人羊膜上皮细胞移植急性肝损伤小鼠的定量效果分析

背景：目前已有较多关于人羊膜上皮细胞移植入动物体内的存活、迁徙及相关特性的初步研究,但其对移植效果的定量分析尚未见报道。 目的：对脾内移植传代的人羊膜上皮细胞小鼠血清肝生化功能及人血白蛋白的定量分析。 方法：40只裸小鼠随机分为4组,每组各10只。肝叶切除+细胞移植2周组、肝叶切除+细胞移植4周组、肝叶切除+盐水组,行半肝叶切除,肝叶切除+细胞移植组自脾下极移植密度为5×106传代的人羊膜上皮细胞约0.2 mL,分别于移植后2周和4周采血;肝叶切除+盐水组自脾下极注射生理盐水0.2 mL;单纯细胞移植组：不行肝叶切除,自脾下极移植密度为5×106传代的人羊膜上皮细胞约0.2 mL。检测其各组肝脾组织学、形态学的改变及各组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、人血白蛋白的变化和人血白蛋白表达定量分析。 结果与结论：人羊膜上皮细胞移植急性肝损伤小鼠4周后肝脾形态未见明显改变,组织学可检测到特异性细胞,血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、人血白蛋白有明显改善,血清中能检测到人血白蛋白且移植后4周较移植后2周有明显升高。因此,人羊膜上皮细胞移植入肝受损小鼠体内能存活超过4周且仍表达肝细胞样细胞的部分特性及功能,改善小鼠的肝功能,治疗小鼠急性肝损伤。     

APA微囊猪肝细胞移植治疗大鼠急性肝功能衰竭的实验研究

目的探讨APA微囊猪肝细胞移植治疗大鼠急性肝功能衰竭的有效性。方法用胶原酶灌注分离猪肝细胞,用海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(alginate-polylysine-alginate,APA)包埋肝细胞,测定肝细胞产量和存活率。用氨基半乳糖诱导建立大鼠急性肝功能衰竭(fulminatehepaticfailure,FHF)模型(n=68),实验动物分为微囊肝细胞植入组、游离肝细胞植入组、空囊组、对照组4组。分别将微囊肝细胞、游离肝细胞、空微囊、生理盐水植入或注入FHF大鼠腹腔,观察治疗效果。结果分离肝细胞产量为1.74×1010～2.90×1010个,微囊肝细胞存活率>80%。APA微囊肝细胞组与游离肝细胞、空囊和对照组相比,能提高FHF大鼠存活率,延长存活时间,改善肝功能。结论APA微囊猪肝细胞腹腔移植治疗FHF大鼠有较好疗效。ExperimentalStudyonHepaticFailureRatInstitute,Tianjin300170AbstractObjectiveThepaticfailurerat.Methpolylysine-alginate(APA(FHF)ratsweresetup     

人脐带间充质干细胞腹腔移植治疗急性肝损伤大鼠

背景：体外实验证实人脐带间充质干细胞可诱导成肝样细胞,故认为其可能具有肝脏修复功能。 目的：进行动物体内实验,观察人脐带间充质干细胞移植治疗大鼠急性肝损伤的效果。 方法：将健康SD大鼠随机分为3组,正常对照组不造模,细胞移植组和PBS组腹腔注射体积分数10%CCl4橄榄油溶液制造急性肝损伤模型后24 h,分别经腹腔移植人脐带间充质干细胞悬液0.5 mL和等量PBS。 结果与结论：苏木精-伊红染色显示,CCl4腹腔注射24 h后大鼠肝脏出现急性肝损伤的病理变化,细胞移植后7 d时肝脏结构完全恢复正常,PBS组14 d才恢复正常肝脏组织结构。与正常对照组相比,其他2组大鼠血清丙氨酸转氨酶及天门冬氨酸转氨酶均明显升高(P < 0.05-0.01);人脐带间充质干细胞移植后3 d,大鼠血清2种转氨酶水平较PBS组明显降低(P < 0.05-0.01);7 d后均降至正常水平。移植后第3天肝脏组织内可见抗人核蛋白抗体阳性细胞分布于汇管区,第7天抗人白蛋白抗体的阳性表达。提示经鼠腹腔移植人脐带间充质干细胞后可以在一定程度上改善肝功能及修复受损的肝组织。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

