紫杉醇诱导三阴性乳腺癌细胞自噬相关蛋白LC3的表达及其作用

目的:探讨紫杉醇对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞自噬相关蛋白LC3表达的影响及意义。方法:用CCK-8法测定紫杉醇对TNBC细胞MDA-MB-231增殖的抑制作用及25%抑制浓度(IC_(25));用IC_(25)浓度的紫杉醇作用MDA-MB-231细胞后,分别用免疫荧光化学法、Western blot、流式细胞术检测细胞LC3与凋亡相关蛋白的表达及细胞的凋亡率。结果:紫杉醇呈浓度依懒性抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P0.05),其IC_(25)为3.11μg/m L。IC_(25)浓度的紫杉醇处理后,MDA-MB-231细胞后LC3的表达量以及LC3B/LC3A比例明显升高、凋亡蛋白Bax与caspase-3蛋白表达量明显降低、总凋亡率与早期调亡率均明降低(均P0.05)。结论:紫杉醇可诱导TNBC细胞自噬相关蛋白LC3表达升高,该作用可能降低细胞凋亡,从而导致TNBC细胞产生紫杉醇耐药。     

泛素特异性蛋白酶5调控三阴性乳腺癌迁移及增殖的机制

目的探索三阴性乳腺癌(TNBC)细胞中USP5的表达及其对细胞生物学行为的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测USP5在TNBC细胞MDA-MB-231和BT-549细胞中的表达。通过转染慢病毒(shRNA)敲低USP5的表达。采用免疫共沉淀(CO-IP)实验验证USP5对活化C激酶1受体(RACK1)泛素化水平的影响。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验检测细胞增殖能力, Transwell检测细胞迁移能力的变化。两组之间的比较采用独立样本t检验。结果 MDA-MB-231细胞和BT-549细胞中USP5的表达(3.167±1.102, 4.700±1.609), 明显高于正常乳腺细胞系MCF-10A(1.000±0.300), 差异有统计学意义(t=3.287、3.915, P<0.05)。在USP5稳定敲低的细胞系中USP5蛋白的表达(MDA-MB-231:0.160±0.012;BT-549:0.190±0.028)显著低于阴性对照细胞(MDA-MB-231:1.000±0.179;BT-549:1....     

miR-299-3p通过调控PAX3基因表达介导乳腺癌细胞增殖和凋亡

目的:研究miR-299-3p对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制.方法:以乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,qRT-PCR检测乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中miR-299-3p和PAX3 mRNA的表达,Western blot检测MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞中PAX...     

USP47促进三阴性乳腺癌进展的机制

目的探讨USP47促进乳腺癌进展的作用及其机制。方法应用蛋白质印迹法(Western blot)和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)实验技术检测USP47在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、BT-549和正常乳腺细胞系MCF-10A(乳腺癌和正常乳腺细胞系均购自ATCC细胞库)中的表达。利用siRNA-USP47敲低MDA-MB-231、BT-549中USP47的表达。应用Transwell检测乳腺癌细胞的迁移能力。利用细胞计数实验(CCK-8)、平板克隆和EDU实验检测MDA-MB-231、BT-549细胞的增殖能力。采用Western blot检测蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和基质金属蛋白酶(MMP)-9的表达。两组之间比较采用独立样本t检验。结果 USP47在MDA-MB-231和BT-549中USP47的表达明显高于正常乳腺癌细胞MCF-10A(MDA-MB-231:2.70±0.53, BT-549:2.50±0.65, MCF-10A:1.00±0.00)。差异有统计学意义(MDA-MB-231:t=4.49, ...     

小干扰RNA下调Notch-1基因的表达对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学功能的影响

目的 观察Notch-1信号通路在三阴性乳腺癌(TNBC)细胞MDA-MB-231增殖中的作用,并探讨其分子机制.方法 运用小干扰RNA(siRNA)转染技术,下调MDA-MB-231细胞中Notch-1 mRNA表达,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测干扰后5d的细胞增殖,并用流式细胞术检测干扰48 h后细胞增殖、凋亡及细胞周期的变化.另外应用实时定量聚合酶链反应(PCR)和Western blot法检测siRNA转染前后Notch-1、细胞周期素D1( Cyclin D1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)、bcl-XL mRNA变化及细胞核中核因子(NF)-κB蛋白的变化.结果 N0tch-1 siRNA可有效降低细胞中Notch-1 mRNA表达;转染后细胞增殖能力明显受到抑制,第5天的抑制率达到44.7％,细胞凋亡率由3.67％增加到13.25％,细胞周期G2期由6.27％增加到14.28％.进一步研究结果显示siRNA介导的Notch-1下调,可使细胞核内NF-κB蛋白表达降低,细胞中Cyclin D1、bcl-2、bcl-XL mRNA 表达下调.结论 Notch-1信号通路在TNBC中发挥重要作用,siRNA下调Notch-1可有效抑制MDA-MB-231细胞增殖,Notch-1是TNBC潜在的新治疗靶点.     

