胞嘧啶脱氨酶基因联合放射治疗恶性肿瘤的研究进展(文献综述)

以胞嘧啶脱氨酶基因为主的自杀基因治疗已日渐引起肿瘤研究者的兴趣 ,近几年出现的基因联合放疗对恶性肿瘤的治疗 ,使两者之间的优势得以互补 ,大大增强了对肿瘤治疗的效果。本文就胞嘧啶脱氨酶基因联合放疗对恶性肿瘤治疗的作用机制、基因转导方法、靶向性表达、基因显像、治疗效果等方面予以综述。     

联合应用胸苷激酶基因和胞嘧啶脱氨酶基因对胆囊癌细胞的杀伤作用

目的研究双自杀基因的应用对胆囊癌细胞的杀伤作用和旁观者效应。方法脂质体法将CD和HSV-tk双自杀基因转染人PA317细胞，用其病毒上清转染胆囊癌细胞GBC-SD，G418筛选出阳性细胞(GBC-SD/CD tk，应用不同浓度的5-FC或(和)GCV，MTT法观察其杀伤作用；将不同比例的GBC-SD/CD tk和GBC-SD细胞混合，联合应用5FC和GCV杀伤，观察其旁观者效应。结果单独应用5FC或GCV均能对转染阳性的GBC-SD／CD tk细胞产生明显的杀伤效应，联合应用可以在较小的剂量下产生更大的杀伤作用；当阳性细胞比例达到20％时即可对半数细胞产生杀伤作用。结论双自杀基因的应用对胆囊癌细胞具有明显的杀伤作用，其旁观者效应明显。     

X线联合胞嘧啶脱氨酶基因对结肠直肠肿瘤细胞的杀伤作用

目的 提高基因疗法对结肠直肠肿瘤的疗效。方法 以绿色荧光蛋白（GFP）基因作为报告基因,观察在X线作用下GFP基因对结肠直肠肿瘤细胞的转染效率及表达时间;用克隆形成试验观察X线对胞嘧啶脱氨酶（CD）基因转染的影响;同时用细胞存活率测定试验检测X线联合CD和5－氟胞嘧啶对结肠直肠肿瘤细胞的杀伤作用。结果 X线提高超螺旋质粒对结肠直肠肿瘤细胞的转染效率2－4倍,可提高线性质粒转染效率30倍。肿瘤细胞的存活率：转染CD基因组LoVo细胞为85％,8348细胞为88％;剂量X线联合空载体组为10％;LD90剂量X线联合CD基因组,LoVo细胞为9％,8348细胞为11％,加上X线作用,细胞总体存活率仅为1％。结论 X线联合自杀基因可有效地杀伤结肠直肠癌肿瘤细胞,可成为治疗结肠直肠肿瘤的一种全新有效的方法。     

胞嘧啶脱氨酶基因修饰的结肠癌细胞瘤苗抗肿瘤研究

目的 研究胞嘧啶脱氨酶（EC—CD）自杀基因修饰的结肠癌细胞瘤苗的抗肿瘤作用。方法 用含EC-CD基因的逆转录病毒质粒pLCDSN将人EC—CD基因转导入鼠结肠癌细胞株CT26，用G418进行筛选，得到抗性克隆CT26／CD，比较CT26／CD与野生型CT26的成瘤性，评价CT26／CD对野生型CT26细胞肝转移模型的治疗作用。结果 CT26／CD能在含0．6g／LG418的培养液中稳定生长；RT—PCR证实EC—CD基因在CT26／CD中表达；CT26／CD细胞对5-氟胞嘧啶（5-FC）的敏感性明显增加（P=0．000），且具有良好的旁观者效应；CT26／CD的成瘤性与野生型CT26相似（P=0．892）；CT26／CD联合5-FC对野生型CT26的肝转移有明显抑制作用，明显延长了荷瘤小鼠存活期（P=0．000）。结论 EC—CD基因修饰的结肠癌细胞瘤苗有一定的抗肿瘤作用。     

