氯喹在小鼠肝脏热缺血-再灌注损伤中的保护作用

目的:研究氯喹对小鼠肝脏热缺血-再灌注损伤的保护作用,并探讨相关机制。方法:Balb/c小鼠建立肝脏部分热缺血-再灌注模型。氯喹组给予氯喹预处理,对照组给予等体积生理盐水。肝脏再灌注1、6、24 h后检测血清谷氨酸转氨酶(ALT)水平,HE染色检测肝脏病理学变化,荧光定量PCR检测炎症因子TNF-α和IL-6 m RNA水平,Western印迹检测肝脏TLR4及HMGB1表达。结果 :与对照组相比,氯喹组再灌注1、6、24 h血清ALT显著下降(P<0.05);肝细胞变性坏死、炎性细胞浸润显著减轻(P<0.01);血清TNF-α、IL-6含量显著降低(P     

霉酚酸酯对IgA肾病患者血清和尿液TGF-β1表达的影响

目的 探讨IgA肾病(IgAN)患者血清、尿液TGF-β1表达以及霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)对其表达的影响,揭示MMF治疗IgAN可能的机制.方法 用ELISA法检测健康对照组19例(Ⅰ组)、与MMF组匹配初诊未治疗IgAN 39例(Ⅱ组)、MMF治疗组48例(Ⅲ组)血清、尿液TGF-β1的水平,并比较各组表达差异性.结果 血清中TGF-β1的表达,Ⅱ组较Ⅰ组表达增加(P＜0.05);Ⅲ组较Ⅱ组表达下降(P ＜0.0001).尿液中TGF-β1的表达,Ⅱ组、Ⅲ组均较Ⅰ组表达增加(P＜0.05);Ⅲ组较Ⅱ组表达下降(P＜0.05).IgAN患者血清TGF-β1的表达与病理级别、尿蛋白排泄呈正相关(P=0.044、0.001),尿液TGF-β1的表达与GFR呈负相关(P=0.012),与病理级别、血肌酐、尿蛋白排泄呈正相关(P=0.01、0.013、＜0.0001).血清TGF-β1与尿液TGF-β1的表达呈正相关(P=0.001).IgAN LEE分级≤3级与＞3级的患者相比,后者血清、尿液TGF-β1表达增加,差别有统计学意义(P =0.049,0.028).MMF治疗组疗程3～6个月与≥6个月的患者相比,后者血清、尿液TGF-β1表达下降,差别有统计学意义(P=0.001,0.026).结论 IgAN患者血清、尿液TGF-β1表达显著增加,并且其表达水平与肾功能进展及严重程度等密切相关,MMF可显著下调IgAN患者血清、尿液中TGF-β1表达.因此,血清、尿液TGF-β1可作为预测IgAN疾病进展及评估MMF疗效的重要指标.     

TGF-β1及FN在狼疮样小鼠肾组织中的表达及霉酚酸酯的干预作用

目的：研究TGF-β1及FN在狼疮样小鼠肾组织中的表达及霉酚酸酯（MMF）的干预作用。方法：建立cGVHD狼疮样小鼠模型。按随机设计原则将模型动物分两组即模型组和MMF治疗组,另设正常对照组。检测各组小鼠血肌酐、尿素氮及尿蛋白的变化,用HE染色观察肾组织纤维化程度,以Real-time PCR检测各组小鼠肾组织中TGF-β1及FN的mRNA丰度,并用Western blotting方法检测各组小鼠肾组织中TGF-β1及FN的蛋白表达情况。结果：12周模型组的小鼠肾小球系膜节段、弥漫性增生,且血肌酐、尿素氮及尿蛋白较正常对照组均明显增加,Real-timePCR及Western blotting结果证实模型组小鼠的肾组织中TGF-β1及FN的mRNA和蛋白表达水平与正常组相比水平均明显增加,而MMF治疗组与模型组相比其TGF-β1及FN的mRNA和蛋白表达均降低,且血肌酐、尿素氮及尿蛋白水平也有所降低。结论：TGF-β1可能参与了狼疮肾炎的发病,MMF可能通过抑制肾组织TGF-β1的表达来改善狼疮肾炎的增生病变。     

