2种盖髓剂行大鼠磨牙直接盖髓后转化生长因子β1表达的比较

目的: 观察氢氧化钙(calcium hydroxide, CH)和矿物三氧化物凝聚体(mineral trioxide aggregate, MTA)行大鼠磨牙直接盖髓后转化生长因子β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)的表达变化, 比较2种盖髓剂对牙髓损伤修复中TGF-β1表达的影响。方法: 建立28只雌性大鼠CH和MTA第一磨牙直接盖髓模型, 在观察时间点1、3、5、7、14、21、28 d处死大鼠取材, 进行TGF-β1免疫组化染色, 用图像分析软件IPP6.0测定各组标本中TGF-β1阳性染色的平均吸光度值。采用SPSS 13.0软件包对数据进行Dunnett t检验和配对t检验。结果: 在正常牙髓组织中, TGF-β1基本无表达;CH和MTA直接盖髓后不同时间, TGF-β1表达强度呈先升高后降低的变化, 其中, 盖髓后5 d的TGF-β1表达最强, 21 d时接近正常水平。表达主要位于盖髓剂下方的成纤维细胞、成牙本质细胞、血管内皮细胞、中性粒细胞等。2种盖髓剂在盖髓后1、3、5、7、14 d , TGF-β1的表达强度有显著差异(P<0.05)。结论: 盖髓剂直接盖髓后, TGF-β1表达强度呈先升高后降低的变化, 不同盖髓剂直接盖髓对牙髓损伤修复中TGF-β1的表达有一定影响。在直接盖髓后的1、3、5、7、14 d, MTA比CH更能促进TGF-β1的表达。     

矿物三氧化物凝聚体在修复性牙本质形成中作用研究进展

矿物三氧化物凝聚体（mineral trioxide aggregate,MTA）可作为盖髓剂应用于直接盖髓术和牙髓切断术。牙髓组织对MTA反应优良,用其盖髓后形成的修复性牙本质较氢氧化钙更厚、更均质。本文对MTA作为盖髓剂在修复性牙本质形成中的作用研究进展做一综述。     

2种盖髓剂直接盖髓后大鼠牙髓诱导型一氧化氮合酶的表达变化

目的 观察氢氧化钙(CH)和矿物三氧化物凝聚体(MTA)在大鼠磨牙直接盖髓后诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达变化.方法 42只雌性Wistar大鼠双侧上下第一磨牙分别用CH和MTA直接盖髓,在观察时点即刻,1、3、7、14、21、28 d处死动物取材,进行iNOS免疫组织化学染色,用图像分析软件测定各组标本中iNO...     

不同质量浓度氟对大鼠切牙成釉细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的研究不同质量浓度氟对大鼠切牙生长过程中转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法40只Wistar大鼠随机分为3组,建立氟斑牙动物模型。3组分别为低剂量氟组（F-质量浓度60 mg·L-1,13只）、高剂量氟组（F-质量浓度120 mg·L-1,13只）和对照组（蒸馏水,14只）。10周后取材,采用苏木精-伊红（HE）染色和免疫组织化学染色的方法观察氟对大鼠切牙成釉细胞的形态及TGF-β1表达的影响。结果实验组大鼠切牙均出现典型的氟斑牙症状,牙面出现白垩色改变,釉质表面有横纹。HE染色结果显示成釉细胞形态发生改变,细胞排列紊乱,甚至成灶性堆积,可见空泡性变。免疫组织化学染色结果显示TGF-β1在分泌期和成熟期成釉细胞均为强阳性表达,在星网状层、中间层均为阳性表达,在新形成的釉基质中呈阳性表达。2个实验组TGF-β1的表达强度明显低于对照组（P<0.01）,2个实验组之间的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论氟可能通过抑制TGF-β1的表达而干扰了成釉细胞的分化和基质分泌,造成釉质发育障碍。     

