右归胶囊对肾阳虚大鼠血管紧张素系统影响的实验研究

目的本研究立足肺肾相关理论,以肌注氢化可的松建立肾阳虚大鼠模型,并给予右归胶囊进行干预,以血管紧张素系统AngⅡ、AT1R指标探讨温补肾养法及肾阳虚对"肺朝百脉"的影响。方法健康雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、模型组、干预组,对照组不造模,生理盐水灌胃;模型组造模,生理盐水灌胃;干预组造模,右归胶囊混悬液灌胃。取大鼠肺组织Western blot法检测AngⅡ、AT1R的的表达。结果模型组合干预组大鼠第16天时,AngⅡ和AT1R明显少于正常组,差异有统计学意义(P0.05);第46天时,与正常组比较,模型组大鼠肺组织AngⅡ表达减少,AT1R表达也减少,差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,干预组大鼠肺组织AngⅡ和AT1R表达较多,差异有统计学意义(P0.05),干预组第46天AngⅡ明显增高,与16天干预组相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论肾阳虚大鼠体内血液循环相关因子AngⅡ、AT1R受到影响,右归胶囊可以通过增加模型大鼠肺组织AngⅡ和AT1R的表达,从而缓解肾阳虚对"肺朝百脉"的影响。     

复方青秦液对尿酸性肾病大鼠肾组织Toll样受体表达的影响

目的观察复方青秦液对尿酸性肾病大鼠肾组织Toll样受体TLR2、TLR4基因及蛋白表达的影响,探讨其肾脏保护的机制。方法将55只SD 大鼠随机分为正常组5只;模型组、阳性药组及中药大、中、小剂量组,每组各10只,用腺嘌呤灌胃伴饲酵母造模。正常组及模型组每日灌胃蒸馏水10 mL/kg,阳性药组每日灌胃别嘌醇9.33 mg/kg,中药大、中、小剂量组每日灌胃复方青秦液3.77、1.89、0.94 g/kg,连续6周。4周和6周时分别处死部分大鼠, 留取肾脏组织,RT-PCR检测TLR2、TLR4 mRNA转录水平,Western blot测定TLR2、TLR4蛋白表达水平,免疫组化测定TLR4蛋白表达水平。结果与正常组同期比较,4、6周模型组大鼠肾组织TLR4 mRNA转录水平、TLR2、TLR4蛋白表达水平升高（P〈0.05, P〈0.01）。与模型组同期比较,4、6周复方青秦液各剂量组TLR2、TLR4mRNA转录水平差异均无统计学意义（P〉0.05）,6周复方青秦液各剂量组TLR2、TLR4蛋白表达水平降低（P〈0.05, P〈0.01）。结论复方青秦液可通过降低TLR2、TLR4蛋白表达以抑制肾组织炎性病理损伤。     

基于右归饮与肾阳虚证方证相应关系探寻肾阳虚证标志蛋白质的初步研究

目的：探寻肾阳虚证动物模型大鼠肝、肾组织脏器的肾阳虚证标志蛋白质。方法：将大鼠分为对照组、模型组与给药组3组，对其肝、肾组织蛋白质提取液分别进行蛋白质双向电泳并对电泳图谱进行分析。根据右归饮与肾阳虚证的方证相应关系，把右归饮将模型组差异表达的蛋白质调节为正常表达的那些蛋白质判定为肾阳虚证标志蛋白质。结果：在给药组的肝、肾组织中分别发现28和31个右归饮调节为正常表达的蛋白质点，这些蛋白质点即为肾阳虚证标志蛋白质。结论：以右归饮与肾阳虚证方证相应关系作为切入点，运用蛋白质组学技术探寻肾阳虚证标志蛋白质是可行的。     