USP41促进三阴性乳腺癌恶性表型及阿霉素耐药的作用机制

目的明确泛素特异性蛋白酶41(ubiguitin-specific peptidase 41, USP41)在三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer, TNBC)的表达情况, 及其与TNBC恶性表型及阿霉素敏感性的相关性和潜在作用机制。方法采用Western blot、qPCR检测USP41在TNBC耐药细胞株及临床组织样本的表达情况。随后确定USP41分子高表达, 并通过CCK8、克隆形成实验、Transwell、Western blot及CoIP-MS等细胞生物学方法评价USP41在TNBC恶性表型及阿霉素耐药中的作用及机制。结果 USP41在TNBC样本的表达显著高于癌旁组织。USP41在阿霉素耐药细胞株MDA-MB-231/DXR中表达量高出近40倍, IC50值为6.86 μM。干扰USP41可显著增加MDA-MB-231/DXR细胞对阿霉素的敏感性。干扰USP41可显著的抑制细胞的细胞增殖、克隆形成及迁移能力, 克隆数量降低30%～80%, 迁移细胞数量降低超过70%, 差异有统计学意义。此外, USP41敲低可提高MDA-MB-231细胞...     

长链非编码RNA RP1-85F18.6在乳腺癌细胞中的表达及其对增殖和细胞周期的影响

背景与目的:近年来,大量研究表明长链非编码RNA(lncRNA)在肿瘤发生、发展中起着重要作用。lncRNA RP1-85F18.6是新近发现的非编码RNA,其在结肠癌组织和细胞系中高表达,并可促进肿瘤细胞增殖和侵袭,抑制凋亡及调控细胞周期。然而,目前尚无lncRNA RP1-85F18.6在乳腺癌中的研究报道,因此,本研究初步探讨lncRNA RP1-85F18.6在乳腺癌细胞中的表达及其对增殖和细胞周期的影响。方法:qRT-PCR法检测lncRNA RP1-85F18.6在乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MBA-MD-468、MCF-7 及正常乳腺细胞系MCF-10A中的表达。将MDA-MB-231细胞分别转染RP1-85F18.6沉默序列(沉默组)与阴性对照序列(阴性对照组),将无处理的MDA-MB-231细胞作为空白对照组,在各组细胞中采用MTT法测定增殖能力,PI染色流式细胞仪检测法测定细胞周期,Western blot法测定Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、cyclin A1和p21~(C1P1)蛋白的表达。结果:乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MBA-MD-468及MCF-7中lncRNA RP1-85F18.6相对表达量均高于正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(均P0.05)。沉默组在转染后24、48、72、96 h的OD_(490) _(nm)值均明显低于空白对照组(均P0.05)。与空白对照组比较,沉默组的G_1/G_0期细胞比例无明显变化(P0.05),但S期细胞比例明显升高、G_2/M期细胞比例明显降低(均P0.05);沉默组Ki67﹑PCNA及cyclin A1蛋白表达量明显下调,而p21~(C1P1)蛋白表达量明显上调(均P0.05)。阴性对照组与空白对照组间以上指标差异均无统计学意义(均P0.05)。结论:lncRNA RP1-85F18.6在乳腺癌细胞系中高表达,其可能通过调节增殖相关蛋白及细胞周期蛋白的表达而参与乳腺癌的发生与发展,对lncRNA RP1-85F18.6及其相关靶基因的干预可能为乳腺癌的治疗提供新的途径。     