热休克处理骨髓Sca-1+细胞移植治疗小鼠心肌梗死

背景：近年来的研究发现,干细胞可以直接定向分化为成熟心肌细胞或促进其再生,为心肌梗死治疗提供一种全新的治疗策略,但是细胞移植率低使其向心肌细胞分化和执行心肌修复能力下降。 目的：探讨热休克Sca-1+细胞在小鼠心肌梗死治疗中的作用。 方法：磁珠分选骨髓中Sca-1+细胞,对Sca-1+细胞进行热休克处理3 h。建立心肌梗死小鼠动物模型,将其随机分为2组,分别经尾静脉注入1 mL热休克Sca-1+细胞悬液、1 mL非热休克Sca-1+细胞悬液。移植后检测细胞存活率、小鼠心脏功能恢复情况、心肌细胞凋亡数目、心肌纤维化程度以及左心室HSF、HSP70及miR-34a表达。 结果与结论：①热休克Sca-1+细胞移植组小鼠心脏sry基因表达显著高于非热休克Sca-1+细胞移植组。②热休克Sca-1+细胞移植组小鼠射血分数及左心室短轴缩短率显著高于非热休克Sca-1+细胞移植组,左心室的舒张末期内径以及收缩末期内径显著低于非热休克Sca-1+细胞移植组。③热休克Sca-1+细胞移植组小鼠的心脏纤维化程度及心肌细胞凋亡均显著低于非热休克Sca-1+细胞移植组。④热休克Sca-1+细胞移植组小鼠左心室HSF和HSP70表达明显高于非热休克Sca-1+细胞移植组,miR-34a表达明显低于非热休克Sca-1+细胞移植组。结果表明热休克Sca-1+细胞移植能够减少心肌细胞凋亡和心肌梗死面积,改善心脏功能。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程      

微囊小肝细胞样前体细胞移植治疗大鼠急性肝衰竭

目的探索大鼠海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊小肝细胞样前体细胞(SHPC)移植治疗急性肝衰竭(AHF)大鼠模型的可行性和有效性。方法选择体质量150~180 g健康雄性Wistar大鼠10只。采用Retrosine(30 mg/kg)腹腔内注射联合2/3肝切除诱导雄性Wistar大鼠SHPC增殖模型,改进Seglen胶原酶灌注联合Percoll密度梯度离心分离SHPC,倒置显微镜、电子显微镜下观察,并进行免疫组织化学染色;静电液滴法APA微囊包埋。选择体质量180~220 g健康雌性Wistar大鼠20只,随机分为A组(微囊化SHPC腹腔内移植)、B组(空囊对照组);采用D-氨基半乳糖腹腔注射制备大鼠AHF模型;观察模型一般状况及生存时间,术后不同时间点检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBiL)及血氨水平,检测肝脏病理改变。结果Retrosine腹腔内注射联合2/3肝切除成功建立SHPC增殖模型,分离获得细胞符合大鼠SHPC;APA微囊呈光滑规则球形,直径为(300±40)μm,强度、韧性良好,囊内细胞形态完整,存活率为(90.0±1.3)%。微囊SHPC移植后,A组较B组中位生存时间延长(119.00 h vs 70.33 h),差异有统计学意义(P<0.05);随时间延长,A组大鼠血清ALT、AST、TBiL及血氨水平明显下降,均低于移植前水平,各时间点A组明显低于B组,差异有统计学意义(P<0.05);肝组织病理显示A组肝细胞损伤较B组明显改善;存活48 h大鼠腹腔内微囊保持完整光滑球形,囊内SHPC形态完整,1周微囊有散在破损皱缩,囊内细胞有增多聚集趋势,细胞存活率85%以上。结论APA微囊化大鼠SHPC腹腔内移植能改善大鼠AHF模型生存时间、生物化学指标(ALT、TBiL等)及病理损伤。     

