黄芪注射液抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元JNK3 mRNA的表达

目的： 观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因c-Jun氨基末端激酶3(JNK3)mRNA表达的影响。方法：取原代培养8 d的大鼠海马神经元,随机分为4组：正常对照组、黄芪注射液原液对照组、缺氧缺糖/复氧复糖组和黄芪注射液组。其中缺氧缺糖/复氧复糖组、黄芪注射液组及黄芪注射液原液对照组进行缺糖缺氧0.5 h再复氧复糖,并于复氧复糖后0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、72 h和120 h采用原位杂交和RT-PCR方法检测海马神经元JNK3 mRNA的表达。结果：正常对照组大鼠海马神经元核膜完整,细胞突起明显,有少许细胞胞浆黄染;缺氧缺糖/复氧复糖组大鼠海马神经元胞核体积增大、突起回缩,大量细胞胞浆黄染,胞核内有黄色颗粒,海马JNK3 mRNA阳性神经元数目在各个时点均比正常对照组明显增多（P<0.05）;黄芪注射液原液对照组神经元形态变化和海马JNK3 mRNA阳性神经元数目均与缺氧缺糖/复氧复糖组相一致（P>0.05）;黄芪注射液组大鼠海马神经元有轻微核皱缩,可见部分神经元胞浆黄染,除120 h时点之外,海马JNK mRNA阳性神经元数目在各个时点均比缺氧缺糖/复氧复糖组明显减少（P<0.05）。缺氧缺糖/复氧复糖组在0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、72 h和120 h海马神经元JNK3 mRNA平均灰度值均较正常对照组明显增加（P<0.05）;与缺氧缺糖/复氧复糖组相比,黄芪注射液原液对照组各时点JNK3 mRNA的平均灰度值无明显变化（P>0.05）,而黄芪注射液组除120 h之外在各个时点JNK3mRNA的平均灰度值均明显降低（P<0.05）。结论：黄芪注射液可抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡相关基因JNK3 mRNA表达,从而抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元的凋亡。     

创伤后应激障碍大鼠海马神经元自噬增强

目的:观察创伤后应激障碍(PTSD)模型大鼠海马神经元自噬的改变,探讨PTSD致海马体积异常的可能机制。方法:成年健康雄性SD大鼠20只,随机被分为对照组和模型组。采用改良的单一连续应激后给予不可逃避足底电击方法制备PTSD大鼠模型;采用透射电镜技术观察海马神经元超微结构,Western blot方法检测海马微管相关蛋白轻链3(microtube-associated protein 1 light chain 3,LC-3)和Beclin-1的表达水平。结果:模型组海马神经元自噬体增多;海马组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin-1表达水平高于对照组(P<0.05)。结论:PTSD模型大鼠海马神经元存在明显的细胞自噬,可能与海马体积异常变化有关。     

补肾益气化瘀方对衰老大鼠海马神经元的影响

目的观察补肾益气化瘀方对衰老大鼠海马神经元结构的影响，并探讨其作用机制。方法选用青年Wistar大鼠36只，随机分成三组：空白对照组、模型对照组、药物组。使用D-半乳糖腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型。模型建立后，药物组每天用补肾益气化瘀方提取液灌胃，空白对照组、模型对照组用生理盐水灌胃，连续四周。然后用光学显微镜观察海马神经元结构，用紫外分光光度计检测大鼠海马超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量。结果空白对照组：海马轮廓清晰，CA3区神经元细胞密集，胞浆丰富，核大深染，细胞间排列整齐，界限清楚；模型对照组：海马轮廓模糊，神经元细胞明显减少，细胞间排列松散，界限不清；药物组：海马轮廓清晰，神经元细胞明显多于模型对照组，神经元胞浆较丰富，核大深染，细胞间排列较整齐，界限清楚。模型对照组海马MDA含量增加，SOD活性减少；与模型对照组比较，药物组海马超氧化物歧化酶（MDA）含量减少，SOD活性增加（P〈0、01）。结论补肾益气化瘀方对衰老大鼠海马神经元具有保护和修复作用，其机理可能与抗自由基损伤有关。     

