大黄酸可影响高糖培养SD大鼠肾小球系膜细胞的凋亡

背景：含有大黄的复方中药消可宁能有效防治早期糖尿病肾病。 目的：观察大黄酸对髙糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响。 方法：以20,40,80 μmol/L浓度的大黄酸刺激髙糖培养的肾小球系膜细胞,苏木精-伊红染色观察凋亡细胞形态,DAPI荧光染色观察细胞核凋亡情况,流式细胞仪观察细胞凋亡率。 结果与结论：苏木精-伊红染色及DAPI染色结果显示大黄酸可促进髙糖培养的肾小球系膜细胞的凋亡,且与浓度与时间成正相关。各组肾小球系膜细胞的细胞凋亡率差异有显著性意义(P < 0.05),表明大黄酸对髙糖培养的肾小球系膜细胞凋亡产生影响且与浓度及时间成正相关。     

大黄素干预高糖培养大鼠肾小球系膜细胞的凋亡

背景：前期工作已经证实中药复方消可宁(制大黄、制附子、生黄芪)能有效防治早期糖尿病肾病并获得国家专利(专利号：200410064899X)。 目的：观察大黄主要活性成分大黄素对高糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响。 方法：用20,40,80 μmol/L大黄素刺激高糖培养的SD大鼠肾小球系膜细胞,苏木精-伊红染色观察凋亡细胞形态,4',6-二脒基-2-苯基吲哚荧光染色观察细胞核凋亡情况,流式细胞仪观察细胞凋亡率。 结果与结论：苏木精-伊红染色及4',6-二脒基-2-苯基吲哚染色结果显示大黄素对高糖培养的肾小球系膜细胞的凋亡有影响,且与浓度与时间成正相关,细胞凋亡率组间差异有显著性意义(P < 0.05)。提示大黄素可诱导肾小球系膜细胞凋亡,且与药物浓度及时间成正相关。     

p53激动剂nutlin-3对高糖培养的肾系膜细胞增殖的影响

目的:观察p53激动剂nutlin-3对高糖培养的肾系膜细胞增殖、凋亡和细胞外基质表达的影响。方法:制备糖尿病肾病(DN)小鼠动物模型,对小鼠肾组织行PAS染色,观察病理形态学变化,免疫组化染色检测肾组织中p53的表达。对肾小球系膜细胞株SV40进行体外培养,根据实验需要将细胞分为甘露醇(Motl)组、正常糖浓度对照(NG)组、高糖(HG)组,高糖+nutlin-3(HG+Nut)组及nutlin-3对照(Nut)组,CCK-8法和台盼蓝染色活细胞计数检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)、p53、p-p53、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:DN小鼠肾组织中系膜细胞增生,细胞外基质增多,p53水平明显升高。高糖环境可以增强系膜细胞的活力,40μmol/L的nutlin-3对高糖培养下的系膜细胞有抑制作用。与HG组比较,HG+Nut组的p53、Bax和p-p53的蛋白水平显著升高(P0.05),Bcl-2和Col-IV的蛋白水平降低(P0.05),Bax/Bcl-2的比值大于1。与HG组比较,nutlin-3可促进高糖培养下的系膜细胞凋亡,凋亡率明显增高(P0.05)。结论:高糖环境增强肾系膜细胞的增殖能力。p53激动剂可抑制高糖培养的肾系膜细胞的活力和Col-IV的表达,促进其凋亡。     

抗Fas抗体诱导人肾小球系膜细胞凋亡

研究抗Ｆａｓ抗体对人肾小球系膜细胞的致凋亡作用，探讨Ｆａｓ－ＦａｓＬ在肾脏损务中的作用。方法：常规方法分离，培养人肾小球系膜细胞，并传代鉴定，用不同浓度的抗Ｆａｓ抗体刺激４－６代Ｍｃｓ１６ｈ后，荧光染色观察Ｍｃｓ凋亡变化，二苯胺法和ＤＮＡ凝胶电泳方法定量和定性分析ＭｃｓＤＮＡ片段化变化。     

