几种抗氧化剂对细胞间粘附分子-1表达的影响

目的 探讨抗氧化剂调节内皮细胞表面的粘附分子ICAM-1表达的分子生物学机制。方法 内皮细胞表面的粘附分子表达用细胞ELISA方法测定,内皮细胞NF-kB的活性用电泳迁移率分析测定。结果 PDTC,DCI和chrysin能明显抑制ICAM-1的表达。Probucol仅在低浓度时对ICAM-1有轻微抑制作用。电泳迁移率分析结果,只有PDTC对NF-kB的活性有抑制作用,其它三种抗氧化药无效。结论 这几种抗氧化药抑制内皮细胞表面粘附分子的表达与它们对核转录因子NF-kB的作用并无必然的联系。     

粘附分子与动脉粥样硬化的关系

粘附分子包括粘合素超家族、选择素家族、免疫球蛋白超家族、钙离子依赖的细胞粘附素家族及其它未归类的粘附分子，它参与机体许多重要的病理和生理过程．粘附分子介导的单核细胞对内皮细胞的粘附、迁移和分化，在动脉粥样硬化早期病变中有重要作用。氧化型低密度脂蛋白可促进粘附分子的表达，抗氧化剂可抑制其表达。提示抗氧化剂防治动脉粥样硬化既与其抗脂质过氧化有关，也与抑制粘附分子的表达有关。     

ICAM-1 与动脉粥样硬化

细胞间粘附分子－1是粘附分子的重要成员之一,它可通过一定机制参与介导单核细胞对内皮细胞的粘附,迁移和分化,在动脉粥样硬化早期,主要出现单核细胞,巨噬细胞,T细胞,中性粒细胞的浸润,细胞间的粘附分子－1在其中起重要作用。脂蛋白等因素可通过不同转录因子与途径调节细胞间粘附分子－1的表达,其中核转录因子－kB的作用研究较多,阻断单核细胞向内皮细胞迁移和相互作用可能是一种有效的预防或逆转动脉粥样硬化的途径。     

二甲亚砜抑制肿瘤坏死因子刺激内皮细胞粘附分子的表达

为了探讨抗氧化剂二甲亚砜对白细胞粘附肿瘤坏死因子－α少有 化的人脐静脉内皮细胞，及共对肿瘤坏死因子－α刺激的内皮细胞表达粘附分子、Ｅ－选择素、细胞间粘附分子－１的影响，用酶联免疫吸附分析方法检测内皮细胞的粘附分子表达，应用孟加拉玫红活细胞染色测定白细胞与内皮细胞的粘附。结果发现，用肿瘤坏死因子－α刺激人脐静脉内皮细胞６小时显著增加白细胞与内皮细胞的粘附（Ｐ〈０．０１）；用肿瘤坏死因子－α孵育人脐静     

巨噬细胞与动脉粥样硬化斑块稳定性

为探讨抗氧化剂维生素Ｅ和元素硒对脂质过氧化诱导内此细胞表达细胞粘附分子及单核细胞粘附的影响产胺诱发培养内皮细胞脂质过氧化,检测维生素Ｅ和元素硒对单核细胞会的影响,用免疫组化及共焦显微镜观察维生素Ｅ和元素硒对内此表达血管细胞粘附分子－１及内此细胞白细胞粘附分子－１的影响。结果显示抗氧化剂维生素Ｅ和元素硒可抑制内此脂质过氧化,抑制血管细胞粘附分子－１及内此占附分子－１表达,减少单核细胞粘附。提示抗氧化     

动脉粥样硬化的发生与细胞间粘附分子

动脉粥样硬化的发生与单核细胞和血管内皮细胞的粘附密切相关。单核细胞产生自由基等，使低密度脂蛋白氧化，导致动脉粥样硬化，细胞间粘附分子与配体在单核细胞与血管内皮细胞的粘附中起重要作用。ＩＬ－１、ＴＮＦ等细胞因子可能是通过细胞间粘附分子来促使动脉粥样硬化的发生和发展。核因子ｋＢ在转录水平调节细胞站粘附分子的表达、也在动脉粥样硬化的发生发展中起调节作用。     

一氧化氮对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠血管平滑肌细胞细胞间粘附分子-1表达的影响

为探讨肿瘤坏死因子－α介导单核细胞与血管平滑肌细胞粘附致动脉 粥样硬化及一氧化氮抗动脉粥样硬化的机制,用体外培养的大鼠血管平滑肌细胞,以硝普钠为一氧化氮供体,采用细胞粘附实验,流式细胞术和逆转录－聚合酶链反应观察一氧化氮对肿瘤坏死因子－α诱导的细胞间粘附分子－1在血管平滑肌细胞中的表达及其对单核细胞与血管平滑肌细胞粘附的影响。结果发现一氧化氮显著抑制肿瘤坏死因子－α诱导的单核细胞与血管平滑肌细胞的粘附及细胞间粘附分子－1在血管平滑肌细胞中的表达,减少血管平滑肌细胞表面的细胞间粘附分子－1,结果表明一氧化氮抑制细胞间粘附分子－1基因表达及降低单核细胞与血管平滑肌细胞之间的粘附率是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