线粒体缺陷对原代培养新生大鼠海马神经元微管相关蛋白表达的影响

目的：观察线粒体呼吸链复合体IV（即细胞色素C氧化酶）抑制剂叠氮钠（NaN₃）对神经元细胞骨架系统的影响,探讨线粒体缺陷在阿尔茨海默病发病中的作用。方法：将叠氮钠与原代培养的新生大鼠海马神经元共同孵育,MTT法测定细胞存活率,激光共聚焦显微镜系统观察细胞微管结构及微管相关蛋白表达的变化。结果：叠氮钠8-128 mmol/L与培养的神经元共孵育6-24 h,细胞存活率下降,呈时间及剂量依赖性;NaN₃ 16、64 mmol/L作用6 h,使细胞微管结构损伤,微管相关蛋白表达下降,尤以突起内最为显著。结论：叠氮钠与培养的神经元共孵育导致神经元损伤,其机制与线粒体缺陷致细胞骨架系统异常有关。     

一种同时培养原代皮质及海马神经元的实验方法北大核心

背景:近年来原代神经元细胞模型在颅脑疾病中扮演着重要的角色,此类细胞模型特性更加贴近于疾病细胞,可用于模拟研究各类神经系统疾病。目的:建立一种便捷实用的可同时提取皮质及海马原代神经元的培养方法。方法:取新生24 h内的SD大鼠,麻醉后断脊法处死,采用体积分数为75%乙醇消毒,用镊子分离出颅骨及脑膜,解剖出完整大脑,剥离脑血管膜,游离出大脑皮质及海马组织,采用木瓜蛋白酶及适量DNA酶顺序消化方案,吹打、离心、过滤,然后接种于左旋多聚赖氨酸包被的6孔板和爬片内,以含体积分数10%胎牛血清的DMEM-F12培养基为种植液,6 h后换用含有B27的Neurobasal无血清专用培养基,持续培养7 d后,显微镜下观察细胞形态及生长状态。分别采用β-Tubulin免疫荧光法、Neun抗体免疫组化法鉴定皮质神经元与海马神经元,以及采用MAP2免疫荧光法鉴定其纯度。结果与结论:①接种24 h后细胞体积变清晰,呈不规则圆形、周围环绕光晕,少数细胞已有细小突起,均已贴壁生长;持续培养3 d后,胞体逐步增大,部分呈聚团性生长,突触延长,细胞间出现交联;持续培养7 d后,胞体成熟饱满,细胞质显著增多,光晕增强,形成更为密集的神经元网络;②经Neun抗体免疫组化法、β-Tubulin免疫荧光法鉴定为神经元,神经元标志物MAP2免疫荧光法鉴定皮质神经元和海马神经元纯度分别为(94.00±0.34)%和(91.00±0.26)%,可用于后期实验;③结果表明,采用同一批24 h内新生SD大鼠分离大脑皮质和海马组织,经木瓜蛋白酶与DNA酶顺序消化后,可提取到优质的海马神经元及皮质神经元。该方案得到的神经元纯度高,操作简化,可作为研究各类神经系统疾病细胞模型的基础。     

高血糖对树鼩脑皮层局灶性缺血时海马微环境离子稳态及神经元继发性损伤的影响

 目的：研究高血糖对树鼩脑皮层血栓性缺血时海马微环境离子稳态的影响,探讨高血糖在缺血后神经元继发性损伤中的作用及机制。方法：用链脲佐菌素复制树鼩高血糖模型,并用光化学方法诱导脑皮层局部血栓性缺血,用单泵等速微灌流系统和离子分析仪测定缺血4 h、24 h及72 h海马离子微环境（细胞外pH值、K+、Na+、Ca2+、Cl-）的动态变化,并观察脑组织的病理形态学改变及海马神经元密度变化。结果：树鼩脑皮层缺血后,其海马微环境内出现了pH值、Na+、Ca2+及Cl-含量的降低,K+含量升高,变化以缺血后4 h为著,24 h次之,72 h无显著差异;高血糖加缺血进一步加重离子稳态的紊乱,缺血后4 h的pH值、K+和Ca2+含量,以及缺血后24 h的pH值和Na+含量与正常血糖缺血组同期值相比,变化显著（P<0.05）。形态学观察显示,光化学反应后4 h照射区皮层可见梗死灶,且患侧海马CA1区也存在缺血损伤性改变;24 h病损达高峰;72 h伴随胶质细胞增生等修复性反应。相应时点高血糖加缺血组皮层及海马的损伤均大于缺血组,以缺血后24 h(P<0.01)和72 h(P<0.05)尤为显著。结论: 树鼩脑皮层血栓性缺血形成后,缺血中心区扩布所导致的微环境内酸碱平衡及离子稳态性异常可能是海马神经元继发性损伤的重要原因,高血糖可加剧缺血脑区离子微环境的紊乱。     