升降散对系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾组织TLR4表达的影响

目的：观察升降散对大鼠系膜增生性肾小球肾炎的治疗作用并探讨其作用机制。方法：40只大鼠随机分为正常对照组、模型组、洛汀新组、升降散组。模型组与药物干预组参照文献方法制备慢性系膜增生性肾小球肾炎模型,药物干预两组于造模第5周起灌服相应药物,于实验前、4周末、12周末测定24小时尿蛋白定量;12周末分别处死各组大鼠,光镜观察肾脏病理变化,采用免疫组织化学法检测肾脏组织中TLR4表达。结果：模型组24小时尿蛋白较正常对照组增多（P〈0．01）;药物干预两组较模型组明显减少（P〈0．05）。模型组肾小球系膜区、肾间质、近曲小管TLR4阳性表达明显;升降散、洛汀新两药物组肾小球系膜细胞与基质增生、炎症细胞浸润均不明显,TLR4表达较模型组减少（P〈0．05）。结论：升降散能够减少肾炎大鼠尿蛋白排泄量,降低肾组织TLR4表达,抑制肾小球系膜细胞与基质的增生。     

温补肾脾方药对肾脾阳虚模型大鼠Akt信号通路的影响

目的：通过采用肌注氢化可的松和灌胃大黄水煎液复合方法复制肾脾阳虚模型大鼠,观察温补肾脾方药对肾脾阳虚模型大鼠大脑海马组织形态及Akt／FOX03a信号通路的影响,探讨肾脾阳虚模型大鼠衰老的可能机制。方法：40只SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、维生素E组和桂附理中丸组。正常对照组大鼠肌肉注射生理盐水,同时灌胃生理盐水,其余组大鼠肌肉注射氢化可的松,同时灌胃大黄水煎液,维生素E组灌胃维生素E混悬液,桂附理中丸组灌胃桂附理中丸混悬液,共30d。取其大脑海马组织,透射电镜下观测海马CA1区超微结构的变化。Westernblot法和免疫组织化学染色方法检测Akt、FOX03a蛋白表达。结果：肾脾阳虚模型大鼠大脑海马CA1区细胞器及神经元出现衰老表现,桂附理中丸组大鼠海马CA1区细胞轮廓清晰,无细胞器及神经元细胞衰老征象,用药效果明显优于维生素E组。与正常对照组比较,模型组大鼠大脑海马磷酸化Akt蛋白表达明显升高（P〈0．05）,磷酸化FOXO3a蛋白表达显著升高（P〈0．01）;与模型组比较,桂附理中丸组大鼠大脑海马磷酸化Akt蛋白明显降低（P〈0．05）,磷酸化FOXO3a蛋白显著降低（P〈0．01）。结论：肾脾阳虚模型大鼠大脑海马细胞衰老的病理改变明显,肾脾阳虚可导致模型大鼠磷酸化的Akt、FOX03a蛋白表达增强,降低机体的抗氧化能力,从而导致衰老。温补肾脾方药可以抑制Akt、FOX03a蛋白的磷酸化,增强抗氧化酶活力,改善大脑海马组织神经元细胞的病理改变．发挥延缓衰老的作用。     

