人参根中聚糖类人参坦(Panaxans)A,B,C,D,E的分离与降血糖活性及A的部分结构

朝鲜白人参经50%MeOH 于室温提取3次,每次4天,合并提取液,减压浓缩,得提取物,与纤维素混合上纤维素柱,用MeOH,50%MeOH 及水洗脱。水洗脱部分于纤维素柱内对水透析4天,不被透析的蛋白质经DEAE 纤维素柱层析,用0.05 MTris-HCl 缓冲液(pH8.0,NaCl 浓度0～0.5M)洗,得两个组分P-1和     

添加表面活性剂检测西罗莫司原料药细菌内毒素的含量

目的:采用添加表面活性剂建立难溶性西罗莫司原料药细菌内毒素的检测方法.方法:以0.1％(W/V)聚山梨酯-80溶解西罗莫司原料药,用细菌内毒素检查用水(BET水)稀释后进行凝胶法细菌内毒素检查的方法学研究.结果:西罗莫司原料药用0.1％(W/V)聚山梨酯-80溶解并用BET水稀释至0.4 mg.mL-1浓度及以下时对鲎...     

一个新的DNA生物素化试剂——对重氮化苯甲酰生物胞素

对重氮化苯甲酰生物胞素(DBB)是实验室合成的一种DNA生物素化试剂,用其标记DNA快速方便,不需要酶或特殊仪器.将新变性的pSVK1或pUC715质粒DNA(10μg)或单链M13 DNA mp19(1μg)加到新制备的DBB(pH9,258μl,14.6mM)溶液中,室温下反应30分钟.然后加入0.1倍体积的3M醋酸钠溶液(pH5.5)和2倍体积的冷乙醇,在-20℃下放置1小时至过夜.然后高速离心15分钟,用70%的冷乙醇洗涤沉淀的核     

胰岛素栓在兔直肠内的吸收

为了在较低剂量下研究胰岛素栓的降血糖作用,本文应用各种表面活性剂制备栓剂,研究了这些表面活性剂对胰岛素直肠吸收的影响。所用表面活性剂有阴离子型、阳离子型、非离子型与两性离子型,还有胆酸与卵磷脂。将胰岛素溶解或混悬于0.1M枸橼酸盐缓冲液或0.1M磷酸盐缓冲液中制成pH_3～8的各种溶液;用日本玉米油作基质,混入备种浓度的各种表面活性剂制备胰岛素检;将200U胰岛素锌制成100ml注射液,溶媒为1.4%W/V甘油、苯酚0.1%W/V与0.01M盐酸。用雄兔(2.0～2.4kg)作试验动物,实验前24小时禁食使直肠内的粪便完全排空。用玻璃注射管(长7.5cm、     

50%硫酸镁溶液中过氧化氢稳定性的影响因素分析

目的:考察pH值和加入不同浓度金属离子络合物乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)对50%硫酸镁溶液中过氧化氢稳定性的影响,为过氧化氢作为防腐剂使用提供试验依据。方法:在pH值3.69、3.80、4.02、4.77、6.40、6.81和加入EDTA-Na20.01%、0.02%、0.04%、0.08%、0.16%的条件下,测定2厂家50%硫酸镁溶液中过氧化氢在贮存60d过程中的含量变化,分析pH值和EDTA-Na2对过氧化氢稳定性的影响。结果:不同pH值条件下过氧化氢贮存5d后含量均为0;加入0.04%以下浓度的EDTA-Na2贮存60d后过氧化氢含量均为0,加入0.04%以上浓度的EDTA-Na2贮存60d后过氧化氢的含量均约为50%。结论:溶液pH值对过氧化氢无稳定作用,加入EDTA-Na2对过氧化氢有一定的稳定作用。     

免疫荧光试验用于结核分枝杆菌抗体的测定

免疫荧光方法测定结核分枝杆菌抗体业已证明是有价值的。本文作者利用的抗原是用乙基结晶氯仿酸化处理旧结核菌素制得的聚合结核菌素。按照 Avrameas 和 Temynak的方法聚合抗原,把每 ml 含有4.8mg 蛋白的旧结核菌素4ml,用0.1M 醋酸钠 pH5.6透析过夜。此液用0.1MHCl 矫正至 pH5.2,     

