尿酸刺激树突状细胞成熟与Toll样受体mRNA表达关系的研究

目的 观察未成熟树突状细胞（DC）经尿酸刺激成熟过程中,TLRs mRNA的表达情况。方法 分离培养小鼠骨髓来源未成熟 DC。以尿酸体外刺激48 h后,RT-PCR方法检测DC TLR2 mRNA、TLR3 mRNA、TLR4 mRNA 、IL-12p70 mRNA等的表达,ELISA法检测上清IL-12P70水平。尿酸及NF-κB抑制剂PDTC刺激不同时间点时,免疫印迹法检测DC NF-κB p65活化情况。结果 尿酸刺激后DC TLRs mRNA 表达出现明显的变化,与培养基对照组相比,TLR2 mRNA、TLR3 mRNA、TLR4 mRNA表达下降（P＜0.05）,以TLR4 mRNA下降最明显;IL-12p70表达显著增高（P＜0.05）;与LPS组相比,TLRs mRNA 与IL-12p70表达水平相似（P＞0.05）。尿酸刺激后15～45 min,DC核因子NF-κB p65显著活化。结论 尿酸能调节未成熟树突细胞 TLR2 mRNA、TLR3 mRNA、TLR4 mRNA及IL-12 p70的表达,促进NF-κB向核内转移,促进DC成熟。TLRs mRNA的动态变化可能为其诱导 DC 成熟及免疫功能提高的机制之一。     

高糖环境对肝星状细胞TLR4表达及脂多糖诱导的炎症因子表达的影响

目的研究高糖环境对肝星状细胞Toll样受体4(TLR4)表达及脂多糖（LPS）诱导的炎症因子表达的影响。方法体外培养
大鼠肝星状细胞株HSC-T6,采用高糖刺激,Western blot及RT-PCR检测细胞TLR4蛋白及mRNA表达;低糖或高糖培养基预处
理肝星状细胞24 h 后采用LPS（100 ng/ml）刺激,2 h 后Western blot 检测NF-κB核转位,24 h 后RT-PCR 检测MCP-1 和IL-6
mRNA表达,ELISA检测细胞上清两种炎症因子的浓度。结果高糖环境可上调肝星状细胞TLR4 蛋白及mRNA表达（均为P<
0.01）,且呈明显的时效-量效关系。高糖可促进肝星状细胞NF-κB核转位（P<0.01）,并促进MCP-1和IL-6表达及分泌（均为P<
0.01）。高糖预处理可增强LPS诱导的肝星状细胞NF-κB核转位（P<0.01）、MCP-1和IL-6表达及分泌（均为P<0.01）。结论高
糖可上调肝星状细胞TLR4的表达,并可促进脂多糖激活NF-κB而增加炎症因子表达及分泌。
     

Talin1在输卵管妊娠患者的输卵管和绒毛中高表达并促进妊娠滋养细胞的侵袭

目的 验证Talin1在妊娠输卵管组织及输卵管妊娠绒毛中的表达差异及对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响,探讨其作用机制。方法 采用免疫组化及Western blot检测Talin1在妊娠输卵管组织及输卵管妊娠绒毛中的表达定位及蛋白表达差异;HTR-8/SVneo细胞内转染Talin1 siRNA,划痕实验及Transwell实验检测Talin1对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响;qRTPCR及Western blot检测HTR-8/SVneo细胞中MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Snail的表达。结果 正常输卵管组织及妊娠输卵管组织中均可检测到Talin1的阳性表达,主要表达于纤毛细胞的细胞质中;妊娠输卵管组织中Talin1的蛋白表达高于正常输卵管组织（P<0.01）;输卵管妊娠绒毛中Talin1表达高于宫内妊娠绒毛（P<0.01）;沉默Talin1抑制HTR-8/SVneo细胞的侵袭（P<0.01）和迁移（P<0.05）;Talin1下调HTR-8/SVneo细胞中N-cadherin、MMP-2、Snail的表达（P<0.05）,上调MMP-9的表达（P<0.05）。结论 输卵管妊娠患者的输卵管组织及绒毛中Talin1的表达显著升高,输卵管妊娠的发生可能和Talin1调控妊娠滋养细胞的侵袭相关。     