艾司氯胺酮诱导人乳腺癌细胞株MDA-MB-468凋亡及机制研究

目的探究艾司氯胺酮(esketamine, ESK)对乳腺癌细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用和作用机制。方法通过CCK-8实验检测ESK对乳腺癌细胞的增殖抑制作用, Annexin V/PI双染检测细胞形态变化, 流式细胞术检测细胞凋亡情况和活性氧水平, Western blot检测凋亡及通路相关蛋白的表达情况。结果 CCK-8实验结果证明ESK能以时间依赖性方式抑制乳腺癌细胞增殖, ESK以20 μM处理MDA-MB-468细胞后存活率为(35.47±2.61)%, 较同浓度长春瑞滨处理差异具有统计学意义(P<0.05), ESK对MDA-MB-468细胞的IC50值为(14.54±2.12)μM;ESK处理后大幅度降低线粒体膜电位, 蛋白水平中上调Cytochrome C、BCL2-Associated X的蛋白质(Bcl-2 associated X protein, Bax)及Caspase-3的表达, 下调B淋巴细胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2 protein, Bcl-2)的表达, 诱导MDA-MB-468细胞发生线粒体依赖性凋亡;ESK能上调MDA-...     

miR-30a对人乳腺癌细胞系增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的 :探讨miR-30a在人乳腺癌细胞系中的表达,及其对乳腺癌细胞系增殖、迁移和侵袭的影响,并寻找作用靶基因。方法:用q RT-PCR法检测miR-30a在人乳腺癌细胞系(MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3、MDA-MB-468、MDA-MB-453、T47D)和人乳腺正常上皮细胞(HBL-100)中的表达。构建miR-30a过表达的人乳腺癌细胞系MCF-7-miR-30a、MDA-MB-231-miR-30a,分别用CCK8法、transwell法检测过表达miR-30a对于乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。通过Western印迹法检测靶蛋白的表达,并通过Luciferase双荧光素酶报告系统验证其抑制作用。结果:与乳腺正常上皮细胞相比,miR-30a在人乳腺癌细胞系中均呈低表达(P<0.05)。在MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞系中过表达miR-30a后,乳腺癌细胞系的增殖、迁移和侵袭能力均有不同程度的抑制(P     

三阴性乳腺癌细胞脂肪非典型钙黏蛋白4表达下调的生物学作用及机制

背景与目的 三阴性乳腺癌（TNBC）容易发生侵袭转移,恶性程度极高。笔者团队前期研究发现脂肪非典型钙黏蛋白4（FAT4）在TNBC组织中呈低表达且与预后相关,进而本研究进一步探讨FAT4对TNBC细胞生物学行为的影响,及其相关机制。方法 用qRT-PCR及Western blot检测正常人乳腺上皮细胞系（MCF-10A）及不同TNBC细胞系（BT-549、MDA-MB-231、MDA-MB-468、MDA-MB-436）中FAT4的表达水平。选择其中合适的TNBC细胞系,分别转染FAT4-shRNA（FAT4敲低组）、阴性对照序列（阴性对照组）,以未处理的TNBC细胞为空白对照组,分别采用CCK-8实验、流式细胞术、Transwell小室实验检测细胞增殖能力、凋亡率、侵袭与转移能力的变化,并用Western blot检细胞中Hippo信号通路下游靶点YAP及上皮间质转化（EMT）相关蛋白的变化。结果 与正常人乳腺上皮细胞比较,各TNBC细胞系中FAT4的mRNA与蛋白表达量均不同程度的降低（均P<0.05）。功能实验选用BT-549细胞和MDA-MB-436细胞。无论在BT-549细胞或MDA-MB-436细胞中,与空白对照组比较,FAT4敲低组在转染后24、48、72 h的增殖能力均明显升高、凋亡率明显降低、侵袭与转移能力明显增强（均P<0.05）;YAP蛋白表达量无明显变化（P>0.05）,但磷酸化YAP（p-YAP）表达量明显降低,上皮标志物E-cadherin水平明显降低,而间质标志物N-cadherin水平明显升高（均P<0.05）;阴性对照组与空白对照组间以上指标差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论 FAT4表达水平在TNBC细胞中普遍降低,FAT4表达的降低能增强TNBC细胞增殖和侵袭迁移能力、减少TNBC细胞凋亡,其机制可能与FAT4降低后Hippo信号通路下游的YAP蛋白磷酸化减少,从而促进EMT进程有关。     

