注射砒霜大鼠的血清对白血病细胞凋亡及Bcl-2基因表达的影响

目的：探讨中药砒霜治疗白血病的作用机理。方法：运用血清药理学法孵育人白血病细胞株K562细胞，通过流式细胞术检测注射砒霜大鼠的血清对细胞凋亡及bcl-2基因表达的影响。结果：注射砒霜大鼠的血清能使K562细胞G0-Gl期细胞百分数减少，S期细胞百分数增加，Bcl-2表达减少，具有诱导k562细胞凋亡的作用。     

去甲斑蝥素诱导K562细胞凋亡的影响

目的:探讨去甲斑蝥素(NCTD)对人白血病细胞株K562细胞增殖的抑制作用。方法:用流式细胞仪测定NCTD对K562细胞体外培养过程中细胞毒性、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果:NCTD对K562细胞有较强的增殖抑制作用;在作用24小时后达到凋亡高峰;24小时各浓度NCTD作用后,G_1期细胞百分数均减少,S期与G_2+M期细胞百分数均增加,呈现G_2+M期阻滞现象。结论:NCTD可诱导K562细胞凋亡,抑制瘤细胞分裂增殖,且有明显的时间和剂量效应。     

芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A、细胞周期素B1表达的影响

目的：观察芒果苷对白血病K562细胞周期分布及细胞周期素A（CyclinA）、细胞周期素B（CyclinB1）表达的影响,以进一步探讨芒果苷抗白血病的分子作用机制。方法：应用流式细胞仪检测细胞周期的分布,用RT-PCR方法检测Cyclin A及Cyclin B1 mRNA表达水平。结果：芒果苷作用24 h后,K562细胞G2/M期细胞增多,出现G2/M期阻滞,并呈现剂量依赖性;Cyclin A mRNA和Cyclin B1 mRNA的表达随作用浓度的增加而逐渐增强,呈显著的剂量依赖性。结论：芒果苷阻滞白血病K562细胞周期于G2/M期,明显上调K562细胞Cyclin A和Cyclin B1 mRNA表达水平,芒果苷诱导K562细胞G2/M期阻滞可能是其抗白血病作用的分子机制之一。     

解毒化瘀方含药血清抑制白血病K562细胞增殖作用的研究

目的：研究解毒化瘀方对白血病K562细胞增殖的影响。方法：应用中药血清药理学方法制备解毒化瘀方的兔血清，用台盼蓝拒染、MTT法、流式细胞仪检测含药血清对K562细胞增殖的影响。结果：台盼蓝拒染试验和MTT法细胞毒作用均显示含药血清可抑制K562细胞的增殖，抑制率随含药血清浓度的增高而增高，流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示，中、高剂量含药血清组G1、G2期DNA含量明显减低，凋亡细胞百分率较高。结论：解毒化瘀对白血病K562细胞增殖具有抑制作用．     

解毒化瘀含药血清抗白血病细胞K562及K562／A的体外实验研究

目的：以解毒化瘀法立意,选取解毒化瘀中药复方,拟通过体外细胞培养证实其是否存在抗白血病细胞及多药耐药白血病细胞的作用。方法：采用MTT比色法,选择白血病细胞K562及阿霉素诱导的白血病多药耐药细胞株K562／A为靶细胞,观察不同浓度解毒化瘀含药兔血清对其细胞毒作用。结果：解毒化瘀含药兔血清对K562及K562／A均有明显的抑制作用,且其对K562／A的细胞毒作用呈剂量依赖性。结论：解毒化瘀中药在抑制白血病细胞生长及白血病多药耐药细胞生长方面具有深入研究的价值。     

紫草素对DNA拓扑异构酶Ⅰ活性的抑制作用和诱导人白血病K562细胞的凋亡

目的：研究紫草素对DNA拓扑异构酶I催化活性和K562白血病细胞凋亡的影响。方法：从K562白血病细胞提取拓扑异构酶I，通过DNA解螺旋试验评价该药对拓扑异构酶I催化活性的抑制作用。用MTT法测定了该药对K562白血病细胞增殖的抑制作用。应用流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳观察了该药对细胞凋亡的诱导作用。结果：紫草素可显著抑制拓扑异构酶I的解螺旋活性(IC50=75．Oμmol/L)。该药能显著抑制K562的细胞增殖，并随剂量增大而抑制作用增强。紫草素O．3～3μmol/L对K562细胞作用24h后，其凋亡率为20％～70％。琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA“lad-der”。结论：紫草素显著抑制拓扑异构酶I的催化活性，并能诱导K562白血病细胞凋亡。     

