞癌组织中Beclin 1蛋白的表达与临床病理因素之间的关系.方法:应用免疫组织化学SP法检测50例食管鳞状细胞癌和其中30例相应的癌旁正常食管上皮组织中Beclin 1蛋白的表达.结果:30例正常食管上皮组织中Beclin 1阳性表达率为100%,高于食管鳞状细胞癌组织的30%(9/30)(χ2=19.050,P<0.001).50例食管鳞状细胞癌组织中Beclin 1蛋白的表达与淋巴结转移和病理分期有关(χ2分别为13.286,4.836,P均<0.05).结论:Beclin 1与食管鳞状细胞癌的发生发展有关.     

雄激素调节耐多西他赛前列腺癌细胞肺耐药蛋白的表达

目的肿瘤多药耐药是导致肿瘤化疗失败的主要原因,肺耐药蛋白(LRP)可诱导多药耐药,我们研究雄激素对前列腺癌的LRP表达影响。方法人前列腺癌细胞株LNCaP及PC-3在含多西他赛的培养液中诱导成为耐药细胞株,耐药细胞株分别在含有DHT培养液和在含DHT及比卡鲁胺培养液中培养7d。免疫细胞化学及Western Blot检测两组细胞的LRP表达。结果 LRP在LNCaP及PC-3细胞系的表达明显低于LNCaP/Docetaxel及PC-3/Docetaxel细胞系,DHT诱导后,LNCaP/Docetaxel及PC-3/Docetaxel细胞系的LRP表达明显增加,经DHT及比卡鲁胺联合作用后,LRP的表达明显低于DHT诱导后。结论多西他赛可诱导前列腺癌LRP表达,二氢睾酮可诱导耐多西他赛前列腺癌的LRP增量表达,雄激素受体阻断剂比卡鲁胺可阻断二氢睾酮的诱导作用。     

前列腺癌中EphA1基因表达的初步研究

目的:检测前列腺癌中EphA1基因转录及受体表达水平,探讨其表达异常的机制及其临床意义。方法:利用RT-PCR法检测雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP和雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3中EphA1基因mRNA表达情况,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法进行甲基化状态分析;用免疫组化方法检测19例前列腺癌和22例良性前列腺组织标本中EphA1受体表达情况。结果:LNCaP和PC-3细胞中均未检测到EphA1基因转录;PC-3细胞中EphA1基因启动子区内CpG岛存在高甲基化现象,而LNCaP细胞则不存在;前列腺癌和良性前列腺增生组织中EphA1受体表达率分别为36.8%和45.5%,其差异无统计学意义(P>0.05)。结论:前列腺癌细胞LNCaP和PC-3中无明显EphA1基因表达,甲基化可能是导致该基因下调的机制之一。EphA1基因的甲基化在前列腺癌进展及由雄激素依赖向雄激素非依赖转化过程中可能发挥一定作用。     

网脊衣酸上调p21CIP1蛋白诱导前列腺癌细胞周期阻滞的作用分析

目的 探讨天然化合物网脊衣酸(RB)对前列腺癌LNCaP细胞的周期阻滞作用及分子机制。方法 细胞经RB处理后,流式细胞术检测细胞周期的变化;溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法检测细胞增殖情况;Western blotting检测p53、p21 CIP1(p21)及细胞周期相关蛋白的表达;实时定量PCR检测p21的 mRNA水平的变化;荧光素酶报告基因检测RB对p21启动子活性的影响;转染p53突变体质粒检测p53对p21表达的影响;基因敲除p21检测其对细胞周期的作用。结果 RB可使LNCaP细胞阻滞于G0/G1期,抑制周期相关的Cyclin D、Cyclin E、Cdk 4和p-Rb表达。同时,RB可时间依赖性地诱导LNCaP细胞中野生型p53表达、促进其入核,同时上调p21的mRNA和蛋白水平。阻断p53的活性后,可抑制RB介导的p21表达及其启动子活性。而敲除p21基因,可降低RB所介导的G0/G1期阻滞,同时G2/M期细胞数量增加。结论 RB通过激活p53,在转录水平上调靶基因p21的表达,导致前列腺癌LNCaP细胞阻滞于G0/G1期,从而抑制细胞的增殖。     

丙戊酸长期给药对抑制PC3细胞系裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探讨丙戊酸(VPA)长期给药抑制人雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞裸鼠移植瘤生长的效应。方法 建立PC3细胞裸鼠移植瘤模型，实验组给予含0.4%丙戊酸钠饮用水，对照组给予纯的饮用水，给药4周，每隔2d测量肿瘤体积1次。取裸鼠移植瘤组织，免疫组化检测p21WAF/CIP和Ki67，Western blot检测p21WAF/CIP和乙酰化H3（Ac-H3）蛋白的表达，Tunnel法检测肿瘤细胞的凋亡。结果 对照组肿瘤体积大于实验组，肿瘤生长抑制率为77.27%。实验组p21WAF/CIP表达强于对照组(P＜0.01)，而Ki67表达弱于对照组。实验组Ac-H3表达增加(P＜0.01)。实验组平均每个视野中凋亡细胞数高于对照组（P＜0.01）。结论 VPA长期给药对PC3细胞移植瘤生长抑制作用明显，该作用是通过抑制细胞增殖、诱导凋亡实现的。     

抑癌基因PDLIM4在前列腺癌细胞中的差异表达

目的 探讨PDLIM4基因在正常前列腺上皮细胞(RWPE1)、前列腺癌细胞(PC-3、DU145、LNCaP)、前列腺癌多药耐药细胞(PC-3/Doc)及其他耐药细胞(K562/A02、H460/Doc)中的差异表达.方法 采用定量PCR(qPCR)、Western blot、免疫荧光等方法检测PDLIM4基因在各种细胞株中的表达;利用Western blo和DNA甲基转移酶(DNMTs)活性检测分析细胞中DNMTs的表达及活性.结果 PDLIM4基因在RWPE1高表达,在DU145、LNCaP细胞中基本无表达,在前列腺癌PC-3细胞中表达甚低,而在与其对应的多药耐药PC-3/Doc细胞中高表达(P＜0.05),并且在耐药细胞株中的高表达具有组织特异性.DNMTs在RWPE1表达水平低于前列腺癌细胞,但在PC-3和PC-3/Doc中无差异.酶活性分析表明,PC-3/Doc中DNMTs的活性低于PC-3细胞(P＜0.05).结论 PDLIM4基因在前列腺癌细胞中低表达,这种特异性的在前列腺癌耐药细胞中表达显著上调可能是由DNMTs活性降低所致.     

