川芎嗪对高糖环境大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质含量的影响

目的：探讨川芎嗪对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖及其细胞外基质含量的影响。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞株,分对照组、高糖组、TMP组,分别培养12h、24h、48h,CASY细胞计数仪计数细胞存活率;以CCK-8法检测细胞增殖;以ELISA法检测细胞上清液细胞外基质ColⅣ及FN的含量。结果：各TMP浓度组之间存活率无统计学差异（P〉0.05）;与对照组比较,高糖下培养24h、48hMCs增殖显著增快（P〈0.01）,分泌的ColⅣ及FN含量增多（P〈0.05）;与高糖组比较,TMP各组MCs增殖显著减慢（P〈0.01）,分泌ColⅣ及FN减少（P〈0.01或P〈0.05）。结论：川芎嗪可以有效抑制高糖的促增殖作用并能减少系膜细胞外基质的增加。     

红参发酵产物对高糖下大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质降解的影响

目的：探讨红参发酵产物（FRGE）对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖和细胞外基质（ECM）降解的影响,阐明FRGE对糖尿病肾病（DN）的防治作用及可能机制。方法：将GMCs分为正常对照（NG）组、高糖（HG）组、高糖＋不同浓度（3.75、7.50和15.00 mg·L^-1）FRGE组。四甲基偶氮唑盐（MTT）光吸收法观察各组GMCs的增殖率,酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养细胞上清中Ⅳ型胶原蛋白（Col Ⅳ）的水平,蛋白免疫印迹技术（Western blotting）检测基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶组织抑制物2（TIMP-2）蛋白表达水平。结果：与NG组比较,HG组GMCs增殖率升高（P<0.01）,Col Ⅳ水平升高（P<0.01）,TIMP-2蛋白表达水平上调（P<0.01）,MMP-2蛋白表达水平下调（P<0.01）;与HG组比较,高糖＋不同浓度FRGE组GMCs增殖率均降低（P<0.01）,Col Ⅳ水平降低（P<0.01）,TIMP-2蛋白表达水平下调（P<0.01）,MMP-2蛋白表达水平上调（P<0.01）。结论：FRGE可通过抑制高糖诱导的大鼠GMCs增殖,促进ECM的降解,延缓DN的发生发展。     

蜕皮甾酮对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质含量的影响

目的：观察蜕皮甾酮对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖、细胞外基质的影响。方法：体外培养大鼠MCs细胞株,分低糖组、高糖组、高糖＋蜕皮甾酮组（EDS组）,分别作用12、24、48h,MTT法检测细胞增殖活力,ELISA法检测细胞上清中FN的含量。结果：与低糖组比较,高糖组12h、24h、48h MCs增殖显著增快（P〈0.01）,FN含量明显增加（P〈0.05）;与低糖组比较,EDS在浓度〉1×10-5mol/L时MCs增殖显著减慢（P〈0.01）;与高糖组比较,EDS 1×10-6mol/L组各时间点及1×10-7mol/L组24h、48h MCs增殖显著减慢（P〈0.05或P〈0.01）,EDS 1×10-6mol/L组各时间点FN含量均有降低（P〈0.05或P〈0.01）;EDS 1×10-10、1×10-8mol/L组各时间点FN含量差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：①蜕皮甾酮在浓度〉1×10-5mol/L时对MCs有明显的细胞毒性作用。②蜕皮甾酮可抑制高糖诱导的MCs增殖。③蜕皮甾酮能减少高糖培养大鼠MCs细胞外基质的增加。     

缓激肽对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的观察缓激肽(BK)对高糖浓度下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响。方法采用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测系膜细胞增殖,酶联免疫(ELISA)法测细胞外基质分泌。结果高糖(30.0 mmol/L)环境可促进肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。BK、ACEI(贝那普利)均抑制高糖环境下肾小球系膜细胞的增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。结论高糖可促使肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌。ACEI抑制肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的作用机制可能与减少BK的降解有关。     

高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中NO的变化及其对细胞外基质的影响

目的 探讨高糖培养的肾小球系膜细胞中一氧化氮（NO）合成的变化,以及上述变化对细胞外基质的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,按干预方法分为正常组（NG组,5.56 mmol·L-1 DMEM）,高糖组（HG组,25 mmol·L-1 DMEM）、一氧化氮供体组（SNP组,5.56 mmol·L-1 DMEM＋100 μmol·L-1 SNP）、NO清除剂组（C-PTIO 组,25 mmol·L-1 DMEM＋200 μmol·L-1 C-PTIO）,以Griess比色法测定培养上清中NO水平;用ELISA法测定培养上清中Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量.结果 高糖培养条件下上清中NO增多（P〈0.05）,Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量增加（P〈0.01）,应用C-PTIO可显著降低上清中NO的含量,Ⅳ型胶原、层黏蛋白的含量也降低.结论 高糖可诱导大鼠肾小球系膜细胞产生NO,异常增多的NO又可导致系膜细胞中Ⅳ型胶原、层黏蛋白的积聚.     

