气道平滑肌细胞增殖的分子机制研究进展

哮喘患者气道可出现上皮损伤、胶原沉积、基膜增厚及气道平滑肌增生等气道重构表现,气道重构是哮喘重要的病理特征,其严重程度与哮喘的严重程度密切相关,其中气道平滑肌细胞(ASMCs)是气道的关键结构和效应细胞,在哮喘中起重要作用。ASMCs通过收缩或舒张气道调节气流,并在生长因子、细胞因子、炎症介质以及酶等多种因素的作用下过度增殖,参与气道重构,从而加重哮喘。造成ASMCs增殖的相关分子机制有多种,主要包括钙离子通道途径、促分裂原活化蛋白激酶途径及氧化应激途径等。     

血管平滑肌细胞增殖调控机制研究进展

血管平滑肌细胞(VSMC)位于血管中膜，是血管中层唯一的细胞成分。生理条件下，血管平滑肌细胞通过收缩和舒张调节血管张力，通过分泌和释放血管调节因子维持血管正常功能。VSMC由中膜迁移到内膜下间隙并异常增殖是动脉粥样硬化、高血压和血管再狭窄等疾病共同的细胞病理基础之一。心血管疾病的危险因素损伤血管内皮功能而导致一些     

二苯乙烯苷抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的机制研究

目的 建立PDGF-BB诱导的原代大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary vascular smooth muscle cells,PASMCs)增殖的细胞模型,并探讨二苯乙烯苷(2,3,5,4-tetrahydroxyl diphenylethylene-2-o-glucoside,TSG)对PASMCs增殖的影响及其机制,为肺血管重构防治寻找新药物。方法 采用酶消化法分离培养大鼠原代PASMCs,通过20ng/ml PDGF-BB诱导PASMCs增殖建立细胞模型,采用1~100μmol/L TSG干预PDGF-BB诱导的PASMCs增殖,通过CCK-8检测PASMCs增殖及TSG的细胞毒作用,BRDU检测DNA的合成,流式细胞仪分析细胞周期,实时定量PCR(RT-PCR)检测CyclinD1、CyclinE、CDK2/4/6 mRNA的表达,Western blot法检测总的和磷酸化AKT/GSK3β的表达。结果 CCK-8检测结果表明TSG抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖及DNA合成具有浓度依赖性,并且实验浓度的TSG对PASMCs无明显毒性不良反应;流式细胞仪分析结果表明TSG能够阻滞细胞周期于G₀/G₁~S期,RT-PCR结果表明TSG能够抑制CyclinD1、CyclinE、CDK2/4/6 mRNA的表达;Western blot法检测结果表明TSG能够抑制AKT/GSK3β活化。结论 TSG通过阻滞细胞周期于G₀/G₁~S抑制PDGF-BB诱导的PASMCs增殖。TSG抑制PASMCs增殖与抑制AKT/GSK3β信号通路的活化有关。     

AG490及5-Aza对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响及分子机制

目的 探讨JAK2/STAT3通路抑制剂AG490及DNA甲基化抑制剂5-Aza对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响及意义.方法 采用CCK8检测不同浓度AG490及5-Aza对PDGF-BB诱导PASMCs增殖的影响;将细胞分为对照组(正常的PASMCs)、...     

舒马曲坦诱发大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖作用及机制

目的:研究舒马曲坦诱发大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的作用及其细胞内信号转导通路机制。方法:应用细胞培养、基因转染等方法,通过MTT及流式细胞仪等检测舒马曲坦及ERK1/2的反义寡核苷酸对肺动脉平滑肌细胞增殖及细胞周期的影响。结果:舒马曲坦明显促进肺动脉平滑肌细胞的增殖。脂质体成功介导了寡核苷酸在肺动脉平滑肌细胞的转染。反义寡核苷酸明显抑制舒马曲坦诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖,增殖率由(164.67±6.67)%降至(76.67±10.17)%,SPF指数由(11.67±0.33)%降至(3.33±0.33)%,增殖指数由(27.33±0.33)%降至(22.00±0.58)%(P均<0.01),正义和随机寡核苷酸对舒马曲坦诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖则无抑制作用。结论:舒马曲坦通过5-HT1B受体促进大鼠肺动脉平滑肌细胞的有丝分裂,其细胞内信号转导途径为ERK1/2 MAPK通路。     