新生大鼠海马神经元原代无血清培养与鉴定

 摘要:目的 建立一种简单、易行的海马神经元无血清体外培养方法以获得高纯度、高活力的海马神经元。方法 取新生24h内SD大鼠,分离海马,经消化后种植于包被有Matrigel基膜的玻片上,24h后换含有N2、B27的neurobasal无血清培养基,于不同时间在倒置相差显微镜下观察细胞的生长状态;采用β-tublinⅢ免疫荧光细胞化学技术鉴定海马神经元纯度。结果 大部分海马神经元于3-24h贴壁且可长出细长突起,3d细胞具有典型神经元的形态特征, 5d神经突起进一步增多并形成稠密的网络连接,7d神经元胞体丰满,趋于成熟。经β-tublinШ免疫荧光技术鉴定纯度为（94.2±3.6）%。结论 此方法简单有效,可获得高纯度的海马神经元。     

红景天苷类似物MADP对谷氨酸诱导的大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的:观察新型红景天苷(salidroside,Sal)类似物4-甲氧基苯甲基-2-乙酰氨基2-脱氧-β-D-吡喃糖苷(4-methoxy-2-acetamido-2-deoxy-β-D-pyranoside,MADP)对谷氨酸(glutamate)损伤海马神经元的保护作用。方法:原代培养大鼠胚胎海马神经元,与浓度分别为60、120、240μmol/L的MADP或240μmol/L的Sal共同孵育24 h,加入125μmol/L谷氨酸损伤海马神经元15 min。使用相差显微镜观察海马神经元的形态变化;四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium salt colorimetry,MTT)比色法测定细胞活力;甲基百里香酚蓝(methyl thymol blue,MTB)法测定细胞内游离的钙离子浓度;采用实时荧光定量PCR技术检测细胞凋亡相关基因Bcl-2,Bax,Caspase-3的表达水平。结果:MADP或Sal预处理24 h可改善谷氨酸损伤后神经元胞体的肿胀和突起的淡化,抑制胞内游离钙离子浓度的上升,提升Bcl-2/Bax mRNA的表达水平,降低Caspase-3 mRNA的表达水平。MADP对大鼠海马神经元的保护作用优于Sal。结论:与Sal相比较,MADP更好的发挥了拮抗谷氨酸对海马神经元损伤的作用,其机制可能与抑制钙离子内流,上调Bcl-2/Bax mRNA及下调Caspase-3 mRNA的表达水平相关。     

马桑内酯对大鼠海马神经元细胞内游离钙离子浓度的影响

以荧光探针Fluo-3/AM为胞浆内游离钙特异性指示剂,通过激光扫描共聚焦显微镜动态监测急性分离SD大鼠(出生后7～14 d)海马神经元细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)的变化情况,以了解钙离子及钙通道在癫痫发病中的作用,探讨马桑内酯(coriaria lactone, CL)调节神经细胞内钙稳态的机理.实验发现,CL能使急性分离大鼠海马神经元[Ca2 ]i增加;nifedipine和低浓度NiCl2虽可延迟,但不能完全阻断这种作用.除促使电压依赖的T-、L-型钙离子通道开放外,CL尚可通过其他途径增加海马神经元内[Ca2 ]i,改变细胞兴奋性而致痫.     