内皮细胞粘附分子与动脉粥样硬化

内皮细胞是血液单核细胞、淋巴细胞迁移到内皮下层的功能屏障和中介。在过氧化脂质、病毒感染等动脉粥样硬化危险因子作用下,内皮细胞粘附性发生改变,其表面粘附分子呈异常表达,诱导单核细胞粘附并向内皮下层迁移。通过检测内皮细胞的粘附性、抑制粘附分子表达或封闭粘附分子可为动脉粥样硬化的早期诊断与防治提供新的思路。     

川芎嗪对血管壁细胞血管细胞粘附分子1和单核细胞趋化蛋白1表达的作用及可能机制

目的观察川芎嗪对血管内皮细胞和平滑肌细胞表达血管细胞粘附分子1、单核细胞趋化蛋白1和核因子κB的影响,探讨川芎嗪抗动脉粥样硬化分子机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞和大鼠胸主动脉平滑肌细胞。用氧化型低密度脂蛋白、氧化型极低密度脂蛋白、血管紧张素Ⅱ和(或)川芎嗪作用于细胞后,采用免疫细胞化学和原位分子杂交检测各组细胞血管细胞粘附分子1、单核细胞趋化蛋白1和核因子κB的表达情况。用单核细胞粘附试验检测川芎嗪对单核细胞粘附于内皮细胞的影响。结果氧化型低密度脂蛋白、氧化型极低密度脂蛋白或血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞血管细胞粘附分子1蛋白相对表达量分别为0.552±0.008、0.460±0.006和0.486±0.025,明显高于对照组的0.365±0.019(P<0.01);诱导平滑肌细胞血管细胞粘附分子1蛋白相对表达量分别为0.564±0.007、0.513±0.021和0.524±0.008,明显高于对照组(0.416±0.013,P<0.01)。氧化型低密度脂蛋白、氧化型极低密度脂蛋白或血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞单核细胞趋化蛋白1蛋白相对表达量分别为0.962±0.051、0.878±0.014和0.824±0.006,明显高于对照组的0.303±0.008(P<0.01);诱导平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1蛋白相对表达量分别为0.877±0.011、0.845±0.023和0.881±0.009,明显高于对照组的0.362±0.018(P<0.01)。氧化型低密度脂蛋白、氧化型极低密度脂蛋白或血管紧张素Ⅱ诱导组血管细胞粘附分子1和单核细胞趋化蛋白1的mRNA表达明显高于对照组(P<0.01)。同时加入川芎嗪后血管细胞粘附分子1和单核细胞趋化蛋白1蛋白和mRNA表达明显低于相应诱导组(P<0.01)。氧化型低密度脂蛋白、氧化型极低密度脂蛋白或血管紧张素Ⅱ诱导核因子κB在核内表达,同时加入川芎嗪后核因子κB表达于胞浆,核内阴性。与氧化型低密度脂蛋白或氧化型极低密度脂蛋白诱导组(2.047±0.011和1.936±0.014)比较,加入川芎嗪后,粘附于内皮细胞的单核细胞明显减少(1.282±0.020和1.265±0.016,P<0.01)。结论川芎嗪通过抑制或阻断动脉粥硬化危险因素氧化型低密度脂蛋白、氧化型极低密度脂蛋白和血管紧张素Ⅱ诱导的核因子κB活化及核内移位,抑制血管壁细胞血管细胞粘附分子1和单核细胞趋化蛋白1表达,抑制单核细胞粘附于内皮,而发挥其抗动脉粥样硬化作用。     

高压培养调节E选择素表达及核因子κB信号通路

目的观察高压培养对内皮细胞E选择素表达的影响及其可能的分子机制。方法在自制的可调压力培养箱中,用高于1个标准大气压的不同压力培养人脐静脉内皮细胞,运用间接免疫荧光技术、流式细胞术检测血管内皮细胞粘附分子E选择素蛋白的表达,Western blot检测核因子κB抑制因子α的表达,间接免疫荧光法观察核因子κB的表达分布。结果高压培养和大气压培养细胞形态无明显差异;高压培养E选择素表达明显增加,180 mmHg培养24 h E选择素的表达升高1.5倍;180 mmHg培养6 h和12 h核因子κB抑制因子α的表达降低2倍多;180 mmHg培养24 h激活核因子κB,使其转位于细胞核。结论高压培养促进E选择素表达,核因子κB信号通路参与调控。     

