液相色谱-串联质谱测定大鼠血浆中紫云英苷的浓度及其药代动力学研究

目的建立液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定大鼠血浆中紫云英苷的浓度,并研究其灌胃给药后在大鼠体内的药代
动力学特征。方法以槲皮素为内标,采用HPLC-MS/MS方法,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18,流动相为甲醇-10 mmol/L
醋酸铵水溶液-甲酸（80∶20∶0.15, v/v/v）,采用多反应监测（MRM）模式,监测离子分别为：m/z 449.1→m/z 287.1（紫云英苷）,m/z
301.1→m/z 151.1（槲皮素）;DAS2.0药动学软件计算药动学参数。结果紫云英苷在1.00~1000 ng/ml浓度范围内线性关系良好
（r2=0.9929）;定量下限为1.00 ng/ml;低、中、高浓度的提取回收率均大于93%。大鼠灌胃给药后在0.5±0.1 h达到231.1±67.3 ng/ml的
峰值浓度,血浆半衰期为3.9±1.3 h,AUC0-∞为782.6±152.8 (ng·h/ml)。结论本方法灵敏度高、选择性强、分析时间短,适用于血
浆中紫云英苷的浓度测定及其药代动力学研究。
     

玉米多糖铁在毕格犬体内的药代动力学研究

目的:采用原子吸收分光光度法对玉米多糖铁在毕格犬体内的药代动力学特征进行研究。方法:毕格犬灌胃(11.0 mg/kg、5.7 mg/kg、2.9 mg/kg)给予玉米多糖铁后,不同时间点测定犬体内铁离子的浓度,所得数据用DAS软件求算药动学参数并分析。结果:当玉米多糖铁中铁离子浓度在0.2⁵μg/ml范围内时其线性关系良好,标准曲线的相关系数r=0.999 65μg/ml范围内时其线性关系良好,标准曲线的相关系数r=0.999 6⁰.999 9,平均回收率达到91%以上、RSD值低于15%。药动学参数表明其在毕格犬体内的药动学模型符合二室模型,其中三个剂量组的t1/2分别为(1.69±0.25)×103、(1.4±0.51)×103和(1.88±1.41)×103min;AUC0-∞分别为(5.87±1.39)×103、(4.53±1.11)×103和(3.91±2.12)×103mg/(L·min)。结论:本研究数据为进一步研究玉米多糖铁的临床应用提供了极具价值的实验参数。     

阿托伐他汀大鼠体内药动学及肠肝循环研究

目的建立测定大鼠血浆、胆汁中阿托伐他汀的浓度的LC-MS方法,研究其在大鼠体内的药动学和肠肝循环情况.方法测定大鼠静脉注射和灌胃给予阿托伐他汀后血浆中的药物浓度,对灌胃给药的吸收程度进行研究;测定大鼠给药后12 h胆汁中的药物浓度,计算其累积排泄率;运用大鼠肠肝循环模型研究阿托伐他汀在大鼠体内从胆汁重吸收的药动学过程,经3P87程序计算药动学参数.结果大鼠静脉注射和灌胃给予阿托伐他汀后体内药动学过程均符合二房室一级吸收模型,灌胃给药的绝对生物利用度为10.2%,两种途径给药后12 h的胆汁累积排泄率分别是(7.3±1.4)%和(3.3±0.02)%.大鼠肠肝循环模型表明,胆汁供体组大鼠的AUC和胆汁受体组大鼠的AUC分别是(26 383.0±9 870.5)ng/mL·min和(2 636.8±1 815.0)ng/mL·min.结论阿托伐他汀在大鼠体内口服吸收程度较低,静脉注射给药后存在肠肝循环现象.     

