nNOS抑制剂亚胺基烯丁基-L-鸟氨酸对心肌缺血再灌注损伤的影响及机制

目的 探讨nNOS选择性抑制剂亚胺基烯丁基-L-鸟氨酸（L-VNIO）对心肌缺血再灌注（I/R）损伤的影响及机制。方法 构建SD大鼠离体心脏I/R模型和H9c2细胞缺氧/复氧（H/R）模型；nNOS抑制剂L-VNIO（10 μmol·L^-1）持续给药整个再灌注或复氧过程。TTC染色测定心肌梗死面积；流式细胞术检测H9c2细胞凋亡率；Fluo-3/AM Ca²⁺荧光探针通过流式细胞仪检测H9c2细胞内Ca²⁺浓度；试剂盒法测定离体心脏灌流液乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）水平以及H9c2细胞MDA水平和超氧化物歧化酶（SOD）活性；离体心脏提取肌浆网，试剂盒法检测肌浆网Ca²⁺-ATP酶（SERCA）活性，Western blotting检测肌浆网SERCA蛋白表达；Western blotting检测离体心脏中受磷蛋白（PLB）和兰尼碱受体2（RyR2）蛋白表达水平和磷酸化水平。结果 与I/R或H/R模型组相比，L-VNIO显著降低细胞凋亡率，减少心肌梗死面积，降低LDH、MDA水平，提高SOD活性，差异均有统计学意义（P<0.05）；此外，与I/R或H/R模型组相比，L-VNIO组明显降低细胞内Ca²⁺超载，增高PLB磷酸化水平，降低RyR2磷酸化水平，增强SERCA活性（P<0.05）。结论 nNOS抑制剂L-VNIO可以减轻I/R损伤，机制与调节Ca²⁺转运相关蛋白而降低I/R引起的Ca²⁺超载相关。     

玉郎伞水提物对心肌缺血再灌注损伤心肌组织ATP酶和凋亡蛋白的影响

目的:研究玉郎伞水提物(WYLS)对大鼠离体心脏缺血再灌注(I/R)损伤心肌组织Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶和凋亡蛋白的影响。方法:采用Langendorff离体心脏灌流法,停灌30 min再灌30 min建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。观察WYLS对心肌组织Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶活性的影响、心肌组织病理学变化、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。结果:与I/R组比较,WYLS高剂量组Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶的活性明显增加(P<0.05或P<0.01),心肌受损程度明显减轻(P<0.05)。同时,WYLS高剂量组心肌Bax蛋白表达明显降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达无明显影响(P>0.05),但Bcl-2/Bax的比率明显增加(P<0.05)。结论:WYLS能减轻大鼠心肌I/R损伤,作用机制可能与减轻钙超载、抑制某些凋亡相关蛋白表达有关。     

田蓟苷调控p53/NOX4信号通路抗缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的机制

目的:探究田蓟苷(tilianin, Til)预处理对缺氧/复氧(H/R)诱导的H9c2心肌细胞的保护作用。方法:体外培养H9c2心肌细胞，将其分为正常(Normal)组、模型(H/R)组、田蓟苷(Til)组、p53激动剂(Nutlin-3a)组、田蓟苷+p53激动剂(Til+Nutlin-3a)组，缺氧12 h再复氧6 h,建立H/R模型。CCK-8法测H9c2细胞活力，化学荧光法测ROS水平，试剂盒测LDH、MDA、SOD水平，JC-1法测线粒体膜电位(ΔΨ_m),Annexin-FITC/PI和Fluo-3 AM分别结合流式细胞仪检测细胞凋亡率和Ca²⁺荧光强度，RT-PCR测定p53、NOX4、Bax、Bcl-2 mRNA表达，免疫蛋白印迹法检测p53、NOX4、Bax、Bcl-2、Nrf2、HO-1蛋白表达，免疫荧光法测定p53、NOX4蛋白表达。结果:相较于H/R组，Til组H9c2细胞活力增强(P<0.01),ROS、LDH、MDA水平下降(P<0.01),SOD水平上升(P<0.01),ΔΨ_m     

