5氮胞苷与丁酸抑制人肝癌细胞转移的实验研究

目的　了解5氮胞苷和丁酸对肝癌细胞转移及肝癌细胞蛋白表达的影响。方法　使用5氮胞苷与丁酸处理人肝癌细胞株HepG2及Hep3B,观察处理后肝癌细胞转移、粘附及增殖的改变以及细胞周期抑制蛋白p21waf1、p27kip1和p53表达的改变。结果　5氮胞苷和丁酸联合使用能够完全阻断两种肝癌细胞的转移,转移细胞数均为0/膜;而对照组HepG2和Hep3B转移细胞数分别为(91±17)/膜和(117±74)/膜,P<0.01;两种药物均可抑制肝癌细胞的粘附及增殖;接种后6d　5氮胞苷与丁酸处理组的HepG2细胞数分别为(13.2±0.6)×10     

5-氮胞苷对EB病毒阳性胃癌细胞的影响

目的体外建立EB病毒阳性胃癌细胞系并探讨去甲基化试剂5-氮胞苷对EB病毒阳性胃癌的辅助治疗作用。方法用cell to cell感染法建立EB病毒阳性胃癌细胞系。用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和PCR-southem检测不同剂量5-azacytidine处理前后EB病毒启动子的活性，并用Western blot检测EB病毒相关基因的表达。结果体外感染后筛选的细胞克隆为EB病毒阳性，EBNA免疫荧光染色为阳性。EB病毒相关蛋白的免疫印记显示核蛋白除EBNA1阳性外EBNA2 EBNA3s均为阴性。膜蛋白LMP1也为阴性。5-azacytidine处理后EB病毒阳性胃癌细胞系中被甲基化失活的C启动子重新活化，并表达潜伏性膜蛋白1（LMP1）。且呈剂量依赖性。结论体外通过cell to cell感染方式，可成功建立EB病毒阳性胃癌细胞系。建立的EB病毒阳性胃癌细胞系AGS／EB病毒和NUGC3／EB病毒体外培养呈Ⅰ型潜伏感染。5-azacytidine可能对EB病毒阳性胃癌的特异性治疗有帮助。     

5-氮杂胞苷联合伊马替尼对胃肠间质瘤的体外治疗作用

目的观察甲基化抑制剂5-氮杂胞苷（5-aza-CaR）联合伊马替尼对人胃肠间质瘤（GIST）细胞GIST882生长、运动、侵袭和凋亡的影响。方法MTF法检测不同浓度5-aza．CdR、伊马替尼及双药联合作用对GIST882细胞生长情况的影响：平板克隆形成实验检测克隆形成数：迁徙运动及侵袭实验观察药物干预对细胞运动和侵袭能力的影响：流式细胞术检测各组细胞周期和凋亡的情况。结果5-aza-CdR与伊马替尼对GIST882细胞均有较强的抑制作用,此作用呈浓度和时间依赖性：两药联用的抑制率较单独应用明显增高（P〈0．05）。药物作用48h时,5-aza—CdR组（1000μg／L）的细胞凋亡率为（11．7±1．2）％,伊马替尼组（100μmol／L）则为（14．6±0．8）％,与对照组（2．8±0．3）％相比,差异有统计学意义（P=0．000）。联合组细胞凋亡率为（19．4±1．1）％,明显高于单药组（与5-aza—CdR组相比,P=0．000：与伊马替尼组相比,P=0．013）。5-aza-CdR可使GIST882GiG。期比例增加,s期比例降低．伊马替尼组及联合用药组对细胞周期的改变不明显。结论去甲基化药物有望成为GIST药物治疗中单独或联合用药的新选择。     

5-氮杂胞苷和地塞米松对大鼠骨髓间充质干细胞分化作用的实验研究

[目的]探究5-氮杂胞苷和地塞米松对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)成骨分化能力的影响。[方法]SD大鼠骨髓间充质干细胞体外扩增和传代培养,流式细胞术鉴定细胞表面标志,取3代细胞随机分为空白组、激素组、激素+5-氮杂胞苷组,相应药物干预3 d后成骨诱导分化14 d,RT-PCR和Western blot检测Runx2和PPARγ的表达。[结果]所取得骨髓间充质干细胞纯度和均一性好,细胞表面标记CD90高表达,CD34、CD45低表达。第3代细胞经药物干预和成骨诱导后,与空白组相比,激素组Runx2基因表达降低,PPARγ基因升高,5-氮杂胞苷+激素组结果与激素组相反(P<0.05)。[结论]激素能抑制骨髓间充质干细胞成骨分化,促进成脂分化,5-氮杂胞苷能干预激素的这种作用,提高骨髓间充质干细胞分化潜能。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷对HepG2中SLIT2甲基化和细胞恶性表型影响的实验研究