低频超声微泡增强紫杉醇诱导三阴性乳腺癌细胞自噬的作用及机制

目的 探讨低频超声微泡增强紫杉醇诱导三阴性乳腺癌细胞自噬的作用及机制。方法 将MDA-MB-468细胞分为对照组(不进行处理)、紫杉醇组(6μg/ml紫杉醇)、低频超声组(低频超声+6μg/ml紫杉醇)和低频超声微泡组(低频超声+6μg/ml紫杉醇+微泡),检测各组MDA-MB-468细胞增殖情况,凋亡情况,自噬情况,Bcl-2、Bax、Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达情况。结果 与0μg/ml相比,1、3、6、12、24μg/ml紫杉醇处理下MDA-MB-468细胞增殖抑制率均升高(P 0. 05)。与对照组相比,紫杉醇组MDA-MB-468细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Bax、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平升高(P 0. 05),细胞中绿色点状物明显增多,细胞中Bcl-2、LC3Ⅰ蛋白表达水平降低(P 0. 05);与紫杉醇组相比,低频超声组MDA-MB-468细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Bax、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平升高(P 0. 05),细胞中绿色点状物明显增多,细胞中Bcl-2、LC3Ⅰ蛋白表达水平降低(P 0. 05);与低频超声组相比,低频超声微泡组MDA-MB-468细胞增殖抑制率、凋亡率、细胞中Bax、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达水平升高(P 0. 05),细胞中绿色点状物明显增多,Bcl-2、LC3Ⅰ蛋白表达水平降低(P 0. 05)。结论 低频超声微泡可通过上调Bax、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达及下调Bcl-2、LC3Ⅰ蛋白表达增强紫杉醇诱导三阴性乳腺癌细胞的凋亡、自噬反应。     

肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因对人乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响

目的 观察肿瘤相关钙信号传导蛋白-2(TROP-2)基因小干扰RNA (siRNA)对乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响.方法 培养人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株,以荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)方法检测TROP-2基因mRNA表达;筛选出TROP-2表达最高者.采用TROP4基因siRNA转染乳腺癌细胞,分别以荧光实时定量RT-PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因mRNA和蛋白水平,然后以噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力.结果 人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-35、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株TROP-2 mRNA分别是1.362±0.057、2.207±0.056、2.997±0.052、0.136±0.045、0.122±0.025、0.194±0.028和2.706±0.039,以MCF-7细胞最高;以TROP-2 siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后,癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;黏附实验结果显示,5、10、20 nmol/L siRNA组黏附率分别为(52.9±2.5)％、(25.6±2.3)％、(12.8±2.2)％(P＜0.01);Transwell实验结果显示,5、10和20 mol/L siRNA组穿过滤膜的细胞分别为78±17、39±15、19±16,而对照组分别为136±25、139±21(P＜0.01).结论 TROP-2基因在乳腺癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染乳腺癌细胞,可抑制乳腺癌细胞黏附和侵袭能力.     

Rab27A蛋白调控转录因子E盒结合锌指蛋白1对白细胞介素-6/信号转导与转录激活因子3信号通路的影响

目的探索三阴性乳腺癌中Rab27A蛋白调控转录因子E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)对白细胞介素(IL)-6/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法通过生信分析Rab27A与ZEB1在三阴性乳腺癌中表达, 在体外培养三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MDA-MB-468)使用慢病毒转染技术进行Rab27A、ZEB1过表达及敲减, 并通过回复实验构建Rab27A过表达ZEB1敲减、Rab27A敲减ZEB1过表达的三阴性乳腺癌细胞系。运用蛋白质印迹法(Western blot)验证其蛋白表达。通过免疫印迹技术研究Rab27A调控ZEB1对IL-6/STAT3信号通路的影响, Shapiro-Wilk检测实验数据均服从正态分布。结果在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系中, 蛋白质印迹法(Western blot)结果显示, ZEB1过表达组高于阴性对照组, 差异有统计学意义(0.607±0.019比0.460±0.073, F=124.111, P<0.05), Rab27A敲减组低于阴性对照组, 差异有统计学意义(0.118±0.003比0.460±0.07...     