蕨麻多糖通过促进环状RNA AKT3(circ-AKT3)表达减轻高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞损伤

目的 探讨蕨麻多糖对高糖诱导的肾小球系膜细胞损伤的影响及环状RNA-AKT3(circ-AKT3)在其中的作用。方法采用高糖诱导SV40 MES13小鼠肾小球系膜细胞建立细胞损伤模型,加入(0.1、 0.3、 0.6)mg/mL蕨麻多糖处理细胞;分别采用pcDNA和pcDNA-circ-AKT3质粒、小干涉RNA阴性对照(si-NC)、环状RNA AKT3小分子RNA(si-circ-AKT3)转染高糖诱导的肾小球系膜细胞后,加入蕨麻多糖处理细胞。根据试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)的水平;ELISA检测白细胞介素6(IL-6)、 IL-18、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时定量PCR检测circ-AKT3的表达量。结果 高糖诱导的肾小球系膜细胞中SOD、 GSH-Px的水平降低,MDA、 IL-6、 IL-18、 MCP-1的水平升高,凋亡率升高,circ-AKT3的表达水平降低;蕨麻多糖处理高糖诱导的肾小球系膜细胞后,SOD、 GSH-Px的水平升高,MDA、 IL-6、 IL-18、 M...     

黄芩苷通过影响miR-141上调Sirt1表达而抑制高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡

目的:探讨黄芩苷在高糖环境下对小鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响,并从微小RNA-141(miR-141)/沉默信息调节因子1(Sirt1)通路深入阐释黄芩苷对糖尿病肾病的治疗机制。方法:高糖(25 mmol/L葡萄糖)培养小鼠肾小球系膜细胞系SV40-MES-13模拟构建糖尿病肾病细胞模型,并分为正常对照组、高糖组、黄芩苷组和高糖+黄芩苷组。q PCR检测miR-141的表达水平,Western blot检测Sirt1的表达水平。双萤光素酶实验检测Sirt1与miR-141的调控关系。流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与正常对照组相比,高糖条件下培养的系膜细胞内miR-141表达水平明显上调,Sirt1蛋白表达水平明显下调,细胞凋亡水平显著增加(P0.01);与高糖组比,高糖+黄芩苷组的细胞凋亡和miR-141表达水平明显降低,Sirt1蛋白表达水平明显升高(P0.01)。敲减Sirt1表达可以逆转下调miR-141对系膜细胞细胞凋亡和细胞内Sirt1蛋白水平的作用。过表达miR-141可以逆转黄芩苷抑制高糖对Sirt1蛋白水平和细胞凋亡的作用;过表达miR-141对系膜细胞的作用可以进一步被Sirt1的过表达所逆转。结论:黄芩苷可以通过抑制miR-141过表达,促进Sirt1表达水平上升,最终缓解高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡,达到治疗糖尿病肾病的作用。     

脑死亡供体肺病理改变及临床移植应用的可行性

背景：有学者认为在脑死亡过程中很多因素可导致肺组织的改变。 目的：观察脑死亡供体肺病理改变,探讨其临床移植应用的可行性。 方法：对23例脑死亡供体肺进行了病理活检,苏木精-伊红染色、银染及PAS染色观察肺脏组织变化,电镜观察肺脏超微结构变化。 结果与结论：苏木精-伊红、银染及PAS染色光镜下见支气管及肺泡结构尚完整,局部病灶见肺泡内皮细胞水肿、坏死、脱落,肺泡间隔未见明显增宽,但充血易见,血管周围有少量出血,有散在淋巴细胞;电镜下脑死亡的肺泡细胞轻微水肿,部分细胞胞核染色质沿皱缩的核膜下凝聚,有的细胞核出现变型,细胞线粒体肿胀,但未见明显坏死。说明脑死亡供肺可以实施临床移植。     