目的评估5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-aza-2dc）对人肝癌细胞系HepG2中抑癌基因SLIT2甲基化状态和细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,探讨SLIT2基因在肝癌中的作用及5-aza-2dc的体外抑制肝癌的效应。方法实验分为对照组和加药组,分别应用MSP、MTT、划痕实验、侵袭实验、AnnexinV—FITC／PI双染实验检测细胞中SLIT2基因的甲基化状态和细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡的变化。结果5-aza-2dc处理后,HepG2细胞株中SLIT2基因甲基化程度得到一定程度逆转,并呈现出剂量依赖性;划痕实验48h后,对照组肝癌细胞明显向划痕的中央迁移,而药物处理组肝癌细胞迁移受到抑制;侵袭实验24h后,加药组细胞的侵袭能力较对照组降低（P〈0．05）;AnnexinV．FITC／PI双染实验显示加药组细胞凋亡率显著增加（P〈0．01）。结论5-aza-2dc对HepG2细胞有抑制细胞增殖、促进凋亡及抑制细胞迁移和侵袭能力等作用,其中对抑制细胞迁移和侵袭的作用可能是通过逆转SILT2基因甲基化、恢复其表达来实现的。     

5-脱氧杂氮胞苷修饰肝癌细胞来源的exosomes对淋巴细胞增殖的影响

exosomes是一些长30～100nm的膜性小囊泡，目前发现T细胞、B细胞、上皮细胞、树突状细胞以及肿瘤细胞等均可分泌exosomes；其中肿瘤细胞来源的exosornes在肿瘤免疫中可以起到抗原呈递作用，一直是肿瘤免疫治疗的热点，并被认为是生产肿瘤疫苗的最佳来源之一。然而，近年来研究发现，有些肿瘤细胞分泌的exosornes对免疫细胞的增殖具有抑制作用，给其用于肿瘤治疗带来新的问题。     

基质金属蛋白酶-2与胃癌的侵袭转移

细胞外基质和基底膜重塑是癌细胞侵袭转移过程中的关键环节,需借助于蛋白降解酶的表达和激活。基质蛋白酶主要有以下数种：丝氨酸蚩白酶类,包括血浆酶原激活剂;半胱氨酸蛋白酶类,包括组织蛋白酶D在内的溶酶体酶;金属蛋白酶类(metalloproteioases)。金属蛋白酶类在肿瘤侵袭过程中的作用近年来倍受关注,大量证据表明基质金属蛋白酶,特别是基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2．MMP-2)在肿瘤细胞介导的细胞外基质降解中起关键作用,临床研究表明,MMP-2活性和表达的增加与人类多种恶性肿瘤侵袭转移潜能及预后密切相关。     

GAS5对骨肉瘤U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:观察生长停滞特异性转录因子5(GAS5)对骨肉瘤U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响,探讨其机制。方法:在人骨肉瘤U2OS细胞和人正常成骨hFOB 1.19细胞中,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测GAS5和微小RNA (miR)-221的表达,Western blot检测基质金属蛋白酶抑制物-2 (TIMP2)蛋白的表达。转染pcDNA-GAS5重组质粒后,采用噻唑蓝(MTT)法和Trasnwell小室法检测GAS5对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响,qRT-PCR检测GAS5对miR-221表达的影响。利用Starbase软件预测和双荧光素酶报告基因实验验证GAS5与miR-221以及miR-221与TIMP2的靶向关系。转染miR-221模拟物和miR-221抑制剂后,观察miR-221过表达对GAS5调控的U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及miR-221对TIMP2蛋白表达的影响。结果:与正常hFOB 1.19细胞相比,U2OS细胞中GAS5和TIMP2蛋白的表达水平明显降低,而miR-221表达水平显著升高(GAS5:P=0.0001;TIMP2:P=0.0003;miR-221:P=0.0004)。GAS5过表达可抑制U2OS细胞增殖、迁移和侵袭(增殖48h:P=0.0005;增殖72h:P=0.0002;迁移:P=0.002;侵袭:P=0.001),而miR-221过表达可明显逆转GAS5对U2OS细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(增殖48h:P=0.0002;增殖72h:P=0.0003;迁移:P=0.0001;侵袭:P=0.0001)。Starbase软件预测到miR-221存在能够与GAS5互补结合的位点,还存在能够与TIMP2 3′UTR互补结合的位点;双荧光素酶结果显示miR-221过表达后野生型GAS5(GAS5-WT)和野生型TIMP2 (TIMP2-WT)细胞的荧光素酶活性明显降低(P均为0.0003);同时,GAS5过表达后,U2OS细胞中miR-221表达水平明显降低(P=0.0001),反之miR-221明显升高(P=0.0001);miR-221过表达后,U2OS细胞中TIMP2蛋白的表达水平明显降低(P=0.0003),反之TIMP2蛋白的表达水平明显升高(P=0.0009)。结论:GAS5可通过靶向抑制miR-221促进TIMP2表达,进而抑制U2OS细胞的增殖、迁移和侵袭。     