人平衡型核苷载体在乳腺癌细胞中的表达情况及其对5-FU药效的影响

目的研究乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3、MCF-7中人平衡型核苷载体（hENTS）的表达及其对5氟尿嘧啶（5-Fu）细胞毒性的影响。方法MDA-MB-231、MDA—MB-468、SK-BR-3、MCF-7细胞常规培养于含10％小牛血清的高糖DMEM培养液中。逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测4种细胞株中hENTlmRNA及hENT2mRNA的表达。每种细胞分别在含有一定浓度序列（1．28×10^4ng／L～2．00×10^8ng／L）5-FU的培养液中培养48h。MTT法检测4种细胞株增殖,并计算其5-FU的半数抑制浓度（IC50）。结果①bENT1及hENT2mRNA在MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3细胞中的表达均较其在MCF-7细胞中（P伊〈0．05）,但其表达在MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3细胞中差异无统计学意义（P〉0．05）。hENT2mRNA表达在4种细胞中均较hENT1 mRNA表达低,差异有统计学意义（P〈0．05）。②MTT结果显示,5-FU的IC50在MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3细胞株中均较在MCF-7细胞株中低（P〈0．05）,在MDA-MB-231、MDA-MB-468、SK-BR-3细胞株之间差异无统计学意义（P〉0．05）。③在5-FU的IC50 较低的乳腺癌细胞株（MDA-MB-231、MDA—MB-468、SK-BR-3）中高表达hENTs,而在5-Fu的Ic50较高的乳腺癌细胞株（MCF-7）中,低表达hENTs或无表达。结论在乳腺癌细胞株中,细胞膜上hENTs的表达情况能显著影响5-FU的作用效果,其结果提示,在临床上可能需要依据hENTs的表达情况来选择核苷类抗癌药物。     

盐诱导激酶2通过调控转化生长因子-β/上皮-间充质转化通路抑制三阴性乳腺癌迁移和侵袭的机制

目的分析和验证盐诱导激酶2 (SIK2)在三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达并探究其对TNBC细胞迁移侵袭能力的影响及机制。方法利用Ualcan在线分析工具探索SIK2在TNBC中表达情况, 结合8对TNBC组织标本运用荧光定量PCR技术进行验证。构建SIK2重组过表达质粒(GV703-SIK2)并包装重组慢病毒。分别感染TNBC细胞株MDA-MB-231和HCC1937, 经嘌呤霉素筛选构建SIK2稳定过表达细胞株和阴性对照细胞株。用蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后TNBC细胞株中SIK2表达水平, 通过划痕实验和Transwell小室实验观察SIK2过表达对TNBC细胞迁移侵袭能力的影响;采用Western blot分析SIK2过表达后对上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子SNAI1蛋白(Snail)、锌指转录因子SNAI2(Slug)、磷酸化SMAD家族成员2(p-SMAD2)蛋白、磷酸化SMAD家族成员3(p-SMAD3)蛋白表达水平的影响。组间比较采用t检验。结果 SIK2 mRNA在TNBC组织中表达明显低于其配...     

3′-脱氧腺苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和p53表达的影响

目的 观察3′-脱氧腺苷对MDA-MB-231细胞生长、细胞周期、凋亡和p53表达的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法观察3′-脱氧腺苷对体外培养MDA-MB-231细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测3′-脱氧腺苷作用于MDA-MB-231细胞48 h后细胞凋亡率和细胞周期变化;免疫组织化学方法检测MDA-MB-231细胞p53蛋白表达的变化.结果 MDA-MB-231细胞经3′-脱氧腺苷作用后,生长明显抑制,呈剂量和时间依赖性,以80 mg/L时作用最强;不同浓度(2、20、40、80、160mg/L)的3′-脱氧腺苷作用48h后,细胞凋亡率明显升高,其中在40 mg/L( 11.23±0.98)组、80 mg/L (15.21 ±2.0l)和160 mg/L( 13.27±2.26)与对照组(3.25±0.12)比较差异有统计学意义(P＜0.05).G0/G1期细胞比例逐渐升高,同时S期、G2/M期细胞比例相应减少(P＜0.05);免疫组织化学染色结果表明,随着3′-脱氧腺苷浓度的增加,MDA-MB-231细胞p53蛋白表达水平逐渐降低.结论 3′-脱氧腺苷对MDA-MB-231细胞具有明显的生长抑制和促凋亡作用,这种作用可能是通过下调p53蛋白表达以及阻滞细胞周期而实现.     