Klotho蛋白在子痫前期患者胎盘外泌体中表达及其对血管内皮细胞氧化应激的影响

目的：探讨Klotho在子痫前期（PE）患者来源的胎盘外泌体（Exo）中的表达,阐明其对血管内皮细胞氧化应激的影响。方法：收集40例孕产妇的临床资料,其中正常妊娠（NP）者20名,PE患者20例,设为NP组和PE组,分离2组研究对象外周血中胎盘Exo。将oe-Klotho和oe-NC质粒转染入人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo中,作为oe-Klotho组和oe-NC组,收集HTR-8/SVneo细胞Exo。采用实时荧光定量PCR (RT-PCR)法和Western blotting法检测2组研究对象胎盘Exo和2组HTR-8/SVneo细胞Exo中Klotho mRNA及蛋白表达水平。取生长状态良好的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,按Exo来源不同将HUVECs分为PE-Exo组（与PE患者胎盘Exo共培养）、NP-Exo组（与NP胎盘Exo共培养）、oe-Klotho-Exo组（与转染oe-Klotho的HTR-8/SVneo细胞Exo共培养）和oe-NC-Exo组（与转染oe-NC的HTR-8/SVneo细胞Exo共培养）。采用透射电子显微镜（TEM）观察Exo形态表现,W...     

血清限制对人滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞胰岛素样生长因子-1表达及细胞侵袭力的影响

目的 探讨血清限制对人滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达及细胞侵袭力的影响.方法 分别以1%、5%及10%胎牛血清(FBS)处理HTR-8/SVneo细胞48 h后,荧光定量PCR检测细胞的IGF-1及MMP-2 mRNA水平,细胞免疫荧光检测细胞IGF-1、MMP-2蛋白表达,MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭力;进一步添加人重组IGF-1处理后,观察HTR-8/SVneo细胞MMP-2表达、细胞增殖及侵袭能力的改变.结果 随着血清浓度降低,细胞增殖能力明显下降(P<0.05);血清限制抑制细胞IGF-1、MMP-2的mRNA及蛋白表达(P<0.05),导致细胞侵袭力下降(P<0.05);补充人重组IGF-1能显著上调HTR-8/SVneo细胞MMP-2表达水平(P<0.05),促进HTR-8/SVneo细胞侵袭(P<0.05).结论 血清限制下调人滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞IGF-1表达,可能通过引起其MMP-2表达降低来介导细胞侵袭力下降;补充人重组IGF-1有助于促进HTR-8/SVneo细胞增殖及侵袭.     

内质网应激介导滋养细胞凋亡在妊娠期肝内胆汁淤积症中的作用及机制

目的探讨内质网应激介导滋养细胞凋亡在妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）中的作用及机制。方法收集2015 年12 月~ 2016年12月在南方医科大学南方医院住院分娩的ICP孕妇20例为病例组,另以同期因社会因素行择期剖宫产术的20例无合 并症的正常孕妇为正常对照组。利用HE染色计量观察正常对照孕妇及ICP孕妇胎盘合体细胞结节数量;RT-PCR法检测正常 孕妇及ICP孕妇胎盘组织中GRP78、CHOP、caspase-3及caspase-7的mRNA表达;建立不同浓度胆酸（0、10、50、100 μmol/L）体 外刺激HTR-8/SVneo人早孕滋养细胞株模型,利用RT-PCR法检测HTR-8/SVneo细胞GRP78、CHOP、caspase-3及caspase-7的 mRNA表达及利用蛋白印迹法检测GRP78、CHOP蛋白的表达;caspase-3、caspase-7活性检测试剂盒分别检测其活化程度;电镜 观察细胞凋亡形态。结果ICP 组较对照组孕妇胎盘组织中合体细胞结节数明显增多（P<0.01）;GRP78、CHOP、caspase-3 及 caspase-7的mRNA表达明显上调（P<0.05）;不同浓度（0、10、50、100 μmol/L）去氧胆酸作用细胞24 h后,GRP78、CHOP、caspase-3 及caspase-7 mRNA的表达水平较对照组显著增高（P<0.05）,GRP78、CHOP蛋白的表达水平较对照组也显著增高,且均存在浓 度依赖效应;50 μmol/L去氧胆酸作用细胞24 h后检测caspase-3及caspase-7活性增高（P<0.05）;50 μmol/L去氧胆酸作用细胞 12 h后电镜观察HTR-8/SVneo细胞呈现凋亡小体。结论ICP孕妇胎盘组织中存在滋养细胞过度凋亡及内质网应激激活的现 象。去氧胆酸可以呈浓度依赖性地促进滋养细胞内质网应激相关基因mRNA和蛋白的表达,引起细胞凋亡,提示内质网应激介 导的滋养细胞凋亡在ICP的发病机制中可能起着重要的作用。     