Leonurine protects against tumor necrosis factor-α-mediated inflammation in human umbilical vein endothelial cells

ObjectiveLeonurine, a bioactive alkaloid compound in Herba leonuri, has various pharmacological activities, including antioxidant and anti-apoptotic capacities. This study was conducted to test the hypothesis that leonurine was able to attenuate tumor necrosis factor (TNF)-α-induced human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) activation and the underlying molecular mechanisms.MethodsMitogen-activated protein kinases (MAPK) activation, nuclear factor-κB (NF-κB) activation, and inflammatory mediators expression were detected by Western blot or enzyme-liked immunosorbent assay, intracellular reactive oxygen species (ROS) and NF-κB p65 translocation were measured by immunofluorescence, endothelial cell–monocyte interaction was detected by microscope.ResultsLeonurine inhibited U937 cells adhesion to TNF-α-activated HUVEC in a concentration dependent manner. Treatment with leonurine blocked TNF-α-induced mRNA and protein expression of adhesion molecules (intercellular adhesion molecule-1 and vascular cell adhesion molecule-1), cyclooxygenase-2, and monocyte chemoattractant protein-1 in endothelial cells. In addition, leonurine attenuated TNF-α-induced intracellular ROS production in HUVEC. Furthermore, leonurine also suppressed the TNF-α-activated p38 phosphorylation and IκBα degradation. Subsequently, reduced NF-κB p65 phosphorylation, nuclear translocation, and DNA-binding activity were also observed.ConclusionsOur results demonstrated for the first time that the anti-inflammatory properties of leonurine in endothelial cells, at least in part, through suppression of NF-κB activation, which may have a potential therapeutic use for inflammatory vascular diseases.     

替米沙坦对同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1、核因子κB表达及细胞黏附的影响

目的观察替米沙坦对同型半胱氨酸诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1(VCAM-1)、核因子κB(NF-κB)表达及与单核细胞黏附的影响。方法胶原酶消化法获取人脐静脉内皮细胞;RT-PCR检测VCAM-1 mRMA的表达;Western blot检测VCAM-1、NF-κB蛋白的表达;ROSE BENGAL染色法检测单核细胞-血管内皮细胞黏附功能。结果与空白对照组相比,同型半胱氨酸增强了人脐静脉内皮细胞VCAM-1 mRMA、VCAM-1蛋白、NF-κB p65蛋白的表达水平及与单核细胞黏附能力。替米沙坦(1000 nmol/L组)明显降低了同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞VCAM-1 mRMA、VCAM-1蛋白、NF-κB p65蛋白及与单核细胞的黏附水平(P<0.01)。与同型半胱氨酸组比,PDTC(NF-κB抑制剂)组NF-κB p65蛋白、VCAM-1 mRMA、VCAM-1蛋白表达水平均明显降低,内皮细胞与单核细胞的黏附水平也明显降低(P<0.01)。结论替米沙坦抑制了VCAM-1 mRMA和蛋白的表达及内皮与单核细胞的黏附水平,其机制可能是通过抑制NF-κB而抑制炎症反应及内皮损伤。     

血管生成素1通过核因子κB传导通路调节内皮祖细胞炎症因子表达

目的探讨血管生成素1调节内皮祖细胞炎症因子的可能的信号传导通路。方法采用肿瘤坏死因子α诱导内皮祖细胞炎症,以慢病毒为载体将血管生成素1导入内皮祖细胞中,使用特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐抑制核因子κB,通过Western blot检测内皮祖细胞中血管生成素1蛋白和核因子κB蛋白的表达情况,随后采用荧光定量聚合酶链反应、酶联免疫吸附法检测各组内皮祖细胞中黏附分子细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1的表达水平。结果转染血管生成素1基因内皮祖细胞中能够成功表达血管生成素1蛋白,而经吡咯烷二硫代氨基甲酸盐抑制后核因子κB蛋白未见明显表达。与肿瘤坏死因子α组相比,血管生成素1组、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐组、血管生成素1+吡咯烷二硫代氨基甲酸盐组细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1的mRNA和蛋白表达水平均明显下调(P<0.05),三组间无明显差异(P>0.05)。结论血管生成素1可能通过核因子κB信号传导通路影响肿瘤坏死因子α诱导的内皮祖细胞的炎症反应。     

