青霉素酰化酶制备6-APA的研究进展

6-氨基青霉烷酸（6-APA）是重要的抗生索药物中间体之一．目前均采用青霉素酰化酶酶促裂解青霉素获得。本文介绍近年来青霉索酰化酶催化青霉素水解的研究进展，青霉素酰化酶的性质及其催化机理，青霉素酰化酶的固定化方法．青霉素酰化酶反应器的设计，反应介质工程的研究进展。     

青霉素酰化酶和β-内酰胺酶

青霉素酰化酶一、引言微生物酶已常用于改造抗生素。抗生素的微生物生物转化能由广泛的降解反应至很局限的特异性反应。某些反应可形成有用的化合物,以此应用于半合成抗生素或新抗生素的工业生产。青霉素生物转化至6-氨基青霉烷酸(6-APA)和侧链酸,是最重要反应之一。水解青霉素产生6-APA 的微生物酶,称为青霉素酰化酶(Penicillin acylase,以下简称 PAase),又称青霉素酰胺酶(Penici-llin amidase)、青霉素酰胺水解酶(Penici-llin amidohydrolase),广泛存在于细菌、放线菌、酵母菌和真菌中。     

微粒明胶固定化青霉素酰化酶性质的研究

青霉素酰化酶(FC.3.5.11)已从大肠杆菌菌株中提取出来。并被固定在微粒明胶上,用于柱式裂解10％高浓度青霉素底物,生产6-氨基青霉烷酸(6-APA)。6-APA产率84％。     

高效液相色谱法测定青霉素裂解液中的青霉素、6-APA和苯乙酸

青霉素(Penicillin)在酶催化作用下,可以裂解为6-氨基青霉烷酸(6-Aminopen-icillanic Acid,6-APA)和苯乙酸(Phen-ylacetie Acid,PAA)。其产物鉴定可以用碘量法,但该方法操作繁杂费时。用HPLC测定青霉素类,前人已有不少报道,并多采用柱前衍生法进行,但这些方法仍很费时,分离效果也不甚理想。目前,还未见到用HPLC测定青霉素裂解产物的报道。 本文采用RPHPLC测定上述产物,选择了最佳检测条件,分离效果较好,分析速度快,操作简便。     

固定化大肠杆菌细胞催化裂解苄青霉素动力学参数的测定

引言据报道大肠杆菌青霉素酰胺酶催化苄青霉素(简称BP)水解所生成的6-氨基青霉烷酸(简称6-APA)和苯乙酸(PAA)分别为反应的非竞争性和竞争性抑制剂;高浓度BP为反应的底物抑制剂。Warburton等曾报道过游离的和固定化的青霉素酰胺酶的有关动力学参数,提出了有关的动力学模型。作者以明胶戊二醛包埋法所固定的大肠杆菌细胞为实验材料,在pH 7.5和8.0、37℃条     

人血清中氟卡胺HPLC立体选择测定

本文报道了人血清中氟卡胺的HPLC立体测定方法。氟卡胺标准贮备液及内标溶液(2,5-二乙氧基-N-(2-哌啶基甲基)苯甲酰胺盐酸盐)分别由10mg外消旋醋酸盐溶于1000ml去离子水中(10μg/ml),工作标准液则将贮备液稀释10倍而得。在试管中放入1.0 ml血浆,然后加入50μl内标溶液(50 ng),1 ml Tris盐酸(2.0 M,pH 8.5)缓冲液和过量(3 g)氯化钠。NaCl极度溶解后,用5 ml氯丁烷:2-丙醇(95∶5v/v)旋涡提取30秒钟。在室温以每分钟3000     

电位滴定法测定青霉素G酰胺酶的酶活力

<正> 青霉素G酰胺酶是一种重要的酶催化剂,可用于由青霉素G到6-氨基青霉烷酸(6-APA)和由青霉素G到7-氨基去乙酰氧基头孢霉烷酸(7-ADCA)的反应中。6-APA和7-ADCA在医药上是半合成抗菌素的两种重要中间体,利用它们可合成一系列新的青霉素和头孢菌素。青霉素G酰胺酶的酶活力直接影响着6-APA和7-ADCA的质量和成本,因此,准确测定酶活力具有重要的意义。采用分光光     