急性多发脑梗死大鼠海马MARCKS mRNA表达的动态变化

目的： 观察急性多发脑梗死大鼠海马MARCKS mRNA表达的动态变化，探讨海马MARCKS基因表达动态变化与缺血损害的关系。 方法： 采用改良Kaneko法复制急性多发脑梗死模型，观察造模后大鼠的神经功能缺损评分改变，应用组织病理学方法观察模型1 h、6 h、24 h、72 h、7 d组缺血损害改变，并应用半定量PCR方法检测缺血各时点海马MARCKS mRNA表达水平。 结果： 造模后大鼠有不同程度的神经功能缺损表现，海马组织病理学改变以24 h后为著。急性缺血海马MARCKS mRNA均为过高表达，1 h开始升高，7 d最高，呈动态变化。 结论： 急性多发脑梗死大鼠海马MARCKS mRNA的表达异常升高，而MARCKS mRNA的过表达与海马缺血损害的发生密切相关。     

过氧化氢对金属硫蛋白Ⅰ/Ⅱ敲除小鼠脾细胞的氧化应激

背景：脑缺血再灌注早期,由于脾脏中有大量炎症因子浸润引发氧化应激损伤,导致脑缺血再灌注后脾细胞出现大量凋亡。 目的：观察外源性过氧化氢对金属硫蛋白Ⅰ/Ⅱ敲除小鼠脾细胞活力的影响及N-乙酰-L-半胱氨酸对过氧化氢诱导的脾细胞氧化应激损伤的保护作用。 方法：制备金属硫蛋白Ⅰ/Ⅱ敲除小鼠脾细胞悬液,分别用不同浓度(0.1,0.2,0.5,1,2 mmol/L)过氧化氢处理2 h后,MTT比色法检测细胞活力。根据MTT结果选择不同浓度过氧化氢(0.5,1 mmol/L)诱导脾细胞凋亡,实验分为6组：对照组、N-乙酰-L-半胱氨酸组、0.5 mmol/L过氧化氢组、1 mmol/L过氧化氢组、N-乙酰-L-半胱氨酸+0.5 mmol/L过氧化氢组、N-乙酰-L-半胱氨酸+1 mmol/L过氧化氢组,2 h后MTT比色法检测细胞活力,酶标仪法检测乳酸脱氢酶活力及紫外分光光度仪检测线粒体通透性转换孔的开放情况。 结果与结论：随过氧化氢浓度增加脾细胞活力呈明显下降趋势(P < 0.01),且0.2,0.5,1,2 mmol/L 过氧化氢组脾细胞活力下降幅度最大。与对照组相比,N-乙酰-L-半胱氨酸组脾细胞活力明显提高(P < 0.01),且乳酸脱氢酶活力降低(P < 0.01),线粒体通透性转换孔开放减少(P < 0.01);分别于0.5,1 mmol/L过氧化氢组相比,N-乙酰-L-半胱氨酸+0.5 mmol/L过氧化氢组、N-乙酰-L-半胱氨酸+1 mmol/L过氧化氢组脾细胞活力也明显提高(P < 0.01),乳酸脱氢酶活力降低(P < 0.01),线粒体通透性转换孔开放减少 (P < 0.01)。结果表明,金属硫蛋白Ⅰ/Ⅱ敲除小鼠随着过氧化氢浓度的升高,脾细胞活力逐渐下降,呈浓度依赖性,尤其对0.2,0.5,1,2 mmol/L过氧化氢刺激最为敏感。N-乙酰-L-半胱氨酸使乳酸脱氢酶释放和线粒体通透性转换孔的开放减少,脾细胞活力增强,以此减轻过氧化氢诱导的金属硫蛋白Ⅰ/Ⅱ敲除鼠脾细胞的氧化应激损伤。     

RNA干扰CRMP 5抑制大鼠海马神经元突起生长

目的探讨CRMP5对大鼠海马神经元突起生长的影响。方法将带FAM标记的CRMP5的特异性干扰片段及阴性对照转染培养成熟的海马神经元,用免疫荧光的方法验证干扰片段对神经元内源性CRMP5的干扰效果,并利用共聚焦显微镜观察神经元突起以及侧枝的形成。结果携带FAM的si RNA可以成功的进入细胞,分布于神经元的胞体以及树突;免疫荧光证实CRMP5 si RNA可以有效的沉默CRMP5蛋白的表达;沉默CRMP5基因表达后的海马神经元突起短小,而且缺少分支,而对照细胞突起长,分支多;定量分析显示,导入CRMP5 si RNA的细胞突起的长度较对照细胞缩短,差异显著(P0.05);突起的数目比较,一级突起数目无显著差异,而二级及其以上突起的数目明显减少,差异显著(P0.05)。结论沉默CRMP5可抑制海马神经元突起的生长和侧枝形成。     

