lncRNA GK-IT1通过调控醛缩酶A影响非小细胞肺癌细胞的恶性进展

目的·探讨长链非编码RNA (long non-coding RNA,lnc RNA) GK-IT1通过调控醛缩酶A (aldolase A,ALDOA对非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer,NSCLC）细胞A549及H358恶性进展的影响。方法·应用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测42对NSCLC组织和癌旁组织以及NSCLC细胞系中GK-IT1的表达。荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）实验检测GK-IT1在A549及H358中的亚细胞定位。RNA免疫共沉淀（RNA immunoprecipitation,RIP）检测GK-IT1与ALDOA的相互作用关系。以2条GK-IT1的小干扰RNA序列（Si-GK-IT1#1和Si-GK-IT1#2）及空白对照（Si-NC）转染A549及H358细胞,再以Si-GK-IT1#2和ALDOA过表达质粒共转染上述细胞系。设置Si-NC组、Si-GK-IT1#1及Si-GK-IT1#2组,采用CCK...     

臭椿酮对非小细胞肺癌H460的作用和机制研究

目的 探究臭椿酮（ailanthone）抗非小细胞肺癌的作用及分子机制。 方法 CCK8检测ailanthone对H460非小细胞肺癌增殖的影响;Cultrex细胞迁移和侵袭法检测ailanthone对细胞迁移和侵袭的作用;细胞免疫荧光检测ailanthone对cyclin d1表达的影响;WB检测ailanthone对细胞蛋白激酶B（Akt）、蛋白酪氨酸激酶Src磷酸化和细胞周期蛋白D1（cyclin d1）蛋白表达的影响。结果 CCK8结果表明,于对照组相比,不同浓度（0.2、0.4、0.6、0.8和1.0μM）的ailanthone处理下H460细胞的增殖能力明显受抑制（P<0.05或P<0.001）;Cultrex 96孔细胞迁移法检测结果显示,于对照组（1.00±0.07）相比,ailanthone组（0.35±0.03,P＜0.01）明显抑制细胞迁移;Cultrex BME细胞侵袭法表明,ailanthone组（0.27 ± 0.04,P＜0.001）与对照组（1.00 ± 0.07）比明显抑制细胞侵袭;细胞免疫荧光实验显示,ailanthone处理细胞（14.67 ±1.20,P＜0.001）与对照组（50.00 ±1.73）比,明显抑制了Cyclin d1阳性细胞数;WB结果显示,H460细胞在ailanthone处理后Akt和Src的磷酸化明显降低,同时cyclin d1的表达明显下降。结论 ailanthone抑制非小细胞肺癌H460的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能是抑制Akt的磷酸化抑制细胞的迁移和侵袭,同时抑制Src的磷酸化抑制细胞周期相关蛋白cyclin d1的表达。     

lncRNA ATP6V1B1-AS1对非小细胞肺癌增殖与侵袭的作用及其机制

目的 探究长链非编码RNA(lncRNA) ATP6V1B1-AS1对非小细胞肺癌增殖与侵袭的作用及其机制。方法 实时定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌细胞系（A549、SK-MES-1、1299、H460）及正常人支气管上皮细胞系（16-HBE）中ATP6V1B1-AS1的表达;从UCSC Xena数据库下载癌症基因组图谱（TCGA）泛癌数据集,分析泛癌中ATP6V1B1-AS1表达情况。采用CCK8实验、Transwell实验检测对照组、过表达ATP6V1B1-AS1组、敲减ATP6V1B1-AS1组细胞增殖及侵袭能力;Western blotting检测侵袭相关蛋白E-cadherin、MMP9、Snail表达。通过生物信息学方法构建ATP6V1B1-AS1参加调控的内源竞争RNA(ceRNA)网络,分析ATP6V1B1-AS1对非小细胞肺癌增殖与侵袭可能的作用机制。利用基因本体（GO）数据库及京都基因和基因组数据库（KEGG）富集分析ATP6V1B1-AS1参与调控的生物学功能。结果 与正常人支气管上皮系比较,非小细胞肺癌细胞系A549、 H460、H1299、SKM...     