组织辐射损伤与胎肝Sca-1阳性细胞的移植后分布

目的：探讨在同种异体造血重建中组织辐射损伤与胎肝Sca-1+细胞及其子代细胞移植后在不同组织器官分布差异的联系。方法:用快速PCR和免疫磁珠分选技术鉴定并分离14.5 d雄性胚胎小鼠肝脏Sca-1+细胞；将分离的Sca-1+细胞(2×10⁴细胞/只)通过尾静脉输入到受［Co⁶⁰］致死剂量(8Gy/只)照射的同系成年雌性小鼠体内，重建受体小鼠的造血功能；在输入细胞6个月后，处死受体小鼠，取出肾、肝、肺、胃和小肠组织固定制片；用Y染色体探针进行荧光原位杂交、荧光显微图像系统观察、摄像和分析。结果:输入2×10⁴细胞/只的雄性胎肝Sca-1+细胞可完全重建经致死剂量照射雌性小鼠的造血功能；造血重建半年后，在受体小鼠的肾、肝、肺、胃和小肠等多个器官组织内可检出含Y染色体的细胞，显微图像计数各器官组织切片中含Y染色体细胞率分别为：肾脏(1.65±0.18)%、肝脏(0.90±0.10)%、肺(1.90±0.60)%、胃(6.10±0.50)%和小肠(7.61±2.30)%。各组织中含Y染色体细胞的检出率呈小肠>胃>肺>肾>肝的趋势，结合资料分析显示与各组织对辐射的敏感性强弱及组织细胞更新率大小基本一致。结论:胎肝Sca-1+细胞向各组织细胞的分化与组织器官受损程度可能存在一定的联系。     

小鼠胎肝Sca-1+细胞分化为骨骼肌细胞

探讨小鼠胚胎肝组织中干细胞抗原-1阳性的细胞(Sca-1+细胞)向骨骼肌细胞分化的潜能.取14.5d的小鼠胎肝,制作细胞悬液;用单克隆免疫磁珠细胞分离技术分离Sca-1+细胞;用PCR鉴别Y染色体性别决定区域(SRY)基因序列;将2×103个雄性小鼠Sca-1+细胞输注给经致死剂量(10Gy)60钴全身照射的雌性小鼠体内;于移植后2个月,处死受体小鼠,取骨骼肌组织固定、制片;用免疫组织化学染色和荧光原位杂交检测雌性受体小鼠骨骼肌组织内供体小鼠胎肝Sca-1+细胞向骨骼肌细胞分化情况.结果在骨骼肌组织内发现存在Y染色体阳性的供体来源的细胞,同时呈现骨骼肌组织的部分特征,表型为Dystrophin+/Flt-1-/CD45-F4/80-.提示小鼠胎肝Sca-1+细胞(其中绝大部分是造血干细胞)具有向骨骼肌组织细胞分化的潜能.     

急性肾衰竭与胎肝Sca-1+细胞向肾脏细胞的分化

目的： 研究急性肾衰竭(ARF)对胎肝Sca-1+细胞向肾组织细胞分化频率的影响。 方法： 用磁性细胞分选(MACS)和PCR技术分离、鉴定小鼠雄性胎肝Sca-1+细胞；将2×104的雄性胎肝Sca-1+细胞输注给致死量射线照射(［60Co］，8 Gy)的同系雌性小鼠体内；8周后，将受体小鼠随机分为A、B和C 3组(A组：单纯辐射；B组：ARF和C组：ARF-Sca-1+)，用50%(V/V)的甘油(11.6 mL/kg)诱导B组和C组小鼠产生ARF；72 h后，将新制备的2×104的雄性胎肝Sca-1+细胞输注给C组小鼠。8周后处死全部实验小鼠，取肾脏固定制片；用Y染色体探针进行荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH），显微观察、摄像并用专业软件进行图像分析和数据处理。 结果： 在单纯辐射、ARF和ARF-Sca-1+ 3种模型小鼠的肾小管上皮、间质、肾小球和肾小球边缘等部位，均发现含Y染色体的细胞；在ARF和ARF-Sca-1+小鼠的肾组织切片中，分别发现成对和成环状排列的含Y染色体的细胞，有组成部分肾小管的趋势；胎肝Sca-1+细胞在单纯辐射、ARF和ARF-Sca-1+ 3种模型小鼠的肾组织切片中的分化频率分别为(1.65±0.18)%、(8.58±1.34)%和(18.13±1.91)%，后者与前者比较，差别有显著意义(P＜0.01)，显示分化频率伴随肾组织的损伤和再生而增加。 结论： 急性肾组织损伤和自然再生的生理微环境有助于促进胎肝Sca-1+细胞向肾组织细胞的分化。     