白介素-2基因增强胞嘧啶脱氨酶基因的抗结肠癌效应

目的探讨联合应用白介素(IL)-2基因与胞嘧啶脱氨酶基因(EC-CD)对结肠癌的治疗效应。方法分别以重组腺病毒载体AdCMVCD、AdCEACD转导EC-CD基因;AdCMVIL-2转导人IL-2基因。分别在体外、内(Balb/cnu/nu裸鼠)研究EC-CD基因联合人IL-2基因对LOVO细胞肿瘤的治疗作用。结果LOVO细胞受AdCMVIL-2感染后,细胞生长有比较明显的抑制。AdCEACD/氟胞嘧啶(5-FC)联合AdCMVIL-2可增强对LOVO细胞的细胞毒作用(P=0.001),肿瘤生长明显抑制(P=0.000),联合治疗的效果与单用AdCMVCD/5-FC接近(P=0.815)。结论联合IL-2基因可明显增强EC-CD基因抗肿瘤效应,且可弥补靶向性载体治疗效率较差的缺点。     

顺铂联合胞嘧啶脱氨酶自杀基因对直肠癌细胞杀伤作用的研究

目的探讨顺铂联合胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因对直肠腺癌细胞8348的杀伤作用。方法以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,观察在顺铂作用下GFP基因对8348细胞的转染效率;用克隆形成试验观察顺铂对CD基因转染效率的影响;同时用四甲基偶氮唑盐(MTT)试验检测顺铂联合CD/5-氟胞嘧啶(5-FC)对8348细胞的杀伤作用。结果顺铂提高质粒对8348细胞的转染效率26倍。对腺癌细胞的杀伤效率:单纯转染CD基因组为14.9%;IC50的氟尿嘧啶(5-FU)联合CD基因组为54.9%;IC50的顺铂联合CD基因组为88.5%,与其他两组相比,对癌细胞杀伤效率明显增强(P<0.01)。结论顺铂联合CD自杀基因能更有效地杀伤直肠腺癌细胞,可成为治疗直肠癌术后复发及转移的一种有效的方法。     

联合应用胸苷激酶基因和胞嘧啶脱氨酶基因对MCF-7细胞的杀伤作用

目的研究双自杀基因(胞嘧啶脱氨酶基因CD和胸苷激酶基因HSV-tk)的应用对乳腺癌细胞的杀伤作用和旁观者效应。方法脂质体法将CD和HSV-tk双自杀基因转染入PA317细胞，用其病毒上清转染乳腺癌细胞MCF-7，G418筛选出阳性细胞MCF-7／CD tk，然后加入不同浓度的5-氟胞嘧啶(5-Fc)或／和丙氧鸟苷(GCV)，MTT法观察其杀伤作用；将不同比例的MCF-7／CD tk和MCF-7细胞混合，联合应用5-Fc和GCV杀伤，观察其旁观者效应。结果单独应用5-Fc或GCV均能对MCF一7／CD tk细胞产生明显的杀伤效应，联合应用可以在较小的剂量下产生更大的杀伤作用；当阳性细胞比例达到20％时即可对半数混合细胞产生杀伤作用。结论双自杀基因的应用对乳腺癌细胞具有明显的杀伤作用．其旁观者效应明显。     

胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶系统治疗胰腺癌体内实验研究

目的探讨胞嘧啶脱氨酶(CD)基因对胰腺癌的杀伤作用机制。方法 应用细菌内同源重组法构建含CD基因的腺病毒载体,将Patu8988、SW1990胰腺癌细胞皮下接种BALB/C裸鼠建立胰腺癌的移植瘤模型,重组CD腺病毒液以1010 pfu/ml原位注射入肿瘤,每周2次,24 h后腹腔给予前药5-氟胞嘧啶(5-FC),连续4周。结果 CD基因原位转导的裸鼠移植瘤生长明显受抑。Patu8988移植瘤治疗组肿瘤重量为(587.7±107.8)mg,SW1990移植瘤组治疗组肿瘤重量为(597.6±159.4)mg,对照组重量为(2 042.4±608.0)mg(P<0.01)。结论重组CD基因的腺病毒载体对胰腺癌不仅转染效果强,加用前药5-FC后,可直接或通过旁观者效应抑制移植瘤的生长。     

胞嘧啶脱氨酶基因体外特异性前药转换抗大肠癌作用研究

目的：为使胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因在大肠癌细胞中特异表达。方法：构建了以ＣＥＡ基因顺式转录调控序列驱动ＣＤ基因的组织特异性重组逆转录病毒载体Ｇ１ＣＥＳＡＣＤＮａ，以脂质体法将重组载体及转录受ＬＴＲ驱动的ＣＤ基因逆转录病毒载体ｐＣＤ２分别转导入高分泌ＣＥＡ的大肠癌细胞ＬｏＶｏ中，经Ｇ４１８完全选择后进行前５－ＦＣ敏感试验。结果：转导普通型及组织特异型ＣＤ基因的ＬｏＶｏ细胞较亲代细胞对５－ＦＣ的前药转     