洋参御糖丸调控糖尿病大鼠肝脏胰岛素PI3K信号通路的机制研究

目的：观察洋参御糖丸对DM大鼠肝脏胰岛素P13K信号通路的调节作用。方法：4周龄Wistar大鼠50只,选取10只作为空白组,给予普通饲料,其余40只给予高脂高糖饲料,喂养8周,腹腔注射STZ,做成糖尿病大鼠模型,分为模型组、二甲双胍组、洋参御糖方高剂量组、洋参御糖方低剂量组,每组10只。各组给予相应药物灌胃,每日一次,给药剂量：洋参御糖丸低剂量组1．35g·（kg·d）-1,高剂量组2．7g·（kg·d）-1,二甲双胍组70mg·（kg·d）-1。模型纽和空白组给予等体积蒸馏水灌胃。各组继续给予高糖高脂饲料,药物干预4周末,进行肝脏取材。血糖仪测定各组大鼠尾静脉空腹血糖;放免法测定空腹血清胰岛素;氧化酶法测定肝糖原含量;结果：①模型组大鼠血糖、血清胰岛素与空白组比较明显增高（P〈0．05）;洋参御糖丸高、低剂量组及二甲双胍组血糖及血清胰岛素较模型组不同程度降低,（P〈0．05）;二甲双胍组上述指标降低程度优于洋参御糖丸高、低剂量组（P〈0．05）;②模型组大鼠肝糖原含量较空白组明显降低（P〈0．05）;洋参御糖丸高剂量组和二甲双胍纽肝糖原含量较模型纽显著升高,（P〈0．05）;洋参御糖丸低剂量组肝糖原含量与模型组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;③模型组大鼠肝脏IRS—1、GLUT-4和P13K—p85蛋白表达与空白组相比显著降低（P〈0．05）;洋参御糖丸高剂量组及双胍组IRS-1、GLUT-4和P13K—p85蛋白表达与模型组比较显著提高（P〈0．05）;而洋参御糖丸低剂量组与模型组相比上述指标无明显差异（P〉0．05）。结论：洋参御糖丸可能通过增加DM大鼠肝脏IRS-2、GLUT-4和P13K—p85蛋白表达,增强胰岛素P13K信号转导,抑制肝糖输出,发挥降糖和改善IR作用。     

二仙汤对更年期肾阳虚大鼠的影响

目的：探讨二仙汤对更年期肾阳虚大鼠模型的治疗作用。方法：将30只符合自然老化的更年期大鼠模型,随机平均分配为对照组、模型对照组和治疗组,3月龄鼠作为青年组。模型治疗组和治疗组用氢化可的松制造肾阳虚模型成功后,治疗组给予二仙汤灌胃14天。观察二仙汤对大鼠性激素水平的影响。结果：二仙汤能明显减轻肾阳虚症状,体重增加（P〈０．01）,治疗组血中的雌二醇（E2）明显高于模型组（P〈０．05）,促黄体生成素（LH）和卵泡生成素（FSH）低于模型组（P〈０．05）。结论：二仙汤对更年期肾阳虚大鼠模型有治疗作用。     

尿毒清胶囊对梗阻性肾病大鼠肾间质纤维化的影响

目的：观察尿毒清胶囊对梗阻性肾病大鼠肾间质纤维化的影响,探讨其对大鼠肾间质纤维化的改善作用及其机制。方法：采用单侧输尿管结扎（UUO）大鼠模型,中药组以尿毒清灌胃,依那普利组则以依那普利灌胃,空白组以蒸馏水灌胃,另设假手术组作正常对照。应用免疫组化法检测肾组织细胞因子转化生长因子-β（TGF-β）、磷酸化的Smads信号蛋白2／3（P-Smad2／3）和α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）在梗阻性肾病肾组织中的表达。结果：尿毒清胶囊、依那普利治疗可以明显抑制肾组织TGF-β1、P—Smad2／3的表达（P〈0．05）,显著下调肾组织α-SMA的表达（P〈0．05）。结论：尿毒清胶囊与依那普利均可显著抑制大鼠梗阻性肾病α-SMA的表达,从而减轻肾间质纤维化,这一作用可能与其抑制肾组织TGF-β1、P-Smad2／3的表达有关。     

四神丸对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织Toll样受体2、4表达的影响

目的观察四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠结肠组织Toll样受体(TLR)-2、TLR-4基因及蛋白表达的影响,探讨其治疗脾肾阳虚型溃疡性结肠炎的作用机制。方法采用氢化可的松注射液腹腔注射+番泻叶灌胃+三硝基苯磺酸/乙醇灌肠法建立脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠模型。将90只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组及四神丸高、中、低剂量组,各给药组给予相应药物干预。RT-q PCR检测大鼠结肠组织TLR-2、TLR-4 m RNA表达,Western blot检测大鼠结肠组织TLR-2、TLR-4蛋白表达,并测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。结果与空白组比较,模型组大鼠血清SOD活性明显降低、MDA含量明显升高(P0.01),结肠组织TLR-2、TLR-4基因及蛋白表达明显增强(P0.05);与模型组比较,各给药组大鼠血清SOD活性明显升高、MDA含量明显降低(P0.05,P0.01),结肠组织TLR-2、TLR-4基因及蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01)。结论四神丸可能通过改善结肠组织氧自由基的代谢,调控肠上皮免疫系统,达到治疗UC的目的。     

