Id1/Id3在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞生物学的作用

目的探讨DNA分化抑制因子(inhibitor of DNA differentiation,Id)Id1/Id3在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移及粘附等生物学行为的作用。方法 Western blot方法检测4例子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的Id1/Id3的表达;将子宫内膜癌RL-952和HEC-1-B两株细胞各分为未处理细胞组、空白病毒组、启动子病毒组和Id1/Id3双敲低组。通过qRT-PCR检测不同腺病毒载体感染细胞后MMP2、CXCR4和P21 mRNA表达量,Western blot检测MMP2、CXCR4、P21蛋白表达情况;通过MTT增殖试验、Transwell侵袭实验、细胞划痕实验和细胞粘附实验检测Id1/Id3表达改变后,对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、移行和粘附能力的影响。结果 Id1/Id3在子宫内膜癌组织中较癌旁组织表达增高(P<0.05);双敲低Id1/Id3,子宫内膜癌细胞中MMP2、CXCR4的mRNA水平和蛋白水平明显降低(P<0.05),P21的mRNA水平和蛋白水平则明显升高(P<0.05),RNAi组与其他3组细胞相比均有显著性差异;Id1/Id3双敲低组子宫内膜癌RL-952和HEC-1-B株细胞增殖能力、侵袭能力、迁移能力和粘附能力均抑制(P<0.05)。结论 Id1/Id3在子宫内膜癌患者组织中高表达,并可通过升调MMP2、CXCR4和降调P21的表达促进子宫内膜癌细胞增殖、侵袭、迁移及粘附作用,靶向Id1/Id3治疗可能成为预防和治疗子宫内膜癌的新方案。     

不同雌激素受体表达状态的子宫内膜癌细胞中转录因子的活性对比

目的:观察不同雌激素受体(estrogen receptor,ER)表达状态的子宫内膜癌细胞中转录因子的活性对比.方法:使用实时荧光定量RT-PCR技术对子宫内膜癌细胞系RL-952、HEC-1A、HEC-1B细胞中ERα mRNA进行检查,使用345通量转录因子芯片检查RL-952、HEC-1A、HEC-1B细胞中转录因子的活性,使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同转录活性的转录因子NFkBp65、p38MARK验证芯片检查的结果.结果:ERα mRNA水平在RL-952、HEC 1A、HEC-1B细胞中的表达依次递减;345个转录因子中,与ER功能有关的差异表达的转录因子28个,与ER(+)的RL-952相比,ER(-)的HEC 1A、HEC-1B细胞中转录因子活性同时上调的有13种,同时下调的有15种.转录因子TTF(1)-1、NRF-1、TCE的活性与ERα mRNA表达存在线性正相关(r=0.521,P=0.035);转录因子RFX123、IKaros的活性与ERα mRNA表达存在非线性负相关(r=-0.314,P=0.039).结论:转录因子芯片检测技术是筛选子宫内膜癌致病机制中主要转录因子的一种可靠技术.转录因子TTF(1)-1、NRF-1、TCE可能与ER(+)子宫内膜癌中的信号通路有关,转录因子RFX123、IKaros可能与ER(-)子宫内膜癌中的信号通路有关.     

siRNA靶向EZH2 抑制子宫内膜癌细胞生长和侵袭

目的探讨靶向抑制EZH2 表达对子宫内膜癌细胞生长及侵袭的影响及其分子机制。方法实时荧光定量PCR检测
EZH2 在子宫内膜癌与癌旁子宫内膜组织中的表达差异。利用化学合成siRNA 转染子宫内膜细胞,靶向抑制EZH2 表达。
MTT、流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期改变。Boyden小室检测细胞侵袭情况的变化。Western blotting检测细胞周期因子
及基质金属蛋白酶2（MMP2）表达改变。结果相比于癌旁子宫内膜组织,EZH2基因在子宫内膜癌中表达相对增高。SiRNA在
子宫内膜癌细胞中抑制EZH2 表达后,细胞增殖能力明显降低,且细胞周期也阻滞在G1期。Boyden 小室分析显示,在抑制
EZH2表达后,细胞的侵袭能力也明显降低。机制分析显示,在抑制EZH2表达后,细胞周期因子E2F1及MMP2表达明显降低,
而抑癌基因p21 表达明显升高。结论EZH2 在子宫内膜癌中表达明显升高。SiRNA 靶向抑制EZH2 之后通过下调E2F1、
MMP2及上调p21表达后,能明显减慢子宫内膜癌细胞增殖和侵袭速度。
     