用TritonX-100裂解的HBsAg组分的分析

本文作者用非离子去垢剂裂解纯化的20～25nm的HBsAg颗粒,并用化学和血清学方法分析所得各种组分。其方法要点如下: 从乙型肝炎持续感染的猩猩的血浆中按Skally(1978)方法得到完全是20～25nm的HBsAg球形颗粒,然后将HBsAg放于0.01MTris-HCl(pH7.3)中,加入Triton X-100和NaCl,令其浓度分别为2％和0.5M,在37℃保温过夜。裂解物用蔗糖密度梯度超离心测得其沉降系数为3.9s。将它再通过CoA-Sepharose柱进行分段,起始缓冲液是含有2％Triton X-100、0.5M NaCl、1mM CaCl_2和1mM MnCl_2的pH7.3的0.01M tris-HCl;     

大鼠脑内阿片受体的溶脱及稀释对其结合活性的影响

用氚标记依托菲(³H-etor)或氚标记二苯羟乙酸喹咛酯(³H-QNB)与大鼠脑(去小脑)P₂膜制备共同保温后,以Triton x-100溶脱,再用Sepharose 6 B层析,阿片受体及M胆碱受体洗脱峰位置相同,分子量皆约为450,000。以CHAPS溶脱P₂制备,可获得有活性的阿片及M胆碱受体。溶脱液被Tris缓冲液(50 mM,pH 7.5)稀释后,阿片受体结合能力可提高25倍,如稀释液中含CHAPS(1 mM)结合能力变化不大。     

鲎抗内毒素因子模拟肽4的体外生物活性实验研究

目的研究鲎抗内毒素因子模拟肽4(modeling peptide 4 from the Limulus anti—lipopolysaccharide factor，M4)体外中和内毒素的活性。方法研究以对内毒素高亲和力的多粘菌素B(polymyxin B．PMB)为对照，M4设80、40、20、10、5μmol／L浓度，结合内毒素的活性以生物传感技术分析；中和内毒素的能力以鲎试验动态浊度法测定；对LPS刺激THP-1细胞释放TNF-α的影响采用ELISA试剂盒定量观察。结果M4具有较好的内毒素亲和力和中和活性，在5、10、20、40和80μmol／L浓度时对内毒素2EU／ml(1EU约等于100pg)的中和率分别为43．44％、47．76％、63．12％、81．54％和84．54％，呈明显的浓度梯度效应．20μmol／L以上浓度时与PMB作用相当。对THP-1细胞释放TNF—α的影响结果显示，M4可明显抑制LPS刺激的TNF—α释放，但M4本身具有诱导THP-1细胞释放TNF—α的作用。结论M4具有较强的中和内毒素活性，值得进一步深入研究。     

对百日咳毒素B低聚物的免疫应答

百日咳毒素在百日咳的发病机理及免疫中均起重要作用。它由具有酶活性的A亚单位和无毒的B低聚物组成。本文证实B低聚物能诱导小鼠产生对百日咳天然毒素的免疫应答,并对百日咳毒素的实验性攻击具有防御作用。作者把百日咳毒素溶于含3M尿素、1%3-[(3-胆胺丙基)-二甲氨基]-1-丙烷磺酸盐和100μM三磷酸腺苷(ATP)的10mM磷酸钠缓冲液(pH7.0)中放置15分钟后混合于羧甲基琼脂糖凝胶中,室温放置15分钟后装于层析柱,用磷酸钠缓冲液洗下不与羧甲基结合的A亚单位,再以6倍体积的缓冲液洗涤,     

无载体多价合成菌苗诱导生物活性抗体

最近报道,用仅含不同特性的合成肽的共聚体免疫小鼠,在无任何蛋白或多肽载体的情况下,仍能产生生物活性抗体,作者采用4种合成肽:链球菌肽S-34、白喉杆菌肽D、疟原虫肽PK26和乙型肝炎病毒肽H(99-121),前3种肽已有人证明能诱导生物活性抗体。用4种肽的共聚体或同聚物PK26或S-34免疫小鼠。采用戊二醛可达到不同肽的异分子聚合,即12.6mgS-34、10.1mgD、12.1mgH以及14.2mgPK26在9.8ml0.1M碳酸氢钠溶液中混合1小时,戊二醛加至最后浓度为2.63mM,在室温内连续搅拌,培育2周后以PBS彻底透析,重新获取的肽总量可达90%。     