胸苷激酶和胞嘧啶脱氨酶融合基因抑骨肉瘤生长的研究

目的观察单纯疱疹病毒-胸苷激酶/胞嘧啶脱氨酶融合自杀基因(HSV-TK/CD)对裸鼠骨肉瘤生长的影响。方法人骨肉瘤细胞系MG-63细胞于裸鼠成瘤后将其分为6组:(1)PBS对照组;(2)重组腺病毒(adenovirus,Ad)-Lac-Z/GCV 5-FC组;(3)Ad-TK/GCV组;(4)Ad-CD/5- FC组;(5)Ad-TK/GCV Ad-CD15-FC组;(6)Ad-TK-CD/GCV 5-FC组。各组经治疗后观察肿瘤的生长状况及组织病理学改变。结果(2)组与(1)组比较,肿瘤体积与肿瘤坏死程度差异无统计学意义(P>0.05);与(1)、(2)组比较,(3)～(6)组肿瘤的生长均受到明显抑制(P<0.05),且(5)、(6)组与(3)、(4)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论融合自杀基因HSV-TK/CD对裸鼠骨肉瘤生长有明显的抑制作用。     

基因毒素治疗恶性肿瘤的研究进展(文献综述)

基因毒素治疗系通过外源性的酶将细胞内的非毒性药物前体转变为毒性药物从而杀死肿瘤细胞的方法。本文从基因毒素的分类、作用机制等方面作一综述     

胞嘧啶脱氨酶基因体外特异性前药转换抗大肠癌作用研究

为使胞嘧啶脱氨酶(CD)基因在大肠癌细胞中特异表达。方法:构建了以CEA基因顺式转录调控序列驱动CD基因的组织特异型重组逆转录病毒载体G1CEACDNa,以脂质体法将重组载体及转录受LTR驱动的CD基因逆转录病毒载体pCD2分别转导入高分泌CEA的大肠癌细胞LoVo中,经G418完全选择后进行前药5-FC敏感试验。结果:转导普通型及组织特异型CD基因的LoVo细胞较亲代细胞对5-FC的前药转换抑瘤效应明显(均为P<0.01);而转导组织特异性CD基因的LoVo细胞较转导普通型CD基因的LoVo细胞对5-FC的敏感性显著增高(P<0.01),其IC_(50)分别为0.1mmol/L和0.5mmol/L。结论:表明CEA TRS可驱动自杀基因在高分泌CEA大肠癌细胞中特异性表达,在一定程度上达到了靶向杀伤肿瘤细胞的目的。     

腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶和胸苷激酶融合基因体外抑瘤效果的观察

目的：构建重组腺病毒载体，观察自杀基因对不同大肠癌细胞系的细胞毒作用。方法：利用重组腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶（CD）、单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk)融合基因感染人结肠腺癌细胞系LoVo、HCT－8和直肠腺癌细胞系HR－8348，通过细胞集落形成实验、细胞存活率测定（MTT法），检测和分析HSV－tk／丙氧鸟苷（GCV）、CD／5－氟胞嘧啶（5－FC）双自杀基因系统对肿瘤细胞的杀伤作用和旁观者效应的大小。结果：Western Blot检测分析融合基因的表达，显示重组腺病毒介导的双自然基因可以在3种肿瘤细胞中表达。不加5－FC和GCV时，各转染组和对照组肿瘤细胞集落形成分别为：94、93、95；96、94，比较差异无显著性（P＞0．05）。在5－FC（80．0mg/L）和GCV（0．8mg/L)浓度下3种肿瘤细胞存活率降至2．1％、4．3％和3．2％，与不同前药相比差异有显著性（P＜0．01）。感染细胞在混合细胞中比例仅仅占5％时，就能获得明显的旁观者效应，细胞杀伤率分别升至22．2％、34．8％和40．4％。结论：CD、TK融合基因联合联合双前药治疗能取得显著的抗肿瘤作用。     