树突状细胞、转化生长因子β1与移植免疫研究进展

树突状细胞 (dendrticcell,DC)是分布广泛的抗原呈递细胞 ,一方面可激活静息型T细胞 ,启动T细胞抗原特异性免疫反应 ,另一方面由于未成熟DC可诱导T细胞凋亡 ,在移植免疫中也发挥重要作用。近年研究发现转化生长因子 β1(TGF β1)不仅具有下调淋巴细胞和巨噬细胞功能等非特异性免疫抑制作用 ,还能抑制DC分化成熟从而诱导供者特异性移植耐受。     

017 树突状细胞、转化生长因子β1与移植免疫研究进展

树突状细胞(dendrtic cell,DC)是分布广泛的抗原呈递细胞,一方面可激活静息型T细胞,启动T细胞抗原特异性免疫反应,另一方面由于未成熟DC可诱导T细胞凋亡,在移植免疫中也发挥重要作用.近年研究发现转化生长因子β1(TGF-β1)不仅具有下调淋巴细胞和巨噬细胞功能等非特异性免疫抑制作用,还能抑制DC分化成熟从而诱导供者特异性移植耐受.     

Effect of inhibitors of polyamine biosynthesis and of exogenous polyamines on mitogenic effect of epidermal growth factor in primary hepatocyte culture

R. E. Kavetskii Institute for Problems in Oncology, Academy of Sciences of the Ukrainian SSR, Kiev. (Presented by Academician of the Academy of Medical Sciences of the USSR T. T. Berezov.) Translated from Byulleten' Éksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 107, No. 3, pp. 339–342, March, 1989.     

小鼠干细胞抗原阳性胎肝细胞在受体鼠脑组织中的分化

为了解胎肝干细胞是否具有向神经组织细胞分化的潜能 ,本研究采用免疫磁珠法分离雄性胎鼠肝组织中干细胞抗原 1(stemcellantigen ,Sca 1)阳性细胞 ,尾静脉注射Sca 1+ 细胞 (2 0× 10 3个 小鼠 )到经致死剂量 (10 0Gy)放射线照射的 10～ 12周C5 7BL 6J雌性小鼠。免疫组化和FISH双染色检测结果显示移植 2、4、6月后受体雌鼠脑组织内存在大量Y染色体阳性细胞 ,约占脑组织总细胞为 4 5 %± 0 5 % ,分布包括 :侧脑室脉络膜丛、脑室室管膜、大脑白质灰质、小脑等。这些Y染色体阳性细胞表达神经组织细胞特异标志 ,如神经元特异核蛋白 (Neuron specificnucleiprotein ,Ne uN)、神经纤维细丝蛋白M(neurofilament 16 0Ka,NF M)、微管蛋白Ⅲ (tubulinⅢ ,TuJ 1)、或者胶质纤维酸性蛋白 (Glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)等 ,其中Y染色体和NeuN均阳性的细胞为 1 2 %± 0 3%、Y染色体和GFAP均阳性的细胞为 1 0 %± 0 2 %。这说明胎肝Sca 1+ 细胞能迁移进入脑组织 ,并且分化成神经细胞和星形胶质细胞。     

Therapeutic effect comparison of hepatocyte-like cells and bone marrow mesenchymal stem cells in acute liver failure of rats

Goals: To evaluate the therapeutic efficacy of rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) induced into hepatocyte-like cells and of un-induced BMSCs in acute liver failure rats. Methods: BMSCs in highly homogenous passage 3 were cultured using the whole bone marrow adherent culture method. Hepatic-related characters were confirmed with morphology, RT-PCR analysis, glycogen staining and albumin (ALB) immunofluorescence assay. Carbon tetrachloride (CCl4) was injected intraperitoneally to establish an acute rat liver failure model. Hepatocyte-like cells or un-induced BMSCs were respectively injected into the models to examine rats’ appearance, liver function assay and liver tissue pathology. Results: Hepatocyte-like morphology, higher expression of cytokeratin 18 (CK18) mRNA and ALB protein, and glycogen accumulation were confirmed in the induced BMSCs. The transplanted DAPI-labeled BMSCs were localized in the liver tissue 3-14 days after transplantation. The levels of liver function indicators (AST, ALT, ALP, and TBIL) from transplanted rats were significant decreased and pathology was improved, indicating the recovery of liver function. However, the differences were statistically insignificant. Conclusion: Both hepatocyte-like cells and un-induced BMSCs had a similarly positively therapeutic efficacy on liver regeneration in rat liver failure model.     