一种快速、简便的青霉素酰化酶活性测定方法

青霉素酰化酶(Penicillin acylase)可以水解青霉素的酰胺键产生6-氨基青霉烷酸(6-APA),是半合成抗菌素工业上常用的重要酶类,它的活性测定方法已有很多种,如羟胺法、对二甲胺基苯甲醛p-dimethylaminobenzaldehyde(PDAB)法等,这些方法虽然各具特点,但或者比较繁复、或者不能用于粗抽提液及菌体活力的测定。1974年C Kutzbach和ERauenbusch     

1-羟基苯并三唑柱前衍生高效液相色谱法测定发酵液中的天然青霉素

本文叙述用1-羟基苯并三唑-氯化汞作柱前衍生的HPLC方法以测定霉菌发酵液中的天然青霉素。为了得到稳定的衍生物,含氨基青霉素有必要用苯甲酸酐先行酰化。缓冲液和衍生试剂配制 1-羟基苯并三唑6.76 g溶于10 ml水中,加入氯化汞溶液2.5 ml,然后用4M氢氧化钠溶液调节pH至9.2。最后体积为25 ml,1-羟基苯并三唑浓度为2M。苯甲酸酐0.45 g溶解于10 ml乙腈中得到0.2M溶液。     

固定化酰化酶在青霉素裂解反应中的影响因素分析

在酶促脱酰法裂解青霉素工业钾盐生产药用中间体6-氨基青霉烷酸(即6-APA)的反应杌理中,在不同反应物浓度、pH及温度下将直接影响酰化酶的活性及其使用寿命。本文通过多组实验进行比较分析摸索出酰化酶的最适宜的工艺条件以达到延长酰化酶的使用寿命,降低6-APA的生产成本的目的。     

青霉素烷基酯经血浆催化降解后不释放母体青霉素

本文通过对不同青霉素酯稳定性的研究,发现苄青霉素和氨苄青霉素的甲酯及甘氨酸酯,在人血浆中虽然能迅速地降解,却不能释放出母体药物。研究药物采用苄青霉素(1),苄青霉素甲酯(2),苄青霉素甘氨酸酯(3,4),氨苄青霉素(5),匹氨西林(6)和氨苄青霉素甘氨酸酯(7)(它们的化学结构见图1)。取这些化合物的储备液100μl,加至10ml预热的0.01M磷酸缓冲液(A)或80%人血浆液(B)中,配制成浓度为10~(-5)M溶液,置于恒温水浴(37℃),于不同时间取样进行HPLC分析。     

青霉素V酰化酶在生产6—APA中的潜力

目前发酵生产的青霉素G(Pen G)和青霉素V(Pen V)多半是用作生产β-内酰胺中间体6-氨基青霉烷酸(6-APA)和7-氨基脱乙酰氧头孢烷酸(7-ADCA)的原料.有效、稳定的固定化青霉素酰化酶的开发,为合成具有不同抗菌性能的6-APA和7-ADCA衍生物创造了有利条件.现6-APA年产量约7500t,为此需消耗10~30t固定化青霉素酰化酶.     

汞溶液滴定6-氨基青霉烷酸

6-APA 是半合成青霉素的重要工业原料,因此必须要有一种正确分析纯6-APA 的方法。碘量法是常用的方法,此法与供测定青霉素的那些碘量法相类似,其效价根据(第一次所测未处理溶液及第二次所测碱水解溶液)二次滴定的差值而得,如果除6-APA 外,尚有青霉素,则可用提取法把青霉素除去。lvashkiv 测定6-APA,是把6-APA 转变成α-苯氧青     

青霉素酰化酶基因的克隆与表达

青霉素酰化酶可永解青霉素为6-APA和相应的侧链,6-APA是半合成青霉素的关键中间物,目前工业生产中已用酶法取代化学法制备6-APA,用青霉素G酰化酶或青霉素V酰化酶水解相应的青霉素.青霉素酰化酶可由各种细菌和霉菌产生,其生理功能还不清楚.这些酸的底物专一性都取决于青霉素分子的侧链.青霉素G酰化酶除了作用于青霉素G之外,还可水解各种苯乙酰衍生物.用7-ACA代替6-APA作为底物,对青霉素G酰化酶活力无明显影响.大肠杆菌和雷氏变形杆菌的青霉素G酰化酶都由α、β两个亚基组成,亚基重组试验表明α亚基决定酶的底物专一性,而活性中     