软脂酸增加血管内皮细胞Toll样受体4表达及活化TLR4炎症信号通路

目的研究饱和脂肪酸软脂酸对血管内皮细胞Toll样受体4（TLR4）表达及信号转导的影响。方法采用软脂酸处理猪髋
动脉内皮细胞（PIECs）,实时荧光定量PCR检测PIECs TLR4 mRNA表达,蛋白印迹法检测PIECs TLR4及IκBα蛋白表达,流式
细胞仪检测PIECs细胞表面TLR4蛋白水平,酶联免疫吸附测定法检测细胞培养液TNF-α及IL-6水平。结果与对照组比较,
软脂酸组PIECs TLR4 mRNA及蛋白表达显著升高（TLR4 mRNA：4.73±0.61 vs 1.25±0.90,P<0.05;TLR4 蛋白：5.79±0.05 vs
4.07±0.31,P<0.05）,PIECs细胞表面TLR4蛋白水平显著增加（38.070±3.907 vs 29.390±1.072,P<0.05）;软脂酸组PIECs IκBα蛋
白表达显著降低（2.04±0.22 vs 3.98±0.18,P<0.05）,细胞培养液TNF-α及IL-6水平显著升高（TNF-α：2.52±0.30 vs 1.38±0.26,P<
0.05;IL-6：3.28±0.32 vs 1.44±0.28,P<0.05）。结论软脂酸在诱导血管内皮细胞TLR4表达的同时活化TLR4炎症信号通路。
     

草甘膦对小鼠睾丸支持细胞凋亡及雄激素结合蛋白、波形蛋白mRNA表达的影响

目的探讨不同剂量草甘膦（GLY）对小鼠睾丸支持细胞（sertoli细胞）凋亡及细胞存活率的影响,同时观察雄激素结合蛋白
（ABP）及波形蛋白mRNA表达的变化。方法体外原代培养小鼠sertoli细胞,收集细胞并分为正常对照组和不同剂量草甘膦
组,草甘膦的浓度分别为60、90、120、150和180 mg/L;各组细胞培养24 h后,倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态改变;MTT
法检测细胞存活率;Hoechst 33342检测细胞凋亡情况;RT-PCR检测草甘膦对ABP及波形蛋白mRNA表达情况。结果在不同
浓度草甘膦作用下,sertoli细胞出现不同程度缩小、脱落、甚至破碎;细胞的增值率明显低于对照组（P<0.01）;细胞凋亡指数明显
高于对照组（P<0.05）;细胞ABP mRNA和波形蛋白mRNA 表达与对照组相比均减弱（P<0.05）。结论草甘膦对小鼠sertoli细
胞有一定的毒性,能诱导细胞凋亡及抑制细胞增殖,且随草甘膦剂量的增加,有害作用有增加的趋势;同时能抑制ABP和波形蛋
白mRNA的表达。
     

DNA-PKcs协同自身免疫调节因子调控小鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体的表达及其意义

目的：探讨小鼠腹腔巨噬细胞内DNA-PKcs协同自身免疫调节因子调控Toll样受体(TLRs)的表达水平,阐明外周免疫系统中自身免疫调节因子的调控作用及其意义。方法：小鼠腹腔巨噬细胞分为pEGFPC1/mAire转染组、pEGFPC1/mAire与negative control siRNA共转染组、pEGFPC1/mAire与DNA-PKcs siRNA共转染组、pEGFPC1转染组、pEGFPC1与negative control siRNA共转染组和pEGFPC1与DNA-PKcs siRNA共转染组,采用RT-PCR方法检测各组小鼠腹腔巨噬细胞内TLR1～9的表达水平;采用脂质体转染重组质粒pEGFPC1/mAire和空载质粒pEGFPC1至小鼠腹腔巨噬细胞,采用RT-qPCR方法检测2组细胞TLR1～9的表达水平;采用RT-qPCR方法检测2组转染细胞沉默DNA-PKcs前后TLRs的表达水平。结果：小鼠腹腔巨噬细胞能表达TLR1～9;与转染pEGFPC1/mAire组细胞比较,转染自身免疫调节因子后巨噬细胞TLR1、3和8的表达水平增加（P<0.05）,其他组TLRs表达水平无明显变化（P>0.05）;DNA-PKcs沉默后,转染pEGFPC1/mAire组细胞TLR1、3和8的表达水平较未沉默组明显下降（P<0.05）,而在转染pEGFPC1的细胞内DNA-PKcs沉默前后TLR1-9表达水平均无明显变化（P>0.05）。结论：在小鼠腹腔巨噬细胞内,自身免疫调节因子能够调控TLR1、3和8的表达,其机制可能与DNA-PKcs协同作用有关。
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Toll样受体7在人胃癌细胞株中的表达及其激动剂诱导SGC-7901细胞发生凋亡的实验研究