EGCG对过氧化氢所致神经元过氧化损伤的保护作用

目的研究表没食子儿茶素没食子酸酚(EGCG)对过氧化氢(H2O2)所致神经元过氧化损伤的保护作用。方法分离胚胎18d大鼠大脑皮质神经元,原代培养2d后分为4组:①正常细胞对照组;②药物对照组(正常细胞内加EGCG);③氧化损伤组(正常细胞内加H2O2);④损伤后药物治疗组(氧化损伤30min后加入EGCG)。各组细胞再培养36h后,进行神经元形态观察、细胞活性MTT分析及细胞中丙二醛(MDA)含量的检测。结果氧化损伤组神经元多崩解成碎片,突起不完整,细胞活性显著降低,MDA含量显著升高。而在损伤后药物治疗组,神经元胞体立体感较强,多数突起完整。细胞活性显著增高,而MDA含量则显著下降。结论EGCG可抑制羟基自由基的产生,从而保护H2O2氧化损害的神经     

B-50/GAP43 localization in polarized hippocampal neurons in vitro: an ultrastructural quantitative study.

Hippocampal pyramidal neurons cultured in vitro gradually develop morphologically and biochemically distinct axons and dendrites, resulting in functional neuronal polarization [Dotti C. G. et al. (1988) J. Neurosci. 8, 1454-1468]. We have studied the distribution of the growth-associated protein B-50 in hippocampal neurons of the rat at stage 3 of development by means of light and electron microscopic immunocytochemistry. Hippocampal neurons grown for two to three days in vitro were aldehyde fixed and immunolabelled using polyclonal rabbit antibodies to B-50 and goat anti-rabbit immunoglobulins tagged with 1 nm gold particles. In order to permit visualization by both light and electron microscopy, the gold probes were silver intensified. Light microscopy demonstrated the absence of B-50 immunostaining in living neurons and the presence after permeabilization by fixation and subsequent treatment of the neurons with sodium borohydride, indicating that B-50 is located intracellularly. Both immunofluorescence and immunogold-silver labelling revealed that B-50 immunoreactivity outlined all neurites of the morphologically polarized neurons. For quantitative electron microscopy, six morphologically polarized neurons (developmental stage 3) were carefully selected from immunolabelled Epon-embedded neurons and processed completely to ultrathin sections. In this way the ultrastructural localization of B-50 has been studied in the cell body, the neurites and their growth cones. For each sectioned neuron, the relative distribution of the gold-silver deposits (representing B-50) over the plasma membrane of various cellular compartments was quantitated. B-50 is located at the plasma membrane of the neuronal cell body and all neurites including their growth cones. The density of B-50 on the plasma membrane of growth cones is not different from that of the neuritic shaft. In addition, B-50 is present on the cytosolic side of the membrane of small electron-lucent vesicles (average diameter 102.7 +/- 2.5 nm) resembling transport vesicles. These vesicles are present in the cell body and the neurites. A two-fold concentration is found in the central region of the growth cones, suggesting a role of these vesicles in axonal transport, membrane insertion and (or) recycling. Since, at the onset of neuronal polarization, B-50 is present at the plasma membrane in all compartments of the hippocampal neuron, we suggest that at this stage of development B-50 does not participate directly in the processes leading to morphological polarization.(ABSTRACT TRUNCATED AT 400 WORDS)     

A developmental study of enteric neuron migration in the grasshopper using immunological probes

Motility of enteric plexus neurons in the grasshopper Locusta migratoria depends critically on the NO/cGMP signaling cascade. This is reflected in a strong NO‐dependent cGMP staining in migrating enteric midgut neurons. In contrast, first cGMP immunoreactivity (cGMP‐IR) in the foregut enteric ganglia was detected clearly after the main migratory processes have taken place. Thus, expression of cGMP‐IR in migrating neurons is a distinct phenomenon restricted to neurons forming midgut and foregut plexus, that does not occur during convergence of neurons forming the enteric ganglia. Analysis of time lapse video microscopy of migrating midgut neurons together with an immunofluorescence study of midgut cellular structures suggests a contribution of the midgut musculature to enteric neuron guidance. Additionally, during midgut plexus formation a fasciculating signal for enteric neuron neurites appears to be provided by the cell adhesion molecule Fasciclin I. Developmental Dynamics 238:2837–2849, 2009. © 2009 Wiley‐Liss, Inc.     