天门冬酰胺酶自组装空心纳米囊的药代动力学及生物等效性

目的研究载带天门冬酰胺酶（AN）的自组装透明质酸-聚乙二醇（HA-g-PEG）/磺丁基-β-环糊精（S-CD）纳米囊（AHSPs）在
雄性SD大鼠体内的药代动力学和生物等效性。方法考察了AHSPs的透射电镜、粒径和Zeta电位,并分别测定大鼠静脉给予
AHSPs和游离AN后,不同时间点大鼠血浆样品中AN的活性。采用DAS 2.1.1软件计算药动学参数,对AHSPs和游离AN进行
生物等效性评价。结果经计算,AHSPs的平均粒径为413.80±10.97 nm,Zeta电位为-20.37±2.38 mV。AHSPs和游离AN的主
要药动学参数AUC（0~48 h）分别为137.34±1.82 U/mL和46.38±1.98 U/mL,AUC（0~∞）分别为164.66±6.88 U/mL和51.44±3.01 U/mL,
t1/2分别为4.62±0.60 h 和1.86±0.38 h。与游离AN比较,AHSPs 的AUC（0~48 h）、AUC（0~∞）和t1/2分别提高了2.96、3.20 和2.48 倍。
AUC（0~48 h）、AUC（0~∞）和Cmax的90%可置信区间分别为75.0%~76.5%、74.3%~76.1%、95.1%~96.7%。结论AHSPs延长了AN在大
鼠体内的生物半衰期,提高了AN在大鼠体内的生物利用度,且AHSPs与游离AN不具有生物等效性。
     

黎药材海南牛耳枫大鼠体内药动学研究

目的研究大鼠灌胃给药海南牛耳枫提取物后槲皮素在大鼠体内的药物动力学特征。方法采用LC-MS/MS法,测定灌胃给药后大鼠血浆中槲皮素的浓度变化,用DAS2.0药动学软件处理,计算药动学参数。结果大鼠灌胃给药海南牛耳枫提取物后槲皮素在大鼠体内动力学参数为Tmax=（0.195±0.155）h,Cmax=（35.00±15.30）ng/ml,AUC0-t=（66.82±21.77）ng/（ml·h）,t1/2=（5.736±2.513）h。结论该法选择性强、灵敏度高,适用于药材及制剂中槲皮素的体内药动学研究。     

枇杷叶提取物中科罗索酸在糖尿病大鼠体内的药动学研究

[目的]建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC),测定枇杷叶提取物中科罗索酸在糖尿病大鼠体内的血药浓度,并探讨其在病理模型大鼠体内药动学特征。[方法]SD糖尿病模型大鼠给予枇杷叶提取物灌胃,在不同时间点眼后静脉丛取血,预处理后测定血浆中科罗索酸的浓度,经DAS 2.0软件处理数据。[结果]枇杷叶提取物中科罗索酸在糖尿病大鼠体内的药动学符合二房室模型,科罗索酸在体内较快地被吸收,给药后1.5 h即达到峰浓度,峰浓度为(0.922±0.182) mg/L,其他主要药动学参数:吸收速率常数为(2.754±0.382)/h、分布半衰期为(0.879±0.295)h、消除半衰期为(8.752±3.561)h、24 h药时曲线下面积为(5.528±1.357)mg·h/L。[结论]高效液相色谱法测定血浆中科罗索酸浓度准确、简便,适用于枇杷叶提取物中科罗索酸的药动学研究。     

当归多糖铁复合物在缺铁性贫血大鼠与正常大鼠体内药动学比较研究

目的比较当归多糖铁复合物 (APIC) 在缺铁性贫血大鼠与正常大鼠体内的药动学差异,为优化临床给药方案提供参考。方法采用低铁饲料并辅以定期放血法建立缺铁性贫血模型,缺铁性贫血大鼠与正常大鼠分别随机分为 APIC 低、中、高剂量 (5.83、8.75、17.5 mg/kg) 组,ig 给药,以原子吸收法测定各时间点血清铁浓度,用 DAS 2.0 软件求算药动学参数,并采用 SPSS 13.0 软件对同剂量组的缺铁性贫血大鼠和正常大鼠的主要药动学参数进行 t 检验。结果APIC 在两种不同生理状况下大鼠的药动学过程均符合二室模型,3个剂量组的缺铁性贫血大鼠的血清铁浓度在 4 h 以后均显著高于健康大鼠,3个剂量组的 CL/F、t1/2β与正常组均有显著差异 (P＜0.05),但只有高剂量组的 t1/2α 与正常组有显著差异。结论APIC 在缺铁性贫血大鼠与正常大鼠体内的药动学存在显著差异,并且这种差异与剂量有一定的关系。     