低密度脂蛋白-阿霉素复合物对白血病细胞的特异性杀伤作用的研究

目的：以低密度脂蛋白(LDL)为阿霉素(ADM)的载体，制备低密度脂蛋白-阿霉素(LDL-ADM)复合物，以游离ADM为对照，体外研究LDL-ADM复合物对白血病细胞株K562、M2亚型白血病细胞和健康外周血单个核细胞的细胞毒作用。方法：采用Vitols方法制备成LDL-ADM复合物。用MTT法测定LDL—ADM复合物对K562细胞、M2亚型白血病细胞和健康外周血单个核细胞的抑制率。结果：LDL—ADM复合物在较高药物浓度(0．01mg/mL以上)作用下，对K562细胞的生长抑制作用明显高于健康外周血单个核细胞，前者为后者的1．6倍，而药物浓度低于0．005mg/mL时，LDL-ADM组与ADM组对K562细胞的抑制率无明显统计学差异。对M2型白血病细胞的抑制率与K562相似。而两组药物对健康外周血单个核细胞的抑制率无明显差异。结论SDL可以作为ADM的有效载体而把二者制备成LDL-ADM复合物．该复合物可以使ADM对白血病细胞的杀伤作用增强，但不增加对正常细胞的毒性，因而，LDL-ADM复合物对白血病细胞的杀伤具有相对特异性。     

当归多糖诱导K562白血病细胞凋亡的实验研究

目的从细胞凋亡的角度探讨当归多糖(APS)抑制白血病细胞增殖的机制。方法体外培养白血病细胞株K562,培养时添加25 mg/L、250 mg/L、2 500 mg/L当归多糖,分别于第2,4,6天,取细胞用台盘蓝拒染法进行活细胞计数;流式细胞术分析细胞周期分布;免疫组织化学检测bcl-2抗凋亡基因的表达。结果细胞生长曲线显示25~2 500 mg/L的当归多糖对白血病细胞株K562有显著抑制作用,且呈剂量效应关系。流式细胞术结果显示250 mg/L作用后S,G2+M期K562细胞数减少,G0/G1期细胞增多。APS诱导细胞后bcl-2明显降低(P<0.05)。结论APS对白血病细胞株K562细胞的增殖具有显著抑制作用,APS通过阻止K562细胞进入S期而抑制其DNA合成,bcl-2表达降低可能是APS诱导白血病细胞凋亡重要途径之一。     

独角莲含药血清对肿瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

目的：观察独角莲含药血清在体外对K562白血病细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用血清药理学方法制备独角莲含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,采用MTT比色法观察独角莲含药血清对K562细胞增殖的影响;采用流式细胞仪（FCM）及DNA片段凝胶电泳观察和检测细胞凋亡情况。结果：不同浓度独角莲含药血清对K562细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。当含药血清作用96h后,其抑制作用开始减弱。流式细胞仪检测显示,独角莲含药血清能够诱导K562细胞的凋亡,且凋亡率随着剂量的增加而增大,与空白对照组比较（P〈0.01）;DNA琼脂糖凝胶电泳谱可见典型的DNA梯形带形成。结论：独角莲含药血清具有抑制K562白血病细胞增殖、促进细胞分化和诱导细胞凋亡的作用,其作用强度与时间-浓度呈正相关。独角莲含药血清对K562细胞发生细胞毒作用可能与诱导K562细胞凋亡有关。     