MTA联合CGF用于大鼠磨牙直接盖髓效果的研究

目的 探讨无机三氧化物聚合物(mineral trioxide aggregate, MTA)联合浓缩生长因子(concentrate growth factors, CGF）用于大鼠磨牙直接盖髓术的效果。方法 将16只SD大鼠处死并分离下颌第一磨牙,将磨牙自牙颈部截断,保留牙冠及冠髓,根据盖髓材料的不同将牙冠随机分为：空白对照组、MTA组、CGF组、MTA+CGF组,盖髓后将样本植入裸鼠背部皮下,6周后取出样本进行HE染色、Masson染色及免疫组化染色,并对染色结果进行分析。结果 (1)盖髓6周后,MTA+CGF组较MTA组、CGF组诱导形成的牙髓-牙本质复合体结构更为典型;(2)MTA+CGF盖髓与单独应用MTA、CGF盖髓对钙化桥的形成及牙髓组织的影响并无明显差异(P>0.05);(3)牙本质涎磷蛋白(dentin salivary phosphoprotein, DSPP)在MTA+CGF组表达最强,各组之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 MTA联合CGF用于大鼠磨牙直接盖髓比单独应用MTA、CGF盖髓效果更佳,在活髓保存术中具有较大的潜能及应用价值。     

乳磨牙MTA直接盖髓术后即刻充填的临床观察

目的 评价乳磨牙MTA直接盖髓术后即刻充填临床疗效.方法 用MTA对4～8岁儿童的36颗深龋洞去腐露髓或意外穿髓的乳磨牙进行直接盖髓术后即刻充填治疗,治疗后6个月和2年后随访,观察盖髓后患牙症状、牙髓活力、X线片等疗效指标.结果 MTA治疗36颗乳磨牙,经6个月和2年后随访,其中34颗成功,牙髓活力正常,可见X线片修复性牙本质形成;2颗失败.结论 MTA应用于儿童乳磨牙直接盖髓术是有效的盖髓剂.     

2种盖髓剂直接盖髓后大鼠牙髓诱导型一氧化氮合酶的表达变化

42只雌性Wistar大鼠双侧上下第一磨牙分别用CH和MTA直接盖髓,在观察时点即刻,1、3、7、14、21、28d处死动物取材,进行iNOS免疫组织化学染色,用图像分析软件测定各组标本中iNOS阳性染色的平均光密度值。用SPSS11.5统计软件对数据分别进行配对t检验和Dunnett-t检验。结果:在正常牙髓组织中iNOS表达呈阴性,CH和MTA直接盖髓后不同时间iNOS表达均呈弱阳性-阳性-弱阳性-阴性的变化,其中盖髓即刻牙髓中iNOS出现低水平表达,3d时牙髓iNOS出现强阳性表达,7d后表达开始减弱,21d后接近正常水平。     

辛伐他汀-胶原蛋白复合海绵用于大鼠磨牙直接盖髓的实验研究

目的 评估辛伐他汀-胶原蛋白复合海绵作为直接盖髓材料的疗效及可行性。方法 120只SD大鼠随机分成3组,即辛伐他汀-胶原蛋白海绵组（SIM组）、胶原蛋白海绵组（CS组）及氢氧化钙组（CH组）,每组40只。在每只大鼠左上颌第一磨牙咬合面开髓,分别用3种材料直接盖髓,玻璃离子充填,并设对侧上颌第一磨牙为正常对照组。在术后第1、3、7、14、28天处死大鼠后拍摄X线片、苏木精-伊红（HE）及Masson’s Thichrome染色,观察牙髓组织生物学反应及牙本质桥形成情况。结果 影像学上,CH组术后第28天见穿髓孔处有高密度阻射影且封闭穿髓孔;术后第14天和第28天,SIM组在穿髓孔处见有高密度阻射影且穿髓孔封闭;而CS组仅在穿髓孔远中见高密度钙化团块影像,但未见钙化组织将穿髓孔封闭。HE及Masson’s Thichrome染色结果显示：不同时间点,3组中观察到不同的炎症反应,CS组炎症程度最重,SIM组与CS组的炎症反应程度在术后第14、28天存在统计学差异（P<0.01）。SIM组的炎症反应程度比CH组轻,在术后第14天二者存在统计学差异（P<0.05）。与另外两组相比,SIM组修复性牙本质形成的速度更快、质量更好,在术后第14天,SIM组与CH组、CS组存在统计学差异（P<0.05）,且在术后第28天,SIM组、CH组与CS组均存在统计学差异（P<0.05）。结论 辛伐他汀-胶原蛋白复合海绵生物相容性好,促进修复性牙本质形成能力较强,作为盖髓材料具有良好的应用前景。     