聚乙二醇化重组人白细胞介素-6大鼠皮下注射的药代动力学研究

目的 研究聚乙二醇化重组人白细胞介素-6(PEG-rhIL-6)单次皮下注射后在大鼠体内的药代动力学过程和组织分布.方法 用同位素示踪法,碘标记PEG-rhIL-6,采用三氯乙酸(TCA)沉淀法检测放射性浓度,3P87软件判断房室模型和计算各种参数,并检测125 I-PEG-rhIL-6皮下注射大鼠后不同时同的血药浓度,组织分布以及排泄.结果 3、20和40μg/kg 3个剂量的125 I-PEG-rhIL-6皮下注射大鼠后,吸收半衰期(tl/2 Ka)分别为10.44、11.25和11.37 h;消除半衰期(t1/2,Ke)分别为20.47、21.53和19.77 h,达峰时间(Tpeak)分别为20.51、21.96和21.30 h;PEG-rhIL-6在大鼠体内的组织分布主要在血液;PEG-rhIL-6主要通过尿液排出体外.结论 PEG-rhIL-6在大鼠体内的药代动学过程基本符合线性药动学特征,血药浓度-时间曲线符合-房室模型.经PEG修饰的rhIL-6在大鼠体内的半衰期明显延长.     

紫花地丁中芹菜素在大鼠体内的药动学研究

目的：建立 HPLC 法测定大鼠血浆中芹菜素的浓度,研究紫花地丁中芹菜素在大鼠体内的药动学特征。方法以乙腈：0.2%磷酸水溶液（65：35）为流动相,血浆样品经乙酸乙酯萃取后,采用 HPLC 法测定芹菜素的血药浓度,检测波长340nm。采用 DAS3.0软件计算主要药动学参数。结果芹菜素在0.03～9.00μg/ mL 范围内线性关系良好（r =0.9992）,方法回收率为（97.36%～101.69%）,日内和日间 RSD 均〈13%。主要药动学参数 Cmax为（220.59±58.65）μg/ mL,t 1/2为（6.785±2.833）h,AUC （0-18）为（11.42±3.587）μg/（mL·h）,AUC （0-∞）为（22.84±6.572）μg/（mL·h）。结论芹菜素在大鼠体内过程符合一室模型,其药动学研究结果为紫花地丁进一步体内研究奠定了良好基础。     

五加皮Age蛋白的药动学研究

目的研究五加皮Age蛋白的药动学特征。方法采用氯胺T法用125I标记Age蛋白,形成125I-Age复合物。S180荷瘤小鼠iv给药后,采用同位素示踪法结合SDS-PAGE电泳测定血浆中Age蛋白质量浓度。用3P87药动学软件分析血浆中Age蛋白的药动学参数。结果小鼠iv125I-Age后,Age蛋白在体内的代谢符合二房室分布模型。按剂量50、100、200μg/kgiv后,测得Age蛋白分布相半衰期(t1/2α)分别为0.34、0.45、0.26h,消除相半衰期(t1/2β)为14.13、16.49、17.42h,全身清除率(CLs)为0.0454、0.0491、0.0533mL/(h·kg)。结论Age蛋白在荷瘤小鼠体内药动学行为符合线性二室模型,在体内的分布和消除均较慢。     

熊果酸对大鼠角膜移植排斥反应的抑制作用

目的探讨熊果酸对大鼠角膜移植排斥反应的治疗效果。方法以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,将48只Wistar大鼠
随机分为4组。A组为正常角膜对照组,B组为Wistar鼠自体原位角膜移植,C、D 组为SD-Wistar大鼠之间进行同种异体角膜移
植。术后当天腹腔给药,A、B、C三组分别给予生理盐水作为空白对照,D组给予熊果酸（UA）（20 mg·kg-1·d-1）,连续给药12 d。
根据Larkin等角膜排斥反应评分系统,判断术后植片排斥情况。比较角膜植片的存活时间和植片存活率。术后14 d检测各组
中IL-2、IFN-γ、NF-κBp65、VEGF及ICAM-1的表达含量,并对角膜植片进行组织学检查与Western blot分析。结果D组角膜
植片的存括时间为29.12±9.58 d,与C组9.67±2.16 d 相比,两组间差异有显著性意义（P<0.01）。术后14 d D组角膜植片中的
IL-2、IFN-γ、NF-κBp65、ICAM-1及VEGF的相对含量明显下降,而IκB-α蛋白含量较高。未见明显淋巴细胞浸润和新生血管形
成。结论熊果酸作为NF-κB的核因子抑制剂,可以抑制角膜新生血管的形成与排斥反应,从而显著延长大鼠角膜植片的存活
时间。
     