5-氮胞苷诱导自体骨髓单个核细胞移植对心功能的影响

目的　观察骨髓单个核细胞 (BM MNC)经化学诱导剂 5 氮胞苷诱导后 ,移植到梗死心肌边缘 ,能否进一步改善心功能。方法　 2 6只雄性家兔 ,随机选取 2 1只结扎冠状动脉左前降支 ,建立急性心肌梗死 (AMI)模型 ,随机分为BM MNC 5 氮胞苷组、BM MNC组和AMI未治疗组 3组 ,每组 7只 ;其余 5只为假手术对照组。AMI后第 3d抽取自体股骨骨髓 1 5ml,分离单个核细胞培养 ;AMI后 14d将培养的单个核细胞移植至梗死心肌边缘 ;移植 2 8d后 ,采用超声心动图 ,并结合左心导管、血流动力学等参数评价心功能情况。结果　AMI后兔心功能明显受损 ,与假手术对照组相比 ,AMI后各组左室舒张末期压明显升高 (P <0 0 5 ) ,左室短轴缩短率、左室壁厚度、射血分数、左室收缩压、压力变化率最大值显著降低(P <0 0 5 )。细胞移植后 ,与AMI未治疗组相比 ,细胞移植组左室舒张末期压显著降低 ,左室短轴缩短率、左室壁厚度、射血分数 ,以及左室收缩压、压力变化率最大值明显升高。但 5 氮胞苷诱导的骨髓单个核细胞移植组与未经诱导组间各项指标差异无显著性。结论　 5 氮胞苷诱导的骨髓单个核细胞移植能明显改善心功能 ,并防止AMI后左室重构发生 ;但与单纯骨髓单个核细胞移植相比差异无显著性。     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷对前列腺癌PC-3细胞生物学行为的影响

目的 检测E-cadherin基因在激素非依赖性前列腺癌(HIPC)细胞上的表达及启动子CpG岛甲基化,探讨甲基化抑制剂5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对HIPC细胞的影响及意义.方法 2.5、5.0、10.0 μmol/L的5-Aza-CdR处理PC-3细胞72h后,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法检测CpG岛甲基化改变,逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测E-cadherin mRNA变化,Westernblot方法检测E-cadherin蛋白变化,Transwell小室检测细胞侵袭性改变.结果 HIPC的E-cadherin启动子CpG岛甲基化呈阳性,基因表达缺失,细胞侵袭性明显.经5-Aza-CdR作用之后,CpG岛甲基化阳性明显减弱(P＜0.05),E-cadherin基因恢复表达(P＜0.05),PC-3细胞的侵袭性下降约59.68％,且与药物的浓度呈正相关.结论 5-Aza-CdR可逆转PC-3细胞E-cadherin启动子CpG岛的异常甲基化,诱导mRNA转录和蛋白的表达,并降低癌细胞的侵袭性.     