胞嘧啶脱氨酶对表达不同水平癌胚抗原的大肠癌细胞株的杀伤作用

目的:探讨特异性胞嘧啶脱氨基酶(cytosine deaminase,CD)/5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)系统对表达不同水平癌胚抗原(CEA)的大肠癌细胞株的选择性杀伤作用。方法:用脂质体法将逆转录病毒载体G1CEACDNa和pCD2分别转导入大肠癌LoVo和SW480细胞株。将转染成功pCD2、G1CEACDNa及未转基因之LoVo和SW480细胞分别接种到BALB/c裸鼠皮下。成瘤2周后,每天腹腔注射500mg/kg的5-FC,观察治疗效果。治疗21d后处死动物,肿瘤标本称重后,以RT-PCR法检测目的基因在肿瘤组织中的表达;显微镜下观察肿瘤病理学变化。结果:目的基因在肿瘤组织中获稳定表达。治疗21d后,在LoVo细胞肿瘤中,G1CEACDNa阳性组和pCD2阳性组肿瘤分别重(60.8±15.3)mg和(410.5±56.3)mg,与未转基因组[(3018.5±453.5)mg]比较均有明显差异(p<0.01,t=4.512; P<0.01,t=3.320);G1CEACDNa阳性组与pCD2阳性组比较,亦有显著差异(P<0.05,t=2.375)。在SW480肿瘤细胞中,G1CEACDNa阳性组和pCD2基因阳性组肿瘤分别重(356.5±23.5)mg和(463.5±56.9)mg,与对照组[(3263.5±450.6)mg]比较有显著差异(P<0.01,t=4.547;P<0.01,t=4.475),但G1CEACDNa阳性组与pCD2基因阳性组之间无明显差异(P>0.05)。结论:组织特异性CD/5-FC系统对大肠癌细胞LoVo和SW480均有明显的选择性     

胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶自杀基因治疗系统对恶性脑胶质瘤荷瘤裸鼠的抗肿瘤作用

目的 评判胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶(CD/5-FC)自杀基因治疗系统对恶性脑胶质瘤的抗肿瘤效果.方法 采用Lipofectamine2000TM脂质体介导方法将CD基因转染17251恶性胶质瘤细胞系,并接种于裸鼠前臂皮下,成瘤后腹腔注射5-FC(每13500mg/kg体重)10 d,观察荷瘤鼠肿瘤的生长情况,8周后比较转染组与对照组肿瘤的体积与重量,并进行病理形态学分析.结果 U251细胞获得CD基因的成功转染,5-FC用于不同组别荷瘤裸鼠,8周后转染组肿瘤体积(0.09±0.03)cm3和重量(0.28±0.11)g明显小于对照组(1.81±0.77)cm3和(1.63±0.80)g;形态学揭示转染组肿瘤细胞出现明显的凋亡与坏死.结论 裸鼠在体实验研究表明:CD/5-FC自杀基因治疗系统是治疗恶性脑胶质瘤行之有效的手段之一.     

热化疗对结肠癌LOVO细胞胞嘧啶脱氨酶基因表达的影响

目的 探讨温热疗法对转染胞嘧啶脱氨酶基因的基因表达的影响.方法 脂质体法将质粒G1CEACDNa转染结肠癌LOVO细胞,G418筛选抗体克隆并扩增,给予前药5-氟胞嘧啶(5-FC)进行热化疗;以β-actin为内参照用实时荧光定量PCR检测热化疗前后CD基因表达量的变化.结果 实时荧光定量PCR(Real-Time RT-PCR)检测得到热化疗前CD基因表达的CT值29.5300±1.1974,B.actinct值20.8200±2.7385;热化疗后CD基因表达的CT值30.285±1.201,β-actinet值21.225±2.237;行ΔΔCt法进行相对定量比较差异无统计学意义(P＞0.05,t=1.4521,v=38).结论 温热疗法对转染G1CEACDNa的LOVO细胞CD基因的表达无明显影响.     