中药抑制血管平滑肌细胞增殖机制的研究进展

综述了单味中药提取物及中药复方抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的机制。认为中药抑制VSMC增殖主要通过以下途径:影响血管活性物质,影响细胞因子,调控细胞增殖基因,调控细胞基质代谢及影响脂质过氧化过程。指出研究中药抑制VSMC增殖的机制对于指导临床从细胞因子、基因调控及信号传导途径多方面、多靶点联合用药,以更有效地抑制 VSMC增生,防治冠心病介入术后再狭窄的发生有重大的意义。     

五羟色胺诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的作用与机制研究

目的 主要研究五羟色胺(5-HT)诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的作用与机制.方法 组织块法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMC),细胞增殖试验检测5-HT对PASMC的作用,流式细胞仪检测细胞周期,免疫组化试验检测PCNA表达.结果 5-HT诱导大鼠PASMC增殖试验证实在5-HT 10-9～10-5mol/L的剂量范围内,大鼠PASMC的促增殖作用对其具有剂量依赖性.流式细胞仪结果证实PASMC可由G1期向S期转化,免疫组化法证实5-HT可促进PASMC中PCNA的表达.结论 5-HT可促进PCNA的表达,进而加速PASMC由G1期向S期转化,达到促PASMC增殖的作用.     

血府逐瘀汤对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨血府逐瘀汤防治肺心病的作用机理。方法：观察缺氧对肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖的影响；用血府逐瘀汤进行药物干预对PASMC增殖的影响。结果：缺氧能够促进PASMC增殖（P＜0．05）；血瘀逐瘀汤能显著抑制缺氧条件下PASMC增殖，高、中、低剂量组与空白对照组比较分别为P＜0．05－0．01。结论：血府逐瘀汤能抑制缺氧条件下PASMC增殖，可能是血府逐瘀汤防治肺心病的作用机理。     

细胞外信号调节激酶1／2在慢性低氧肺动脉高压肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用研究进展

肺动脉高压是一种高发病率和病死率的疾病,其病因复杂,可由多种心、肺或肺血管疾病等引起,共同表现为肺血管阻力增加、右心负荷增大,最终导致右心衰竭,严重影响人体健康。肺动脉平滑肌细胞的肥大和增生导致的肺动脉壁增厚是肺动脉高压的病理特征。许多研究表明,低氧引起平滑肌细胞增殖与细胞外信号调节激酶1／2（EPK1／2）激活有关。该文主要就（EPK1／2）在慢性低氧肺动脉高压肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用研究进展予以综述。     

红景天甙对兔肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制

０引言目前，认为缺氧性肺动脉高压形成的主要因素有缺氧性肺动脉血管收缩和缺氧性肺动脉壁构型重建．而在这两者中，肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移起着重要作用．植物红景天被认为具有抗缺氧、提高机体在高原劳动能力等作用［１］，在我国西北、西南高原缺氧地区被用于防治高原适应不全症，并取得满意效果，但对其作用机理尚缺乏研究．本试验应用四唑盐比色试验、３Ｈ—ＴｄＲ参入试验技术研究红景天甙对培养的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）增殖和ＤＮＡ合成的影响，探讨其在防治肺动脉高压中的可能作用机制。１方法１．１实验动物纯种１…     

低氧刺激复合培养的平滑肌细胞表达Janus激酶

目的：研究低氧对复合培养的平滑肌细胞中Janus激酶（JAK）基因表达的作用。方法：鼠肺微血管内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞复合培养，采用半定量RT－PCR技术检测常氧组、低氧2、6、12h组的JAK1、JAK2和JAK3基因的表达水平，并对PCR产物进行测序。结果：低氧复合培养2h组肺动脉平滑肌细胞中JAK1、JAK2、JAK3 mRNA表达水平升高，在低氧6h组达最高，与正常组比较均有明显差别。低氧12h组的表达量低于6h组，但高于正常组。RT－PCR产物直接测序证实扩增产物片断与Genebank中相应序列相同。结论：低氧增强复合培养的肺动脉平滑肌细胞中JAK基因的表达，而JAK基因在低氧所致的肺动脉收缩和低氧肺动脉高压的信号转导中可能发挥重要作用。     