用SDS-PAGE银染法分析脑膜炎球菌多糖菌苗中脂多糖(内毒素)含量

本文报道,用一种简易的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)银染法检测脑膜炎球菌多糖(PS)菌苗中脂多糖(LPS)含量。作者采用法国和美国制造的多糖菌苗,美国FDA的标准内毒素和鲎试剂以及美国Sigma化学公司的蛋白酶K。SDS-PAGE采用Laemmli系统。含乳糖之菌苗用含50mM三羟甲基氨基甲烷pH6.8,2mM乙二胺四乙酸、1%SDS、0.5% 2-巯基乙醇和0.001%溴酚蓝缓冲液溶解成2     

自人参分离胰岛素样物质

人参的水浸出液对离体的大鼠副睾脂肪组织有较强的抑制肾上腺素引起的脂肪分解的作用。已知胰岛素亦有此作用。本文用生化指标分离这类胰岛素样的物质。其分离法如下:人参1公斤,在4℃下搅拌24小时,离心过滤,滤浓浓缩(得1升),将其用10升蒸馏水透析48小时,外透析液(有抗脂肪分解活性)浓缩至150毫升,用DEAE纤维素吸着,再用1M碳酸氢胺缓冲液(pH 8.0)溶出,将有生理活性的部分通过分子筛Saph-adex G-50(予先用10mM碳酸氢胺缓冲     

新底物TMB在ELISA检测病毒性肝炎的应用

我们选用敏感性高而无诱变特性的新底物3,3′,5,5′—四甲基联苯胺(TMB),结合新型终止剂阴离子表面活性剂k12,用ELISA 对654份乙型肝炎血清标本进行了检测,并与常用底物OPD 及3‘3′一二氨基联苯胺(DAB)进行了敏感比较,得到满意结果。TMB 先用无水乙醇配成2mg/ml 的贮存液,临用时将底物配成0.1mg/ml 的应用液,每10ml 底物中加0.3%H_2O_2 20μl,每孔加100μl,置室温20～30分钟,每孔加1%阴离子表面活性剂k(?)滴终止反应,比色用630nm 滤光板,P/N≥2.1倍者为阳性。     

用胃酶、尿素及福马林三种方法灭活乙型肝炎病毒

作者把含乙型肝炎病毒(HBV)adr或ayw亚型的人血清稀释至10~3～10~5CID_(50)后,分别用胃酶、尿素及福马林处理,以观察不同方法灭活病毒的效果。胃酶处理:含有HBV adr亚型的血清稀释至10~5CID_(50)/ml,用1N HCl调pH至2.1±0.05,加入胃酶使最终浓度为1μg/ml,37℃搅拌18小时,再用1N NaOH调pH至7.0±0.2。取1ml静脉注射于1只黑猩猩体内。尿素处理:上述HBV材料,加尿素使最终浓度为8M,37℃搅拌4小时,5℃透析67小时,用1只黑猩猩试验,静脉注射1ml。福马林处理:血清稀释至含10~3、10~4及     

弹性蛋白酶抑制剂Fw99468抑制动力学的研究

弹性蛋白酶抑制剂Fw99468是小单孢菌FIM99468发酵产生的次级代谢产物.在37℃,0.05M Tris-HCl(pH7.6)缓冲液中,它对弹性蛋白酶具有抑制作用.在抑制剂浓度较小(0mM～0.013mM)的情况下,抑制剂与酶的结合呈直线关系,随着抑制剂浓度的提高,抑制活力曲线则出现漂移.根据Dixon图和Lineweaver-Burk图的研究,该抑制剂对弹性蛋白酶呈竞争性抑制,抑制常数Ki=3.5×10-5M.     