血小板衍生生长因子-BB、转化生长因子-β1联合应用对大鼠正畸牙牙周膜中整合素β3表达的影响

目的 观察大鼠正畸牙局部联合应用血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）和转化生长因子-β1（TGF-β1）后正畸牙牙周膜中整合素 β3表达的变化。方法 按随机数字表法,将 32只大鼠随机均分为4组。建立大鼠上颌第一磨牙近中移动正畸模型,隔日于施力磨牙颊侧牙龈黏膜下分别注射1%PBS、10 ng PDGF-BB、5 ng TGF-β1、10 ng PDGF-BB和5 ng TGF-β1叠加剂量,注射体积均为0.1 mL。加力10 d后处死动物,取左上颌第一磨牙及其牙周组织,用免疫组织化学方法检测牙周组织中整合素 β3的表达,进行阳性表达区域平均光密度值测量,对测量结果行方差分析,服从正态分布,再行组间t检验统计学分析。结果 各实验组压力侧牙周膜细胞中整合素β3的表达强度均高于对照组（P<0.01）,其中PDGF-BB+TGF-β1组与TGF-β1组或PDGF-BB组比较差异均有统计学意义（P<0.01）。实验组张力侧牙周膜细胞中整合素β3的表达强度均高于对照组（P<0.05）,其中PDGF-BB+TGF-β1组整合素β3表达强度较强,与TGF-β1或PDGF-BB组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 局部联合应用外源性PDGF-BB和TGF-β1对大鼠正畸牙牙周组织中整合素β3的上调作用较单独运用PDGF-BB或TGF-β1组强,二者联合应用有协同效应,共同促进了正畸牙周组织改建。     

转化生长因子-β1shRNA真核表达载体的构建

目的 构建转化生长因子β1（TGF-β1）的短发夹状RNA（shRNA）表达系统，为人涎腺粘液表皮样癌的治疗提供新的方法。方法 根据Genebank提供的TGF-β1 mRNA序列，设计短链寡核苷酸，化学合成后经退火形成双链DNA片段，克隆到pWH1载体中，用酶切方法对重组体进行鉴定；最后将构建的TGF-β1特异性shRNA表达载体转染涎腺粘液表皮样癌细胞，通过RT-PCR、免疫组化观察其对细胞TGF-β1 mRNA和蛋白水平表达的影响。结果 经酶切、连接后构建的质粒称之为pWH1-TGF-β1。酶切证实成功构建了TGF-β1 shRNA表达载体，RT-PCR和免疫组化结果显示其能够在mRNA和蛋白水平抑制细胞内TGF-β1的表达。结论 成功构建的TGF-β1特异性shRNA表达载体具有阻断TGF-β1表达的功能，可能为涎腺粘液表皮样癌治疗提供有效的方法和手段。     

水蛭素对牙龈成纤维细胞碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β1表达的影响

目的 观察水蛭素对人牙龈成纤维细胞（HGFs）碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达变化的规律,探讨水蛭素影响牙龈改建的可能作用机制。方法 体外培养并鉴定HGFs,利用不同浓度的水蛭素分别作用于正常（对照组）和受长期机械外力作用后增生的HGFs（实验组）,通过实时定量聚合酶链反应法和免疫细胞化学法检测TGF-β1及bFGF的表达。结果 未加入水蛭素时,受长期机械外力作用后,实验组促进HGFs增殖胶原合成的TGF-β1表达升高,而抑制胶原合成的bFGF表达降低（P<0.05）。加入水蛭素干预增生的HGFs后,可正向调节bFGF表达,而负向调节TGF-β1的表达（P<0.05）。结论 外力作用干扰了HGFs胶原合成与降解之间的平衡,水蛭素可能通过调节这一平衡而促进牙龈改建过程。     