PTEN和Eg5蛋白在前列腺癌中表达及相关性

目的 对前列腺癌中PTEN和Eg5蛋白进行免疫组化检测,探讨PTEN和Eg5蛋白表达与前列腺癌临床病理的相关性。方法 采用免疫组化SP法对2014年12月至2016年3月浙江大学医学院附属金华医院检测81例前列腺癌和45例前列腺增生PTEN和Eg5蛋白的表达,对前列腺癌临床病理资料与PTEN和Eg5表达分析,采用Spearmen对PTEN和Eg5蛋白表达进行相关性分析。结果 前列腺癌中PTEN蛋白表达阳性率为25.93%(21/81),前列腺增生中表达阳性率为88.89%(40/45),二者比较,差异有统计学意义(P0.05)。Eg5蛋白在前列腺癌中表达阳性率为70.37%(57/81),前列腺增生中表达阳性率为4.44%(2/45),二者比较,差异有统计学意义(P0.05)。PTEN蛋白缺失表达和Eg5蛋白增高表达与前列腺癌的Gleason评分、TNM分期、术前PSA、精囊浸润、盆腔淋巴结转移和五年生化复发密切相关(P0.05)。Spearmen相关性分析显示PTEN与Eg5蛋白的表达呈负相关(r=-0.763,P0.05)。结论 前列腺癌中PTEN蛋白下降表达,Eg5蛋白升高表达,它们异常表达与前列腺癌发生进展有关。     

核小体结合蛋白1在前列腺癌中的表达和意义

目的 通过检测核小体结合蛋白1（NSBP1）在正常前列腺（NP）、良性前列腺增生（BPH）、前列腺癌（PCa）组织中的表达,探讨其与前列腺疾病发生发展的关系。方法 采用Western印迹方法检测NSBP1在10例NP组织、15例PCa组织中的蛋白表达差异;采用免疫组织化学方法检测19例NP组织、26例BPH组织、40例PCa组织中NSBP1的表达水平。结果 NSBP1在PCa组织中蛋白表达高于在NP组织中的表达,差异有统计学意义（t=37．308,P〈0．01）。3种组织中NSBP1的阳性及弱阳性表达率为56．5％（48／85）,其中NP、BPH、PCa组织中分别为36．8％（7／19）、34．6％（9／26）、80．0％（32／40）。PCa组织中NSBP1表达水平明显高于NP及BPH组织（t=-3．569,-4．152,P〈0．01）。在PCa中NSBP1的表达水平与PCa病理分期、Gleason评分（GS）、血清前列腺特异抗原（PSA）均不相关（P=0．911,0．666,0．779）。结论 NSBP1在PCa中高表达,并可能参与了PCa的发生发展过程。     

RPS4Y1蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨RPS4Y1蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义.方法 利用Real-time PCR、RT-PCR和免疫组织化学方法检测RPS4Y1在不同细胞系以及前列腺癌组织中的表达.结果 RPS4Y1的表达在C4-2中比LNCaP中下调(137.19±13.64)倍;RPS4Y1在LNCaP、C4-2、C4-2B中随着恶性程度的增加,其表达随之降低,在骨转移前列腺癌细胞系中未见表达,而脑转移的前列腺癌细胞系DU145中有较高表达,在MCF-7、HepG2、Hela、PC12、293T等细胞系中未检测到RPS4Y1的表达,特异性较好;RPS4Y1胞浆阳性,表达与恶性程度呈负相关,与表达谱结果一致.结论 RPS4Y1蛋白可作为前列腺癌进展诊断的候选分子标志物.     

前列腺癌主动监测期间组织ERG蛋白表达与肿瘤进展的关系

【摘要】目的 探讨前列腺癌患者组织ERG蛋白表达与肿瘤进展的关系。方法 纳入2012年3月～2016年2月前列腺穿刺证实为前列腺癌且符合主动监测条件的56名患者,收集患者年龄、血清前列腺特异性抗原（PSA ）水平、格里森评分（GS）、临床分期等临床病理学参数,采用免疫组织化学的方法检测前列腺癌穿刺组织中ERG蛋白的表达。ERG蛋白表达与患者临床病理学特征之间的关系采用2检验,Kplan meier生存分析模型及Cox回归模型用于分析ERG蛋白表达状态与前列腺癌进展间的关系。结果 56名患者中,48名纳入最后的研究,ERG蛋白表达阳性率375%（18/48）。Kplan meier生存分析模型中,ERG蛋白阳性及阴性组中位组织学无进展生存期分别为32个月和48个月（2=4476,P=0.034）;中位PSA无进展生存期分别为21个月及26个月（2=4272,P=0.039）;在多变量分析中,穿刺组织ERG蛋白表达是前列腺癌主动监测期间进展的独立危险因素（Hr=2024,P=0.044）。结论 组织ERG蛋白的表达增加了主动监测前列腺癌进展的风险,通过对其检测和分析可以为制定个体化的主动监测方案提供参考。