右归饮阻断激素性股骨头坏死相关机制的实验研究

目的：观察右归饮治疗SD大鼠激素性股骨头坏死的疗效,探讨其药物作用相关机制。方法：取30只SD大鼠随机分成3组：正常对照组、右归饮组、激素模型组;激素模型组和右归饮组腹腔内注射大肠杆菌内毒素连续2次。末次注射后24h,臀肌注射甲泼尼松龙琥珀酸钠,同时注射青霉素钠预防感染,连续注射6周,正常对照组给予等量生理盐水注射。右归饮组在造模的同时,每天给予右归饮灌胃,连续灌胃8周,模型组和正常对照组给予等容积生理盐水。所有动物在第八周处死,测定血液流变学及血浆NO（一氧化氮）水平。结果：右归饮组能降低全血高切粘度、血浆粘度及红细胞聚集指数（P〈0.05）。能增高红细胞变形指数及NO的值（P〈0.05）。结论：右归饮可能通过改善因激素导致的血浆NO水平降低,改善异常的血液流变状况,对大鼠激素性股骨头坏死具有预防和治疗作用。     

右归胶囊改善糖尿病大鼠勃起功能障碍机制的实验研究

目的:通过建立大鼠糖尿病性勃起功能障碍(Diabetic Erectile Dysfunction,DED)模型,研究右归胶囊对DED大鼠阴茎组织抗氧化能力及细胞凋亡的影响。方法:利用成年雄性SD大鼠建立糖尿病勃起功能障碍模型,将成模大鼠随机分为右归胶囊高剂量组、中剂量组、低剂量组及糖尿病组。给药12周后所有大鼠颈部皮下阿扑吗啡观察勃起情况并筛选ED模型,应用分光光度法及免疫组化方法检测阴茎海绵体组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)及凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:各组之间勃起阳性率未见明显差异;右归胶囊高剂量组与糖尿病组相比,GSH含量增高、SOD、GSH-Px的活性提高;右归胶囊高剂量组与糖尿病组相比,Bcl-2阳性细胞率较高,Bax表达较低,Bcl-2/bax比值较高。结论:右归胶囊可通过提高阴茎海绵体抗氧化能力并调控细胞凋亡,改善DM大鼠勃起功能障碍氧化损伤。     

加味参附汤对肾阳虚肺纤维化大鼠凋亡相关因子caspase-3和Bcl-2表达的影响

目的:观察加味参附汤对肾阳虚肺纤维化大鼠模型的病变程度及caspase-3和Bcl-2在模型大鼠肺内表达的影响。方法:大鼠60只随机分为正常组、模型组和干预组。模型组和干预组制作肾阳虚肺纤维化大鼠模型,造模成功后干预组给予加味参附汤治疗,常规石蜡切片,HE染色,观察肺泡炎及肺纤维化程度,免疫组织化学技术检测caspase-3和Bcl-2蛋白在各组大鼠肺组织中的表达。结果:caspase-3和Bcl-2主要在肺泡上皮细胞、肺泡巨噬细胞及浸润的炎症细胞中表达,第28天,模型组、干预组caspase-3和Bcl-2蛋白表达增强,均高于正常组(P0.05)。第42天,干预组大鼠细胞caspase-3表达较模型组降低(P0.05),而Bcl-2表达在干预组中增强,高于模型组(P0.05)。结论:在大鼠肾阳虚肺纤维化的发展过程中,肺组织细胞凋亡起重要作用,加味参附汤可用通过调控caspase-3和Bcl-2蛋白的表达而减少细胞凋亡,从而减缓肾阳虚肺纤维化的进展。     