依维莫司对高糖诱导肾小球系膜细胞凋亡的保护作用

目的:观察依维莫司对高糖诱导肾小球系膜细胞(HBZY-1)凋亡的保护作用,并探讨其意义。方法:将培养HBZY-1细胞按不同葡萄糖和依维莫司浓度分组处理72h后,用磺酰罗丹明B法测量细胞OD值,计算各组细胞存活率,用Annexin V和PI双标法检测各组细胞凋亡率。结果:30mM葡萄糖处理的细胞存活率明显降低,凋亡率明显增加(均P<0.05)。不同浓度依维莫司均能提高细胞存活率(均P<0.05),其中以200ng/ml依维莫司效果最好(P<0.05);200ng/ml依维莫司具有明显抗HBZY-1细胞凋亡作用。结论:依维莫司对高糖诱导HBZY-1细胞凋亡具有保护作用,从而为其治疗糖尿病肾病提供新的研究方向。     

三磷酸腺苷诱导人白血病细胞U937凋亡的电镜观察

目的 为探讨三磷酸腺苷（ＡＴＰ）对人白血病细胞Ｕ９３７的促凋亡作用。方法 应用ＡＴＰ（０．２３ｇ／Ｌ）作用于人白血病细胞Ｕ９３７（ｈｕｍａｎ ｈｉｓｔｏｃｙｔｉｃ ｌｙｍｐｈｏｍａ）,⑴用白细胞计数器每日计数器细胞和计算抑制率;⑵用流式细胞分析仪检测ＡＴＰ对Ｕ９３７细胞周期改变和凋亡的影响;⑶苏木精－伊红以和电子显微镜检测凋亡小体的形成过程;⑷用苯胺黑染色检测凋亡小体的生命本性。结果 ⑴ＡＴＰ对Ｕ     

大黄素对早期糖尿病肾病大鼠足细胞上皮间质转化的影响

目的 探讨大黄素对早期糖尿病肾病（DN）大鼠足细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法 选取健康雄性SD大鼠40只,按数字表法随机分为对照组10只和实验组30只。对照组大鼠实验过程中采用普通饲料喂养。实验组30只大鼠采用高糖、高脂饮食喂养4周后,一次性腹腔注射链脲佐菌素（40 mg/kg）的方法,制备DN模型,取造模成功的大鼠随机分为DN组和大黄素治疗组（DN+大黄素组）。造模成功后,DN组继续高糖、高脂饮食;DN+大黄素组给予高糖、高脂饮食,联合大黄素（20 mg/kg）灌胃,每天1次,连续8周。各组大鼠在实验14周末观测以下指标：（1）收集24 h尿液,测定24 h尿蛋白量;（2）完成尿液收集后称体质量并记录;（3）处死后取腹主动脉血检测肾肌酐、尿素氮、血糖;（4）取左侧肾脏,苏木精-伊红（HE）染色、过碘酸希夫染色（PAS）观察肾脏病理改变,免疫组织化学染色观察Nephrin、Desmin蛋白的表达情况;（5）取右侧肾脏肾皮质部位组织,电镜下观察足细胞及基底膜变化情况。结果 实验组大鼠30只,DN大鼠模型造模成功24只,实验过程中DN组及DN+大黄素组大鼠各死亡2只。（1）14周末对照组、DN组、DN+大黄素组大鼠体质量分别为（350.1±14.16）、（265.2±7.62）、（312.1±11.77）g,差异有统计学意义（F=136.50,P<0.001）。（2）对照组肾肌酐、尿素氮、血糖、24 h尿蛋白分别为（28.88±4.36）μmol/L、（8.76±0.50）mmol/L、（9.81±0.86）mmol/L、（3.60±0.79）mg;DN组分别为（92.30±7.30）μmol/L、（29.41±6.67）mmol/L、（25.10±4.10）mmol/L、（35.23±4.07）mg;DN+大黄素组分别为（52.10±5.80）μmol/L、（14.93±1.03）mmol/L、（16.51±1.14）mmol/L、（13.35±1.89）mg。与对照组比较,DN组、DN+大黄素组肾肌酐、尿素氮、血糖、24 h尿蛋白量均升高;与DN组比较,DN+大黄素组各项指标均降低：差异均有统计学意义（P值均<0.01）。（3）HE染色观察肾组织形态学：对照组肾小球及肾小管结构未见异常;DN组肾小球硬化,肾小囊狭窄,部分肾小管上皮细胞空泡变性;DN+大黄素组肾小球硬化及肾小囊狭窄均有改善。（4）PAS染色观察肾小球毛细血管袢、系膜基质变化情况：对照组肾小球毛细血管袢结构清晰可见,系膜基质无异常;DN组肾小球毛细血管袢结构模糊,系膜基质增多;DN+大黄素组肾小球毛细血管袢结构较模糊,系膜基质较多。（5）免疫组织化学检测Nephrin及Desmin蛋白表达情况：与对照组比较,DN组、DN+大黄素组Nephrin蛋白光密度值均降低,Desmin蛋白光密度值均增加;与DN组比较,DN+大黄素组Nephrin蛋白光密度值增加,Desmin蛋白光密度值降低,差异均有统计学意义（P值均<0.01）。（6）透射电镜观察足细胞和基底膜变化情况：对照组足细胞轻度水肿,足突均匀、等宽排列,未见融合,基底膜完整,厚薄均一,3层结构明显;DN组足细胞呈中度水肿,足突明显融合、变宽,基底膜厚薄均一,3层结构明显;DN+大黄素组足细胞呈轻度水肿,足突融合、变宽情况减轻,基底膜厚薄均一。结论 大黄素能显著改善早期DN大鼠的体质量、肾脏病理结构及功能,其机制可能与抑制足细胞发生EMT、促进肾病蛋白Nephrin的表达和减少足细胞EMT骨架蛋白Desmin表达有关。     