丙泊酚对大鼠肝脏缺血-再灌注内皮素-1和肝功能的影响

目的 探讨丙泊酚对肝脏缺血-再灌注损伤中内皮素-1(ET-1及肝功能的影响.方法 SD大鼠72只,体重280～300 g,随机均分为三组:缺血-再灌注组(Ⅰ组)、丙泊酚保护组(Ⅱ组)、对照组(Ⅲ组).在肝脏缺血-再灌注前(T1)、再灌注后2 h(T2)、4 h(T3)时检测血浆和肝组织中ET-1、谷丙转氨酶(ALT)及肝脏组织病理学变化.结果 T2、T3时Ⅰ、Ⅱ组血浆、肝组织中ET-1水平明显高于Ⅲ组(P＜0.05),而Ⅱ组明显低于Ⅰ组(P＜0.05).T2、T3时Ⅰ、Ⅱ组血浆、肝组织中ET-1水平、血浆ALT明显高于T1时,而Ⅰ组T3时高于T2时(P＜0.05).结论 ET-1参与了肝脏缺血再灌注损伤,丙泊酚具有抑制ET-1分泌及保护肝功能的作用.     

TGF-β1转基因对大鼠心脏移植物缺血-再灌注损伤的影响

目的 观察转化生长因子-β1(TGF.β1)转基因对大鼠移植心脏缺血-再灌注损伤的影响.方法 利用Cuff技术建立心脏移植模型,转基冈组供心离体灌注携带mTGF-β1基因腺病毒颗粒;空白对照组灌注停跳液;空载体组灌注空白载体腺病毒颗粒.观察移植物超微结构变化;RT-PCR检测心肌组织mTGF-β1mRNA的转录强度;测定心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)活性.结果 转基因组心肌组织有外源性mTGF-β1基凶及蛋白表达,心肌细胞凋亡显著减少、SOD活性升高、MDA含量和MPO活性下降.结论 TGF-β1基因能减轻移植心脏缺血.再灌注损伤.     

肝脏缺血-再灌注2相损伤对胰岛β细胞分泌功能的影响

目的 研究大鼠肝脏缺血-再灌注2相损伤对胰岛β细胞分泌功能的影响.方法 36只SD大鼠随机分为假手术组(C组)和IR组,每组18只.IR组制成肝脏缺血1 h再灌注12 h的70%肝脏I/R损伤模型.每组取10只大鼠,再灌注12 h后采血,测定血糖及血胰岛素浓度并计算胰岛素分泌指数.每组另各取8只大鼠,进行高血糖钳夹试验.结果 IR组血糖水平明显高于C组[(9.02±1.37)mmol/L vs.(5.52±0.95)mmol/L](P<0.01),胰岛素浓度也显著高于C组[(116.45±10.87)mU/L vs.(73.65±22.87)mU/L](P<0.01),但IR组胰岛素分泌指数显著低于C组[(462.80±46.28) vs.(1 046.54±30.21)](P<0.01).高血糖钳夹试验显示,IR组2相胰岛素分泌量显著低于C组[(83.17±6.01)mU/L vs.(99.80±10.81)mU/L](P<0.05),葡萄槠代谢率也明显低于C组[(29.68±4.92)mg·kg-1·min-1 vs.(53.16±3.45)mg·kg-1·min-1](P<0.01),胰岛素敏感性指数显著低于C组[(30.97±8.11) vs.(64.34±7.21)](P<0.01).结论 肝脏缺血-再灌注损伤12 h后,大鼠胰岛β细胞分泌功能受损,外周组织的胰岛素敏感性明显下降.     