胚胎小鼠肝脏Sca-1+细胞横向分化的研究

目的:研究和探索胚胎小鼠肝脏细胞的横向分化潜能。方法:将2×10³ C57BL/6j雄性胚胎小鼠的肝脏Sca-1⁺细胞从尾静脉注射到受致死性γ射线(10 Gy, ⁶⁰Co)全身照射的同种成年雌性小鼠体内;于移植后2个月, 用荧光原位杂交和免疫组织化学技术, 检测雄性胚胎小鼠肝脏Sca-1⁺细胞在雌性受体小鼠肾脏和脑组织内的分化情况。结果:在雌性受体小鼠的肾脏和脑组织内, 分别检测到Y染色体阳性的供体来源的肾小管上皮组织细胞样和神经组织细胞样的细胞, 其细胞表型分别为RCA⁺/CD^-₄₅F^-_4/80和NueN⁺/CD^-₄₅F^-_4/80。结论:胚胎小鼠肝脏Sca-1⁺细胞具有向肾脏和脑组织细胞横向分化的能力。     

Secretion of high amounts of hepatocyte growth factor is a characteristic feature of cancer‐associated fibroblasts with EGFR‐TKI resistance‐promoting phenotype: A study of 18 cases of cancer‐associated fibroblasts

Humoral factors from cancer‐associated fibroblasts (CAFs) reportedly affect epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor (EGFR‐TKI) resistance in cancer cells with EGFR mutations. The aim of this study was to identify the robust humoral factors secreted from CAFs that induce the primary resistance to EGFR‐TKI. We evaluated the EGFR‐TKI sensitivity of EGFR‐mutant lung adenocarcinoma cell line (PC‐9) treated with condition media (CM) from 18 cases of CAFs and matched non‐cancerous‐tissue‐associated fibroblasts (NCAFs). We measured the expression levels of hepatocyte growth factor (HGF), interleukin‐6, fibroblast growth factor‐2, insulin‐like growth factor‐1, and vascular endothelial growth factor‐A in CAFs and NCAFs. We examined whether HGF neutralizing antibody could annul the EGFR‐TKI resistance induced by CM from CAFs. Compared to CM from NCAFs, CM from CAFs increased the resistance of PC‐9 cells to EGFR‐TKI in five out of 18 cases. Relative expression ratio of HGF messenger RNA was significantly higher in these five CAFs compared to others (P = 0.0013), whereas other cytokines were not. In four of these five cases, the addition of HGF neutralizing antibody significantly decreased the survival ratio of PC‐9 cells. This study suggests that the secretion of higher amounts of HGF is the robust feature of EGFR‐TKI resistance‐promoting CAFs.     

不同浓度肝细胞生长因子和成纤维细胞生长因子 对大鼠肝干细胞的增殖调控

目的：初步探讨不同浓度的肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)和成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor, FGF)对大鼠肝干细胞增殖的调控作用。方法：先将大鼠肝胎细胞分别种植A、B培养板上进行肝细胞的体外培养。A组：培养液中含有HGF,浓度分为别1,5,10,20,40,80及100 ng/mL。B组：培养液中含有FGF,浓度分别为1,5,10,20,40,80及100 ng/mL。对照组不加细胞因子。由A、B两组剂量效应获得HGF和FGF的最佳浓度。再将细胞接种于C组培养板进行培养,培养液中含有最佳浓度HGF联合上述各浓度FGF, 并用四甲基偶氮唑盐比色法(mononuclear cell direct cytotoxicity assay, MTT)分别测两组的光密度值（optical delnsity, OD）,检测出HGF与FGF的最佳浓度组合。结果：HGF和FGF浓度与肝干细胞增殖效应呈剂量依赖性（dose-dependent）。当HGF浓度为20 ng/mL,FGF浓度为10 ng/mL时,为最佳浓度组合。结论：HGF和FGF均能对肝干细胞的增殖起促进作用,并且两者有一定协同作用。