红景天苷对百草枯中毒大鼠肺组织Toll样受体4-和核转录因子-κB表达的影响

目的：研究红景天苷（SDS）对百草枯（PQ）中毒大鼠肺组织Toll样受体4和核转录因子KB（TLR4-NF—KB）mRNA表达的影响。方法：将120只SD大鼠随机分为生理盐水（NS）对照组、PQ模型组和SDS干预组（低、中、高剂量）,每组24只。采用一次性腹腔注射PQ溶液的方法,制备PQ中毒ALI模型,PQ溶液20mg/kg。PQ模型组和SDS干预组注射PQ溶液,NS对照组腹腔注射等容积NS。染毒1h后,SDS干预组腹腔注射SDS,低、中、高剂量分别为1、5和10mg／kg,Ns对照组、PQ模型组腹腔注射等容生理盐水,每24h注射1次。分别在染毒后6h、24h、48h和72h麻醉处死大鼠,测定肺湿／干重比,测定肺组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、血清中白介素-6（IL-6）含量,检测TLR4和NF—κB的mRNA表达情况。结果：与NS组相比,各时间点PQ模型组肺湿／干重比明显增加（P〈0．01）,肺组织TLR4和NF—KB的mRNA表达水平明显提高（P〈0．01）,肺组织中TNF-α、血清中IL-6含量显著增加（P〈0．01）;而在SDS干预组中,与PQ模型组相比,中、高剂量组各时间点的肺湿／干重比明显减少（P〈0．05）,中、高剂量组在染毒后24、48、72h肺组织TLR4和NF—κB的mRNA表达水平明显减少（P〈0．05）,各剂量组TNF—α的水平于染毒后各时间点均有显著降低（P〈0．05）。高剂量组血清IL-6水平于染毒后6、24、48、72h明显减低（P〈0．05）。结论：TLR4-NF—κB通路参与了PQ中毒大鼠肺损伤的早期病理生理过程,SDS能抑制TLR4-NF—κB活化,减轻PQ中毒大鼠肺损伤。     

复方益肾胶囊对糖尿病大鼠肾组织中TNF-α表达的实验研究

目的：研究复方益肾胶囊对糖尿病肾病保护作用。方法：将雄性Wistar大鼠手术切除右肾后合并注射小剂量链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型;应用免疫组化SABC法检测左肾TNF-α的表达。结果：TNF-α在正常肾组织中呈弱阳性表达,在DN组表达明显增强（与正常对照组相比,P〈0．01））,复方益肾胶囊高剂量组大鼠肾组织TNF-α表达与模型组比较明显降低（P〈0．05）,且与西药对照组效果接近（P〉0．05）。结论：复方益肾胶囊能一定程度下调肾组织TNF-α的表达,有利于改善DN大鼠肾小球滤过率以及控制血糖,并阻断糖尿病大鼠肾脏病变发展的作用。     

中医“补肾法”治疗老年骨质疏松症临床研究

目的：观察补肾中药治疗老年骨质疏松症（OP）的,晦床疗效。方法：将符合纳入标准的400例患者分为观察组（200例）和对照组（200例）。两组均予适当体力运动和西药碳酸钙D3咀嚼片、鲑降钙素注射液治疗。观察组加用补肾中药治疗,根据阴阳虚损不同分别选用左归丸或右归丸加减。结果：观察组、对照组总有效率分别为91．50％、62．50％;组间比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。治疗后观察组中医证候积分低于对照组,骨密度和血钙、血磷水平均高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。两组治疗后各项临床症状均有所改善。组间比较,骨痛、腰酸腿软、疲乏无力和自汗盗汗差异均有统计学意义（P〈0．05）;抽筋差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：补肾中药左归丸或右归丸加减联合西药用于治疗OP,临床疗效良好,在改善临床症状、提升骨密度和血钙、血磷水平方面优于单纯西药。     

右归饮对肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴钙调素mRNA表达的影响

目的：从分子水平探讨肾阳虚证的本质以及补肾中药的作用机理。方法：用醋酸可的松造成肾阳虚模型,以逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）半定量法,测定肾阳虚大鼠下丘脑－垂体－肾上腺轴CaMmRNA的表达,以及补肾中药右归饮对其的影响。结果：肾阳虚大鼠下丘脑、肾上腺CaMmRNA水平升高,垂体组织CaMmRNA水平没有显著变化,右归饮能够降低下丘脑组织CaMmRNA水平,但对肾上腺影响不显著。结论：下丘脑中CaMmRNA水平升高与肾阳虚证有关,下丘脑CaMmRNA水平的降低是补肾中药右归饮改善肾阳虚症状的作用机理之一。     

