黄杞苷对H2O2诱导SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨黄杞苷对H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用与分子机制。方法黄杞苷(5、10、20、40、80和160μmol·L^-1)预处理SH-SY5Y细胞12 h, MTT法检测黄杞苷对H₂O₂诱导损伤后细胞活力的影响;通过氮蓝四唑(NBT)法总超氧化物歧化酶(SOD)活力检测试剂盒和总谷胱甘肽过氧化物酶(NADPH)检测试剂盒测定黄杞苷对H₂O₂诱导损伤后SOD和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力的影响;通过流式细胞术对SH-SY5Y细胞进行活性氧(ROS)水平的测定。黄杞苷(20μmol·L^-1)预处理SH-SY5Y细胞12 h, H₂O₂孵育6、12和24 h或用黄杞苷(5、10和20μmol·L^-1)预处理细胞12 h, H₂O₂孵育12 h,采用Western blot法分别检测Nrf...     

纳米SiO2对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡诱导作用及其机制

目的:探讨纳米二氧化硅(SiO₂)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡和周期的影响,阐明其作用机制。方法:选取不同浓度粒径为90 nm的SiO₂颗粒作用于SH-SY5Y细胞,分别为0、3.125、6.250、12.500、25.000、50.000 mg·L^-1 SiO₂组,其中0 mg·L^-1组为对照组。MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率;采用AO/EB染色和 Annexin Ⅴ-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期百分比和细胞中活性氧(ROS)水平。结果:MTT检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于对照组 (P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于3.125 mg·L^-1 SiO₂组 (P<0.05)。AO/EB染色和 Annexin V-FITC/PI法检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于3.125 mg·L^-1 SiO₂组(P<0.05)。FCM检测,3.125、6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞中ROS水平高于对照组 (P<0.05)。25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₀/G₁期细胞百分比低于3.125 mg·L^-1SiO₂组和对照组(P<0.05),50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₂/M期细胞百分比高于对照组 (P<0.05)。结论:纳米SiO₂ 可降低SH-SY5Y细胞的活力,诱导细胞凋亡,增加细胞中ROS水平,可干扰细胞周期进程,对SH-SY5Y细胞的增殖具有抑制作用。     

CaN抑制剂对H2O2诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响

目的：探讨过氧化氢（H₂O₂）诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡以及钙调神经磷酸酶（CaN）抑制剂他罗利姆（FK506）对细胞的保护作用,为心肌缺血/再灌注所致的心肌损伤及拮抗机制提供实验依据。方法：将大鼠H9c2心肌细胞株体外培养进行实验,实验分为正常对照组（n=6）和H₂O₂各处理组（n=6）。正常对照组采用生理盐水,实验各组分别用50、100、200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理1、 6和24 h后,用罗丹明（Rhodamme-123）荧光探针检测心肌细胞线粒体膜电位(Δψmt)变化,用Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;并采用100 μmol•L^-1 H₂O₂处理6 h建立大鼠心肌细胞凋亡的损伤模型,给予高、低剂量FK506（0.60和0.15 μmol•L^-1）干预,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率。结果：①100、200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理组1 h 时线粒体膜电位均较对照组显著升高（P<0.01）, 6和24 h时,200和400 μmol•L^-1组Δψmt值均低于100 μmol•L^-1 组（P<0.05）,且400 μmol•L^-1组低于200 μmol•L^-1组（P<0.05）;②200和400 μmol•L^-1 H₂O₂处理组1　h 时心肌细胞凋亡率和坏死率均较对照组显著增加（P<0.05）,24　h达高峰。③ 高、低剂量FK506干预组与单纯100 μmol•L^-1H₂O₂处理组比较,心肌细胞凋亡率均明显降低（P<0.01）,高、低剂量组比较差异无显著性（P>0.05）。结论：H₂O₂可损伤心肌细胞线粒体,引起线粒体膜电位下降,导致细胞凋亡。CaN抑制剂对H₂O₂诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡具有保护作用。     