microRNA-335对人非小细胞肺癌细胞迁移?侵袭及增殖能力的影响

目的:研究 microRNA-335(miR-335)在非小细胞肺癌中的表达及其对细胞迁移?侵袭能力与增殖能力的影响?方法:采用荧光实时定量PCR检测miR-335在12对非小细胞肺癌与癌旁正常组织中的表达差异,以及miR-335在非小细胞肺癌SPCA-1细胞与肺正常上皮细胞16HBE中的表达差异;应用Lipofectamine 2000瞬时转染anti-miR-335下调SPCA-1细胞中miR-335的表达,并通过荧光实时定量PCR验证;划痕实验检测 miR-335对SPCA-1细胞迁移能力的影响;Transwell侵袭实验检测miR-335对SPCA-1细胞侵袭能力的影响;MTT实验及克隆形成实验检测miR-335对SPCA-1细胞增殖能力的影响?结果:与癌旁正常组织比较,miR-335在非小细胞肺癌组织中显著高表达(P < 0.05);与16HBE细胞比较,miR-335在SPCA-1细胞中显著高表达(P < 0.05);利用Lipofectamine 2000瞬时转染anti-miR-335入SPCA-1细胞24 h时miR-335表达明显减弱(P < 0.01);抑制miR-335表达对SPCA-1细胞迁移和侵袭能力有显著的抑制作用,抑制率分别为(42.8 ± 2.7)%(P < 0.01)及(73.25 ± 4.4)%(P < 0.01);抑制miR-335表达对SPCA-1细胞的增殖能力无明显影响?结论:miR-335在非小细胞肺癌中呈高表达,miR-335低表达能显著抑制SPCA-1细胞的迁移和侵袭能力,但对SPCA-1细胞的增殖能力无明显影响?     

METTL7B促进非小细胞肺癌细胞侵袭的机制研究

目的：探讨METTL7B对非小细胞肺癌细胞侵袭的机制。方法：通过western blot和qPCR检测METTL7B在A549细胞和正常人上皮细胞（BEAS-2B）分别在蛋白和mRNA水平上表达情况;利用慢病毒在A549细胞中过表达METTL7B,通过western blot 检测过表达效果,细胞transwell侵袭实验检测过表达METTL7B对A549细胞的侵袭能力;再利用双向电泳技术对过表达METTL7B的A549细胞中的蛋白质组学进行分析,寻找METTL7B促进非小细胞肺癌细胞侵袭的机制。结果：qPCR 和western blot 结果均显示METTL7B在A549中的表达明显高于正常的人肺上皮细胞。使用的慢病毒能有效地使METTL7B在A549中过表达,侵袭实验结果显示过表达METTL7B可增强A549细胞的侵袭能力。通过双向电泳技术分析过表达METTL7B细胞中差异蛋白,发现共有12个差异表达蛋白,其中6个上调,6个下调,且通过western blot 实验显示,过表达METTL7B细胞中的SOD1和SAE1表达上调。结论：METTL7B可能通过上调SOD1和SAE1的表达,从而增强非小细胞肺癌细胞的侵袭能力。     