参附对脐静脉内皮细胞Toll样受体4/NF-κB途径的影响

目的观察参附注射液对内毒素介导的人脐静脉细胞Toll样受体4/NF-κB途径及细胞间黏附分子、E-选择素表达的影响。方法健康产妇分娩后的新鲜婴儿脐带,应用胶原酶消化,收集内皮细胞进行培养。实验分为对照组、内毒素组、内毒素+参附组。对照组:M199培养基中不加任何物质。内毒素组:M199培养基中加入脂多糖1 mg/L。内毒素+参附组:预先加入参附注射液10 mL/L,30 min后加入脂多糖1 mg/L。干预1h收集细胞,提取核蛋白测定NF-κB活性,干预12 h后收集细胞检测Toll样受体4、细胞间黏附分子1、E-选择素表达水平。结果内毒素组的Toll样受体4、细胞间黏附分子1、E-选择素表达水平、NF-κB活性均显著高于对照组,内毒素+参附组的Toll样受体4、细胞间黏附分子1、E-选择素表达水平、NF-κB活性均明显低于内毒素组。结论参附注射液可以通过抑制NF-κB活化,减弱Toll样受体4/NF-κB途径,抑制了脂多糖介导的黏附分子表达,从而减轻机体的炎症反应。     

牛磺酸对NMDA诱导的视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的 探讨牛磺酸对N-甲基-D天冬氨酸(NMDA)诱导的转基因的视网膜神经节细胞系RGC-5损伤的保护作用.方法 体外培养RGC-5细胞,用NMDA(100 μmol/L)诱导损伤.设正常对照组(A组)、单纯损伤组(B组)和地卓西平(MK-801)对照组(C组);以终浓度分别为0.01 mM(D1组)、0.1 mM(D2组)和1 mM(D3组)的牛磺酸预保护12h.用倒置显微镜下观察细胞形态,MTT比色法测定细胞存活率,Hochest染色检测细胞凋亡,RT-PCR测定B细胞淋巴瘤白血病2(Bcl-2)和B细胞淋巴瘤白血病相关X蛋白(Bax)mRNA表达的变化.结果 NMDA可诱导RGC-5细胞损伤.与B组比较,0.1mM和1mM牛磺酸可提高RGC-5细胞存活率,减少细胞凋亡(P＜0.05).0.1mM牛磺酸预保护后Bcl-2 mRNA表达水平增加,Bax mRNA的表达水平降低(P＜0.05).结论 牛磺酸可抑制NMDA诱导的视网膜神经节细胞凋亡,保护视网膜神经元.其机制可能与其上调Bcl-2mRNA表达和下调Bax mRNA的表达有关.     

阿糖胞苷的脑脊液动力学

对7例白血病脑膜转移患者脑室内注射阿糖胞苷(Ara-C)后,于24h 内分次收集的脑脊液及血浆样品,用反相HPLC 测定Ara-C 浓变(测脑脊液灵敏度为0.5μM,测血浆灵敏度为1μM),并可分离得原药Ara-C 及代谢物阿糖尿苷(Ara-U)。结果表明,经髓鞘向脑室注入Ara-C 30mg 后,脑脊液中初始浓度可达2mM以上,并保持在1μM 以上达24h(据组织培养试验,浓度在0.4μM 即具抗肿瘤作用)。外周血Ara-C 浓度低于1μM 未能测出。如静脉注射给药,Ara-C 剂量即     

一种用鲎试验测定灭活内毒素的新方法(英文)

本文建立了一种用鲎试验测定灭活内毒素的新方法,其主要步骤包括:(1)样品与内毒素的预保温反应;(2)反应混合物的有限稀释;(3)用ELISA鲎试验测定残留的内毒素,样品灭活内毒素的活性(EIA50)定义为能灭活加入的内毒素的50％时的初始内毒素浓度。采用这种方法,可以观察到人血清和血浆,鲎血浆,鲎阿米巴细胞溶解物(LAL)以及多粘菌素B对内毒素的定量灭活作用。LAL对不同菌株的革兰氏阴性菌产生的内毒素的灭活作用有显著不同。本文建立的方法可以消除样品对鲎试验的干扰,适用于筛选和评价抗内毒素物质。