人参皂苷对过氧化氢诱导的HepG2细胞损伤的保护作用

目的：探讨人参皂苷对过氧化氢（H₂O₂）诱导的HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法：体外培养HepG2细胞,采用不同浓度（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8和1.0 mmol·L^-1）H₂O₂诱导HepG2细胞损伤。将HepG2细胞分为空白组、对照组、损伤组、人参皂苷对照组和人参皂苷保护组。10、20和40μmol·L^-1人参皂苷RH1、F1、RD、RO和RE分别孵育细胞3 h,H₂O₂损伤2 h,采用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞存活率,CAA法检测细胞抗氧化活性,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）荧光探针法检测细胞中活性氧（ROS）水平,WST-1法检测细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果：H₂O₂半数抑制浓度（IC₅₀）为0.4 mmol·L^-1。与损伤组比较,10、20和40μmol·L^-1人参皂苷RH1、F1、RD、RO和RE预处理后,H₂O₂诱导氧化损伤的HepG2细胞存活率均有不同程度的升高,其中人参皂苷F1保护组细胞存活率升高最明显（P<0.05）。与对照组比较,10、20和40μmol·L^-1人参皂苷RH1、F1、RD、RO和RE保护组HepG2细胞存活率差异无统计学意义（P>0.05）。人参皂苷F1的半数效应浓度（EC₅₀）为（15.82±0.82）μmol·L^-1,CAA当量为（1 275.20±33.90）μmol TE/100 μmol·L^-1人参皂苷F1。与对照组比较,损伤组细胞中ROS水平明显升高（P<0.05）,SOD活性明显降低（P<0.05）;与损伤组比较,人参皂苷F1保护组细胞中ROS水平明显降低（P<0.05）,SOD活性明显升高（P<0.05）。结论：人参皂苷F1通过提高细胞抗氧化能力,降低细胞中ROS水平,提高细胞SOD活性对H₂O₂诱导的HepG2细胞氧化应激损伤起到保护作用。     

黄芪甲苷对新生乳鼠心肌细胞过氧化氢损伤的保护作用

目的: 探讨黄芪甲苷(ASⅣ ) 对培养的心肌细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法: 体外培养的新生Wistar大鼠心肌细胞分为对照组、 0.1%二甲基亚枫（DMSO）溶剂组、H₂O₂损伤组 (0.2 mmol•L^-1)、阳性药黄芪注射液及 ASⅣ小、中、大（3 、10及30　mg•L^-1）剂量组。药物预先处理心肌细胞30 min 后,加入H₂O₂损伤心肌细胞24 h,观察ASⅣ对心肌细胞形态学的影响,MTT法测定心肌细胞存活力以及测量乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮（NO）含量的变化。结果: H₂O₂ 损伤组心肌细胞部分皱缩,细胞核暗淡,伪足消失;ASⅣ各剂量组心肌细胞损伤程度减轻,心肌细胞核折光性较H₂O₂ 损伤组好,伪足略变细; ASⅣ各剂量组细胞存活力均高于H₂O₂ 损伤组(P<0.05 或 P<0.01); ASⅣ10及30 mg•L^-1剂量组LDH、MDA含量低于H₂O₂损伤组(P<0.05 或 P<0.01),SOD、 NO含量高于H₂O₂损伤组 (P<0.05 或 P<0.01)。 结论:ASⅣ可对抗H₂O₂ 对心肌细胞的损伤,其机制与提高心肌细胞抗氧化损伤能力、诱导NO生成有关。     

双氢青蒿素对神经母细胞瘤细胞生长的抑制作用及其机制

目的: 探讨双氢青蒿素(DHA)对神经母细胞瘤细胞生长的抑制作用,阐明DHA抗神经母细胞瘤的作用机制。方法: 实验分为空白对照组和DHA组(DHA终浓度分别为0.05、0.50、5.00和50.00 μmol·L^-1)。采用MTT法检测DHA作用后SH-SY5Y细胞的增殖率,流式细胞术分析DHA作用后SH-SY5Y细胞周期的变化,ELISA和Western blotting法分析DHA作用后SH-SY5Y细胞中cyclin D1和caspase-3蛋白表达水平的变化。结果: 不同浓度DHA作用SH-SY5Y细胞24、48和72h时均可抑制细胞的生长,与空白对照组比较,0.50、5.00和50.00 μmol·L^-1 DHA组SH-SY5Y细胞增殖率明显下降(P<0.05或P<0.01);细胞生长的密度随药物浓度的升高而降低。与空白对照组比较,50.00 μmol·L^-1 DHA组SubG₁期细胞的百分比增加(P<0.05);G₀/G₁期细胞百分比先升高再降低,S期与G₂/M期细胞的百分比减少。与空白对照组比较,50.00 μmol·L^-1 DHA组SH-SY5Y细胞中cyclinD1蛋白表达水平降低(P<0.05);与空白对照组比较,50.00 μmol·L^-1DHA组caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论: DHA可能通过阻滞肿瘤细胞周期、促进肿瘤细胞凋亡而抑制神经母细胞瘤细胞的生长。     