吗啡预处理对H9c2心肌细胞缺氧/复氧时microRNA表达的影响

目的探讨吗啡预处理(morphine preconditioning,MPC)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia reoxygenation,H/R)时microRNA(miRNA)表达的影响,为明确其机制提供参考。方法培养H9c2心肌细胞,随机分为3组(n=4):1正常对照组(CON):H9c2心肌细胞置于DMEM/F12细胞培养液常规培养;2缺氧/复氧组(H/R):对心肌细胞行缺氧5h/复氧1h处理;3吗啡预处理组(MPC+H/R):在H/R前,应用1μmol·L~(-1)吗啡预处理10 min。处理结束后,采用CCK-8法检测细胞增殖、化学比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡、Western blot法检测细胞内Fas蛋白表达、荧光定量RT-PCR法检测细胞miRNA表达水平。结果与CON组比,H/R组细胞活力降低,LDH活性升高,细胞凋亡率增加,Fas蛋白水平升高(P<0.01);MPC可明显提高细胞活力,降低LDH活性,抑制细胞凋亡,降低Fas蛋白水平(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,与CON组相比,H/R组miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-664-1-5p、miR-6216和let-7e-5p表达明显下调,而MPC能明显地抑制H/R对这些miRNA表达的下调作用(P<0.01)。结论吗啡预处理减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤可能与调控miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-664-1-5p、miR-6216和let7e-5p等miRNA表达有关。     

苦参碱对阿霉素所致H9c2心肌细胞损伤的保护作用及与线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶关系的研究

目的：研究苦参碱对阿霉素所致H9c2心肌细胞损伤的保护作用及其机制。方法：将H9c2心肌细胞培养,取2~3代细胞进行试验,共分为4组。对照组：接受生理盐水作为干预因素;阿霉素组：接受0.5 mg·L^-1阿霉素作为损伤模型;苦参碱+阿霉素组：接受0.5 mg·L^-1阿霉素和不同浓度苦参碱（50,150,200 mg·L^-1）作为干预因素;苦参碱组：接受不同浓度苦参碱（50,150,200 mg·L^-1）作为干预因素。以上各组相应干预24 h后,应用流式细胞仪检测H9c2心肌细胞凋亡水平,应用分光光度法检测线粒体Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶活性,利用JC-1法检测线粒体膜电位。结果：与阿霉素组相比,苦参碱+阿霉素组H9c2心肌细胞凋亡显著减少、线粒体Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶活性显著升高（P<0.05）、线粒体膜电位显著改善。结论：苦参碱对阿霉素所致H9c2心肌细胞有保护作用,减轻心肌细胞凋亡,改善线粒体膜电位、提高线粒体Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶活性。     

Bcl-2介导的芹菜素抗心肌细胞缺氧/复氧损伤作用

目的探讨芹菜素(apigenin,Api)在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用,并阐明Api对心肌损伤的保护作用是否主要由Bcl-2介导。方法培养H9c2心肌样细胞;随机分为正常对照(Cont)组、缺氧/复氧(Anoxia/Reoxygenation,A/R)组、Api预处理组、Api+ABT-737组。MTT法检测细胞存活率;Western blot法检测Bcl-2表达;比色法检测培养液LDH活性、细胞SOD及GSH-Px活性、MDA含量;流式细胞仪检测心肌细胞ROS含量、线粒体膜电位及细胞凋亡。结果 Api预处理25 h后,心肌细胞Bcl-2表达呈剂量依赖性上调(P<0.01);细胞存活率升高,培养液LDH活性降低,细胞SOD、GSH-Px活性升高,MDA含量与ROS生成减少,线粒体膜电位更为稳定,细胞凋亡减少(P<0.01);Bcl-2抑制剂ABT-737则可取消Api的上述心肌保护作用。结论Api抗心肌A/R损伤作用涉及Bcl-2信号通路,至少部分依赖于其对Bcl-2表达水平的上调。     