RhoC-shRNA对子宫内膜癌细胞RL-952增殖和侵袭能力的作用

目的探讨RhoC-shRNA对子宫内膜癌细胞RL-952生物学行为的影响。方法首先重组RhoC-shRNA表达载体,并以脂质体转染法将之稳定转染入子宫内膜癌细胞RL-952。免疫印迹检测转染RhoC-shR-NA后,观察RL-952细胞中RhoC蛋白表达的变化。继续观察转染前后子宫内膜癌RL-952细胞增殖和侵袭能力的变化。结果测序结果表明成功构建RhoC-shRNA表达载体。将其转染子宫内膜癌细胞后,RhoC蛋白表达水平受到抑制,抑制了肿瘤细胞的增殖、降低肿瘤细胞侵袭力。结论干扰RhoC蛋白的表达可抑制子宫内膜癌细胞RL-952增殖和侵袭能力,本研究为子宫内膜癌的治疗提供了新的思路。     

子宫内膜癌腺体及间质细胞中基质细胞衍生因子1及其受体CXCR4的表达

目的:检测基质细胞衍生因子1(SDF-1)及其受体CXCR4 mRNA和蛋白在子宫内膜癌细胞系及组织中的表达.方法:应用免疫组织化学和RT-PCR技术,检测子宫内膜癌细胞系Ishikawa和HEC-1A细胞,44例子宫内膜癌组织,26例非典型增生子宫内膜、单纯增生子宫内膜和正常子宫内膜组织中SDF-1和CXCR4 mRNA和蛋白表达水平.结果:HEC-1A和Ishikawa细胞均表达CXCR4 mRNA;Ishikawa细胞中SDF-1 mRNA弱表达,而HEC-1A细胞中SDF-1 mRNA未见表达.CXCR4和SDF-1在正常和良性病变的子宫内膜组织腺体细胞中的阳性表达率为100%,在子宫内膜癌组织的腺体细胞中的阳性表达率分别为90.9%和93.2%.各种子宫内膜组织中间质细胞CXCR4和SDF-1的表达均显著弱于腺体细胞.在子宫内膜癌腺体细胞和间质细胞中CXCR4和SDF-1的表达均显著弱于正常及良性病变者.在低分化的子宫内膜癌腺体细胞中CXCR4和SDF-1的表达弱于高分化者.结论:CXCR4和SDF-1在子宫内膜癌细胞系、子宫内膜组织及内膜癌组织中的表达存在差异,在内膜癌组织中其表达均显著弱于正常及良性病变者.     

miR-135b通过靶向FOXO1促进子宫内膜癌细胞的增殖

目的探讨miR-135b在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞增殖的作用的机制。方法运用RT-PCR的方法检测22 对子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的miR-135b 和FOXO1 的表达;运用RT-PCR 的方法检测JEC、Ishikawa、HEC-1-B、 RL-952这4种子宫内膜癌细胞株中miR-135b和FOXO1的表达。分别转染miR-135b的模拟物抑制物于子宫内膜癌细胞株,通 过RT-PCR检测转染的效果,通过MTT增殖试验检测对子宫内膜癌细胞增殖的影响。通过RT-PCR的方法检测FOXO1 mRNA 的变化,Western blotting 检测在FOXO1 蛋白的变化。结果miR-135b 在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达增高（P< 0.05）, FOXO1在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达降低（P<0.05）。荧光定量PCR显示子宫内膜癌细胞中miR-135b与 FOXO1表达趋势成负相关。miR-135b能促进子宫内膜癌细胞增殖（P<0.05）。上调miR-135b能够降低FOXO1 mRNA和蛋白 的表达（P<0.05）,下调miR-135b能够提高FOXO1 mRNA和蛋白的表达（P<0.05）。结论miR-135b在子宫内膜癌的发生发展 中发挥重要的作用,其部分分子机制可能是通过调控靶基因FOXO1而发挥作用。     