异丙基肾上腺素对热缺血再灌注大鼠肝脏微循环的影响

缺血再灌注 (Ｉｓｃｈｅｍｉａ/ＲｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎＩ/Ｒ)损伤为临床常见的病理生理表现 ,再灌注对组织可造成严重的损伤。在肝胆外科 ,某些肝胆疾病的手术常需要完全或部分阻断肝血流 ,从而不可避免地造成肝微循环障碍 ,严重时导致肝功能衰竭 ;在肝脏移植过程中热Ｉ/Ｒ引起的肝脏微循环障碍可能是供肝失活、移植失败的一个重要原因。因此 ,我们设计了本实验 ,为肝移植及需要阻断肝门的肝脏手术探索防治热Ｉ/Ｒ期肝微循环障碍的有效药物及给药途径。材料与方法1.动物分组及药物剂量 :选择Ｗｉｓｔａｒ大鼠 2 0只 (解放军总医院实验动物…     

霉酚酸酯对糖尿病大鼠肾脏基质金属蛋白酶9、转化生长因子β1表达的影响

目的 探讨霉酚酸酯（MMF）对糖尿病（DM）大鼠肾脏的保护作用及其机制。 方法 将实验动物分为正常对照组、DM组及MMF治疗组。MMF组给予MMF(15 mg/kg,口服,1次/d) 治疗。8 周后检测各组大鼠尿蛋白量（24 h）、内生肌酐清除率（Ccr）、血糖;HE染色观察肾脏病理改变;免疫组化及RT-PCR法检测肾组织中基质金属蛋白酶9（MMP-9）、转化生长因子β1（TGF-β1）的表达。 结果 DM组大鼠血糖[（22.18±3.36） mmol/L比（6.40±0.87）mmol/L]、尿蛋白量（24 h）[（26.80±0.82） mg比（6.64±1.42） mg]、Ccr[（0.220±0.380） ml/min比（0.098±0.015） ml/min]显著高于对照组（P ＜ 0.05）。MMF组的尿蛋白量（24 h）[（16.17±1.15） mg]、Ccr[（0.220±0.380） ml/min比（0.207±0.377） ml/min]均显著低于DM组（P ＜ 0.05）。与DM组比较,MMF组肾小球肿大、系膜细胞增生显著减轻。肾组织中MMP-9在对照组表达较多,主要在肾小球系膜细胞胞质内及肾小管上皮细胞,DM组表达较弱,MMF组介于两组之间,组间差异均有统计学意义（P < 0.05）。TGF-β1在正常对照组大鼠肾组织有少量表达,在DM组表达较强,在MMF组介于两组之间,组间差异亦均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 MMF可降低DM大鼠尿蛋白排泄、Ccr,减轻早期肾小球肥大,此作用可能与MMF上调肾组织中MMP-9表达、下调TGF-β1的表达、减少系膜外基质的沉积有关。     