大鼠磨牙牙髓血运重建术后血管内皮生长因子的表达及意义

目的 分析大鼠磨牙牙髓血运重建术后血管内皮生长因子(VEGF)的表达及意义。方法 牙科显微镜下对大鼠下颌第一磨牙进行牙髓血运重建术,术后3周对磨牙组织进行HE染色分析,应用实时荧光定量PCR和免疫组化技术检测磨牙组织中VEGF基因和蛋白的表达,评估VEGF表达在磨牙牙髓血运重建术后的表达意义。结果 牙髓血运重建术后,可见根管内有丰富的血管新生,未见明显炎症细胞浸润,在组织结构上更接近正常牙髓结构。VEGF在正常磨牙组织、根尖周炎磨牙组织和牙髓血运重建术后的磨牙组织中均有表达,牙髓血运重建术后VEGF mRNA表达明显高于正常组织和根尖周炎磨牙组织(P<0.01)。VEGF蛋白表达水平高于正常组织和根尖周炎磨牙组织。结论 牙髓血运重建术可显著促进大鼠磨牙中VEGF的表达,从而促进牙髓中血管的生成,促进牙髓组织的修复。     

脂多糖和转化生长因子-β1对牙髓细胞Toll样受体4的表达及信号通路的影响

目的研究牙髓炎症过程中,在促炎因子脂多糖（LPS）和抑炎因子转化生长因子-β1（TGF-β1）同时存在的情况下,牙髓细胞表面Toll样受体4（TLR4）的表达水平及相关信号分子的变化情况。方法LPS、TGF-β1作用于体外培养的牙髓细胞,用流式细胞术检测牙髓细胞表面TLR4的表达;实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）、Westernblot方法检测相关信号分子的表达水平,包括进化保守的Toll信号中介分子（ECSIT）和核转录因子-κB（NF-κB）;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测前炎症因子白细胞介素-6（IL-6）的分泌水平;然后进一步通过real-time PCR法检测临床炎症牙髓组织中相应指标的变化。结果体外培养的牙髓细胞在LPS、TGF-β1共同作用下,细胞表面TLR4的表达水平没有明显变化,但是IL-6分泌增加,ECSIT表达增加,NF-κB入核增加。临床标本的real-time PCR结果表明：炎症状态下的牙髓组织中TGF-β1 mRNA表达增加,TLR4 mRNA表达没有明显变化,ECSIT及IL-6 mRNA表达增加。结论牙髓炎症发展过程中,虽然牙髓组织中TGF-β1表达增加,抑制细胞表面TLR4的表达,但TLR4的信号通路仍然被活化,主要机制可能是LPS引起信号分子ECSIT的活化,从而抑制TGF-β1信号通路的活化。     

咬合创伤下大鼠磨牙牙周膜中转化生长因子β1表达的变化

目的：了解咬合创伤下转化生长因子β1(transforming growth factorβ1 TGFβ1)在大鼠磨牙牙周膜中表达的变化，探讨咬合创伤下TGFβ1在牙周组织改建中的作用。方法：建立咬合创伤动物模型，利用HE染色法和免疫组织化学技术，观察大鼠磨牙在咬合创伤后12小时、3天、7天、14天、30天的不同时期内牙周膜中TGFβ1表达的变化，并运用图像分析技术将结果数值化。结果：咬合创伤下，牙周膜中TGFβ1的表达在12小时组、3天组与正常咬合力组相比无显著差异；7天组、14天组与正常咬合力组相比有显著差异，并高于后者；30天组与正常咬合力组相比无显著差异。结论：TGFβ1可能在咬合创伤下牙周组织的改建中起了重要的作用。     