miR-19b通过调节线粒体功能抑制H2O2诱导H9c2心肌细胞凋亡

目的：研究microRNA(miR)-19b抑制H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡并探讨其机制。方法：使用过氧化氢(H₂O₂)诱导H9c2心肌细胞损伤模型,将H₂O₂诱导的H9c2细胞分别转染miR-19b模拟物、抑制剂及其阴性对照。大鼠H9c2心肌细胞株分为6组,对照(Control)组,H₂O₂组,H₂O₂+miR-19b mimic阴性对照(NC)组,H₂O₂+miR-19b mimic组,H₂O₂+miR-19b inhibitor组,H₂O₂+miR-19b inhibitor NC组。采用活性氧(ROS)试剂盒检测细胞氧化应激水平,JC-1法检测细胞线粒体膜电位(MMP)变化,试剂盒检测细胞色素c与线粒体共定位,Western Blot...     

刺五加叶皂苷B对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的：探讨刺五加叶皂苷B（C-B）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响,阐明其对氧化应激损伤所致的心肌细胞凋亡的抑制作用。方法：乳鼠心肌细胞行原代培养,取自主搏动良好的心肌细胞随机分为正常对照组、H2O2 损伤组(200 μmol•L^-1H2O2诱导心肌细胞凋亡)、100 mg•L^-1C-B 组和200 mg•L^-1 C-B 组,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,AnnexinⅤ-FITC 流式细胞术检测凋亡率,分光光度法检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测细胞Caspase-3、PARP、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：与正常对照组比较,200 μmol•L^-1H₂O₂组心肌细胞有损伤性改变,细胞
存活率明显降低（P<0.001）,凋亡率升高（P<0.001）,Caspase-3活性增加（P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达减少,Caspase-3及Bax蛋白表达增多,PARP蛋白降解增多。与H2O2损伤组比较,100及200 mg•L^-1C-B组心肌细胞损伤性改变均减轻,细胞存活率增加（P<0.05或P<0.01）,凋亡率降低（P<0.001）,Caspase-3活性降低（P<0.05或P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达和Caspase-3蛋白表达减少,PARP蛋白降解减少（依据电泳条带的宽窄及明暗度判断蛋白表达程度）,且200 mg•L^-1C-B组的作用更明显。结论：C-B对H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡有一定的抑制作用,可能与其调节细胞内凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达有关。     

北五味子总木脂素对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用及其抑制NF-κB/iNOS/NO信号通路的机制

目的:观察北五味子总木脂素(SCL)对H₂O₂诱导的PC12细胞氧化应激损伤的保护作用及对NF-κB/iNOS/NO信号通路的影响,并探讨其机制。方法:将处于对数生长期PC12细胞分为对照组、模型组(H₂O₂ 200 μmol·L^-1)、SCL高剂量组(SCL 30 mg·L^-1+H₂O₂ 200 μmol·L^-1,SCL₁组)和SCL低剂量组(SCL 10 mg·L^-1+ H₂O₂ 200 μmol·L^-1,SCL₂组)。对照组PC12细胞不做任何处理;模型组PC12细胞用200 μmol·L^-1H₂O₂孵育6 h造成细胞氧化应激损伤模型;SCL₁和SCL₂组分别采用不同剂量SCL预处理PC12细胞2 h后再用H₂O₂(200 μmol·L^-1)继续孵育6 h。MTT法检测各组细胞存活率,酶标仪检测培养基上清中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平,流式细胞术检测活性氧(ROS)水平,免疫组织化学和Western blotting法检测PC12细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和核转录因子(NF-κB) P65蛋白的表达情况。结果:与对照组比较,模型组PC12细胞存活率明显降低(P<0.01),细胞上清液中LDH活性升高(P<0.01),SOD活性降低(P<0.01),MDA和NO水平升高(P<0.01),细胞中ROS水平升高(P<0.01),NF-κB阳性细胞数显著增加(P<0.01),iNOS和NF-κB P65蛋白表达水平均升高 (P<0.01);与模型组比较,SCL₁和SCL₂组细胞存活率明显升高(P<0.05或P<0.01),细胞上清中LDH活性降低(P<0.05或P<0.01),SOD活性升高(P<0.01),MDA和NO水平降低(P<0.05或P<0.01),细胞中ROS水平降低(P<0.01),NF-κB阳性细胞数明显减少(P<0.05或P<0.01),iNOS和NF-κB P65蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:SCL对氧化应激损伤的PC12细胞具有一定的保护作用,其机制可能与抑制NF-κB/iNOS/NO信号通路、减少氧自由基的产生和减轻脂质过氧化损伤有关联。     