钙蛋白酶抑制剂对缺血-再灌注心肌肌浆网钙泵功能及其蛋白水平的影响

目的研究钙蛋白酶抑制剂ALLN对缺血-再灌注(I-R)大鼠心肌肌浆网钙泵(SERCA)功能的影响。方法 24只雄性SD大鼠随机分为正常灌注组(对照组)、I-R组、ALLN+I-R组和二甲亚砜+I-R组(DMSO+I-R组),分别检测再灌注15min时冠状动脉流出量(CF)和冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;荧光分光光度计测定荧光强度来反映钙蛋白酶活性;分别采用改良p-NPP法和Millipore过滤技术测定SERCA的活性和ATP依赖的SERCA45Ca2+摄取率,免疫印迹法检测心肌细胞SERCA蛋白表达水平。结果与I-R组相比,ALLN+I-R组CF、SERCA蛋白表达水平、SERCA的活性和45Ca2+摄取率显著增高(P<0.01),而LDH漏出量和钙蛋白酶活性显著降低(P<0.01)。结论 ALLN对离体大鼠心脏I-R损伤有保护作用,与其抑制钙蛋白酶活性,一定程度减轻I-R损伤对SERCA功能及蛋白表达水平的影响有关。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠心肌保护机制研究

目的　在大鼠离体心肌缺血 -再灌注 (I/R)损伤模型上 ,观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对心肌金属硫蛋白的影响 ,探讨bFGF心肌保护作用的可能机制。方法　复制大鼠离体心脏I/R损伤模型。预先2 4h应用bFGF ,以生理多导仪测定±dp/dtmax .[Cd10 9] 血红素饱和法测定心肌MT含量 ,硫代巴比妥法测心肌丙二醛 (MDA)含量 ,以自动生化分析仪测灌流液乳酸脱氢酶 (LDH)活性。结果　bFGF可诱导心肌MT生成 ,bFGF组心肌MT含量升高 ,MDA含量大于I/R组 ,灌流液乳酸脱氢酶 (LDH)及蛋白漏出明显减少 ,同时心功能明显改善。结论　MT参与了bFGF对大鼠离体心肌缺血 -再灌注 (I/R)损伤心肌保护作用。     

银杏叶提取物对D-半乳糖诱导心肌细胞老化的肌浆网钙摄取及SERCA活性的影响

目的 探讨银杏叶提取物EGB76l对D-半乳糖诱导的心肌细胞老化肌浆网钙摄取能力及肌浆网Ca2+-ATP 酶(SERCA)活性的影响.方法 实验分正常对照组(C组)、D-半乳糖组(5g/L)(A组)、D-半乳糖+EGB76l组(B组).用荧光钙离子指示剂 Fura-2/AM,激光共聚焦显微镜(LSCM)测定心肌细胞肌浆网钙摄取能力及改良的p-NPP法测定SERCA活性.结果 与C组相比,A组心肌细胞舒张期钙离子浓度明显升高(0.71±0.08 vs.0.59±0.06)(P＜0.05);舒张期钙离子回摄时间明显延长[(1000.95士129.34)ms vs(775.15士121.68)ms](P＜0.05);咖啡因刺激后,钙离子增幅明显减少(0.11±0.02 vs.0.53±0.19)(P＜0.05),细胞内SERCA活性明显降低.与A组相比,B组舒张期钙离子浓度明显降低,舒张期钙离子回摄时间明显缩短;咖啡因刺激后,钙离子瞬变增幅明显增高,细胞内SERCA活性明显提高.结论 银杏叶提取物EGB761对D-半乳糖诱导老化的心肌细胞肌浆网钙摄取功能和SERCA活性有一定程度的提高.     