阿托伐他汀对老年大鼠多器官内皮型一氧化氮合酶的影响及其在心肌缺血再灌注中的作用

目的观察阿托伐他汀对多器官内皮型一氧化氮合酶（eNOS）合成及eNOS mRNA表达的影响,探讨阿托伐他汀在心肌缺
血再灌注过程中对多器官保护作用的可能机制。方法20月龄Wistar大鼠应用阿托伐他汀灌胃至24月龄,采用结扎冠状动脉
方法建立心肌缺血再灌注模型,并设立未用药未手术组、未用药手术组、用药未手术组及用药手术组。应用Western blot方法检
测eNOS在各组大鼠心、肝、肾组织的含量,应用RT-PCR方法检测eNOS mRNA的表达情况。同批次同处理24月龄大鼠,分为
大剂量他汀组、小剂量他汀组并老年对照组。采用同上方法检测eNOS在各组大鼠心、肝、肾组织的含量,应用Western blot方法
检测eNOS在各组大鼠心、肝、肾组织的含量,应用RT-PCR方法检测eNOS mRNA的表达情况。结果阿托伐他汀能显著提高
老年大鼠心、肝、肾器官内eNOS合成（P<0.05）及eNOS mRNA的表达（P<0.05）,且与心肌缺血再灌注无关。引入药物剂量分组
后,与老年对照组相比,他汀组eNOS合成及eNOS mRNA的表达显著增加（P<0.05）;其中,大剂量他汀组较小剂量他汀组增加
更为显著（P<0.05）。结论阿托伐他汀可使老年大鼠多器官内eNOS合成及eNOS mRNA的表达增加,部分解释了阿托伐他汀
在心肌缺血再灌注过程中对多器官功能的保护作用。
     

芦丁在正常及糖尿病肾病大鼠体内药代动力学研究

目的比较芦丁在正常大鼠及糖尿病肾病大鼠体内药代动力学行为的差异。方法腹腔注射链脲霉素建立糖尿病肾病模型,静脉给予芦丁后取血分离血浆,采用HPLC-DAD法检测血浆中芦丁的浓度,以矩量法计算药代动力学参数。结果与正常大鼠比较,糖尿病肾病大鼠给予芦丁后体内AUC（0-4）明显增加〔（39.20±12.10）mg.h/L vs.（69.40±24.20）mg.h/L,P〈0.01〕、体内平均滞留时间显著延长〔（0.726±0.13）h vs.（1.069±0.17）h,P〈0.05〕、血浆消除半衰期显著增大〔（5.413±0.57）h vs.（6.595±0.38）h,P〈0.05〕、血浆清除率显著减小〔（0.424±0.071）L.h-1.kg-1vs.（0.226±0.072）L.h-1.kg-1,P〈0.05〕。结论芦丁在糖尿病肾病大鼠与正常大鼠之间存在明显的药代动力学差异。     