当归多糖对K562细胞增殖抑制与诱导分化的实验研究

目的：探讨中药当归的主要有效成分当归多糖（APS）在白血病分化疗法中的应用价值。方法：应用细胞计数、流式细胞术、形态学、细胞化学、细胞分化免疫表型等现代实验血液学检测技术，研究APS对人红白血病细胞株K562细胞的增殖与分化的作用。结果：APS对K562细胞有明显的增殖抑制作用（P＜0．05）；经APS诱导后K562细胞向红系、粒单系细胞方向分化增加，联苯胺染色、糖原染色和过氧化物酶染色阳性率、细胞表面分化抗原CD15表达明显增强（P＜0．05）；APS诱导后K562细胞表达C－MYC明显降低（P＜0．05）。结论：APS体外可抑制K562细胞增殖，并诱导其向红系、粒系细胞方向分化，是较有开发和应用前景的天然诱导剂。     

芒果甙对K562细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

目的:研究芒果甙对白血病K562细胞端粒酶活性及其细胞周期的影响。方法:采用端粒重复序列扩增(telomeric repeat amplification protocol,TRAP)PCR-ELISA方法检测K562细胞经芒果甙作用前后端粒酶活性的变化,应用流式细胞仪检测细胞周期的分布。结果:经芒果甙作用后,K562细胞端粒酶活性下降,随药物浓度增加和作用时间的延长,其抑制作用增强;芒果甙作用24小时后,K562细胞G2/M期细胞增多,S期细胞减少,出现G2/M期阻滞,并呈现剂量依赖性。结论:芒果甙能抑制K562细胞的端粒酶活性,其机制可能与其细胞周期阻滞作用有关。     

清毒饮、养正片影响白血病K562细胞增殖周期、细胞凋亡的实验研究

目的:观察清毒饮、养正片诱导人白血病细胞株K562细胞凋亡及对细胞增殖周期的作用;探索其时效关系,为临床提供选择最佳用药时机的实验基础.方法:制备含清毒饮、养正片药物血清,建立相应的培养体系,加入含药小鼠血清,培养K562细胞株;分别于培养12、24、36、48、72h收集细胞,固定、染色、上流式细胞仪进行细胞周期、细胞凋亡的检测.结果:人白血病K562细胞株存在有自然凋亡,正常小鼠血清无诱导该细胞凋亡的作用;清毒饮、阿糖胞苷具有诱导细胞凋亡的作用,且随着培养时间的延长凋亡率愈加明显.清毒饮对K562细胞周期的影响,还表现出明显的时间依赖性;随着培养时间的延长,当细胞出现明显凋亡时,细胞株S期显著下降,G0/G1期升高,提示清毒饮和清毒加养正合剂都可引起K562细胞株的G0/G1期阻滞,对凋亡的敏感性增强.结论:清毒饮能抑制K562细胞增殖、促进细胞分化、诱导细胞凋亡,提示该中药复方具有从分子水平抗肿瘤细胞增殖的效应,这也是中药复方协同化疗药物治疗白血病在增效减毒方面的关键机制;清毒饮对K562细胞发生细胞毒作用,是通过抑制其细胞周期S期、将其阻滞于G1期,并通过促进K562细胞凋亡实现的,其作用强度与时间呈密切正相关.     

灵芪胶囊含药血清对人红白血病K562细胞增殖抑制作用的影响

目的：观察灵芪胶囊（LQC）含药血清在体外对K562白血病细胞增殖抑制作用的影响。方法：采用血清药理学方法制备灵芪胶囊含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,并测定抑制率、分裂指数以及克隆形成能力,观察灵芪胶囊含药血清对肿瘤细胞的抑制作用;用W right-G iemsa染色方法观察肿瘤细胞形态的变化。结果：不同浓度灵芪胶囊含药血清对K562细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系;灵芪胶囊含药血清对肿瘤细胞的分裂指数和克隆形成能力均具有显著的降低作用,在一定的时间内与剂量呈正相关,同时亦使肿瘤细胞的形态结构发生改变。结论：灵芪胶囊含药血清对K562白血病细胞具有细胞毒作用,其直接杀伤和破坏肿瘤细胞的作用是灵芪胶囊抗肿瘤的主要机理之一。     