低氧对复合培养的平滑肌细胞中白细胞介素-6表达的影响

目的：研究低氧对复合培养的平滑肌细胞中白细胞介素6（IL－6）表达的影响。方法：低氧处理与肺微血管内皮细胞复合培养的鼠肺动脉平滑肌细胞，采用RT－PCR方法检测常氧组、低氧2、6、12h组IL－6基因的表达水平，并测定细胞培养上清中IL－6的活性。结果：低氧复合培养2h组肺动脉平滑肌细胞中IL－6　mRNA表达水平升高，在低氧6h组达最高，低氧12h组有所降低，但与常氧组比较有明显差别。低氧复合培养2h组肺动脉平滑肌细胞上清中IL－6的活性明显升高，6h组细胞上清中IL－6的活性水平最高，12h组的活性降低，24h组的水平低于2h组。IL－6活性水平与其基因表达的水平一致。结论：低氧可以增强复合培养的肺动脉平滑肌细胞中IL－6基因的表达，使细胞培养上清中IL－6活性升高，进有可能激活其它一些信号转导相关基因调节细胞的低氧反应。     

白藜芦醇对过氧化氢诱导人动脉平滑肌细胞的影响及其机制

目的：探讨白藜芦醇（Res）对过氧化氢（H2O2）诱导的人动脉平滑肌细胞的影响及其可能机制。方法：在人动脉平滑肌细胞中加入不同浓度（20、100、500umol／L）H2O2处理24h,建立动脉平滑肌细胞氧化损伤模型。不同终浓度（2、10、50umol／L）的Res单纯作用或分别与100umol／LH202共同作用于动脉平滑肌细胞24h。应用MTT比色法检测细胞存活率,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SODl的活力,硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛（MDA）含量,2,7-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH—DA）染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧簇（ROS）水平,流式细胞术检测细胞凋亡百分率。结果：20、100、500umol／LH2O2处理人动脉平滑肌细胞24h后,动脉平滑肌细胞存活率和培养基上清液SOD活力均呈剂量依赖性地下降,细胞蛋白裂解液MDA含量活性则呈剂量依赖性地升高（P〈0．05）。2、10和50txmol／LRes与100umol／LH2O2共同作用动脉平滑肌细胞24h后,可呈剂量依赖性地抑制H2O2诱导的细胞存活率、SOD活力的下降以及MDA含量的升高,其中10和50umol／LRes＋100umol／LH202处理组与100umol／LH2O2模型组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。10和50umol／LRes＋100Ixmol／LH202处理组DCF荧光强度均显著低于100txmol／LH2O2模型组（P均〈0．05）。10和50btmol／LRes＋100umol／LH2O2处理组人动脉平滑肌细胞的凋亡率分别为（20．7±3．0）％和（13．2±1．5）％,均显著低于100umol／LH2O2模型组的（27．2±3．6）％（均P〈0．05）。结论：Res可对抗H2O2诱导的动脉平滑肌细胞氧化损伤,其机制可能与其减少ROS生成以及降低动脉平滑肌细胞凋亡率有关。     

二十二碳六烯酸对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:观察二十二碳六烯酸(DHA)在动物整体水平的抗大鼠肺动脉高压作用及其对肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为常氧组、低氧组、低氧DHA处理组,每组7只。大鼠缺氧肺动脉高压模型采用慢性间歇性低氧方法建立,通过右心导管法测定大鼠平均肺动脉压,精确称左右心室质量计算右心室指数,测定肺动脉平滑肌细胞凋亡率和Caspase3、Caspase9活性。结果:与常氧组比较,低氧组大鼠平均肺动脉压和右心室指数均明显升高(PPPP结论:DHA具有抗大鼠肺动脉高压作用,其机制与促进肺动脉平滑肌细胞凋亡有关。     

缺氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞Akt mRNA表达的变化

目的通过观察缺氧致大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMC）3种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶（Akt1、Akt2、AkG）mRNA的表达水平变化,初步探讨Akt信号途径在缺氧肺动脉高压（hypoxia pulmonary hypertension,HPH）血管重建中的作用。方法组织贴片法建立纯PASMC细胞系。采用半定量RT-PCR技术检测常氧组（N组）、低氧2、8、12、24组的Akt1、Akt2和AkG基因mRNA的表达水平。结果建立了纯PASMC细胞系。各组均检测出Akt1、Akt2和AkG基因的mRNA,图像定量分析光值显示各组表达的mRNA含量与缺氧时限存在一定的关系。结论Akt信号通路可能是大鼠缺氧肺动脉高压中PASMC增殖和分化的重要传导途径,其中Akt1可能起主要作用。     