低能量激光疗法联合Dycal用于大鼠磨牙直接盖髓术的体内研究

目的:观察低能量激光疗法(LLLT)联合Dycal用于大鼠磨牙直接盖髓对牙髓炎、修复性牙本质形成及IL-1β、TRPA1表达的影响。方法:64只大鼠随机均分成对照组(NC)、低能量激光组(LLLT)、Dycal组(Dy)、联合组(LLLT+Dy)(n=16)。直接盖髓术后3、7、14、28 d取标本,行HE及免疫组化(IHC)染色观察。结果:LLLT组与LLLT+Dy组炎症反应在术后14、28 d都存在显著性差异(P<0.016 7);修复性牙本质桥形成在术后14 d, LLLT+Dy组与LLLT组、Dy组存在显著性差异(P<0.016 7);术后28 d, LLLT+Dy组与LLLT组存在显著性差异(P<0.016 7)。IL-1β、TRPA1阳性MOD值在术后7 d存在显著性差异,Dy组>LLLT组>LLLT+Dy组>NC组(P<0.05),术后14 d存在显著性差异,LLLT组、Dy组均>LLLT+Dy组(P<0.05)。结论:低能量激光联合Dycal可能通过减少IL-1β、TRPA1的表达来减轻牙髓炎症、促进修复性牙本质的形...     

转化生长因子-β1和白细胞介素-10单核苷酸多态性与复发性口腔溃疡易感性的研究

目的 研究转化生长因子-β1（TGF-β1）-509T/C位点与白细胞介素-10（IL-10）-1082A/G位点的单核苷酸多态性与复发性口腔溃疡（RAU）易感性的相关性。方法 采用限制性片段长度多态性-聚合酶链式反应（RFLPPCR）RFLPPCR）法和序列特异性引物-聚合酶链式反应（SSP-PCR）法对138例RAU患者和124例健康对照者进行TGF-β1-509位点与IL-10-1082位点的单核苷酸多态性的检测分析,用比值比（OR）和95%可信区间（95%CI）估计相对危险度。结果 TGF-β1-509位点与IL-10-1082位点在基因型频率与等位基因频率的分布上,病例组与正常对照组之间均存在明显差异（P<0.05）。TGF-β1-509位点基因型CT（OR=1.231,95%CI=0.702~2.160）与TT（OR=2.482,95%CI= 1.250~4.927）为高风险基因型,T等位基因为高风险等位基因（OR=1.465,95%CI=1.036~2.074）。IL-10-1082位点基因型AG（OR=1.391,95%CI=0.808~2.396）与GG（OR=4.165,95%CI=1.944~8.924）为高风险基因型,G等位基因为高风险等位基因（OR=2.134,95%CI=1.474~3.089）。结论 TGF-β1-509位点与IL-10-1082位点是RAU患者的易感基因位点。TGF-β1-509位点携带T等位基因患RAU的风险性是携带C等位基因者的1.465倍。IL-10-1082位点携带G等位基因患RAU的风险性是携带A等位基因者的2.134倍。     

人转化生长因子-β1基因转染对人牙龈成纤维细胞成骨特性的影响

目的观察并评价基因转染后牙龈成纤维细胞（GF）表达外源目的基因人转化生长因子-β1（hTGF-β1）对其分化、成骨特性的影响。方法采用碱性磷酸酶（ALP）活性检测方法检测转染对GF ALP活性的影响,免疫组化染色及图像分析评价基因转染后骨钙素（OC）、骨桥素（OPN）、骨涎蛋白（BSP）、骨结合素（ON）含量的变化,体外矿化结节形成实验检测转染后细胞成骨特性的变化。结果转染后GF的ALP活性较未转染组有显著的提高（P<0.05）,并且与牙周膜成纤维细胞（PDLCs）的ALP活性接近（P>0.05）。OC含量检测显示转染后GF的OC含量与未转染组和PDLCs组相比,其差异均无统计学意义（P>0.05）。免疫组化染色后,转染组GF所表达的OPN、ON、BSP含量均高于未转染组GF（P<0.05）,而与PDLCs间差异无统计学意义（P>0.05）。第21天和第24天时,在矿化液作用下PDLCs及转染GF在倒置显微镜下可见致密的结节形成,von Kossa染色可见紫色的矿化结节形成。未转染GF未见结节形成。而转染GF在未经矿化液诱导情况下,虽出现显著的细胞聚集,但von Kossa染色未见紫色矿化结节形成。结论转染pcDNA3-hTGF-β1后的GF可表达一定的成骨细胞特性,但这种成骨特性有限。     