天麻素对大鼠骨骼肌细胞化学损伤的保护**

背景：现代药理学研究表明,天麻的主要成分天麻素可以恢复大脑皮质兴奋与抑制过程间的平衡失调,产生镇静、安眠和镇痛等中枢抑制作用。 目的：观察天麻素对L6大鼠成肌细胞化学损伤的保护作用。 方法：用H2O2建立L6大鼠成肌细胞的化学损伤模型。DMEM培养液制备不同浓度的天麻素(1.562 500,0.781 250,     0.390 625 g/L)预处理保护组的L6大鼠成肌细胞24 h,然后用0.1 mmol/L H2O2孵育80 min,同时设置增殖组(用不同浓度的天麻素预处理,但不经H2O2处理),模型组(仅用H2O2处理),阳性对照组(仅有L6细胞悬液),阴性对照组(只有DMEM培养液),对照组既不用天麻素预处理,也不用H2O2孵育。 结果与结论：MTT检测显示,增殖组和保护组L6大鼠成肌细胞存活率明显高于模型组;DAPI荧光标记细胞核为蓝色,模型组细胞荧光度较弱,且数目显著少于保护组;苏木精-伊红染色显示保护组的细胞核形状较规则,细胞轮廓较清晰,而模型组破损细胞较多;Bax和Bcl-2免疫荧光细胞化学结果表明,模型组促凋亡基因bax表达明显高于保护组,而抑制凋亡基因bcl-2的表达量完全相反;流式细胞仪检测显示保护组的凋亡率显著低于模型组(P < 0.05)。提示天麻素对保护大鼠骨骼肌细胞化学损伤有显著效果。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体参与雷帕霉素诱导血管内皮细胞功能损伤的体外研究