辨体调理膏对阳虚体质的干预作用研究

目的:观察辨体调理膏对阳虚体质的干预作用。方法:符合阳虚体质条件的门诊患者,随机分成实验组30例和对照组30例。试验组在一般辨体施养的基础上冬令加用辨体调理膏干预,每年从冬至前10 d开始服用,至立春后10 d之间,大约服用60 d左右为1个疗程;对照组采用一般辨体施养的方法。结果:试验组在干预后,阳虚体质者总体临床体质评分优于干预前(P<0.01),且试验组比对照组的干预效果要好(P<0.01)。结论:辨体调理膏对阳虚体质者有干预作用。     

右归饮对肾阳虚大鼠下丘脑正中隆起室管膜细胞的影响

目的：探讨肾阳虚证的本质及补肾中药右归饮的作用机理。方法：以大剂量醋酸可的松造成大鼠肾阳虚模型,取其下丘脑进行扫描电镜观察。结果：1.肾阳虚大鼠下丘脑正中隆起室管膜细胞超微结构发生改变,细胞出现孔洞。2.右归饮能够逆转肾阳虚所致下丘脑正中隆起室管膜超微结构的改变。结论：肾阳虚大鼠下丘脑正中隆起室管膜细胞存在着超微结构的改变和损伤,右归饮对这种超微结构的改变和损伤具有逆转作用,说明肾阳虚证与下丘脑正中隆起室管膜细胞的结构和功能改变密切相关。     

参地补肾胶囊对肾小球硬化大鼠BMP-7、CTGF表达的影响

目的:探讨参地补肾胶囊对肾小球硬化大鼠BMP-7、CTGF表达的影响。方法:采用单侧肾脏切除同时尾静脉注射阿霉素的方法建立肾小球硬化大鼠模型,实验分为正常对照组、模型组、西药(洛汀新)对照组、中药(苏黄泄浊丸)组和参地补肾胶囊组,分组给药处理8周。检测各组大鼠24小时尿蛋白定量、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、血浆蛋白(ALB);光镜观察大鼠肾脏病理学变化;免疫组化法检测BMP-7、CTGF表达。结果:各治疗组大鼠24小时尿蛋白及血SCr、BUN、ALB较模型组明显改善(P0.05)。各给药组大鼠肾脏病理变化明显改善。各治疗组均能抑制CTGF的表达(P0.05),上调BMP-7表达(P0.05);参地补肾胶囊组作用明显优于两阳性对照组(P0.05)。结论:参地补肾胶囊对肾小球硬化大鼠肾功能具有保护作用,上调BMP-7表达、抑制CTGF表达可能是其部分作用机制。     

温阳健脾法对急性马兜铃酸肾病大鼠肾功能影响的研究

目的：观察温阳健脾法对急性马兜铃酸肾病大鼠肾功能及临床表现的影响。方法：采用关木通水煎剂灌胃复制急性马兜铃酸肾病大鼠模型,试验前后观察正常组、模型组、对照组、中药组大鼠血肌酐、尿素氮及临床症状积分的变化。结果：造模后大鼠均出现脾阳虚症状;造模组与正常组比较血肌酐、尿素氮均显著增高（P〈0.01）,表明造模成功;中药组和对照组与模型组比较血肌酐、尿素氮及临床症状积分均明显下降（P〈0.01）;中药组与对照组比较下降更明显（P〈0.05）。结论：关木通所致急性马兜铃酸肾病大鼠临床表现以脾阳虚为主,温阳健脾法能改善急性马兜铃酸肾病大鼠的肾功能和临床表现,提示对急性马兜铃酸肾病大鼠有良好的治疗作用。