同型半胱氨酸血症诱导内皮细胞蛋白激酶C和核转录因子-κB的活化

目的探讨内皮细胞蛋白激酶C(PKC)和核转录因子-κB(NF-κB)信号传导系统在调节高同型半胱氨酸(Hcy)血症发病过程中的作用。方法Hcy、PKC抑制剂或两者联合作用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)不同时间点后,用TransAMTM系统和凝胶电泳迁移率实验(EMSA)法检测NF-κB P65的活性,蛋白质印迹技术分析相关蛋白的表达。结果EMSA和TransAMTM系统检测显示,在高浓度Hcy刺激下,HUVEC中NF-κB的活化高峰出现在作用0.5 h和6 h时;且伴有IκBα短暂快速的磷酸化(P<0.05);Hcy刺激0.5 h后PKC水平较对照组明显上升(P<0.05);予以PKC抑制剂Bisindolylmaleimide Ⅰ(100 nmol/L)处理后,由Hcy所介导的NF-κB的激活作用和IκBα磷酸化效应几乎完全被抑制。结论Hcy能诱导HUVEC NF-κB系统活化,这些生物学效应是通过PKC信号通路来实现的;PKC抑制剂能显著抑制上述效应。     

Nuclear factor κB up-regulation of CCAAT/enhancer-binding protein β mediates hepatocyte resistance to tumor necrosis factor α toxicity

The sensitization of hepatocytes to cell death from tumor necrosis factor α (TNFα) underlies many forms of hepatic injury, including that from toxins. Critical for hepatocyte resistance to TNFα toxicity is activation of nuclear factor κB (NF-κB) signaling, which prevents TNFα-induced death by the up-regulation of protective proteins. To further define the mechanisms of hepatocyte sensitization to TNFα killing, immunoblot analysis comparing livers from mice treated with lipopolysaccharide (LPS) alone or LPS together with the hepatotoxin galactosamine (GalN) was performed to identify TNFα-induced protective proteins blocked by GalN. Levels of CCAAT/enhancer-binding protein β (C/EBPβ) were increased after LPS treatment but not GalN/LPS treatment. In a nontransformed rat hepatocyte cell line, TNFα-induced increases in C/EBPβ protein levels were dependent on NF-κB-mediated inhibition of proteasomal degradation. Pharmacological inhibition of c-Jun N-terminal kinase (JNK) did not affect C/EBPβ degradation, indicating that the process was JNK-independent. C/EBPβ functioned to prevent cell death as adenoviral C/EBPβ overexpression blocked TNFα-induced apoptosis in cells sensitized to TNFα toxicity by NF-κB inhibition. C/EBPβ inhibited TNFα-induced caspase 8 activation and downstream mitochondrial cytochrome c release and caspase 3 and caspase 7 activation. Studies in primary hepatocytes from c/ebpβ(-/-) mice confirmed that loss of C/EBPβ increased death from TNFα. c/ebpβ(-/-) mice were also sensitized to liver injury from a nontoxic dose of LPS or TNFα. The absence of jnk2 failed to reverse the GalN-induced block in C/EBPβ induction by LPS, again demonstrating that C/EBPβ degradation was JNK-independent. Conclusion: C/EBPβ is up-regulated by TNFα and mediates hepatocyte resistance to TNFα toxicity by inhibiting caspase-dependent apoptosis. In the absence of NF-κB signaling, proteasomal degradation of C/EBPβ is increased by a JNK-independent mechanism and promotes death from TNFα.     

Inhibition of PMA-induced endothelial cell activation and adhesion by over-expression of domain negative IκBα protein

AIM: NF-κB, regulate the expression of cytokine-inducible genes involving immune and inflammatory responses, will be potential therapy approach for allograft from rejection. In this study, we use pCMV-IκBαM vector to inhibit NF-κB activation and investigate the effect of pCMV-IκBαM in inhibition of T cells adhesion to endothelial cells. METHODS: The NF-κB activity was detected with pNF-κB reporter gene and electrophoretic mobility shift assay. Expression of cell surface molecules was detected by RT-PCR and flow cytometer. The cell-cell adhesion assay was performed to determine the effect of pCMV-IκBαM in inhibition of T cells adhesion to endothelial cells. RESULTS: We could find that NF-κB activity is inhibited by over-expression of non-degraded IκBα protein. Expression of adhesion molecules like ICAM-1, VCAM-1, and P-selectin as well as cell-cell adhesion were inhibited significantly by transfection of the pCMV-IκBαM vector. CONCLUSION: Our results indicate that the pCMVIκBαM, which inhibit the activity of NF-κB through over-expression of non-degraded IκBα protein, can be used for gene therapy in diseases involving NF-κB activation abnormally like organ transplantation via inhibiting cell adhesion.