炎症牙髓中转化生长因子—β分布特征的实验研究

目的：探讨转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）在牙髓、牙本质损伤修复中的可能作用。方法：采用免疫组化手段检测狗实验性牙髓炎病变过程中牙髓组织内ＴＧＦ－β的定位和分布变化。结果：正常牙髓中ＴＧＦ－β染色阴性，炎症牙髓则呈阳性反应，其染色强度随炎症的发展而改变。成牙本质细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞是其主要的阳性细胞。结论：在牙髓炎症的发展过程中存在ＴＧＦ－β的变化，ＴＧＦ－β参与了牙髓损伤修复的过程。     

富血小板纤维蛋白联合MTA用于兔牙直接盖髓术的组织学研究

目的 探讨富血小板纤维蛋白（platelet-rich fibrin,PRF）联合三氧化矿物凝聚体（mineral trioxide aggregate,MTA）作为直接盖髓剂的可行性和疗效。方法 将32只新西兰兔随机分为4组,即PRF+MTA组（P+M组）、PRF组（P组）、MTA组（M组）、空白对照组（BC组）,每组8只,对每只实验兔的2颗下颌中切牙进行开髓,分别用上述材料进行直接盖髓术,完成冠方封闭。分别在术后7 d、28 d从每组中随机选择4只实验兔并处死,实验牙进行HE染色,分析评价炎症细胞浸润程度、钙化桥形成程度及牙髓组织变性程度。结果 炎症细胞浸润程度：术后7 d和术后28 d,P+M组、M组均较BC组炎症细胞浸润程度轻,差异具有统计学意义（P<0.05）;术后28 d,P+M组较P组轻（P<0.05）;P+M组与M组比较差异无统计学意义（P>0.05）。钙化桥形成程度：术后7 d和术后28 d,P+M组钙化桥形成程度较P组、M组、BC组高,差异有统计学意义（P<0.05）;术后28d,M组较BC组钙化桥形成程度高,差异有统计学意义（P<0....     

转化生长因子β1对人牙髓干细胞成骨分化作用研究

目的　研究不同浓度的转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）对人牙髓干细胞（human dental pulp stem cells,hDPSCs）成骨分化的影响。方法　采用酶消化法提取hDPSCs,通过流式细胞术鉴定干细胞的表面标记物。实验组利用含有不同浓度TGF-β1（1、5、10、20 ng/mL）的α-MEM培养细胞,对照组以不含TGF-β1的α-MEM培养细胞,分别在第7天和14天时,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法检测成骨相关因子的表达情况。在第21天时,通过茜素红染色观察矿化结节形成情况。结果 　显微镜下可见hDPSCs呈长梭形,形态类似成纤维细胞。流式细胞术检测结果显示细胞呈CD73和CD90阳性表达,CD31、CD34和CD45阴性表达,具有典型的干细胞表面标记物。qRT-PCR结果表明,含有TGF-β1的各实验组均能明显促进成骨相关因子Runt 相关转录因子2（Runx-2）、骨涎蛋白（BSP）和骨钙素（OCN）mRNA的表达。第7天时,TGF-β1浓度为1 ng/mL 组的Runx-2、BSP和OCN的表达水平分别为对照组的11.3倍、8.7倍和11.7倍,明显高于其他各浓度组（P < 0.05）;第14天时,1 ng/mL组的Runx-2、BSP和OCN表达水平分别为对照组的5.08倍、7.17倍和3.03倍（P < 0.05）,20 ng/mL组BSP表达水平与对照组差异无统计学意义（P > 0.05）。茜素红染色显示各浓度的TGF-β1均能促进hDPSCs矿化结节形成。结论　TGF-β1可以促进hDPSCs的成骨分化。