C5a激活Akt1⁃ERK1/2通路促进NSCLC细胞的增殖和迁移

目的：探讨C5a对非小细胞肺癌（non?small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖和迁移的影响及其潜在的分子机制。方法：RT?PCR和Western blot检测人正常支气管上皮细胞系BEAS?2B和3种NSCLC细胞系（H1703、PC9、H1299）中C5a受体（C5aR）的表达;CCK?8和划痕实验检测C5a对PC9细胞增殖和迁移的影响;Western blot检查C5a刺激PC9细胞后蛋白激酶Akt1、细胞外信号调节激酶1/2（extracellular signal?regulated kinase,ERK1/2）和蛋白激酶C?α（protein kinase C?α,PKC?α）表达及磷酸化水平;用Akt1抑制剂Perifosine和ERK1/2抑制剂U0126分别处理PC9细胞后再给予C5a刺激,Western blot检测Akt1和ERK1/2的表达和磷酸化及其上下游调控关系,CCK?8和划痕实验检测Perifosine和U0126对细胞增殖和迁移的影响。结果：PC9细胞C5aR的表达水平显著高于其他细胞;C5a可明显促进PC9细胞的增殖和迁移能力;C5a刺激PC9细胞后,可显著增强Akt1和ERK1/2的磷酸化;Akt1和ERK1/2抑制剂均能明显降低C5a刺激PC9细胞后引起的细胞增殖和迁移,且Akt1抑制剂不仅能减弱Akt1的磷酸化,还能减弱ERK1/2的磷酸化,而ERK1/2抑制剂则仅能阻断其自身的磷酸化。结论：C5a刺激NSCLC细胞后可能通过激活Akt1?ERK1/2通路促进细胞的增殖和迁移。     

血管内皮生长因子在六价铬诱导的肺支气管上皮细胞Beas-2B恶性转化中的作用

目的: 探究在六价铬\[Cr(Ⅵ)\]诱导的人支气管上皮细胞（human bronchial epithelial cells 2B,Beas 2B）恶性转化过程中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）在迁移、侵袭及血管生成等方面的生物学作用及其可能机制。方法: 通过对VEGF高表达的恶转细胞Cr(Ⅵ) Beas 2B转染重组VEGF质粒和siRNA,分别上调和下调VEGF的表达,利用蛋白免疫印迹检测VEGF表达及迁移侵袭相关蛋白表达,划痕实验、Transwell实验、免疫荧光实验检测细胞迁移、侵袭等运动能力的改变,以及小管生成实验检测细胞血管生成能力的变化。结果： 重组质粒过表达VEGF上调了恶转细胞中VEGF、基质金属蛋白酶 9、磷酸化黏着斑激酶和磷酸化Src蛋白的表达,下调了钙黏蛋白的表达;重组质粒过表达VEGF增强迁移、侵袭及血管生成能力;siRNA干扰处理结果相反。结论： VEGF通过影响迁移、侵袭相关蛋白的表达从而调控细胞迁移、侵袭以及血管生成,参与六价铬致癌过程。     

miR-28调控非小细胞肺癌细胞增殖、迁移与侵袭的作用机制

目的 探讨微小RNA-28 (miR-28)对非小细胞肺癌细胞株细胞A549和H1299的影响及其作用机制。方法 通过转染miR-28 mimics过表达miR-28,转染miR-28 inhibitor抑制miR-28的表达,其中miR-28 NC作为对照组。通过CCK-8实验、克隆形成试验和细胞周期实验分别评估过表达miR-28、抑制miR-28对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;通过划痕实验、Transwell迁移及Boyden小室侵袭实验分别评估过表达miR-28、抑制miR-28对非小细胞肺癌细胞迁移与侵袭能力的影响;通过生物信息学软件分析发现Ras相关蛋白1b (RAP1B)可能是miR-28的潜在靶基因并利用荧光素酶报告基因实验进行验证;通过RT-qPCR和Western blot方法检测过表达和抑制miR-28表达后A549和H1299细胞RAP1B的表达。结果 与miR-28 NC比较,miR-28 mimics组A549和H1299细胞的增殖速度明显减慢,迁移及侵袭能力明显减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);miR-28 inhibitor组A549和H1...     

lncRNA MNX1-AS1通过调控miR-218-5p影响非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡及迁移