当归补血汤对高糖条件下系膜细胞增殖及细胞外基质表达的影响

目的:研究当归补血汤对培养在高糖条件下系膜细胞(GMC)增殖及细胞上清液中层粘连蛋白(LN)、Ⅳ胶原纤维(ColⅣ)、纤维连接蛋白(FN)的表达的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义。方法:①采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定经体外培养的大鼠肾小球系膜细胞在各种处理因素的作用下上清液中LN、Ⅳ型胶原及FN的表达情况;②利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法动态观察各种处理因素的作用下各组GMC增殖情况。结果:高糖能明显刺激体外培养的GMC增殖,同时促进GMC分泌FN、LN和ColⅣ(P<0.05或P<0.01)。而当归补血汤能抑制GMC增殖及GMC分泌FN、LN和ColⅣ,并呈一定量效关系(P<0.05或P<0.01),即随糖或药物浓度的增加,GMC增殖、GMC分泌FN、LN和ColⅣ的能力也相应增加或减少。结论:高糖可促进GMC增殖、细胞外基质(ECM)蛋白分泌,当归补血汤能明显抑制高糖条件下GMC增殖、及其分泌FN、LN和ColⅣ,说明当归补血汤能直接抑制GMC增殖及分泌ECM,从而发挥预防肾小球纤维化及硬化的发生、发展,进而延缓DN的进展。     

高糖对大鼠系膜细胞NADPH氧化酶的影响

目的 探讨高糖对大鼠系膜细胞NADPH氧化酶表达及活性的影响.方法 高糖体外培养大鼠系膜细胞,RT-PCR技术检测系膜细胞内NADPH氧化酶亚基p22phox mRNA的表达,流式细胞术检测超氧离子(.O2-)和过氧化氢(H2O2)反映NADPH氧化酶活性.结果 高糖(10mM)培养3天及5天组,p22phox mRNA表达较正常组和培养1天组升高(P<0.05).随着葡萄糖浓度升高和作用时间的延长随着葡萄糖浓度升高和作用时间的延长,.O2-和H2O2的表达增多(P<0.05).结论 高糖使系膜细胞NADPH氧化酶表达增多、活性增强.     

浅谈高糖高脂环境下肾小球内皮细胞与系膜细胞间相互作用对细胞外基质产生的影响

目的:探讨高糖高脂条件下肾小球内皮细胞与系膜细胞间相互作用对细胞外基质(ECM)产生的影响。方法:建立内皮细胞与系膜细胞共培养模型,实验分为正常对照组、甘露醇组、高糖组、高脂组、高糖高脂组及阻断剂干预组,分别培养12,24,48h后,ELISA法测定细胞上清液Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤维连接蛋白(Fn)含量。结果:(1)高糖高脂培养条件下,共培养组细胞上清液ColⅣ、Fn的含量较单培养组明显增高(P<0.05);(2)氯沙坦可抑制高糖高脂引起的Fn和ColⅣ升高(P<0.05);结论:(1)高糖高脂环境下,内皮细胞和系膜细胞间存在相互作用,这种作用能促进ECM-ColⅣ、Fn的产生;(2)氯沙坦能通过抑制ECM的产生影响细胞间的相互作用。     

阿托伐他汀和卡托普利对高压培养下大鼠系膜细胞外基质的影响

目的 观察阿托伐他汀和卡托普利干预对连续周期性波动的高静水压下大鼠肾小球系膜细胞(RMC)细胞外基质(ECM)的影响.方法 RMC分别在生理压力(40 mm Hg,PP)、中压(60 mm Hg,MP)、高压(80 mm Hg,HP)环境下,不同药物(阿托伐他汀、卡托普利)中培养1、3、5、7 d.采用Western Blotting法测定细胞裂解液中胶原Ⅰ和Ⅳ、纤维连结生长因子(FN)的含量.结果 与PP组第1天相比,PP组第3、5、7天胶原Ⅰ/Ⅳ、FN浓度无明显变化;MP和HP组从第1天开始可见胶原Ⅰ/Ⅳ、FN水平呈时间依赖性升高,7 d达到最高.阿托伐他汀和卡托普利均能抑制MP、HP组胶原Ⅰ/Ⅳ和FN水平上升,胶原Ⅰ在1 d时,阿托伐他汀吸光度(A)值为1.06±0.12,1.16±0.14 vs 0.78±0.05;卡托普利A值为0.96±0.09,1.02±0.13 vs 0.71±0.06(P＜0.05).二者合用可使胶原Ⅰ/Ⅳ和FN水平进一步下降.结论 周期性波动的高静水压可使ECM积聚.阿托伐他汀和卡托普利能减轻高静水压引起的ECM积聚.二者合用存在协同作用.     

雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增生、肥大及细胞外基质合成的影响

目的:观察雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增生、肥大及细胞外基质合成的影响.方法:在高糖状态下培养系膜细胞,予以不同剂量雷帕霉素进行干预,采用MTT的方法观察细胞增生能力,并用流式细胞仪检测各组系膜细胞体积,以前向角散射光平均强度表示细胞大小,Western印迹法检测细胞中纤维连接蛋白(FN)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)的表达变化.结果:同正常糖及甘露醇组比较,高糖可使肾小球系膜细胞增生且发生肥大,同时高糖环境下系膜细胞分泌的FN及ColⅣ显著增加(P＜0.05),而雷帕霉素能显著抑制高糖的上述作用(P＜0.05),且呈剂量依赖性.结论:雷帕霉素可以抑制高糖状态下系膜细胞的增生、肥大及细胞外基质的合成,且呈剂量依赖性,有望用于糖尿病肾病的防治.     

RNA干扰蛋白聚糖酶-1表达对体外培养的软骨细胞基质代谢的影响

目的 探讨RNA干扰蛋白聚糖酶-1(aggrecanase-1)对大鼠肋软骨细胞基质代谢的影响.方法 体外分离培养大鼠肋软骨细胞,采用脂质体转染试剂将针对aggrecanase-1的载体质粒转染软骨细胞,观察转染后细胞生长曲线、细胞形态的变化,RT-PCR检测aggrecanase-1 mRNA水平的变化.Westernblotting检测蛋向多糖(aggrecan)的变化.结果 RNA干扰aggreanase-1对细胞生长速度及形态无明显影响,可明显降低aggrecanase-1的mRNA表达水平(P<0.05).增加aggrecan的含量(P<0.05).结论 抑制aggrecanase-1可减少蛋白多糖的降解,RNAi是一种有效的研究软骨细胞基质代谢的工具.     

硫氢化钠对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞的影响

目的 观察硫氢化钠(NaHS,外源性的H2S供体)对高浓度葡萄糖环境下原代人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的作用。方法 以0.125%胰酶和0.01%EDTA灌注法获得HUVECs,分别用5.5mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖、25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS及50μmol/L NaHS处理72h,采用MTT法检测各组细胞的存活率,Western blot法检测H2S生成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-Iyase,CSE)的变化。结果 MTT检测表明,25mmol/L葡萄糖组的HUVECs存活率比5.5mmol/L葡萄糖组下降28.37%(P<0.05),而50μmol/L NaHS和25mmol/L葡萄糖共同处理组的细胞存活率比25mmol/L葡萄糖组上升30.3%(P<0.05),50μmol/L NaHS组与5.5mmol/L葡萄糖组无明显差异(P>0.05)。与5.5mmol/L葡萄糖组相比,以25mmol/L葡萄糖处理72h后能使CSE蛋白的表达下降(P<0.05),而25mmol/L葡萄糖+50μmol/L NaHS 则能改善这种损害作用(P<0.05),CSE蛋白的表达比25mmol/L葡萄糖组增强。结论 高浓度葡萄糖降低人原代脐静脉内皮细胞的生长和存活率,减少CSE蛋白的表达,而NaHS能够减轻高浓度葡萄糖对CSE的作用。     

Antisense Smad2 inhibits high glucose-stimulated production of extracellular matrix in cultured rat glomerular mesangial cells

Transforminggrowthfactor-β1(TGF-β1)is amultifunctionalpolypeptidethatregulatesanum-berofcellularprocesses,includingcellprolifera-tion,differentiation,apoptosis,migration,matrix synthesis,andtheimmuneresponse[1,2].Inchron-icrenaldiseases,TGF-β1isakeymediatorofex-tracellularmatrix(ECM)accumulation[3].Oneof thetargetrenalcellsforTGF-β1isglomerular mesangialcellsthatarecapableofproducingcom-ponentsofECM,suchascollagens,lamininand fibronectin[4,5].Recentstudiesindicatedthatinhi-bitionofT…     

高糖对大鼠GMC表面β1整合素表达和ECM分泌的影响

目的 观察高糖对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)表面β1整合素表达和细胞外基质(ECM)分泌的影响。方法 应用不同浓度的葡萄糖刺激培养GMC，采用MTT法检测细胞增殖，RT-PCR法检测GMC表面β1整合素的表达，ELISA法检测纤维连接蛋白(FN)、层粘蛋白(LM)的分泌情况。结果 高糖抑制GMC的增殖，促进β1整合素的表达，且与FN和LM的分泌呈显著正相关，并具有浓度依赖性。结论 高血糖作为糖尿病肾病的启动因素可能是通过上调β1整合素mRNA的表达，从而促进ECM成分FN和LM的合成分泌。     

高糖对大鼠GMC表面β1整合素表达和ECM分泌的影响

目的观察高糖对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)表面β1整合素表达和细胞外基质(ECM)分泌的影响.方法应用不同浓度的葡萄糖刺激培养GMC,采用MTT法检测细胞增殖,RT PCR法检测GMC表面β1整合素的表达,ELISA法检测纤维连接蛋白(FN)、层粘蛋白(LM)的分泌情况.结果高糖抑制GMC的增殖,促进β1整合素的表达,且与FN和LM的分泌呈显著正相关,并具有浓度依赖性.结论高血糖作为糖尿病肾病的启动因素可能是通过上调β1整合素mRNA的表达,从而促进ECM成分FN和LM的合成分泌.