目的探讨Toll 样受体7（TLR7）在不同人胃癌细胞株中的表达及其激动剂咪喹莫特对SGC-7901 细胞增殖和凋亡的影
响。方法Western blot法检测3种胃癌细胞株（SGC-7901、HGC-27和MKN-28）中TLR7蛋白表达差异,选取高表达TLR7的胃
癌细胞作为主要研究对象;MTT法考察不同浓度咪喹莫特处理TLR7高表达胃癌细胞12~72 h后细胞增殖活性的改变;流式细
胞仪AnnexinV-FITC/PI双染色法观察100 μg/ml咪喹莫特干预12及24 h后细胞早期凋亡比率的改变;透射电镜下观察细胞凋
亡形态学改变;实时定量PCR法分析Bcl-2及Bax mRNA在咪喹莫特作用前后表达差异。结果TLR7蛋白在SGC-7901中表
达水平高于其他两种胃癌细胞,其激动剂咪喹莫特能够明显抑制SGC-7901细胞增殖并且呈现出浓度及时间依赖性;100 μg/ml
咪喹莫特干预24 h 后SGC-7901 细胞早期凋亡比率明显上升,透射电镜下可观察到典型的凋亡形态学改变;咪喹莫特处理后
SGC-7901细胞Bcl-2 mRNA表达呈浓度依赖性下降,Bax mRNA呈浓度依赖性上升。结论TLR7在3种不同分化程度的胃癌
细胞中均有表达,其激动剂咪喹莫特能够明显抑制SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡。
     

维生素D通过下调miR-21的表达促进人胎盘滋养细胞的迁移和侵袭

目的探讨维生素D对microRNA-21表达的调控作用以及对人胎盘滋养细胞迁移、侵袭能力的影响。方法不同剂量维生 素D刺激HTR-8/SVneo细胞24、48、72 h后,RT-qPCR 检测microRNA-21表达情况;将miR-21 mimic、miR-21 mimic-nc、miR- 21 inhibitor和miR-21 inhibitor-nc分别转染至HTR-8/SVneo细胞,或将miR-21 mimic、miR-21 inhibitor联合维生素D共同刺激 细胞,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,western blot 检测E-cadherin、Fibronectin、MMP9的蛋白表达水平。结果维 生素D刺激HTR-8/SVneo细胞后抑制了micoRNA-21的表达,且抑制作用呈浓度-时间依赖性增强。单独转染miR-21 mimic抑 制HTR-8/SVneo细胞的迁移、侵袭能力,E-cadherin表达水平增加,Fibronectin、MMP9表达水平降低;联合维生素D共同刺激细 胞则可以减弱该作用。单独转染miR-21 inhibitor 促进了HTR-8/SVneo 细胞的迁移、侵袭能力,E-cadherin 表达水平降低, Fibronectin、MMP9表达水平增加;联合维生素D共同作用与单细胞独转染miR-21 inhibitor相比,细胞迁移、侵袭能力以及蛋白 水平无明显改变。结论维生素D可能通过下调microRNA-21的表达来影响子痫前期发生发展。     