脑源性神经生长因子对原代培养的下丘脑加压素能神经元的影响

目的：研究脑源性神经生长因子对下丘脑加压素能神经元发育的影响。方法：选用当日生Wistar大鼠,取下丘脑和垂体组织联合培养,向联合培养体系中加入外源性的脑源性神经生长因子,进行形态学观察以及VP免疫组织化学染色。结果：脑源性神经生长因子可明显促进加压素能神经元的早期发育,突起增长且数目增多,VP免疫阳性细胞增多,结论：脑源性神经生长因子在加压能神经元早期生长发育中发挥重要的作用。     

病毒硫氧还蛋白基因在Neuro2A细胞中的重组与表达

背景：目前对抗氧化基因硫氧还蛋白的研究逐步受到重视,但从基因治疗的角度对其研究较少。 目的：采用硫氧还蛋白转染Neuro-2A细胞,观察细胞内表达相应蛋白因子对细胞的具体保护效果,并分析其发挥保护作用的可能机制。 方法：以质粒PIRES2-EGFP-TRX转染Neuro-2A细胞,经RT-PCR鉴定,建立能够稳定表达硫氧还蛋白的细胞株。利用不同浓度的H₂O₂处理正常细胞及转染细胞,建立氧化应激模型。观察受到氧化损伤后两组细胞的形态学、存活率、还原型谷胱甘肽的浓度及细胞内DNA链断裂情况。 结果与结论：经H₂O₂作用后,两组细胞形态均出现损伤,但转染组细胞比正常组细胞损伤减轻、细胞存活率升高、细胞内还原型谷胱甘肽水平增高、DNA链断裂程度减轻。说明人类硫氧还蛋白基因可以在Neuro-2A细胞中被重组并顺利表达,对细胞具有一定的保护作用;这一作用可能是通过清除氧自由基,维持细胞内还原型谷胱甘肽水平,从而保护细胞DNA免受氧化性损伤来实现的。     

胚鼠大脑皮质一氧化氮合酶阳性神经元的体外生长发育研究

本文在体外培养条件下观察了孕 14 d SD胚鼠大脑皮质中一氧化氮合酶阳性神经元的形态和发育过程。将孕 14 d SD胚鼠大脑皮质细胞悬液接种于 2 4孔培养板 ,实验按培养龄分 4组 ,分别在接种后 5d、10 d、15d和 2 0 d终止培养 ,继而进行NA DPH - d组织化学染色 ,观察各组一氧化氮合酶阳性神经元的数量和形态。结果显示 :培养后 5d即有一定数量的一氧化氮合酶阳性神经元出现 ,在 4个实验组中 ,以 15d组的一氧化氮合酶阳性神经元的数量为最多、突起最长 ,深染细胞数量也最多 ,大部分一氧化氮合酶阳性神经元的胞体与突起均局限分布在细胞团块内 ,胞体大小不一 ,只有少量的一氧化氮合酶阳性细胞散在分布在细胞团块之间 ,其突起伸向或围绕团块。本研究结果表明 ,在胚鼠大脑皮质的神经元内即已有一氧化氮合酶存在 ,提示一氧化氮可能与胚脑的生长发育有关     

Probing mechanical adaptation of neurite outgrowth on a hydrogel material using atomic force microscopy

In this study, we describe the design and initial results of probing mechanical adaptation of neurite growth of lightly fixed neurons on a hydrogel substrate by using atomic force microscopy (AFM). It has been shown previously that cells are responsive to the physical conditions of their micro-environment, and that certain cells can adjust their own stiffness as part of the adaptation to the substrate. AFM, a powerful tool to probe micro- and nano-scale structures, has been utilized in assessing topography, morphology, and structural change of neuronal cells. We used AFM with a robust force analysis approach in this study to probe the mechanical properties of both neurites and the substrate at close proximity. We first confirmed the robustness and consistency of the approach specific to soft materials by comparing measurements made on the same reference material using different methods. Subsequently, it was found that the primary spinal cord neurons that were lightly fixed exhibited different stiffnesses between the cell body and neurites. Furthermore, in comparison to the rigidity of the substrate, the stiffness of the neurites was lower, whereas that of the neuronal cell body was higher.