microRNA-126靶向PIK3R2调控肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡

【摘要】 目的 研究microRNA-126(miR-126)对肝癌细胞SMMC-7721迁移能力的影响以及对靶基因PIK3R2表达的影响。方法 通过慢病毒转染肝癌细胞株SMMC-7721使其过表达miR-126,利用CCK-8法检测细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡;采用实时定量PCR和蛋白印迹检测细胞PIK3R2表达水平的变化,并通过荧光素酶实验验证miR-126与PIK3R2基因的直接调控关系。结果 与对照组相比,转染miR-126组的SMMC-7721细胞的增殖能力减弱,凋亡增加。过表达miR-126后,SMMC-7721细胞PIK3R2的蛋白表达下调(P=0.0135)。荧光素酶报告基因实验显示,miR-126能明显抑制PIK3R2-3’UTR的荧光素酶活性(P=0.0016)。结论〓过表达miR-126可能通过靶向降低PIK3R2基因的蛋白表达,抑制肝癌细胞的迁移。     

miR-1246在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察微小RNA-1246（miR-1246）在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨其在肝癌发生发展中的作用和意义。方法应用实时定量PCR（qRT-PCR）方法检测miR-1246在肝癌以及癌旁组织的表达;对人肝癌细胞株（BEL7402、SMMC7721）转染miR-1246 抑制剂后,采用MTT法观察肝癌细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果 miR-1246 在肝癌组织中表达显著高于癌旁组织[（65.39±8.77）vs（10.23±2.58）,P=0.002]。MTT和凋亡实验结果显示,与阴性对照组相比,转染miR-1246抑制剂后,BEL7402细胞增殖能力下降,凋亡增加（P均＜0.05）;SMMC7721细胞也出现增殖能力下降,凋亡增加（P均＜0.05）。结论 miR-1246 在肝癌组织中高表达,并且与肝癌细胞的增殖及凋亡有关,其表达的上调可能与肝癌的发生发展有关。     

HBV-X蛋白对人肝癌细胞株SMMC-7721恶性表型的影响

目的 观察HBV-X蛋白对低侵袭性人肝癌细胞株SMMC-7721恶性表型的影响.方法 pcDNA3.1(-)-X重组质粒转染SMMC-7721细胞,以空质粒转染作对照,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),Western blot检测X蛋白表达水平,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液X蛋白、MMP-2、MMP-9、尿激酶纤溶酶原活化因子(uPA)水平,并用体外功能实验观察转染前后的恶性表型的变化.结果 重组质粒转染SMMC-7721后X蛋白表达明显升高,细胞培养上清液HBV-X蛋白为(13.02±2.12)μg/L,对照组为(4.07±0.37)mg/L;MMP-2重组质粒转染组为(49.04±4.07)μg/L,对照组为(25.15±5.43)μg/L,MMP-9水平分别为(27.82±2.25)μg/L和(7.89±1.27)μg/L;uPA重组质粒转染组水平明显高于空质粒转染组,分别为(10.78±3.23)μg/L和(1.24±0.34)μg/L,t值分别为19.93,6.27;6.83,7.04,P值均<0.01.体外功能实验提示SMMC-7721转染HBV-X重组质粒后细胞黏附、运动和侵袭能力明显增强,细胞黏附率为(85.33±14.78)%,对照组为(57.34±2.52)%,t=2.96,P<0.05.运动试验透膜组胞数分别为(24.3±1.9)个和(12.3±2.5)个,t=4.89,P<0.05.侵袭试验透膜细胞数分别为(18.2±3.2)个和(9.3±2.3)个,t=4.29,P<0.05.而细胞增殖能力也明显增加.结论 HBV-X蛋白可能通过MMP-2、MMP-9、uPA分泌促进SMMC-7721的恶性表型.     

miR-1470对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨miR-1470对人肝细胞癌增殖和凋亡的影响。 方法 采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qPCR）检测人正常肝细胞株（LO2）和人肝癌细胞株（HepG2、Hep3B、Huh7）中miR-1470的差异表达;采用慢病毒转染肝癌细胞株,过表达（HepG2细胞株,过表达组）或敲减miR-1470（Huh7细胞株,抑制组）后,qPCR检测各组细胞miR-1470的表达;CCK8法检测细胞增殖改变;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 miR-1470在肝癌细胞系HepG2、Hep3B和Huh7中的表达水平高于正常肝细 胞系LO2,HepG2、Hep3B、Huh7三种细胞系相对正常细胞表达量分别为：2.304±0.366、2.851±0.508、 5.768±0.445（均P＜0.05）。CCK8实验证实,过表达miR-1470组OD值在72 h显著高于对照组（P＜0.05）,而抑制组显著低于对照组（P＜0.05）。流式细胞分析结果显示过表达miR-1470抑制肝癌细胞的凋亡（P＜0.05）;而miR-1470抑制组对比对照组,凋亡细胞显著增多（P＜0.05）。结论 miR-1470促进肝癌细胞增殖,抑制肝癌细胞凋亡。     