二甲双胍对体外子宫内膜癌细胞COX-2、VEGF和PTEN表达的影响

目的 探讨二甲双胍在体外对人子宫内膜癌细胞环氧合酶-2 (COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)和张力蛋白同源第10号染色体缺失的磷酸酶(PTEN)蛋白表达的影响。方法 按照二甲双胍干预药物浓度的不同，将细胞实验分为实验组(0.01 mmol/L组，0.1 mmol/L组，1 mmol/L组，10 mmol/L组)和对照组(0 mmol/L组)，分别干预4种人子宫内膜癌Ishikawa、RL-952、HEC-1A和KLE细胞相同时间后，采用ELISA法检测内膜癌细胞中COX-2和VEGF表达的变化，Western blotting法检测内膜癌细胞中PTEN蛋白的表达情况。结果 Ishikawa和RL-952细胞中4个实验组相对于对照组COX-2和VEGF的表达均随着二甲双胍浓度的增加呈明显下降趋势，差异均有统计学意义(P<0.05);HEC-1A和KLE细胞中4个实验组相对于对照组COX-2的表达均随着二甲双胍浓度的增加呈下降趋势，但是仅有HEC-1A细胞中10 mmol/L组差异有统计学意义(P<0.05)，其余实验组差异均无统计学意义(P>0.05);HEC-...     

CXCR7-shRNA慢病毒载体对人肝癌细胞生长及侵袭能力的抑制作用

目的探讨CXCR7-shRNA慢病毒表达载体靶向抑制CXCR7的表达对人肝癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法利用
RNA干扰技术,构建CXCR7的shRNA慢病毒表达载体,转染人肺转移肝癌细胞株HCCLM3,分别通过RT-PCR和Western blot
检测HCCLM3细胞中CXCR7 mRNA和蛋白质表达水平的变化;然后通过MTT法考察CXCR7沉默对HCCLM3细胞增殖侵袭
能力的影响,通过体外粘附实验和Transwell小室法分别考察CXCR7沉默对HCCLM3细胞粘附及侵袭能力的影响。结果与空
白对照组比较,转染CXCR7-shRNA慢病毒载体的HCCLM3细胞中CXCR7 的mRNA及蛋白水平表达均明显降低（P<0.01）,
SDF-1诱导的HCCLM3细胞的增殖能力显著下降（P<0.05）,同时HCCLM3细胞的粘附及侵袭能力也明显受到CXCR7-shRNA
的抑制（P<0.01）。结论靶向沉默CXCR7能显著抑制结肝癌细胞的增殖和侵袭能力,为肝癌的治疗提供一个潜在的作用靶点。
     

miR-135b对子宫内膜癌HOXA10基因表达的调控作用

目的 探讨miR-135b对子宫内膜癌中HOXA10基因表达的调控作用.方法 RT-PCR方法检测28例子宫内膜癌组织及相应癌旁组织中miR-135b及HOXA10的表达;用miR-135b模拟物及抑制物转染RL-952子宫内膜癌细胞株,RT-PCR检测转染效果并检测FOXO1 mRNA的变化,划痕实验检测转染后对细胞迁移的影响,流式细胞技术检测转染对细胞增殖的影响,Western blot检测HOXA10蛋白的变化.结果 miR-135b在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达升高(P<0.05),HOXA10则降低(P<0.05),经miR-135b模拟物转染后,子宫内膜癌细胞中HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平下降(P<0.05);经miR-135b抑制物转染后,子宫内膜癌细胞中HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平升高(P<0.05);miR-135b能促进子宫内膜癌细胞的增殖(P<0.05).结论 miR-135b 在子宫内膜癌发生发展中有一定作用,子宫内膜中HOXA10的异常表达受miR-135b的调控.     

Fhit基因在子宫内膜癌增殖、侵袭中的作用和临床意义

目的探讨Fhit基因在子宫内膜癌中的表达情况,并通过RNA激活上调Fhit表达后观察其对子宫内膜癌细胞增殖和侵袭、迁移的影响。方法收集135例子宫内膜癌组织和40例正常子宫内膜组织,使用免疫组织化学和Western blotting检测Fhit基因的表达情况并分析Fhit表达与临床病理特征的联系。构建Fhit-saRNA表达载体,转染至子宫内膜癌ISK细胞株,建立上调Fhit基因表达的子宫内膜癌细胞株。Western blotting和RT-PCR验证转染效果。通过CCK-8和Transwell试验分析转染前后增殖、迁移、侵袭能力的差异。结果免疫组织化学和Western blotting结果均显示在子宫内膜癌组织中Fhit基因表达与正常子宫内膜组织相比明显降低甚至缺失（P < 0.01）;CCK-8结果显示Fhit基因表达上调后子宫内膜癌细胞生长明显减慢,与未转染组比较差异有统计学意义（P < 0.01）;Transwell试验结果显示Fhit基因表达上调后子宫内膜癌细胞迁移和侵袭能力显著减弱,空白对照组的穿膜细胞数显著高于转染组（P < 0.01）。结论相比于正常子宫内膜组织,Fhit基因在子宫内膜癌组织中表达较低且与临床病理特征相关。在子宫内膜癌细胞株中通过saRNA上调Fhit后,其增殖、迁移、侵袭能力受到明显抑制。     