甘草酸对UVB诱导人皮肤角质形成细胞凋亡的影响

目的:研究甘草酸对UVB(中波紫外线)诱导人皮肤角质形成细胞(Ha Ca T细胞)凋亡的影响。方法:以不同浓度的甘草酸作用于Ha Ca T细胞,噻唑蓝比色(MTT)法筛选药物的有效安全浓度;用总剂量为30 m J/cm-2的UVB照射Ha Ca T细胞,制备光老化模型,MTT法检测细胞增殖率;流式细胞仪检测各组细胞总凋亡率;实时定量PCR(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)法分别检测Caspase-3、Caspase-9 m RNA和蛋白表达水平。结果:1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L甘草酸为最佳有效安全浓度。与空白组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P0.01),细胞总凋亡率显著显著升高(P0.01),Caspase-3、Caspase-9 m RNA及蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与UVB组比较,1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L甘草酸+UVB组细胞增殖率显著升高(P0.01),细胞总凋亡率显著显著降低(P0.05,P0.01),Caspase-3、Caspase-9 m RNA及蛋白表达水平显著降低(P0.05,P0.01)。结论:甘草酸能抑制UVB诱导的Ha Ca T细胞凋亡,其机制与其降低细胞总凋亡率,抑制Caspase-3、Caspase-9 m RNA和蛋白的表达有关。     

c-Met抑制剂SU11274对基底样乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响

目的 研究c-Met抑制剂SU11274对c-Met阳性基底样乳腺癌细胞系MDA-MB-231凋亡和运动的影响.方法 荧光染料Hoechst33342、MitroTrackerRed和Yo-pro-1染色,观察SU 11274诱导细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测不同处理组的细胞早期凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白的表达变化和c-Met及Akt磷酸化水平的改变;划痕试验及趋化试验观察SU 11274对细胞迁移、趋化能力的影响.结果 SU11274(10 μmol/L)处理MDA-MB-231细胞48 h后,与对照组比较,荧光染色可见处理组细胞核绿染,胞核碎裂;各加药组MDA-MB-231的早期凋亡率分别为(7.3±0.9)％、(14.1±0.6)％、(35.5±4.4)％、(48.2±5.3)％,与对照组相比明显升高(P＜0.05).同时,抗凋亡蛋白Bcl-XL表达减少,凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP蛋白剪切增加,量效关系明显.SU11274可显著延长划痕愈合时间以及减少趋化穿膜细胞个数(P＜0.05),并有效抑制c-Met及Akt的磷酸化水平,呈剂量依赖性关系. 结论 SU11274可通过抑制c-Met/PI3 K/Akt的磷酸化水平而诱导c -Met阳性基底样乳腺癌细胞系MDA-MB-231凋亡,并抑制其运动.     

微小RNA-9-5p通过靶向作用于亮氨酸拉链肿瘤抑制因子2对三阴性乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的观察三阴性乳腺癌(TNBC)细胞中微小RNA(miRNA, miR)-9-5p对亮氨酸拉链肿瘤抑制因子2(LZTS2)的调控作用, 及其对三阴性乳腺癌细胞侵袭能力的影响。方法收集30例2019年4月至2020年4月期间河北医科大学第四医院乳腺外科三阴性乳腺癌及癌旁标本。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测三阴性乳腺癌组织中miR-9-5p及LZTS2基因的表达水平;将MDA-MB-231细胞分为阴性对照组及miR-9-5p模拟物组, 采用双荧光素酶报告基因实验分析LZTS2是否为miR-9-5p靶基因;再将MDA-MB-231细胞分为阴性对照组及miR-9-5p抑制剂组, 采用蛋白印迹实验检测miR-9-5p对LZTS2蛋白表达的影响;采用细胞侵袭实验检测miR-9-5p抑制剂对细胞侵袭能力的影响;随后, 将MDA-MB-231细胞分为miRNA阴性对照+空载体组及miR-9-5p模拟物+LZTS2组, 利用细胞侵袭实验分析miR-9-5p对细胞侵袭能力的影响是否与LZTS2表达有关, 两组间比较采用t检验。结果实时荧光定量PCR结果表明miR-9-5p在三阴性乳腺癌组织...     

RNA干扰下调midkine基因表达对人乳腺癌细胞粘附和侵袭力的影响

目的 探讨中期因子(midkine,MK)基因siRNA对乳腺癌细胞生物学行为的影响.方法 培养人乳腺癌Bcap-37、LCCI、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测MK基因mRNA表达;筛选出MK表达最高者.采用MK siRNA...