补阳还五汤及其有效成分体外给药对脑细胞膜流动性的影响

 目的 比较研究补阳还五汤及其有效成分黄芪甲苷、阿魏酸、川芎嗪、芦丁、绿原酸、紫檀烷苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、毛蕊异黄酮苷、芍药苷、丹皮酚、槲皮素体外给药对缺血 再灌损伤大鼠脑细胞膜流动性的影响。方法 大鼠颈总动脉结扎30 min 再灌2 h作为脑中风动物实验模型。用自旋标记ESR法测脑细胞膜流动性。结果 病理切片证实脑组织发生脑中风的典型病变。损伤大鼠脑细胞膜流动性较正常大鼠减低;补阳还五汤及其有效成分对正常细胞无影响但可使损伤大鼠脑细胞膜流动性增大,不同程度地恢复到接近于正常细胞膜流动性水平。结论 细胞膜流动性是一个敏感而重要的生物学指标,反映细胞的活性状态。可用这一新的技术方法来研究补阳还五汤及其组方的配伍机理,为中药方剂的改进提供理论依据。     

半枝莲逆转白血病细胞株K562/A02耐药性的实验研究

目的:探讨半枝莲对白血病细胞株K562/A02耐药性逆转能力的影响。方法:体外培养K562细胞,分别加入高三尖杉酯碱(HHT)、长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)3种药物得到耐药细胞株K562/A02,MTT比色法检测半枝莲含药血清对3种K562/A02耐药性逆转作用的影响。结果:不同浓度的半枝莲含药血清均能够逆转K562/A02细胞的多药耐药性。结论:半枝莲在一定程度上能够逆转肿瘤细胞的多药耐药性,提高对化疗药物的敏感性。     

人参皂苷Rg1诱导人白血病K562细胞株衰老的实验研究

目的:观察人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病K562细胞株衰老的作用及其机制。方法:MTT比色法检测Rg1对K562细胞增殖的影响,筛选最佳作用浓度及时间(20μmol.L-1,48 h)。流式细胞术检测Rg1对细胞周期的影响;SA-β-Gal染色检测细胞阳性染色百分率;RT-PCR法检测衰老相关基因p16,p53,p21,Rb的表达;电镜观察细胞衰老超微形态学改变。结果:Rg1在体外能明显抑制K562细胞增殖,使细胞阻滞于G2/M期;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率显著增高(P<0.05);细胞衰老相关基因的表达上调(P<0.05);超微结构观察显示细胞增大,异染色质凝集、碎裂,线粒体体积增大,溶酶体体积增大、数目增多等衰老形态学变化。结论:Rg1能诱导K562细胞衰老,p53-p21-Rb,p16-Rb信号转导通路在其衰老调控中起重要作用。     

天佛参逆转K_(562)/ADM细胞株耐药性的作用及机制探讨

目的 :研究复方天佛参口服液 (TFS)逆转人红白血病耐药细胞株K56 2 /ADM耐药性的作用 ,探讨该药对K56 2 /ADM细胞膜P -糖蛋白 (P -gp)的功能及表达的影响。方法 :体外培养K56 2 /ADM细胞 ,分别用MTT法、流式细胞仪、免疫组化法等方法观察TFS对K56 2 /ADM细胞生长的抑制作用 ,检测K56 2 /ADM细胞膜上P -gp的功能及表达情况。结果 :TFS在非毒性浓度以下能逆转细胞耐药 ,与ADM合用能抑制K56 2 /ADM细胞生长 (P <0 .0 0 5 ) ;K56 2 /ADM细胞内药物浓度升高 ;K56 2 /ADM细胞上P -gp的高表达 ,经TFS作用后其表达下降 ,且 48h后完全消失 ,呈时间依赖性。结论 :TFS能逆转K56 2 /ADM耐药性 ,其机制与抑制K56 2 /ADM细胞膜上P -gp高表达有关。     

Cytotoxic effects induced by combination of heliantriol B2 and dequalinium against human leukemic cell lines