三氧化二砷对原发性肝癌的作用及其机理研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞系BEL-7402的影响及其作用机理,并观察不同应用途径对原发性肝癌患者的治疗效果。方法 观察As2O3作用后肝癌细胞的形态学改变、并通过流式细胞仪和DNA梯状电泳观察细胞凋亡的情况,应用逆转录聚合酶链式反应和荧光分光光度计检测半胱氨酸蛋白酶-3的变化情况。观察其对裸鼠移植瘤生长抑制的效果。并分别通过静脉滴注和动脉持续灌注观察其对原发性肝癌患者的治疗效果。结果 不同浓度的As2O3作用于肝癌细胞有明显的时间和剂量依赖性,发生作用后细胞生长明显受抑制,有明显的凋亡特征性改变;流式细胞仪分析存在G2／M期阻滞,在G1峰前出现明显的凋亡峰;琼脂糖凝胶电泳出现明显的凋亡特征性梯状条带。随着As2O3作用时间的延长,半胱氨酸蛋白酶-3的mRNA无明显变化,而半胱氨酸蛋白酶-3蛋白质的活性逐渐增高。不同浓度的As2O3对于裸鼠肝癌移植模型有明显的抑制生长作用。对28例患者的静脉输注治疗可明显改善患者的生存质量,并且具有毒副作用小的特点。43例动脉灌注治疗患者中,30例肿瘤体积缩小或不变,有效率为69．8％,19例甲胎蛋白下降或降至正常。结论 As2O3可明显抑制肝癌细胞的生长,其机理主要是诱导肝癌细胞凋亡;凋亡的可能机理是通过半胱氨酸蛋白酶-3起作用,作用位点是在酶的前体水平;应用As2O3连续区域化疗对原发性肝癌有很好的治疗效果。     

5-Aza-CdR调控胃癌细胞系RASSF1A基因表达及对细胞生长的抑制作用

目的观察去甲基化制剂5-Aza-CdR对体外培养的胃癌细胞SGC7901RASSF1A基因的去甲基化和表达调控及生长抑制作用。方法5-Aza-CdR处理SGC7901细胞后,应用MTT法、流式细胞术、AnnexinV．FITC染色法检测细胞增殖活性、细胞周期分布及细胞凋亡率;应用MSP、RT-PCR及Westem印迹法检测RASSF1A基因的甲基化状态、mRNA及蛋白表达。结果5-Aza-CdR处理后,胃癌细胞SGC7901生长受到抑制（P〈0．05）,细胞周期呈现G1期阻滞,细胞凋亡率显著增加（P〈0．05）。RASSF1A基因在SGC7901中呈异常甲基化状态,在mRNA及蛋白水平表达阴性：5-Aza-CdR处理后RASSF1A基因呈去甲基化状态,在mRNA及蛋白水平重新表达。结论去甲基化制剂5-Aza-CdR调控胃癌细胞SGC7901RASSF1A基因去甲基化及重新表达．对SGC7901细胞具有生长抑制作用。     

加热联合吲哚美辛对人肝癌MHCC97L细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 观察水浴加热联合吲哚美辛对人肝癌MHCC97L细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 42℃水浴加热前2h加入0.2 mmol/L吲哚美辛,加热组不加药,对照组不加热、不加药,其他处理相同并在同一时间点观察.在不同的时间观察细胞增殖、生长曲线、克隆形成率、流式细胞术(FCM)分析细胞周期、侵袭、运动、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达[酶联免疫吸附试验(ELISA)法].结果 与对照组比较,加热+吲哚美辛明显抑制MHCC97L细胞增殖(P＜0.01),其最大抑制效应为加热后48 h(53.6％),细胞倍增时间延长了2.07倍;加热+吲哚美辛组48、96 h的细胞集落形成率均明显降低(P ＜0.01);FCM显示,吲哚美辛能逆转加热对细胞周期的影响,加热+吲哚美辛组48 h和96 h的G1期细胞比例均明显升高,S+G2期细胞比例均明显降低(P＜0.05).加热+吲哚美辛组48 h和96 h相同数量的细胞穿过人工基底膜到达Transwell小室膜背面的细胞平均数(侵袭实验)和穿过Transwell小室膜到达背面的MHCC97L细胞平均数(运动实验)均明显低于加热组(P＜0.01);ELISA法检测发现,加热+吲哚美辛组48、96 h的分泌量均明显低于加热组(P＜0.05).结论 吲哚美辛抑制体外加热后肝癌细胞的增殖,其作用和抑制细胞进入DNA合成期和分裂期有关;进一步抑制其侵袭运动能力,其作用和MMP-2、VEGF表达降低有关.     