前胡丙素对大鼠缺血-再灌注心肌肌浆网钙泵功能及其蛋白水平的影响

目的研究前胡丙素对大鼠缺血-再灌注(I-R)心肌肌浆网钙泵(SERCA)的影响及机制。方法 24只雄性SD大鼠随机均分为正常对照组、I-R组、前胡丙素+I-R组和聚乙二醇400+I-R组。检测再灌注15min时冠状动脉流出量(CF)和冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,采用改良对硝基苯酚棕榈酸酯(p-NPP)法和Millipore过滤技术测定SERCA的活性和三磷酸腺苷依赖的SERCA45 Ca2+摄取率,Western blot法检测心肌细胞SERCA蛋白表达水平。结果与I-R组相比,前胡丙素+I-R组CF、SERCA蛋白表达量、SERCA的活性和45 Ca2+摄取率增高(P<0.01),LDH漏出量降低(P<0.01)。结论前胡丙素对离体大鼠心脏I-R损伤有保护作用,可能与其减轻I-R损伤引起的心肌SERCA功能和蛋白表达抑制有关。     

H2S减少H2O2诱发H9c2心肌细胞内质网应激的机制研究

目的 探讨硫化氢(H2S)减少过氧化氢(H2O2)诱发H9c2心肌细胞内质网应激的作用机制.方法 H2O2 150 μmol/L诱发制备H9c2心肌细胞内质网应激模型后分为三组,A组为模型对照组,B组和C组分别采用硫氢化钠25 μmol/L和S-炔丙基半胱氨酸25 μmol/L处理;另设空白对照(D)组.CCK-8法检测细胞生存率,Hoechst染色法检测凋亡细胞,荧光分析法检测Caspase-12活性,Western blot检测转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)、免疫球蛋白结合蛋白(BiP)、钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)、受磷蛋白(PLN)和心肌肌浆网钙ATP酶2a(SERCA2a)表达,免疫共沉淀法检测CaMK Ⅱ与PLN以及SERCA2a与PLN的结合.结果 A组细胞存活率低于D组,而B组和C组高于A组(P＜0.05).A组凋亡细胞数多于D组,而B组和C组均少于A组(P＜0.05).A组 Caspase-12活性、PLN 磷酸化水平、CHOP、BiP、CaMK Ⅱ 以及 CaMK Ⅱ与PLN结合表达均高于D组,B组和C组则均低于A组(P＜0.05).A组SERCA2a与PLN结合的表达低于D组,B组和C组则均高于A组(P＜0.05).结论 H2S可以通过CaMK Ⅱ/PLN/SERCA2a途径减少内质网应激,对H2O2诱导的心肌细胞损伤发挥保护作用.     

新化合物TG6对心肌缺血/再灌注损伤的影响及机制研究

目的研究TG6对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及机制。方法采用整体大鼠心肌缺血/再灌注（I/R）实验,离体大鼠心脏低灌复灌实验和乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤（H/R）实验等模型,以血清CK、LDH、T-SOD、MDA等为指标,研究TG6对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。结果在整体大鼠心肌缺血再灌注损伤实验中,TG6显著减少I/R损伤后心肌梗死面积,减少血清中CK活力和MDA含量,减少LDH活力,增加T-SOD活力;在离体大鼠心脏低灌复灌实验中,TG6显著增加低灌复灌后心肌冠脉流量,减少心肌组织中MDA含量和CK、LDH外漏,提高心肌组织中T-SOD活力;在乳鼠心肌细胞H/R损伤实验中,TG6对正常生长条件下的细胞没有明显影响,提高Na2S2O4制备的心肌细胞H/R模型下细胞的存活率、降低细胞CK的释放率及细胞[Ca^2＋]i的含量。结论 TG6对心肌I/R损伤有一定的保护作用。     