异丙酚和白藜芦醇预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤时细胞凋亡的影响及机制

目的探讨异丙酚与白藜芦醇单独应用及联合应用预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响及可能的作用
机制。方法144 只健康成年雄性SD 大鼠随机分为8 组,18 只/组,分别为：假手术组（SO 组）、生理盐水预处理组（NS 组）、
Tween80预处理组（TW组）、低剂量异丙酚预处理组（PROⅠ组）、高剂量异丙酚预处理组（PROⅡ组）、低剂量白藜芦醇预处理组
（RESⅠ组）、高剂量白藜芦醇预处理组（RESⅡ组）、异丙酚联合白藜芦醇预处理组（PRO+RES组）。参照Pringle 法建立大鼠
全肝缺血再灌注模型。SO组仅游离肝门,不作肝门阻断,经股静脉输注生理盐水（2 ml/kg）;NS组、TW组分别于肝门阻断前
10 min经股静脉输注生理盐水（2 ml/kg）、Tween80（2 ml/kg）;PROⅠ组、PROⅡ组、RESⅠ组、RESⅡ组及PRO+RES组分别于
肝门阻断前10 min 经股静脉输注异丙酚10 mg·kg-1·h-1、异丙酚20 mg·kg-1·h-1、白藜芦醇10 mg/kg、白藜芦醇20 mg/kg、异丙
酚10 mg·kg-1·h-1+白藜芦醇10 mg/kg。各实验组均于再灌注后1、3、6 h分别处死6只动物,留取肝组织标本,常规石蜡包埋后切
片。HE染色观察肝组织形态学改变,原位细胞凋亡检测技术（TUNEL法）检测肝组织细胞凋亡情况;免疫组织化学技术检测肝
组织凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及caspase-3蛋白的表达。结果与NS组、TW组比较,PROⅠ组、PROⅡ组、RESⅠ组、RESⅡ组及
PRO+RES组肝组织病理损害减轻,细胞凋亡指数降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达增多（P<0.05）,Bax及caspase-3蛋白表达减少
（P<0.05）。相较于PROⅠ组及RESⅠ组,PRO+RES组肝组织病理损伤减轻,细胞凋亡指数降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达增多
（P<0.05）,Bax蛋白及caspase-3蛋白表达减少（P<0.05）。PROⅡ组、RESⅡ组与PRO+RES组间肝组织病理损伤程度、细胞凋亡
指数及细胞凋亡相关蛋白表达无显著差异。结论异丙酚与白藜芦醇通过上调Bcl-2蛋白的表达,下调Bax及caspase-3蛋白的
表达,抑制细胞凋亡,对HIRI产生一定的保护作用。异丙酚与白藜芦醇联合应用可以明显减少用药剂量。
     

基于RAM-HPLC在线富集技术检测大鼠血浆及尿液中的呋塞米

目的通过柱切换技术建立限进性填料柱-高效液相色谱法,实现在线直接进样并检测大鼠血浆及尿液中的呋塞米。方法
以自制限进填料柱为预处理柱,Luna C18柱为分析柱,预处理流动相为水-甲醇（95∶5,V/V）,含体积百分数为0.1%的甲酸,流速
为1 ml/min;分析流动相为血浆：甲醇- 水（65∶35,V/V）,尿液：甲醇-水（55∶45,V/V）,均含体积百分数为0.1%的甲酸,流速均为
1 ml/min,柱温为25 ℃;检测波长为274 nm。结果呋塞米血浆样品在进样100 μl时,富集效果良好,在0.1~3.2 μg/ml的浓度范
围内具有良好的线性关系（r=0.9995）,尿液进样20 μl,呋塞米浓度在0.5~32 μg/ml范围内具有良好的线性关系（r=0.9991）,血样
及尿样的三个加标水平下的平均回收率分别为101.82%~113.36%,98.75%~112.27%,日内日间精密度均小于5%。结论药代
动力学参数AUC0→24为6.265 μg/（ml·h）,t1/2为2.447 h,Cmax为1.414 μg/ml;24 h内呋塞米的累积排泄率为32.50%~39.08%。本
方法简单快速,适用于血浆及尿液中呋塞米的直接进样检测。
     

脑出血能促进大鼠海马齿状回神经再生

目的探讨脑出血是否能促进大鼠海马齿状回神经再生。方法使用Western blotting、免疫组化染色和免疫荧光双标等方
法并结合激光共聚焦显微镜技术对脑出血大鼠海马齿状回神经再生进行检测。结果与正常对照大鼠比较,同侧海马齿状回
DCX蛋白在脑出血1 d即表达增强（0.127±0.088 vs 0.202±0.062）,14 d达到高峰（0.771±0.108,P<0.01）,28 d开始降低（0.582±
0.121,P<0.01）。同时发现DCX和BrdU免疫阳性细胞以及DCX和BrdU免疫双标细胞出现在海马齿状回。与对照组相比,脑
出血28 d大鼠海马齿状回颗粒细胞层BrdU和NeuN免疫双标细胞显著增加（1.808±1.020 vs 5.654±1.671,P<0.01）。结论脑出
血能促进大鼠海马齿状回神经再生。
     