用离子交换树脂为载体固定化青霉素酰化酶制备6-氨基青霉烷酸的研究

6-氨基青霉烷酸(6-APA)是半合成抗生素的母核。在 6-APA的氨基上引入不同侧链,可获得高效、广谱、服用方便的各种半合成抗生素。目前6APA的制备方法有化学法和固定化酶法。固定化酶法是将青霉素酰化酶固定在水不溶性载体上,直接用于裂解青霉素G生成6-APA。1973年英、美、西欧等国已应用固定化酶生产6-APA。本研究以大孔离子交换树脂为载体使青霉素酰化酶固定化。大孔离子交换树脂具有大孔径、高比表面积、高交换率、耐磨性好等优点。本文报导初步研究结果。 材料与方法     

用柑桔黄单孢菌(Xanthomonas citri)的α-氨基酸酯水解酶合成羟氨苄青霉素

本文报道,利用不含青霉素酶的柑桔黄杆菌(X Citri,K24)突变株,将D-α-对-羟基苯甘氨酸甲酯(HPGME)和6-APA,在实验条件下,可把90％以上所投入的6-APA,转化为羟氨苄青霉素。各种最适条件的实验结果如下: 一、通过减少离子强度提高羟氨苄青霉素的产率含有HPGME盐酸盐(20mg/ml)、6-APA(10mg/ml)、磷酸钠缓冲液(100mM)和柑桔黄杆菌(X.Citri.K24)的洗涤细胞(35mg/ml)的反应混和物,于20℃搅拌,保温培养。反应约6小时后,反应液浓度达到高峰,这时转换6-APA为羟氨苄青霉素的     

酶法半合成青霉素与头孢菌素

自从1950年 Sakaguchi 和 Murao发现青霉素酰化酶以来,随着对其研究的不断深入,利用青霉素酰化酶制备6-氨基青霉烷酸(6-APA)已经工业化。1960年Rolinson 等及 Claridge 等发现大肠杆菌(E.coli)或产碱杆菌(Alcalig-enes faecelis)的青霉素酰化酶能从6-APA 和苯乙酸合成青霉素 G;Kaufmann     

青霉素酰化酶的生产及其在制造—6APA上的应用

引言由Sakaguchi等发现的“penicin”,后鉴定为6-氨基青霉烷酸(6-APA),从而揭开了β-内酰胺类抗生素新纪元。对6-APA的兴趣是在有机化学家致力于酰化此种分子取得成功,并获得象氨苄青霉素、羟氨苄青霉素等具有更宽抗菌谱,且于口服时具有足够稳定性的各种半合成青霉素之后出现的。生产这些半合成青霉素所需关键中间体——6-APA是通过裂解青霉素C(PenG)或青霉素V(PenV)侧链后获得的。最初曾试图     

固定化青霉素G酰化酶的初步研究

本文研究固定化青霉素G酰化酶的不同制备方法,比较了各种固定化青霉素G酰化酶的载体。实验表明:聚丙烯腈纤维和无机载体制成的固定化酶具有较高的酶比活力,而且表面积大,易于装柱,抗污染能力大,又能裂解高浓度青霉素 G 溶液生成6-APA。     

青霉烷砜对β-内酰胺酶的抑制作用

本文报告国产青霉烷砜、进口青霉烷砜及克拉维酸对13种β-内酰胺酶的抑酶作用比较.以氨苄青霉素为底物,测定了当这种酶抑制剂存在与不存在时,β-内酰胺酶对氨苄青霉素的水解作用.结果表明: (1)各种β-内酰胺酶对氨苄青霉素均有不同程度的水解作用,水解率约在50～100%;(2)国产及进口青霉烷砜、克拉维酸对13种革蓝氏阴性杆菌产生的β-内酰胺酶,除个别酶外,均有明显的抑制作用,浓度为1μg/ml时,对β-内酰胺酶的抑酶率分别为0～82.18%、0～80.08%和6.00～97.5%;浓度为10μg/ml时,抑酶率则分别为5.50～100%、9.76～100%和19.57～100%;(3)国产青霉烷砜及进口青霉烷砜对β-内酰胺酶的抑酶率经统计学检验,无显著差异,提出以氨苄青霉素为底物时两者对β-内酰胺酶的抑制作用相仿.但两者除对TEM-1和P-99酶的抑酶作用大于克拉维酸外,对其余β-内酰胺酶的抑制作用均小于或接近于克拉维酸.本实验结果显示青霉烷砜具有良好的抑制作用,提示了氨苄青霉素与青霉烷砜联合对氨苄青霉素耐药菌株可产生协同抗菌作用.