转化生长因子-β1转基因联合FTY720对大鼠心脏移植物缺血-再灌注损伤的影响

目的 探讨经冠脉灌注转化生长因子(TGF)-β1基因联合FTY720对移植心脏缺血-再灌注损伤(IRI)的影响及其机制.方法 实验分为空白对照组、空载体组、FTY720组、转基因组和转基因+FTY720组.心脏移植8 h后切取移植心脏,免疫组织化学检测mTGF-β1、ICAM-1、核转录因子(NF)-κB表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测mTGF-β1 mRNA转录强度;测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)活性.结果 mTGF-β1成功转到心肌细胞,转基因组和转基因+FIY720组mTGF-β1的表达强度分别是(1.08±0.24)和(1.16±0.22),明显高于其他3组(P<0.01);而两组ICAM-1的表达积分分别是(2.43±0.46)和(1.90±0.20),NF-κB的表达积分分别是(9.80±1.85)和(10.10±2.27),较其他3组显著下调(P<0.01);FRY720组、转基因组和转基因+FTY720组心肌细胞凋亡指数分别是(9.20±1.12)、(5.90±1.09)和(5.40±0.77),显著减少(P<0.01);FTY720组、转基因组和转基因+FTY720组SOD活性分别是(51.03±5.54)、(55.91±6.66)和(73.42±6.42)U/mg,明显升高(P<0.01),MDA含量(10.90±1.93)、(11.02±2.45)和(9.28±1.64)U/g,明显下降(P<0.01);而MPO活性分别是(4.38±1.43)、(4.63±1.04)和(3.16±0.64)U/g,亦明显下降(P<0.01);转基因和FTY720两因素对减轻心肌细胞凋亡以及对SOD、MDA和MPO的影响存在交互作用(P<0.05).结论 TGF-β1和FTY720均具有减轻移植心脏缺血-再灌注损伤的作用,机制可能与抑制心肌细胞凋亡、下调ICAM-1、NF-κB表达、增高SOD活性等因素有关;两者联合应用在减轻缺血-再灌注损伤方面有协同作用.     

特异性敲除β-连环蛋白基因对小鼠肝缺血再灌注损伤的影响

目的 通过构建特异性敲除小鼠模型观察β-连环蛋白(β-catenin)基因在小鼠肝缺血再灌注损伤中的作用.方法 应用Cre-lox系统构建肝细胞特异性敲除β-catenin基因小鼠模型,90 min半肝血流阻断制造肝脏缺血再灌注小鼠模型,分为β-catenin基因敲除组及对照组,再灌注后0、3、6、20 h测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及其肝脏组织学改变.结果 肝细胞特异性敲除β-catenin基因小鼠基因表型为:ctnnb纯合(loxP/loxP)并且Alb-Cre阳性表达,Western blot 方法证实其β-catenin蛋白表达丰度明显低于对照组.再灌注3、6、20 h敲除组小鼠血清ALT水平分别为282、405及128 U/ml;对照组分别为221、295及101 U/ml.敲除组AST水平分别为603、805及396 U/ml;对照组分别为421、398及336 U/ml,各时间点两组间差异均有统计学意义(P＜0.05).其肝细胞坏死、窦状隙充血以及炎细胞浸润程度明显重于对照组.结论 β-catenin对肝脏缺血再灌注引起的肝损伤起保护作用.

Abstract：

Objective To study the role of β-catenin in liver ischemia-reperfusion injury used a conditional knockout approach to delete p-catenin in the liver. Methods We adapted the Cre-lox recombination system to create the p-catenin conditional knockout (KO) mice and liver ischemia-reperfusion injury were made by 90min hemiliver blood supply block. Experimental animal were randomized into two groups:p-catenin conditional knockout group (KO group) and control group (C group). 0,3,6,20 h after reperfusion,serum samples were used for measurement of serum alanine transaminase ( ALT) and aspartate aminotransferase (AST) ,liver sections were subjected to hematoxylin-eosin staining. Results Genotyping identified that β-catenin KO mice showed ctnnb homozygosis ( - / - ) and Alb-Cre positive. Western blotting analysis showed an obviously lower expression of p-catenin in KO group. Three,6,20 h after reperfusion,KO group ALT level were 282,405 and 128 U/ml. C group were 221,295 and 101 U/ml. KO group AST level were 603,805 and 396 U/ml,C group were 421,398 and 336 U/ml. Hematoxylin and Eosin (HE)staining showed significant sinusoid inflation and congestion, extensive acidophilic necrosis, focal hemorrhages , hepatic lobula structure disorder and slightly lymphocyte inflammatory cells infiltration in KO group. In C group, HE staining show slightly sinusoid inflation and congestion, limited acidophilic necrosis and focal hemorrhages, hepatic lobula structure nearly integrity, slightly lymphocyte inflammatory cells infiltration.Conclusion β-catenin may play a protect role in liver ischemia-reperfusion injury.     