Id2和 MMP9的表达及其与食管鳞癌的临床病理特征关系研究

目的：观察细胞分化/DNA 结合抑制因子2(Id2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)在食管鳞癌组织中的表达,探讨 Id2和 MMP9表达的意义及相关性。方法应用免疫组织化学方法检测70例食管鳞癌和30例正常食管上皮中 Id2和 MMP9的表达水平。结果食管鳞癌中 Id2和 MMP9的阳性表达率均显著高于正常食管上皮(P <0.01);Id2和 MMP9的表达水平均随食管鳞癌的浸润加深、临床 TNM 分期级别增高而升高,浸润深度在 T3+T4组的表达水平高于 T1+T2组(P <0.05),临床Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期的表达水平高于Ⅰ期(P <0.05),但 Id2和 MMP9的表达均与食管鳞癌的分化程度无显著相关(P >0.05)。淋巴结转移组中 MMP9的表达水平高于无淋巴结转移组(P <0.05);而 Id2的表达与淋巴结转移无显著相关(P >0.05);食管鳞癌组织中 Id2和 MMP9的表达水平呈正相关关系(P <0.05)。结论Id2和 MMP9在食管鳞癌的发生和浸润进展中存在协同促进作用,同时检测对于评估食管鳞癌的生物学行为和预后有重要意义。     

miR-216a-5p和WASL在子宫内膜癌组织中的表达及其调控子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的：探讨微小RNA-216a-5p（miR-216a-5p）靶向湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征样蛋白（WASL）对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,阐明miR-216a-5p与WASL基因的靶向关系及其作用机制。方法：收集行手术切除的47例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织;将miR-216a-5p模拟物（miR-216a-5p）、模拟物阴性对照（miR-con）、沉默对照（si-con）、沉默WASL的小干扰RNA（si-WASL）、抑制物阴性对照（anti-miR-con）、miR-216a-5p抑制物（anti-miR-216a-5p）、miR-216a-5p及空载质粒（pcDNA）和miR-216a-5p及WASL过表达质粒（pcDNA-WASL）分别转染子宫内膜癌HEC-1-B细胞作为miR-216a-5p组、miR-con组、si-con组、si-WASL组、anti-miR-con组、anti-miR-216a-5p组、miR-216a-5p+pcDNA组和miR-216a-5p+pcDNA-WASL组。采用逆转录实时荧光定量PCR（Real-time RT-qPCR）和Western blotting法分别检测子宫内膜癌组织、癌旁组织和各组HEC-1-B细胞中miR-216a-5p和WASL mRNA及蛋白表达水平。采用MTT法检测各组细胞增殖活性,Transwell法检测各组迁移和侵袭细胞数。采用双荧光素酶报告基因法检测各组细胞双荧光素酶活性,以此确定WASL是否为miR-216a-5p的靶基因。结果：与癌旁组织比较,子宫内膜癌组织中miR-216a-5p表达水平明显降低（P<0.05）,WASL mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,两者呈负相关关系（r=-0.317,P<0.01）。与miR-con组和si-con组比较,miR-216a-5p组和si-WASL组细胞中WASL蛋白表达水平（P<0.01）和细胞增殖活性均明显降低（P<0.05）,迁移和侵袭细胞数明显降低（P<0.05）。双荧光素酶报告基因和Western blotting检测,WASL为miR-216a-5p的靶基因。与miR-216a-5p+pcDNA组比较,miR-216a-5p+pcDNA-WASL组细胞增殖活性、迁移细胞和侵袭细胞数均明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：miR-216a-5p在子宫内膜癌组织中呈低表达,其可能通过靶基因WASL抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能是子宫内膜癌治疗的潜在靶点。     