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MNX1-AS1通过调控miR-218-5p的表达对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法qRT-PCR检测MNX1-AS1和miR-218-5p在肺癌细胞系及肺正常上皮细胞系中的表达;采用双荧光素酶报告基因实验和RNA pull down实验验证MNX1-AS1和miR-218-5p之间的靶向关系;干扰A549细胞中MNX1-AS1和miR-218-5p的表达后,MTT、流式细胞术和Transwell实验检测MNX1-AS1靶向miR-218-5p对癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果与肺正常上皮细胞系相比,肺癌细胞系中MNX1-AS1表达升高,miR-218-5p表达降低(P＜0.05);荧光素酶报告基因实验显示,MNX1-AS1可与miR-218-5p结合导致荧光素酶活性显著降低(P＜0.05);RNA pull down实验证实miR-218-5p能特异性结合MNX1-AS1(P＜0.05);抑制A549细胞中MNX1-AS1的表达后,miR-218-5p水平上调,细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低,凋亡率显著升高;与MNX1-AS1抑制剂组相比,共抑制MNX1-AS1和miR-218-5p的细胞增殖、迁移、侵袭能力升高,凋亡率下降(P＜0.05)。结论MNX1-AS1可以通过靶向下调miR-218-5p的表达影响非小细胞癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭。     

CCR10的表达对非小细胞肺癌细胞在增殖、迁移和侵袭的影响

目的 本研究旨在探讨趋化因子受体10（chemokine receptor 10,CCR10）的表达对NSCLC细胞在增殖、迁移和侵袭方面的影响。方法 应用基因工程技术将CCR10siRNA导入NSCLC细胞中,干扰CCR10的正常表达,进而研究CCR10对NSCLC细胞在增殖、迁移和侵袭等功能方面的影响。结果 转染了CCR10siRNA的人NSCLC腺癌细胞A549的细胞增殖率明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,空白对照组与阴性对照组的细胞增殖率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组及阴性对照组比较,转染了CCR10siRNA的人NSCLC腺癌细胞A549的细胞迁移率明显低于空白对照组及阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,空白对照组和阴性对照组的细胞迁移率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。转染了CCR10siRNA的人NSCLC腺癌细胞A549的细胞侵袭率明显低于空白对照组及阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,空白对照组及阴性对照组的细胞侵袭率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 CCR10促进NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭能力,CCR10可能参与非小细胞肺癌的发生、发展、侵袭及转移过程。     

TET2对非小细胞肺癌细胞活性及运动能力的影响

目的 观察甲基双加氧酶( ten-eleven translocation,TET2)表达量对非小细胞肺癌细胞增殖能力、凋亡率、细胞周期、迁移和侵袭的影响。方法 通过RT-PCR和Western blot法检测不同非小细胞肺癌细胞TET2基因和蛋白的表达情况,对高表达TET2的细胞敲低其基因表达(shRNA1),对低表达TET2的细胞过表达其基因(OE-TET2)。通过CCK-8检测TET2表达量对细胞增殖的影响,通过流式细胞术观察TET2表达量对细胞凋亡和细胞周期的影响,通过迁移实验和侵袭实验观察TET2表达量对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 H1299细胞的TET2基因和蛋白表达量最高,A549的最低(P<0.05)。OE-TET2组细胞增殖能力显著低于正常A549,shRNA1组细胞增殖能力显著高于正常H1299细胞(P<0.05)。OE-TET2组细胞凋亡率显著高于正常A549,shRNA1组细胞凋亡率显著低于正常H1299细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。OE-TET2组细胞迁移和侵袭细胞数量显著低于正常A549,shRNA1组细胞迁移和侵袭细胞显著高于正常H1299细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TET2可降低非小细胞肺癌增殖能力,提高其凋亡率,减弱其迁移和侵袭能力     

非小细胞肺癌患者CX3CL1表达与肿瘤侵袭和迁移能力相关性分析

目的 探究非小细胞肺癌患者趋化因子C-X3-C配体1(CX3CL1)表达与肿瘤侵袭、迁移能力相关性及其作用机制.方法 选取河南省人民医院2018年3月-2021年3月收治的非小细胞肺癌患者100例进行研究,均进行CX3CL1表达检测,根据检测结果将所有患者分为CX3CL1高表达组(CX3CL1＞0.8 mg/mL,n=...     