注射用益气复脉(冻干)对阿霉素诱导H9c2(2-1)心肌细胞毒性的保护作用

目的 探讨注射用益气复脉（冻干,YQFM）对阿霉素（doxorubicin,DOX）诱导H9c2（2-1）心肌细胞毒性的保护作用。方法 H9c2（2-1）心肌细胞随机分为对照组,模型组（终浓度为0.3 μmol/L的DOX处理细胞48 h）,YQFM低、中、高剂量（125、625、3 125 μg/mL）组（提前2 h加入药物预处理,然后加入终浓度为0.3 μmol/L的DOX处理48 h）,采用CCK-8法检测细胞活力;使用乳酸脱氢酶（LDH）和ATP试剂盒检测细胞LDH和ATP水平;应用Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡;JC-1法检测细胞线粒体膜电位;Western blotting法检测caspase-3蛋白的表达水平。结果 与模型组比较,YQFM中、高剂量组显著增加细胞存活率（P<0.05、0.01）,低、高剂量组明显改善细胞凋亡;低、中、高剂量组LDH活性显著降低（P<0.05、0.01）,ATP含量显著增加（P<0.05、0.01）,线粒体膜电位明显恢复。结论 YQFM抑制DOX诱导H9c2（2-1）的细胞毒性,其作用机制可能与抑制线粒体凋亡信号通路的激活有关。     

脑源性神经营养因子可减轻 H9c2 心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的 探讨脑源性神经营养因子（BDNF）预处理对 H9c2 心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的影响及其作用机制。方法 体外培养 H9c2 心肌细胞并以缺氧 （95%N2+5%CO2） 培养 4 h 后复氧 （95%O2+5%CO2） 培养 12 h 建立 H/R 模型, 并分为 Control 组、 H/R 组、 不同浓度 （1、 10、 100 μg/L） BDNF 预处理后 H/R 组、 酪氨酸蛋白激酶受体 B （TrkB）inhibitor 组 （同时加入 100 μg/L BDNF 和 1∶1 000 的 TrkB inhibitor 预处理后 H/R 组）。利用 MTT 方法检测各组心肌细胞的细胞存活率; 并测定各组心肌细胞 H/R 损伤后乳酸脱氢酶（LDH）、 肌酸激酶（CK）、 丙二醛（MDA）、 超氧化物歧化酶（SOD）含量及活性; 流式细胞术测定各组心肌细胞的凋亡率; Western-blot 检测 TrkB、 Bcl-2、 Bax 蛋白表达。结果 与 Control 组相比, H/R 组细胞存活率明显下降, LDH、 CK 和 MDA 含量升高, SOD 活性降低, 细胞凋亡率升高, 抗凋亡 Bcl-2 蛋白表达下降, 促凋亡 Bax 蛋白表达升高（均 P < 0.05）。与 H/R 组相比, 不同浓度 BDNF 预处理H9c2 心肌细胞后 H/R, 各组细胞存活率均明显上升, CK、 LDH、 MDA 含量逐渐下降, SOD 活性升高, 细胞凋亡率下降, TrkB 和 Bcl-2 蛋白表达升高, 而 Bax 蛋白表达降低, 但 BDNF 的作用均受到 TrkB inhibitor 的抑制。结论 BDNF预处理能够提高 H9c2 心肌细胞 H/R 损伤的细胞存活率, 通过降低细胞凋亡率和提升细胞抗氧化能力而发挥保护作用, 并与 BDNF-TrkB 信号通路有关。     

艾塞那肽预处理对过氧化氢损伤的H9c2心肌细胞的保护作用研究

目的:研究胰高血糖素样肽1(GLP-1)类似物艾塞那肽(EX)预处理对过氧化氢损伤的H9c2心肌细胞的保护作用。方法:取体外培养的H9c2心肌细胞,分为正常对照组、模型组和0·01、0·1、1、10nmol·L-1EX预处理组。除正常对照组外,其余各组用过氧化氢诱导H9c2心肌细胞建立氧化应激损伤模型,EX预处理组建模前30min加入相应浓度EX,共培养6·5h后,检测各组细胞细胞活力和培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与正常对照组比较,模型组H9c2细胞活力、SOD活性明显降低,LDH、CK-MB活性和MDA含量明显升高(P<0·05)。与模型组比较,0·1、1、10nmol·L-1EX预处理组细胞活力、SOD活性明显升高,LDH、CK-MB活性和MDA含量明显降低(P<0·05),并与剂量成正相关。结论:EX预处理对H9c2心肌细胞的氧化应激损伤有保护作用,并与剂量呈正相关。     