目的: 探讨雷帕霉素对内皮细胞凋亡和增殖、迁移能力的影响,以及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达水平的变化。方法: 用浓度为0、1、10、100 μg/L 的雷帕霉素孵育内皮细胞24 h,应用CCK8法检测血管内皮细胞的增殖能力,Transwell小室和划痕试验检测细胞迁移能力,DAPI染色观察凋亡细胞核形态改变,Western blotting法检测caspase-3活性以显示血管内皮细胞的凋亡,并用 Western blotting检测TRAIL在凋亡的内皮细胞中的表达。结果: 雷帕霉素(1-100 μg/L)能诱导血管内皮细胞凋亡并抑制其迁移能力(P<0.01)。除雷帕霉素1 μg/L外, 10 μg/L和100 μg/L雷帕霉素均能抑制内皮细胞增殖能力(P<0.01),同时雷帕霉素(10-100 μg/L)使TRAIL蛋白表达增加,两者作用均呈浓度依赖性(P<0.01)。结论: 雷帕霉素能诱导内皮细胞发生凋亡并抑制其增殖和迁移能力。TRAIL表达上调与雷帕霉素诱导血管内皮细胞损伤有一定的相关性。     

稳定过表达饰胶蛋白聚糖基因对大鼠肾系膜细胞凋亡的影响

目的 观察稳定过表达饰胶蛋白聚糖(DCN)基因对大鼠肾系膜细胞(MsC)凋亡的影响.方法 采用脂质体介导法将pcDNA3.1A-DCN质粒稳定转染MsC,G418筛选阳性克隆.细胞免疫荧光法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法鉴定并获得转染DCN阳性的细胞株(MsC/DCN);脂质体介导法将DCN-siRNA瞬时转染MsC/DCN以干扰DCN表达,Western印迹法鉴定.Hoechst染色和流式细胞仪观察细胞凋亡及比率,Western印迹法检测活性凋亡相关激酶半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白的表达.结果 成功建立了过表达DCN基因的细胞株MsC/DCN.MsC/DCN中凋亡率为(20.40±8.01)%,显著高于MsC的凋亡率(2.07±0.99)%(P＜0.01),部分MsC/DCN发生典型的形态学改变.活性Caspase-3的蛋白表达也明显高于MsC(P＜0.01).DCN-siRNA瞬时转染不仅有效干扰了MsC/DCN中DCN的表达和降低了细胞凋亡率,而且显著下调了活性Caspase-3的蛋白表达.结论 大鼠MsC中DCN基因的过表达能诱导MsC发生凋亡,为肾小球疾病中调控MsC增生提供了新的实验依据.     

喜树碱诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及其机制

目的 测定不同浓度的喜树碱（CPT）对宫颈癌HeLa细胞促凋亡作用的影响,并探讨其促凋亡的机制。方法 人宫颈癌细胞系HeLa细胞,加入不同浓度的CPT（100 nmol/L~10 μmol/L）,继续培养24 h。MTT方法检测细胞增殖,并通过倒置显微镜观察细胞形态学变化,细胞核染色法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞早期凋亡率。Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleave-Caspase-3、细胞色素C（Cyt-C）,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）的表达。结果 MTT实验及细胞形态学结果显示,CPT对HeLa细胞的生长有明显抑制作用,并可导致细胞形态改变,且具有剂量依赖性,其IC₅₀为2.45 μmol/L;细胞凋亡检测表明,不同浓度的CPT可导致凋亡小体出现,并可使早期凋亡比例增加。Western blotting法检测结果显示,不同浓度CPT可使HeLa细胞Bcl-2蛋白表达降低,而Bax、cleaved-Caspase-3蛋白表达,胞质Cyt-C,89 kD 5-磷酸核糖-1-焦磷酸（PRPP）蛋白表达增加且呈剂量依赖性。结论 CPT可以诱导HeLa细胞凋亡,其作用机制可能为激活线粒体依赖途径,并活化作用底物PARP而实现。     

Rhein induces apoptosis of human gastric cancer SGC-7901 cells via an intrinsic mitochondrial pathway