脂质体转染CD基因联合放射线对人直肠癌荷瘤裸鼠体内抗癌作用的研究

目的　探讨脂质体反复转染CD基因联合放射线对人直肠癌细胞荷瘤鼠体内的抗癌效果 ,为临床治疗直肠癌提供理论依据。方法　构建PXJ4 1/CD载体并进行测序证实 ,制备人直肠癌细胞荷瘤鼠 ,待瘤体长至长径达 0 5cm后 ,设实验组应用脂质体于治疗的当日及第 4、8、12天反复转染 ,于当日起 2Gy/day连续照射患肢 15d ,第 3天起 5 FC 80 0mg/kg/day腹腔注射共 12d ,另设单纯放射组、单纯CD/ 5 FC治疗组、空白对照组 ,观察荷瘤裸鼠的肿瘤生长曲线 ,瘤体积抑制率和瘤重抑制率。结果　荷瘤裸鼠肿瘤生长曲线显示 :实验组肿瘤生长曲线平缓 ,治疗效果显著 ,瘤体积抑制率平均为 81 5 % ,瘤重抑制率平均为 78 7% ,与其它 3组比较差异有显著性意义 (χ2 =2 87 86 ,P <0 0 1)。病理学检查示肿瘤细胞较对照组明显减少。结论　脂质体反复转染CD基因联合放射线治疗直肠癌荷瘤鼠 ,二者可产生协同作用 ,比单纯放疗或单纯CD/ 5 FC有更显著的抗癌疗效     

结直肠癌放射线联合CD基因治疗的研究进展—（文献综述）

放疗联合基因治疗恶性肿瘤的研究正日益受到重视,实验显示放疗联合基因治疗肿瘤二者有明显的协同作用,能有效提高对肿瘤细胞的杀伤效能。本文对CD基因的作用机理、CD基因的靶向转移、放射线联合CD基因治疗结直肠癌等方面的研究进行综述。     

组织特异性胞嘧啶脱氨酶和5-氟胞嘧啶热化疗对裸鼠结肠癌肝脏转移的影响

Objective To investigate the effects of tissue specific cytosine deaminase/5-fluorocytosine (CD/5-FC) thermotherapy on hepatic metastasis of colonic carcinoma in nude mice. Methods Forty-five nude mice were randomly divided into control group, 5-FC group and 5-FC thermotherapy group according to the random number table (15 mice in each group). Mice models of hepatic metastasis of colonic carcinoma were established by portal vein injection of LoVo/CEACD cells. The hepatic metastasis rate and number of metastatic nodules of the 3 groups were compared by ehi-square test and one-way ANOVA. The pathological changes in tumor tissues and apoptotic index of tumor cells were observed. The expression of the CD gene in tumor tissues was detected by fluorescent quantitative RT-PCR and Western blot. Results The number of metastatic nodules and liver metas-tasis rate were 4.6±1.3 and 100.0% in control group, 2.2±1.0 and 60.0% in 5-FC group, 0.5±0.8 and 13.3% in 5-FC thermotherapy group, with statistical difference among the 3 groups (F=25.898, χ2=5.208, 19.548, 5.168, P<0.05). The mean apoptotic indexes of tumor cells of the 3 groups were 4.6%, 9.9% and 17.4%, respectively. Vacuolar degeneration, cell necrosis, cytolysis and apoptotic bodies were mostly observed in the 5-FC thermotherapy group. The expression of CD gene in tumor tissue was detected in all the groups. Conclusion Tissue specific CD/5-FC thermotherapy has inhibitory effects on the hepatic metastasis of LoVo cells transfected with CD gene.     

组织特异性胞嘧啶脱氨酶和5-氟胞嘧啶热化疗对裸鼠结肠癌肝脏转移的影响

目的 探讨组织特异性胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶(CD/5-FC)系统热化疗对裸鼠结肠癌肝脏转移的影响.方法 将45只裸鼠按随机数字表法分为3组:对照组、非热疗组、热疗组,每组15只.门静脉注射法建立结肠癌肝脏转移动物模型,3组分别给予不同的治疗方法.采用χ2检验和单因素方差分析3组肝脏肿瘤转移率、转移数目;观察各组病理学变化、肿瘤细胞凋亡指数;荧光定量RT-PCR和Westernblot检测肿瘤组织中CD基因的表达情况.结果 对照组、非热疗组、热疗组肝脏平均转移癌结节数目和转移率分别为(4.6±1.3)、(2.2±1.0)、(0.5±0.8)个和100.0%、60.0%、13.3%,3组比较差异有统计学意义(F=25.898,χ2=5.208,19.548,5.168,P<0.05);肿瘤细胞凋亡指数平均为4.6%、9.9%和17.4%.热疗组可见大量细胞空泡变性、坏死、溶解现象,有较多的凋亡小体形成.3组均可以检测到CD基因的表达.结论 组织特异性CD/5-FC系统热化疗对转CD基因结肠癌LoVo细胞裸鼠肝脏转移有明显的抑制作用.