缺血后处理对大鼠缺血再灌注损伤肝脏血红素加氧酶-1表达的影响

灌注损伤,其机制可能与增加HO-1的表达和增强移植肝脏抗氧化能力有关.     

α-硫辛酸对大鼠肝脏部分热缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察α-硫辛酸对大鼠肝脏部分热缺血再灌注损伤的保护作用。方法建立Wistar大鼠肝脏部分热缺血再灌注模型。将大鼠随机分为损伤组（A组）和处理组（B组），缺血前15min从尾静脉分别注射生理盐水和α-硫辛酸，再灌注后1、3、6和12h分别取血和肝脏组织，检测血清丙氨酸氨基转移酶（GPT）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX），免疫组织化学检测肝脏组织中核转录因子．KBp65（NF-κBp65），RT-PCR法检测肝脏组织中巨噬细胞炎性蛋白．2mRNA（MIP-2mRNA）的表达。结果A组血清GPT和GSH-PX在1、3、6、12h都明显高于B组P〈0．01）；A组血清GSH明显低于B组（P〈0．01）；B组肝脏组织中NF-κBp65和MIP-2mRNA表达明显低于A组（P〈0．01）。结论α-硫辛酸能明显减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤，可能与直接清除氧自由基、增加GSH产生以及减少NF—κB的活化和GSH的消耗有关。     

肝脏手术中肝血流阻断与肝脏缺血-再灌注损伤

随着肝脏外科发展，我们已经可以完成非常复杂的肝脏肿瘤切除术。但在切肝过程中，肝脏切面的出血仍为须认真对待问题。为减少出血量，目前临床上主要采取各种方法以阻断肝脏血流，最经典、最常用的是Pringle法。虽然肝脏血流的阻断可有效地控制出血，但是肝脏热缺血所造成的肝脏损伤成为术后严重的并发症。热缺血主要对肝实质细胞产生伤害，特别是肝脏伴有肝硬化等慢性病变时对缺氧更敏感。在亚洲人群中超过80％的肝脏恶性肿瘤伴有肝硬化，因此肝脏的热缺血-再灌注损伤在阻断血流的肝叶切除术中更易发生。     

预缺血对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

已有较多的实验证明,预缺血处理对多种缺血再灌注器官有保护作用.本文综述了预缺血对缺血再灌注肝脏的保护作用及其机理.     

匹立尼酸对肝脏缺血-再灌注大鼠血清TNF-α和IL-1β的影响

目的 观察匹立尼酸(Wy14643)对肝脏缺血-再灌注大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的影响.方法 SD雄性大鼠30只,体重220～280 g,随机均分为五组:W1、W2、W3组、缺血-再灌注组(I-R组)和假手术组(S组).阻断左、中侧肝动脉及其门静脉(缺血约70 %)90 min后再灌注建立大鼠缺血-再灌注模型,S组操作同前但不阻断血管.缺血前1h,W1、W2、W3组分别经腹腔注射Wy14643 1、5、10mg/kg,I-R组和S组注射等容积生理盐水.4h后取腹主动脉血测定血清TNF-α和IL-1β水平.结果 再灌注4h后,S组血清TNF-α和IL-1β水平明显低于其它四组(P＜0.05);W2、W3组明显低于I-R组(P＜0.05).结论 预先给予匹立尼酸可降低肝脏缺血-再灌注后血清TNF-α和IL-1β水平.     