Toll样受体在人眼角膜上皮和永生化人角膜上皮细胞系的表达及功能研究

目的探讨Toll样受体（TLR）1—9在人眼角膜上皮和上皮细胞系的表达及其功能性。方法以健康人外周血单个核细胞（PBMC）为阳性对照,收集20例健康青年人角膜上皮标本和培养永生化人角膜上皮细胞系（THCE）细胞,用半定量反转录聚合酶链反应检测TLR1～9mRNA表达;Western印迹检测TLR2、4的蛋白质表达;TLR3和TLR4的配体对THCE刺激后酶联免疫检测分泌IL-8的变化,结合抗体封闭实验,研究角膜上皮TLR的功能性。结果与PBMC比较,人角膜上皮强表达TLR1、2、3、5、6、9,弱表达TLR8,微弱表达TLR4;20例角膜上皮标本中发现1例TLR3、4、6、8阴性表达,1例TLR5微弱表达;人角膜上皮在蛋白质水平表达TLR2、4;THCE细胞与人角膜上皮有相似的TLR表达谱;LPS和PolyI：C刺激THCE1、4、8h后IL-8分泌增加,8h时分别达到对照组的10倍和7倍（均P〈0．05）,抗体封闭TLR4可以阻断LPS诱导的IL-8分泌。结论人角膜上皮表达TLR1—9,但不同TLRs表达水平有差异。THCE是研究人角膜上皮TLR表达和功能的良好细胞系。     

肝细胞生长因子对滋养细胞HLX1基因的表达及侵袭能力的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对胎盘滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞HLX1基因的表达及侵袭能力的影响.方法 常规体外培养HTR-8/SVneo细胞,用不同浓度HGF(0、10、20、50、100ng/mL)处理细胞48h.设0浓度组为对照组;用HLX1 siRNA转染细胞24h后继续以20 ng/mL HGF刺激48h,分空白对照组(MC)、siRNA+HGF组、MC+HGF 3个实验组;应用实时荧光定量RT-PCR和蛋白印迹法测定各组细胞中HLX1 mRNA和蛋白的表达;明胶酶谱测定上清中MMP-2的表达;Matrigel侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力.结果 ① HGF处理组细胞HLX1 mRNA表达水平与对照组比较上调了90%～475%(P<0.01),且与HGF呈剂量依赖性;20ng/mL HGF使HLX1蛋白表达水平上调(156.7±6.4)%,P<0.01;② siRNA+HGF组与MC组比较.细胞HLX1 mRNA和蛋白的表达水平分别下降(54.57±0.31)%及(68.44±2.48)%,P<0.01;③ 20ng/mL HGF处理组细胞其上清MMP-2表达水平与对照组比较上调(394.6±2.9)%,P<0.01;siRNA+HGF组与MC组比较MMP-2表达水平下降(81.5±0.6)%,P<0.01;④ 20ng/mL HGF处理的HTR-8/SVneo细胞穿过Matrigel的细胞数为(71±5)个,与对照组(50±3)个比较侵袭能力明显增强(P<0.01);siRNA+HGF组穿膜细胞数明显减少为(20±4)个,MC组为(43±3)个,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 HGF可提高HTR-8/SVneo细胞HLX1基因的表达及细胞的侵袭力,且侵袭力的增加可能与HLX1表达水平升高有关.     

C型凝集素样受体CLEC-2在人滋养细胞系HTR-8/SVneo的表达与调控

目的研究C型凝集素样受体CLEC-2在人早孕期母胎界面滋养细胞的表达及调控。方法应用免疫细胞化学法和Western blot法检测人滋养细胞系HTR-8/SVneo中CLEC-2的表达;并观察不同浓度人绒毛膜促性腺激素（hCG）、孕激素及雌激素对其表达CLEC-2的影响。结果 HTR-8/SVneo显著表达CLEC-2。与对照组相比,2.5和5.0kU/LhCG处理组CLEC-2的表达上调;相反,经0～10-7mol/L浓度雌激素处理后,HTR-8/SVneo中CLEC-2的表达呈剂量依赖性降低;孕激素不影响CLEC-2的表达。结论 HTR-8/SVneo表达CLEC-2受hCG升调节、雌激素降调节;CLEC-2可能参与调节人早孕期滋养细胞的生物学行为,进而参与正常妊娠的维持。     

HADHA通过调节PI3K/AKT信号通路抑制人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo迁移与侵袭