厚朴中苯乙醇苷类化合物厚朴苷A的大鼠体内药动学研究

目的:建立血浆样品中厚朴苷A的测定方法,研究厚朴苷A在大鼠体内的药动学特征。方法:大鼠经口服和尾静脉注射给药,以黄芩苷为内标,采用高效液相色谱法测定不同时间点大鼠血浆中的厚朴苷A浓度。使用岛津LC-20A高效液相色谱仪,色谱柱为Agilent Zobax SB-C18(250 mm×20 mm,5μm),甲醇/水溶液梯度洗脱(0~15 min,甲醇15%~85%),流速为1 mL·min~(-1)。采用DAS 2.0软件对所得的需要浓度进行拟合,计算相应的药动学参数。结果:大鼠经口服给药200 mg·kg~(-1)、尾静脉注射给药5 mg·kg~(-1),目标物质量浓度在0.3~100μg·mL~(-1),内线性关系良好(r=0.999 6),标准曲线定量下限为0.3μg·mL~(-1);批内精密度RSD7.1%,批间精密度RSD12.4%;准确度RE3.3%~5.9%;回收率83.5%~99.0%。大鼠经口服给药的药动学参数AUC(0-t)为(15.6±7.4)mg·h/L,CL为(14.5±6.1)L·h/kg,Vd为(13.5±2.8)L/kg,t1/2为(1.16±0.8)h。大鼠尾静脉注射给药的药动学参数AUC(0-t)为(17.8±9.9)mg·h/L,CL为(0.34±0.14)L·h/kg,Vd为(0.08±0.04)L/kg,t1/2为(0.15±0.03)h。结论:该实验建立了一种简便、准确、快速地测定厚朴苷A浓度的方法,首次报道了厚朴苷A在大鼠体内的药物代谢动力学特征。     

白藜芦醇苷在Beagle犬体内的药代动力学研究

目的 建立测定血浆中自藜芦醇苷的方法,并对其在Beagle犬体内的药代动力学进行研究.方法 采用Hypersil-BDS C18色谱柱;流动相为甲醇-水(35:65),流速1.0 ml/min;紫外检测波长为290 nm,柱温25℃.用非室模型计算药代动力学参数.结果 白藜芦醇苷在0.21～21.0μg/ml浓度范围内,其线性良好,r=0.9995(n=5),最低检测浓度约为0.1μg/ml.平均回收率达到90%以上,RSD值低于8.0%.其主要药代动力学参数在3个剂量组的T_(1/2)分别为89.95±19.96 min,152.15±55.82 min,202.36±66.75 min,AUCO-∞分别为300.14±51.33μg·min/ml,751.72±173.97μg·min/ml和1521.12±310.02μg·min/ml.结论 用本法测定血浆中自藜芦醇苷,结果满意,白藜芦醇苷在体内符合二室模型.

Abstract：

Objective To establish a method for detecting plasma polydatin using high-performance liquid chromatography (HPLC) and investigate the pharmacokinetics of polydatin in Beagle dogs. Methods HPLC-based detection of polydatin was performed on a Hypersil-BDS C18 column with a mobile phase of methanol and water (35=65) at the flow rate of 1.0 ml/min and the detection wavelength of 290 nm. The pharmacokinetic parameters of polydatin were calculated by non-compartment model statistics. Results The standard curve was linear within the range of 0.21-21.0 (Ag/ml (correlation coefficient of 0.9995,n=5). The average recovery was 90% with a relative standard deviation no more than 8.0%. The limit of detection of the method was 0.1 μ/ml. The pharmacokinetic parameters of polydatin at 3 doses were obtained, with T_(1/2) of 89.95±19.96 min,152.15±55.82 min, and 202.36±66.75 min, and AUC0-∞ of 300.14±S1.33 g·min·ml~(-1), 751.72+173.97 g·min·ml~(-1) and 1521.12±310.02 μg· min· ml~(-1), respectively. Conclusion The method we established allows effective detection of polydatin,whose pharmacokinetics conforms to the two-compartment model.