Rhein is a primary anthraquinone found in the roots of a traditional Chinese herb, rhubarb, and has been shown to have some anticancer effects. The aim of the present study was to investigate the effect of rhein on the apoptosis of the human gastric cancer line SGC-7901 and to identify the mechanism involved. SGC-7901 cells were cultured and treated with rhein (0, 50, 100, 150, and 200 µM) for 24, 48, or 72 h. Relative cell viability assessed by the MTT assay after treatment was 100, 99, 85, 79, 63% for 24 h; 100, 98, 80, 51, 37% for 48 h, and 100, 97, 60, 36, 15% for 72 h, respectively. Cell apoptosis was detected with TUNEL staining and quantified with flow cytometry using annexin FITC-PI staining at 48 h after 100, 200 and 300 µm rhein. The percentage of apoptotic cells was 7.3, 21.9, 43.5%, respectively. We also measured the mRNA levels of caspase-3 and -9 using real-time PCR. Treatment with 100 µM rhein for 48 h significantly increased mRNA expression of caspase-3 and -9. The levels of apoptosis-related proteins including Bcl-2, Bax, Bcl-xL, and pro-caspase-3 were evaluated in rhein-treated cells. Rhein increased the Bax:Bcl-2 ratio but decreased the protein levels of Bcl-xL and pro-caspase-3. Moreover, rhein significantly increased the expression of cytochrome c and apoptotic protease activating factor 1, two critical components involved in mitochondrial pathway-mediated apoptosis. We conclude that rhein inhibits SGC-7901 proliferation by inducing apoptosis and this antitumor effect of rhein is mediated in part by an intrinsic mitochondrial pathway.     

双醋瑞因对白细胞介素1β诱导软骨细胞凋亡的影响*

背景：双醋瑞因是一种新型的白细胞介素1阻滞剂,其是否对软骨细胞的凋亡有抑制作用以及是否通过细胞信号转导通路发挥作用的基础应用研究较少。 目的：观察双醋瑞因对体外白细胞介素1β诱导大鼠关节软骨细胞凋亡的影响。 方法：体外培养SD大鼠关节软骨细胞,苏木精-伊红染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色鉴定软骨细胞,用白细胞介素1β诱导大鼠关节软骨细胞凋亡模型,再用10-4,10-5,10-6 mol/L双醋瑞因干预培养。 结果与结论：10-4 mol/L和10-5 mol/L的双醋瑞因可降低白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡率(P < 0.01和P < 0.05)。      10-5 mol/L双醋瑞因能够显著抑制白细胞介素1β诱导p38磷酸化(P < 0.01)。双醋瑞因干预的软骨细胞中p38 mRNA的表达量较模型组下降0.38倍(P < 0.01)。结果证实,双醋瑞因能够抑制软骨细胞中p38蛋白和基因的表达,从而抑制白细胞介素1β诱导关节软骨细胞凋亡。     

PPARδ激动剂GW501516抑制ox-LDL或高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的: 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)激动剂GW501516对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)和高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的抑制作用。方法: ox-LDL或高糖诱发HUVECs凋亡,给予不同浓度GW501516处理后,用流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。采用MTT法检测ox-LDL或高糖对HUVECs生长活性的影响,用不同浓度GW501516干预后观察细胞生长活性的变化。结果: ox-LDL诱导的细胞凋亡率是21.30%,不同浓度GW501516处理组凋亡率分别为17.47%、9.72%和3.94%,高糖诱导的细胞凋亡率为22.65%,不同浓度GW501516处理组凋亡率分别为20.23%、17.01%和9.38%,结果显示GW501516可抑制ox-LDL或高糖诱导的细胞凋亡,且呈剂量依赖性;MTT结果显示,GW501516可使ox-LDL或高糖对HUVECs活性的抑制作用减弱。结论: GW501516可抑制ox-LDL或高糖诱导的HUVECs凋亡;并减弱ox-LDL或高糖对HUVECs活性的抑制作用。