不同分级NSCLC病灶内FoxM1表达的变化及其与增殖、侵袭基因表达的相关性

目的研究不同分级非小细胞肺癌(NSCLC)病灶内FoxM1的表达及其与NSCLC相关增殖、侵袭基因表达的内在联系,方法选择2016年9月—2018年5月中国人民解放军总医院肿瘤内科接受肺癌根治术后的NSCLC患者118例作为NSCLC组,根据病理检查结果分级将其分为高分化亚组49例、中分化亚组54例、低分化亚组15例。同期在医院进行手术治疗的肺腺瘤患者50例作为良性组。对比各组病灶组织中FoxM1基因表达量,以及与NSCLC相关增殖、侵袭基因表达量的差异。采用Pearson检验评估NSCLC病灶内FoxM1基因表达量与增殖、侵袭基因表达的内在联系。结果 NSCLC组病灶中FoxM1基因表达量高于良性组,随NSCLC分化程度降低,FoxM1基因表达量增加(t/P_(NSCLC.vs.良性组)=21.825/0.000,F/P_(NSCLC组内值)=184.926/0. 000)。随NSCLC分化程度降低,病灶中NSCLC相关增殖基因PAX6、HOXB7、EIF5A2 mRNA的表达量增加,抑制基因DLC-1、Keap1、PTEN mRNA的表达量减少(F/P_(NSCLC组内值)=159.043/0.000,172. 949/0. 000,167. 401/0. 000,287.337/0. 000,117. 509/0. 000,134. 506/0. 000); NSCLC相关侵袭基因PTTG1、LSD1、TEM8 mRNA的表达量增加,KLF4、LKB1、RKIP mRNA的表达量减少(F/P_(NSCLC组)内值=190.261/0.000,254. 442/0.000,267. 734/0. 000,438. 880/0. 000,298. 887/0. 000, 180. 279/0. 000)。NSCLC病灶内FoxM1基因表达量与增殖基因PAX6、HOXB7、EIF5A2 mRNA的表达量呈正相关(r/P=0.419/0. 009、0. 388/0. 013、0.465/0.006),与DLC-1、Keap1、PTEN mRNA的表达量呈负相关(r/P=-0. 347/0. 015、-0. 417/0. 010、-0. 503/0. 000);与侵袭基因PTTG1、LSD1、TEM8 mRNA的表达量呈正相关(r/P=0. 377/0. 016、0.412/0. 009、0. 509/0. 000),与KLF4、LKB1、RKIP mRNA的表达量呈负相关(r/P=-0.453/0.003、-0.409/0.010、-0.386/0.019)。结论随NSCLC病理分化程度下降,病灶中FoxM1基因表达量增加,且FoxM1基因具体表达量与NSCLC相关增殖、侵袭基因表达量直接相关,对NSCLC的发生发展具有重要意义。     

富集AT序列的特异性结合蛋白1通过激活核糖核苷酸还原酶#br# 小亚基M2促进非霍奇金淋巴瘤的恶性进展

目的：探讨富集AT序列的特异性结合蛋白1(special AT rich sequence binding protein-1,SATB1)与核糖核苷酸还原酶(ribonucleotide reductase,RR)小亚基M2(RRM2)在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin lymphoma,NHL)恶性进展中的相互作用机制。方法：收集NHL及慢性淋巴结炎患者各42例。Western印迹检测NHL及慢性淋巴结炎患者颈部淋巴结冰冻组织中的SATB1和RRM2的蛋白表达水平;RT-PCR检测过表达和干扰SATB1后RRM2 mRNA的表达水平的变化;MTT及EdU渗入法检测过表达SATB1及同时干扰RRM2后对细胞生长增殖的影响。Transwell法检测过表达SATB1及同时干扰RRM2后对细胞迁移和侵袭的影响。结果：NHL患者淋巴结冰冻组织中SATB1及RRM2表达水平明显高于慢性淋巴结炎患者,且两者的表达水平呈正相关。过表达SATB1后,RRM2蛋白和mRNA的表达水平上调;干扰SATB1后,RRM2蛋白和mRNA的表达水平下降。MTT及EdU检测结果表明过表达SATB1后NHL细胞生长增殖能力增加,而同时干扰RRM2后生长增殖能力受到抑制。Transwell结果表明过表达SATB1后NHL细胞迁移侵袭能力增加,而同时干扰RRM2后迁移侵袭能力受到抑制。结论：SATB1在NHL中高表达,其可能通过上调RRM2基因的表达促进NHL的生长增殖、迁移和侵袭。     