  目的  探讨羟酰基辅酶A脱氢酶α亚基（hydroxyacyl-CoA dehydrogenase alpha subunit, HADHA）对人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo迁移和侵袭能力的影响及其潜在作用机制。  方法  通过组织免疫荧光染色检测HADHA在6～8周正常早孕绒毛及复发性自然流产绒毛样本中表达水平的差异;慢病毒系统构建HADHA过表达及敲低稳转HTR-8/SVneo细胞系,并采用qRT-PCR、Western blot、Transwell、细胞划痕实验评价HADHA对HTR-8/SVneo细胞迁移侵袭能力和相关基因表达的影响;转录组测序及生物信息学分析筛选HADHA可能调控的靶基因及信号通路;加入蛋白激酶B（protein kinase B, AKT）抑制剂明确HADHA调节HTR-8/SVneo细胞迁移侵袭的具体分子机制。  结果  HADHA在复发性自然流产样本的绒毛外滋养层（extravillous trophoblast, EVT）中较正常对照组中高表达。过表达HADHA的HTR-8/SVneo细胞中迁移侵袭相关基因HLA-G、MMP2、MMP9、NCAD的表达水平降低（P<0.01,P<0.05）,且迁移和侵袭能力减弱（P<0.05）;敲低HADHA后,基因HLA-G、MMP2、MMP9、NCAD的表达水平增高（P<0.01,P<0.05）,且迁移和侵袭能力增强（P<0.05）。此外,过表达HADHA后p-PI3K、p-AKT水平降低（P<0.05）,PI3K/AKT信号通路被抑制;敲低HADHA后PI3K/AKT信号通路被激活。在HADHA敲低稳转细胞系中加入AKT抑制剂MK-2206后,细胞迁移侵袭能力较对照敲低组减弱（P<0.01,P<0.05）。  结论  HADHA通过抑制PI3K/AKT信号通路抑制HTR-8/SVneo细胞的迁移与侵袭。     

Toll样受体在不同转移能力人乳腺癌细胞株中的差异表达及意义研究

目的探讨Toll样受体在不同转移能力人乳腺癌细胞株中的差异表达及意义。方法分别选取高转移能力人乳腺癌细胞株MDA-MB231与低转移能力人乳腺癌细胞株MCF-7,采用RT-PCR、实时荧光定量PCR及细胞免疫荧光检测测定其蛋白水平及TLR1-TLR10mRNA水平,比较两株细胞TLRs表达情况及差异性。结果人乳腺癌细胞株MCF-7mRNA、MDA-MB-231 mRNA、蛋白水平均存在TLRs广泛表达;两种细胞株TLR4、TLR6、TLR8及TLR9 m RNA水平表达存在明显的差异性(P0.05);MDA-MB-231的TLR4、TLR6、TLR7及TLR5水平明显高于MCF-7(P0.05)。结论 TLRs在不同转移能力人乳腺癌细胞株中表达广泛但水平存在差异,其中TLR4受体差异表现最为明显,考虑TLRs表达差异与乳腺癌细胞转移能力相关。     

ALKBH5通过抑制上皮-间质转化降低人滋养细胞的迁移和侵袭能力

目的 探讨去甲基酶ALKBH5对滋养细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭功能及对上皮-间质转化（EMT）过程的影响。方法 将ALKBH5高表达、抑制及其阴性对照NC质粒转染人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及Westen boltting（WB）实验检测各组细胞中ALKBH5 mRNA及ALKBH5蛋白的表达水平。并通过Transwell实验检测转染后滋养细胞迁移、侵袭功能变化,同时通过 WB 实验检测各组细胞中上皮-间质转化（EMT）相关蛋白：Vimentin、Fibronectin、E-cadherin、N-cadherin、MMP9及MMP2的表达水平。结果 ALKBH5组与未转染组（Control）和无意义序列组（NC）相比,ALKBH5 mRNA及蛋白高表达效果显著（P<0.05）;shALKBH5组与未转染组（Control）和无意义序列组（NC）相比,ALKBH5 mRNA及蛋白抑制效果显著（P<0.05）。ALKBH5高表达后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能降低（P<0.05）,EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达上调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达下调,差异有统计学意义（P<0.05）。ALKBH5表达抑制后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能增强（P<0.05）,EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达下调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达上调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 ALKBH5通过抑制EMT过程降低滋养细胞迁移、侵袭能力,从而参与子痫前期的发病机制。     

化瘀消癥颗粒调控Talin1抑制人绒毛膜滋养层细胞侵袭迁移的研究

目的 研究化瘀消癥颗粒含药血清对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo增殖、侵袭和迁移的影响,并探讨其作用机制.方法 制备化瘀消癥颗粒含药血清,CCK8实验检测不同浓度化瘀消癥颗粒含药血清对HTR-8/SVneo细胞增殖的影响并筛选后续实验药物浓度,划痕实验、Transwell实验检测化瘀消癥颗粒含药血清对HTR-8...