食源性原花青素对SH-SY5Y细胞生长的抑制作用及其机制

目的：探讨食源性原花青素对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞生长的抑制作用,并阐明其作用机制。方法：培养SH-SY5Y细胞,将细胞分为对照组及10、20和40mg·L^-1食源性原花青素组,各组细胞中加入含不同浓度（0、10、20和40mg·L^-1）食源性原花青素的培养基,采用噻唑蓝（MTT）法检测药物作用24、48和72h时SH-SY5Y细胞增殖率,流式细胞术检测药物作用72 h时不同细胞周期SH-SY5Y细胞百分率,Annexin Ⅴ凋亡试剂盒检测药物作用72 h时SH-SY5Y细胞的凋亡率。结果：与对照组比较,各时间点10、20和40mg·L^-1食源性原花青素组SH-SY5Y细胞增殖率均降低,作用48和72h时20mg·L^-1食源性原花青素组细胞增殖率差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,作用24、48和72h时40mg·L^-1食源性原花青素组细胞增殖率差异有统计学意义（P<0.01）。与对照组比较,40mg·L^-1组食源性原花青素组细胞中G₀/G₁期细胞百分率升高（P<0.01）,G₂/M期细胞百分率降低（P<0.01）。与对照组比较,10、20和40mg·L^-1食源性原花青素组细胞凋亡率均明显升高（P<0.01）。结论：食源性原花青素可抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的生长,其机制主要是阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡。     

参附注射液对氧化应激血管内皮损伤及相关信号转导通路的影响

目的 研究参附注射液对氧化应激血管内皮损伤的作用及相关信号转导通路的影响.方法 培养血管内皮细胞ECV304,MTT法筛选H2 O2造模和参附注射液的干预浓度;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)含量;Hoechst染色和流式细胞术检测评估细胞凋亡;Western blot法检测Cleaved Caspas...     

敲低EphB1基因对过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞氧化损伤的影响

目的：探讨敲低EphB1基因对过氧化氢（H₂O₂）诱导的大鼠心肌H9c2细胞氧化损伤的影响,为EphB1基因治疗心血管疾病提供依据。方法：体外培养大鼠心肌H9c2细胞,分为空白组（不做任何处理）、H₂O₂组（H₂O₂细胞损伤）、阴性对照组（转染siRNA control）和转染si-EphB1组（转染si-EphB1后H₂O₂细胞损伤）。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组H9c2细胞中EphB1基因表达水平,噻唑蓝（MTT）法检测各组H9c2细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,DCFH-DA探针法检测各组细胞内活性氧（ROS）水平,分光光度计法检测各组细胞中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。结果：与空白组比较,H₂O₂组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）,阴性对照组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平无明显变化（P>0.05）;与H₂O₂组比较,转染si-EphB1组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。与空白组比较,H₂O₂组细胞存活率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,ROS和MDA水平升高（P<0.05）,SOD水平降低（P<0.05）,而阴性对照组细胞存活率、凋亡率、ROS、MDA和SOD水平差异无统计学意义（P>0.05）;与H₂O₂组比较,转染si-EphB1组细胞存活率升高（P<0.05）,细胞凋亡率降低（P<0.05）,ROS和MDA水平降低（P<0.05）,SOD水平升高（P<0.05）。结论：敲低EphB1基因能够抑制H₂O₂诱导的大鼠心肌细胞氧化损伤,起到心肌保护作用,其机制与提高心肌细胞存活率、抑制细胞凋亡、改善抗氧化酶活性和提高细胞内氧化应激产物清除能力有关。     