非小细胞肺癌中Biglycan高表达与肺癌的恶性程度相关

目的 研究Biglycan在人非小细胞肺癌中的表达,并分析其表达与肺癌临床病理特征及恶性程度的关系。方法 采用免疫组织化学（SP）法检测102例非小细胞肺癌石蜡包埋组织中Biglycan蛋白的表达情况,分析其表达与临床病理因素之间的相关性。应用Western blot法及RT-PCR 方法检测肺癌细胞中Biglycan 的表达情况,采用脂质体介导法将Biglycan干扰片段Biglycan siRNA转染入肺癌细胞系A549和SK-MES-1后,利用RT-PCR和Western blot法检测Biglycan在mRNA和蛋白水平的表达情况,并应用MTT法、Transwell法检测干扰Biglycan表达后对肺癌细胞增殖和侵袭的影响。结果 Biglycan在非小细胞肺癌中高表达,其高表达与肺癌高TNM分期（P=0.022）、低分化（P=0.034）和淋巴结转移（P=0.028）显著相关。Biglycan在肺癌细胞系中呈高表达。在干扰Biglycan表达后,与未处理组及转染对照片段control siRNA组相比,Biglycan的mRNA（P<0.05）和蛋白（P<0.05）表达均明显下降,细胞生长增殖能力[P<0.01（2～4天）;P<0.01（2～4天）]减弱,细胞侵袭数目（8.41±1.03,11.24±1.21,P<0.05）减少。结论 非小细胞肺癌中Biglycan存在普遍高表达现象,并且Biglycan的高表达可能参与了肺癌恶性表型的形成过程。     

沉默UBE2T基因表达对A549细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨沉默泛素结合酶E2T(UBE2T)基因表达对A549细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭等生物学行为的影响.方法 体外培养A549细胞,分别构建三组shRNA-UBE2T质粒载体(UBE2T-shRNA1组、UBE2T-shRNA2组和UBE2T-shRNA3组)以及shRNA-NC(shRNA-NC组),并以脂质体转...     

沉默APE1对非小细胞肺癌细胞的放射敏感性的影响研究

目的 研究脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶-1（APE1）对非小细胞肺癌细胞放射敏感性的影响。方法 采用免疫组化染色检测手术标本切片（非小细胞肺癌组织20例及癌旁组织5例）中APE1的表达,Western blot与实时荧光定量（qRT）-PCR检测非小细胞肺癌细胞系（A549,H460,H1299）及肺正常上皮细胞系中APE1的表达;Western blot检测辐照A549与H460细胞0~6 Gy后APE1的表达;构建沉默APE1的A549与H460稳定细胞株后,Western blot检测其辐照6 Gy后APE1的蛋白表达;细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成率;CCK-8检测细胞增殖;细胞术流式检测细胞凋亡。结果 非小细胞肺癌组织及细胞系中APE1的表达明显上调;辐照能诱导非小细胞肺癌细胞APE1的表达,且表达随辐照剂量增高而上调;沉默APE1能有效地抑制辐照诱导A549与H460细胞中APE1的表达;成功构建沉默APE1的A459、H460稳定细胞株;沉默APE1联合辐照进一步抑制了非小细胞肺癌细胞克隆形成率、细胞增殖率,同时促进细胞凋亡（ PAPE1可增强非小细胞肺癌细胞的放射敏感性。