整合素连接激酶在子宫内膜癌组织中的表达及其对细胞迁移和侵袭能力的影响

目的：观察子宫内膜癌患者癌组织中整合素连接激酶（ILK）的表达水平,通过体外细胞实验探讨其对子宫内膜癌细胞迁移和侵袭能力的影响,并阐明其作用机制。方法：采用免疫组织化学SP法检测29例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织细胞中ILK阳性表达率。分别将ILK siRNA和siRNA control转染至子宫内膜癌HEC-1B细胞作为干扰组和空载组,以不作处理的细胞作为对照组;采用Western blotting法检测HEC-1B细胞中ILK、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）和磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）蛋白表达水平,细胞划痕实验检测细胞迁移距离,Transwell小室法检测侵袭细胞数。结果：29例子宫内膜癌患者癌组织中ILK阳性表达率为79.3%,癌旁组织中ILK阳性表达率为10.3%,子宫内膜癌组织中ILK阳性表达率明显高于癌旁组织（P<0.05）。与对照组和空载组比较,干扰组HEC-1B细胞中ILK、p-Akt和p-GSK-3β蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Akt和GSK-3β蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）;细胞划痕实验,与对照组和空载组比较,干扰组HEC-1B细胞迁移距离明显缩短（P<0.05）,侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。结论：ILK在子宫内膜癌组织中呈高水平表达,干扰ILK表达能够降低子宫内膜癌细胞的迁移和侵袭能力,其作用机制可能与其抑制Akt和GSK-3β蛋白磷酸化有关。     

大黄素抑制人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖及细胞周期进程的实验研究

目的探讨大黄素对人口腔鳞癌细胞体外生长增殖及细胞周期改变的影响。方法采用2.5、5.0、10、20、40、60和80 μmol/L
大黄素分别干预体外培养的口腔鳞癌细胞Tca8113,作用24、48和72 h后,并设含0.1%二甲基亚砜的培养液作为对照组,通过
MTT检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞Tca8113的增殖作用;以FCM检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞周
期的影响;结合Western blotting 方法分析大黄素干预后对口腔鳞癌细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin E和P21 表达水平的变
化。结果大黄素能够在72 h内明显抑制Tca8113细胞生长以及增殖行为。MTT结果显示,随作用时间从24、48到72 h,大黄素
对于Tca8113细胞的抑制效应呈明显的时间—浓度依赖关系;由细胞周期检测结果显示,大黄素作用使口腔鳞癌Tca8113细胞
周期表现为G0~G1期细胞时相阻滞;蛋白免疫印迹则表明经大黄素干预口腔鳞癌Tca8113 细胞的细胞周期相关蛋白CDK2、
Cyclin E和P21表达水平明显降低,与空白对照组相比较,具有显著的统计学差异（P<0.05）。结论大黄素能够明确抑制人口腔鳞
癌细胞Tca8113的生长增殖以及影响其细胞分裂周期,这可能与抑制细胞周期调控信号通路中分子的活化与转导有关。
     

人食管癌相关基因4在食管癌中的抑癌功能

目的 探讨人食管癌相关基因4(ECRG4)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的抑癌功能及其机制.方法 利用DNA重组技术,构建ECRG4真核表达质粒pcDNA3.1-ECRG4,在ESCC细胞系EC9706细胞中转染表达ECRG4蛋白,检测细胞生长状态、细胞黏附、迁移、侵袭能力和裸鼠成瘤能力的改变.Western印迹检测ECRG4表达诱导P53和P21蛋白表达的变化.结果 ECRG4基因转染组裸鼠成瘤的最后体积和重量分别为(264±43)mm3和(0.39±0.09)g,对照组裸鼠分别为(464±128)mm3和(0.76±0.13)g,差异均有统计学意义(均P＜0.05).ECRG4基因转染组肿瘤细胞与基质的黏附性、迁移和侵袭能力均低于对照组,但差异均无统计学意义(均P＞0.05).ECRG4基因转染组P53和P21蛋白表达均高于对照组(100.00±3.87和35.71±2.36比16.6±1.92和1.09±0.11,均P＜0.05).结论 ECRG4是ESCC的候选抑癌基因,ECRG4可能通过参与P53通路调控P21蛋白表达来发挥其抑癌功能.     

MMP2和MMP9在子宫内膜癌中的表达及其临床意义

目的探讨基质金属蛋白酶-2(MMP2)及基质金属蛋白酶-9(MMP9)与子宫内膜癌的侵袭和转移的关系.方法采用免疫组织化学法检测121例子宫内膜癌患者的子宫内膜癌组织中MMP2及MMP9的表达,并分析其与临床病理参数的关系.结果子宫内膜癌组织中MMP2及MMP9表达显著高于正常子宫内膜组织(P＜0.01),MMP2及MMP9强阳性表达率与手术病理分期、肌层浸润、病理分级及有无淋巴转移有关.结论MMP2及MMP9与子宫内膜癌的侵袭和转移有关.