过氧化氢通过内质网应激信号通路对Hela细胞自噬和凋亡的诱导作用

目的:利用过氧化氢(H₂O₂)构建人宫颈癌Hela细胞体外氧化应激模型,观察其对Hela细胞自噬和凋亡的影响,并探讨H₂O₂与内质网应激(ERS)信号通路之间的关系。方法:以1 mmol·L^-1 H₂O₂构建体外氧化应激模型;实验分为对照组、H₂O₂ 4 h组、H₂O₂ 8 h组和H₂O₂ 12 h组,各组细胞分别以H₂O₂作用0、4、8及12 h后,利用Western blotting法检测各组Hela细胞中ERS及凋亡、自噬相关蛋白表达。结果:与对照组比较,各H₂O₂组Hela细胞中Cleaved Caspase-3表达水平升高(P<0.05),Cleaved Caspase-4表达水平亦明显升高(P<0.05);各H₂O₂ 组Hela细胞中LC3-Ⅱ表达水平高于对照组(P<0.05),GRP78表达水平亦高于对照组(P<0.05);随着H₂O₂作用时间的延长,各H₂O₂组Hela细胞中IRE1a表达水平明显升高(P<0.01),p-JNK表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论:在H₂O₂所构建的体外氧化应激模型中H₂O₂能够诱导Hela细胞发生自噬和凋亡,且该诱导作用由ERS信号通路介导。     

慢病毒介导LOX-1基因RNA干扰抑制氧化应激诱导心肌细胞凋亡

摘要：目的构建大鼠凝集素养氧化低密度脂蛋白受体（LOX-1）RNA干扰慢病毒表达载体并观察LOX-1在氧化应激诱导心肌
细胞凋亡中的作用。方法设计针对大鼠LOX-1的shRNA序列,将shRNA序列插入到pLentiLox3.7（pLL3.7）慢病毒载体中,构
建慢病毒载体pLL3.7-LOX1。慢病毒载体及包装载体dR8.9、VSVG共转染293FT细胞包装慢病毒。慢病毒侵染H9C2大鼠心
肌细胞,RT-PCR鉴定对LOX-1抑制效率,CCK-8、Hochest33258染色检测LOX-1对H2O2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响。结
果通过双酶切鉴定,证实shRNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入的序列正确,抑制LOX-1能抑制H2O2诱导的细胞活
力下降,减轻H2O2诱导的心肌细胞凋亡,与H2O2组比较均有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建靶向大鼠LOX-1基因RNAi
慢病毒载体,LOX-1激活可能在H2O2诱导心肌细胞凋亡中发挥重要作用。
     

褪黑素对过氧化氢诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞氧化应激的改善作用及其机制

目的:研究褪黑素对过氧化氢(H2O2)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)氧化应激损伤的保护作用,并探讨其作用机制.方法:体外培养SH-SY5Y细胞,将SH-SY5Y细胞分为对照组、H2O2组、不同浓度褪黑素组和2-苯基-N-乙酰色胺(Luzindole)组.对照组为正常培养SH-SY5Y细胞,H2O2组加入...     

过氧化氢抑制三氧化二砷诱导的伯基特氏淋巴瘤细胞凋亡

目的 探讨过氧化氢(H₂O₂)对三氧化二砷(As₂O₃)诱导人类伯基特氏淋巴瘤细胞凋亡的影响及双染法荧光显微技术在检测细胞凋亡中的作用。方法 应用As₂O₃诱导人类伯基特氏淋巴瘤细胞株BJAB细胞凋亡,采用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)核染料双染法荧光显微镜和透射电镜对细胞死亡进行观察及定量分析。结果 BJAB细胞经As₂O₃处理后,荧光显微镜下可见大多数细胞出现细胞染色质凝集、核边集、核碎裂等凋亡的特征性改变;在低剂量(200 μmol/L)H₂O₂的影响下,抑制了As₂O₃诱导的细胞凋亡,降低细胞的死亡率;细胞的死亡方式由凋亡转变为核固缩性坏死,表现为既无凋亡的特征性改变,又非典型的细胞坏死,死亡细胞的细胞核呈固缩状态而非肿胀。结论 低浓度(200 μmol/L)H₂O₂可抑制临床治疗浓度的As₂O₃诱导的人类伯基特氏淋巴瘤BJAB细胞凋亡;双染法荧光显微镜技术不但可明确区分细胞凋亡及坏死,还可判断早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞,并可进行定量分析,是一种良好的细胞凋亡检测方法。