Natural occurring compounds are considered an important source of antitumoral agents. In the present study, the cytotoxic potential of three pentacyclic triterpenes isolated from Chuquiraga erinacea (Asteraceae), against the human leukemic cell lines NB4 and K562 was assessed. Heliantriol B2 (HB2) showed the highest cytotoxic activity after 24 h treatment showing IC₅₀ values of 1.98 ± 0.12 µm and 3.52 ± 0.14 µm for NB4 and K562 cells, respectively. This activity was higher than that of the reference compound dequalinium (DQA). Apoptosis and necrosis induced by HB2 in both NB4 and K562 cell lines were analysed by Annexin V/PI labeling. Mitochondrial alterations including reactive oxygen species (ROS) production and mitochondrial transmembrane potential (ΔΨm) were also tested. The results demonstrated that HB2 induced cell death by apoptosis and necrosis and showed enhanced cytotoxic effects in combination with DQA. Besides, HB2 induced ROS overproduction in NB4 cells and a slight decrease of ΔΨm. Consequently, our findings prompt further studies on the HB2 mechanism of action and its selectivity to tumor cells in order to assess the potential of HB2 as an agent for cancer treatment. Copyright © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.     

半夏醇提取液逆转多药耐药细胞系K562/A02的耐药性

目的:观察非细胞毒性浓度(抑制率≤5％)半夏醇提取液对耐阿霉素的人白血病细胞系K562/A02多药耐药性的逆转作用,并探讨其逆转机制.方法:将细胞悬液接种于72孔培养板中,细胞数为2 ×108个/L,半夏醇提取液(2.5,5,10,20,40μg·L-1)处理K562/A02细胞72 h后,采用MTT法测定半夏醇提取液的细胞毒性及其对K562/A02细胞敏感性的影响,用流式细胞仪检测非细胞毒性浓度的半夏醇提取液处理后K562/A02细胞膜表面糖蛋白p170表达的变化与细胞内柔红霉素的浓度,应用SPSS 16.0软件包对实验结果进行统计学处理.结果:半夏醇提取液对K562/A02细胞有一定的细胞毒作用,其非细胞毒性质量浓度为6.5 μg·L-1,非细胞毒性浓度半夏醇提取液可显著降低阿霉素对K562/A02细胞的半数抑制浓度( IC50),使K562/A02细胞的IC50由原来的(30.9±0.11) μg·L-1降低至(10.1±0.21) μg·L-1,其逆转倍数为3.06倍;半夏醇提取液作用于K562/A02细胞后,细胞膜糖蛋白p170的表达从91.21％下调至45.12％ (P ＜0.01);柔红霉素外渗试验显示,半夏醇提取液作用于K562/A02细胞后,可使细胞内化疗药物的浓度明显增加.结论:半夏醇提取液可部分逆转多药耐药细胞系K562/A02细胞对阿霉素的耐药性,半夏醇提取液逆转白血病细胞耐药性是通过下调了白血病细胞膜糖蛋白p170的表达,使其将化疗药物泵出细胞外的功能受到了抑制,从而使化疗药物在白血病细胞内能达到有效浓度,从而可以杀灭耐药的白血病细胞系.     

黄芪总黄酮和毛蕊异黄酮对K562细胞的抑制作用及其机制研究

目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragali Radix,TFA)和毛蕊异黄酮在体外实验条件下对人红白血病K562细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:以K562细胞为实验对象,运用MTT方法测定不同浓度TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞的增殖抑制作用,PI单染法检测药物对K562细胞周期的作用,Annexin V/PI双染法检测药物对K562胞诱导凋亡的影响,并且应用RT-PCR技术检测药物作用下K562细胞中Cyclin D1 mRNA水平表达的变化.结果:与阴性对照组相比,TFA及毛蕊异黄酮处理24h后,TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞有明显的抑制作用,其IC5o分别为98.63,130.32 mg·L-1;TFA在100 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为7.8％,毛蕊异黄酮在130 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为5.8％;药物对K562细胞持续作用24h后,可以使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少;经IC50剂量的药物处理后,K562细胞内的Cyclin D1 mRNA水平明显降低.结论:TFA和毛蕊异黄酮具有抑制K562细胞增殖作用;将细胞生长周期阻滞在G0/G1期以及降低细胞内Cyclin D1 mRNA水平可能是它们抑制K562细胞生长的主要作用机制.