人参皂苷 Rg1减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的作用研究

目的：探讨人参皂苷 Rg1对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的减轻作用及机制。方法制备大鼠离体心脏 I/ R 模型,将18只大鼠随机分为正常对照组、I/ R 组、人参皂苷 Rg1组。100μmol/ L 人参皂苷 Rg1进行预处理10 min,观察血流动力学指标左心室内压最大上升/下降速率和心率压力乘积的变化,检测灌流液中肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）活性。Western blotting 检测心肌组织 PI3K 下游激酶 Akt、ERK1/2及其磷酸化水平的变化,磷酸化GSK-3β的蛋白表达。结果与 I/ R 组比较,人参皂苷 Rg1预处理显著改善心脏功能,降低灌流液中 CK、LDH 活性（ P ﹤0.05）;升高 p-Akt 和 p-GSK-3β的蛋白表达（ P ﹤0.05）。结论人参皂苷 Rg1对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤有减轻作用,其机制与激活 PI3K-Akt 通路有关。     

芳香新塔花总黄酮对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究芳香新塔花总黄酮(Ziziphora clinopodioides flavonoids,ZCF)对大鼠离体心脏缺血再灌注(I/R)损伤的保护作用。方法 SD大鼠40只,随机分为5组:空白组,I/R组,ZCF低剂量组(12.5mg·L-1),ZCF中剂量组(25mg·L-1),ZCF高剂量组(50mg·L-1),采用Langendorff法建立离体大鼠心脏I/R模型。观察I/R期间室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、室内压最大下降速率(-dp/dtmax)、左心室舒张压(LVEDP)、冠脉流量(CF)和心率(HR)。测定心肌组织中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果 ZCF高剂量组和中剂量组均可显著改善I/R所致的心功能损伤,减少CK、LDH的释放和心肌组织MDA的产生,增加SOD的活性(与模型组相比,P<0.001,P<0.01或P<0.05)。结论ZCF对大鼠离体心脏I/R损伤具有保护作用,其作用可能与清除氧自由基、减少脂质过氧化反应、提高心肌抗氧化能力、维持细胞膜的完整性有关。     

血根碱对脂多糖致H9c2细胞氧化损伤的改善作用

目的 观察血根碱（sanguinarine,SAN）对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的H9c2细胞氧化应激的影响,并对其与HO-1/NOX2途径之间的关系进行探讨。方法 不同因素干预H9c2细胞后,采用细胞活性试剂盒检测不同浓度SAN和/或LPS对H9c2细胞生存的影响;酶标仪及荧光显微镜检测SAN对LPS诱导细胞产生活性氧（reactive oxygen species,ROS）的影响; Real time RT-PCR检测SAN对LPS诱导的NOX2、P47PHOX、HO-1、SOD1、SOD2基因表达的影响; MDA检测试剂盒检测MDA的变化。结果 单用SAN对H9c2细胞活性无影响,LPS可显著降低细胞活性,而SAN与LPS共同干预则可呈浓度依赖性地提高细胞活性,降低ROS产生。LPS处理12 h上调H9c2细胞NOX2、p47phox mRNA表达、下调HO-1 mRNA表达; SAN预处理后,细胞内NOX2、p47phox mRNA下调、HO-1 mRNA上调,而SAN与锌原卟啉IX预处理则可逆转这种现象。SAN上调SOD1及SOD2 mRNA表达,降低MDA产生。结论 SAN可通过活化HO-1/NOX2途径,抑制ROS的产生,从而使H9c2细胞免受LPS介导的损伤,提高细胞活力。     