大鼠肝脏缺血-再灌注损伤时齐墩果酸对氧自由基的影响

目的 探讨齐墩果酸(OA)对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤时氧自由基的影响.方法 128只雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH组)、缺血-再灌注组(IR组)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na组)和OA组.建立70%肝脏缺血-再灌注模型,测定肝脏缺血60 min再灌注0、3、6、12 h后血清ALT活性和肝组织丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)水平.结果 再灌注3、6、12 h,IR组、CMC-Na组、OA组血清ALT活性、肝组织MDA水平分别显著高于SH组(P<0.05),肝组织SOD活性、GSH水平分别明显低于SH组(P<0.05);OA组ALT活性、MDA水平分别较IR组和CMC-Na组明显降低(P<0.05),SOD活性和GSH水平分别较IR组和CMC-Na组显著升高(P<0.05).结论 OA对肝脏缺血-再灌注损伤具有一定保护作用,其抗肝脏缺血-再灌注损伤作用与抑制自由基的生成和释放有关.     

大黄素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的预防作用

目的:探讨大黄素对肝脏缺血-再灌注损伤的保护作用及其机制.方法:将45只成年雄性SD大鼠随机分成三组:假手术对照组(A组)15只,肝缺血30 min、再灌注90min组(B组)15只,术前5 d给予大黄素灌胃60mg/(kg·d),5次 肝缺血30 min、再灌注90min(C组)15只;观察血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、透明质酸酶(HA)、肝组织丙二醛(MDA)含量的变化及肝脏组织病理学改变情况,同时测定各组大鼠胆汁流量情况.结果:C组与B组相比,MDA含量显著降低(P＜0.05),HA浓度明显降低(P＜0.01),胆汁流量显著增加(P＜0.01),同时C组的肝细胞功能明显改善,且肝脏超微结构改变也较轻.结论:大黄素对肝脏缺血-再灌注损伤具有保护作用,该作用与减轻肝脏缺血再灌注后脂质过氧化程度和肝窦内皮细胞损伤有关.     

缺血再灌注损伤对肝脏免疫原性的影响

目的 观察缺血再灌注损伤对肝脏免疫原性的影响.方法 30只大鼠均分为3组,利用免疫荧光及Western blol检测缺血30min再灌注组及缺血60min再灌注组及对照组的肝脏中共刺激分子B7蛋白的表达水平.结果 正常肝脏B7-1、B7-2表达处于极低水平(0.035±0.005、0.025±0.004),缺血再灌注后肝脏B7-1、B7-2的蛋白表达明显升高(P<0.01),缺血再灌注60min组的B7-1、B7-2的表达水平明显高于缺血30min再灌注组(B7-1:0.070±0.017比0.051±0.008,B7-2:0.042±0.004.比0.037±0.004,P<0.01).结论 缺血再灌注损伤使共刺激分子B7蛋白表达升高,提示缺血再灌注损伤可使移植肝免疫原性升高,这些均能促进急性排斥反应的发生.     

还原型谷胱甘肽预处理对肝脏缺血-再灌注后糖代谢的影响

目的 观察还原型谷胱甘肽(GSH)预处理对肝脏缺血-再灌注损伤(HIRI)后糖代谢的影响.方法 78只SD大鼠随机均分为假手术组(C组)、缺血-再灌注组(IR组)和GSH预处理组(G组).IR组和G组大鼠制作HIRI模型,C组仅开腹,不阻断肝门血管.每组分别在HIRI后2、6 h各取8只大鼠检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、血糖和胰岛素的含量,另取5只大鼠做高血糖钳夹试验后检测胰岛素含量,并计算葡萄糖代谢率(GMR)和胰岛素敏感指数(ISI).结果 与IR组比较,C组和G组血糖、MDA含量明显降低(P<0.05),胰岛素、SOD含量明显升高(P<0.05).高血糖钳夹试验后,与IR组比较,C组和G组胰岛素含量,GMR及ISI均明显升高(P<0.05).结论 GSH预处理可改善HIRI后的高血糖,其机制可能与GSH减轻HIRI过程中的氧化还原反应有关.     

预缺血对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

已有较多的实验证明,预缺血处理对多种缺血再灌注器官有保护作用.本文综述了预缺血对缺血再灌注肝脏的保护作用及其机理.