Rho激酶在缺氧性肺动脉平滑肌细胞中的表达

目的：探讨缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖及其中Rho激酶表达的影响。方法：分别在常氧和缺氧12、24和48h条件下体外培养大鼠PASMC，应用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况，流式细胞术测定细胞周期，同时用蛋白印迹杂交（Western blot）检测Rho激酶的表达情况。结果：PASMC比色吸光度A值缺氧12h增大，24h最高，48h下降但仍高于常氧对照组；流式细胞术分析细胞周期，G2／M期细胞缺氧组均显著高于常氧组；Western blot结果分析各缺氧组Rho激酶表达明显高于常氧组。结论：缺氧诱导PASMC增殖，促使细胞进入有丝分裂期，同时，Rho激酶表达的增强可能是缺氧诱导PASMC增殖的重要机制之一。     

红景天甙抑制兔缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖的作用

目的　观察红景天甙 (salidroside,Sal)对缺氧状态下兔肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)增殖、DNA合成和细胞周期的影响 ,并初步探讨其作用机制 .方法　应用离体培养的PASMC,采用四唑盐 (MTT)比色法实验、3H-胸腺嘧啶核苷(3H- Td R)参入和流式细胞仪技术 ,观察 PASMC的增殖、DNA合成和细胞周期的变化 .结果　缺氧 2 4h可直接刺激PASMC,使其3H- Td R的参入量显著增加 (P<0 .0 1 ) ,MTT吸光度 (A)增加 (P<0 .0 5 ) ;钙通道阻滞剂 verapamil可抑制缺氧的这种刺激作用 ;流式细胞仪分析显示缺氧 2 4h PASMC的 G2 /M期细胞比例与常氧对照组相比明显增加 (P<0 .0 1 ) ,G0 /G1 期细胞比例明显减少 ;在缺氧的 PASMC培养液中加入 Sal(0 .2～ 3.2 μmol· L- 1 ) ,PASMC的 3H- Td R参入量与 MTT的 A值与单纯缺氧组相比显著下降 ,Sal(6 .4μmol· L- 1 )可增加 G0 /G1 期细胞比例 ,减少 G2 /M期细胞比例 (P<0 .0 5 ) ;缺氧状态下 ,Sal与 verapamil合用并不增加对PASMC的抑制效应 .结论　缺氧可直接刺激 PASMC的增殖及 DNA合成 ,其作用机制可能与 PASMC内 Ca2 浓度增加有关 ,Sal可抑制缺氧对 PASMC的增殖及 DNA合成的促进作用     

不同方法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞的差异

目的比较酶消化法、组织贴块法所培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cell,PASMC)的生长曲线、蛋白质含量、胞内[Ca2 ]含量上的差异性,探讨不同方法是否可以用于同一系列的信号通路研究.方法酶消化法、组织贴块法分别培养PASMC,经过纯化以及免疫组化鉴定后,采用改良Lowry法测定蛋白质含量,采用荧光指示剂法测定胞内[Ca2 ]含量,光镜下观察生长曲线.结果两种方法均顺利建立了纯PASMC系,但是在生长曲线和蛋白质含量上存在一定程度的差异,在胞内[Ca2 ]含量上差异有显著性意义(P＜0.05).结论在同一系列的信号通路研究中应该尽量采用其中一种细胞培养方法.     

复合培养对低氧时肺动脉平滑肌细胞表达细胞因子的调节

目的 研究低氧对肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)白细胞介素-1β、4、10、13(IL-1β、4、10、13)活性的影响,及复合培养下肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs)对其调控作用.方法 大鼠PASMCs单独培养或与PMVECs复合培养,分为正常组、低氧作用2 h(H2)、6h(H6)、12 h(H12)、24 h(H24)组,采用ELISA法测定各组培养细胞上清中IL-1β、IL-4、IL-10、IL-13的活性.结果 低氧刺激后PASMCs的IL-1β、IL-4、IL-10、IL-13活性2 h开始升高,6 h达高峰,12 h降低;各时相点复合培养组均低于对应的单独培养组(P＜0.01).结论 低氧可以激活PASMCs的IL-113、IL-4、IL-10、IL-13活性,在复合培养条件下,PMVECs对此效应具有下调性影响.