Lupeol对肝癌SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响

【摘要】〓目的〓探讨羽扁豆醇(lupeol)对人肝癌SMMC-7721细胞生长和凋亡的作用及机制。方法〓采用MTT法检测lupeol对肝癌细胞 SMMC-7721和正常肝细胞L-02的增殖抑制作用,流式细胞法检测细胞凋亡情况,Western blot检测TRAIL受体及抗凋亡蛋白表达变化,比色法分析caspase-8、-9、-3酶活性改变。结果〓lupeol对SMMC-7721细胞具有明显的增殖抑制作用(IC50=40 μmol/L),而对正常肝细胞L-02无细胞毒作用;lupeol在30、40、50 μmol/L浓度范围诱导SMMC-7721细胞48小时的凋亡率分别为5.5%、12.6%、28%;抗凋亡蛋白c-FLIPL表达下调,caspase-8及caspase-3活性增强均呈剂量依赖性。结论〓Lupeol通过下调c-FLIPL表达激活caspase通路诱导肝癌细胞凋亡,对肝癌细胞增殖发挥抑制作用。     

5-LOX抑制剂NDGA对人肝癌HepG-2细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其机制的探讨

目的观察5-lox抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA)对裸鼠人肝癌HepG-2细胞移植瘤的作用,并探讨其抗肿瘤的可能机制。方法以人肝癌细胞HepG-2制备裸鼠人肝癌移植瘤模型共18只,将18只荷瘤裸鼠随机分为三组:1、正常对照组(接种正常肝癌HepG2细胞)。2、药物组(接种正常肝癌HepG2细胞同时皮下注入5-lox抑制剂去甲二氢愈创木酸(NDGA),剂量:10μml/L NDGA 0.1ml/10g一天一次,连续5天)。3、溶媒组(接种正常HepG-2细胞后皮下注射溶质二甲亚酚)。密切观察移植瘤生长及裸鼠生存情况21天,记录各组移植瘤肿瘤体积V(V=长径×短径2×0.5),计算衰退率:肿瘤衰退率=1-干预组平均肿瘤体积比/空白对照组平均肿瘤体积比(V/Vo)。通过RT-PCR及Western-blot法检测裸鼠移植瘤组织中bcl-2、caspase3凋亡调节因子以及通路信号蛋白MEK1/2、ERK1/2等的表达。结果实验期间各组荷瘤鼠活动较好,成瘤率100%,且实验过程中无不良繁衍及裸鼠死亡;试验后分别测得各组荷瘤鼠皮下移植瘤体积及肿瘤衰退率,利用单因素方差分析及t检验可以发现:药物组荷瘤鼠较对照组及溶媒组移植瘤体积明显缩小,肿瘤衰退率明显较高,且存在统计学差异(P0.01);利用RT-PCR及Western-blot法检测发现药物组caspase3表达量较对照组及溶媒组明显增强,差异存在统计学意义(P0.01),bcl-2、ERK1/2、MEK1/2等表达量较对照组及溶媒组明显下降,差异具有统计学意义(P0.01)。结论 NDGA对于裸鼠人肝癌移植瘤具有明显的抑制效果。NDGA可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而抑制肿瘤生长,其作用机制与抑制MEK/ERK信号通路有关。     

miR-139-5p对人肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA)-139-5p在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖、侵袭的影响和潜在的分子机制。方法 采用生物信息学方法,从GEO数据库中下载GSE36915数据集,进行差异miRNA分析,结合TCGA-LICH数据集中的生存数据,筛选与预后显著相关的miRNA。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-139-5p在肝癌及其癌旁组织中的表达。利用CCK-8实验、Transwell实验观察miR-139-5p对人肝癌细胞SK-Hep-1和SMMC-7721的表型变化。采用高通量测序检测过表达miR-139-5p的SK-Hep-1细胞中基因表达的变化,确定miR-139-5p调控的潜在的信号通路和靶基因,并采用免疫印迹实验和报告基因实验进行验证。结果 通过对GSE36915数据集进行分析,共鉴定到50个显著差异表达的miRNA。结合TCGA-LICH数据集中的生存数据,发现在差异最显著的20个miRNA中,miR-15b-3p、miR-1180-3p、miR-139-5p、miR-139-3p与预后显著相关,最终确定miR-139-5p为进一步研究对象。mi...