PI3K/Akt/FoxO3a/Bim信号通路介导硫化氢后处理对缺氧H9c2心肌细胞的保护作用

目的探讨硫氢化钠(Na HS)后处理是否通过PI3K/Akt/Fox O3a/Bim信号通路调节细胞凋亡发挥减轻心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的作用。方法 H9c2大鼠心肌细胞缺氧3 h/复氧6 h,建立缺氧/复氧损伤模型。将细胞随机分为5组:空白组(Control组)、缺氧/复氧组(H/R组)、硫氢化钠后处理组(H/R+Na HS组)、抑制剂LY294002组(H/R+LY组)、硫氢化钠后处理+LY294002组(H/R+Na HS+LY组)。分别在缺氧前、复氧末检测H9c2心肌细胞的存活率以及LDH释放;流式细胞术检测各组的细胞凋亡率;应用Western blot检测Akt、p-Akt、Fox O3a、p-Fox O3a、Bim蛋白的表达水平;免疫荧光检测Fox O3a的分布情况。结果缺氧前各组心肌细胞存活率、LDH释放量差异无统计学意义(P>0.05)。复氧末,Na HS组与H/R组相比,心肌细胞存活率明显提高(P<0.05),LDH释放量与细胞凋亡率明显降低(P<0.05);p-Akt、p-Fox O3a蛋白表达水平升高,Bim表达降低,同时Fox O3a在细胞质的表达升高。LY294002逆转了Na HS后处理产生的心肌细胞保护作用,使得H/R+Na HS+LY组的心肌细胞存活率降低(P<0.05)、LDH释放和细胞凋亡率升高(P<0.05),p-Akt、p-Fox O3a蛋白表达降低(P<0.05),Bim表达升高(P<0.05),FoxO 3a在细胞质的表达水平降低。结论硫氢化钠(NaH S)后处理通过PI3K/Akt/FoxO 3a/Bim信号通路调控细胞凋亡,减轻心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤。     

圣草次苷激活Nrf2信号通路保护H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤作用研究

目的 建立大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤模型,考察圣草次苷改善心肌缺血再灌注损伤的作用机制。方法 利用无糖无血清培养基结合厌氧（94%N₂、5%CO₂、1%O₂）处理H9c2心肌细胞4h后,更换新鲜完全培养基再放入正常孵箱复氧24h,制备H/R损伤模型。在造模前12h给予圣草次苷（5、10、20μg·mL^-1）,细胞活力及乳酸脱氢酶（LDH）检测实验中选择灯盏乙素（20μg·mL^-1）作为阳性药,对照组及模型组给予等体积DMSO。MTT法测定细胞存活率;试剂盒检测细胞培养上清液中LDH水平;试剂盒检测细胞内丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力;TUNEL染色检测细胞凋亡;DCFH-DA和JC-1探针分别检测细胞内活性氧（ROS）和线粒体膜电位改变;Western blotting检测核蛋白中转录因子（NF）-E2相关因子2（Nrf2）和总蛋白中血红素氧合酶1（HO-1）、γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）水平。结果 与对照组比较,H/R损伤诱导的模型组细胞存活率明显下降,凋亡明显增加,LDH水平明显升高,细胞内MDA水平明显升高,SOD、CAT、GSH-Px活力明显降低,ROS释放明显增多,线粒体膜电位明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.01）;与模型组比较,圣草次苷可剂量相关性地改善上述变化,其中10、20μg·mL^-1组均差异显著（P＜0.01）。Western blotting结果显示,与对照组比较,模型组细胞Nrf2核转位以及HO-1、GCL表达水平无显著变化;与模型组比较,圣草次苷10、20μg·mL^-1显著增加Nrf2核转位及HO-1、GCL表达水平（P＜0.01）。结论 圣草次苷能够保护H/R诱导的H9c2心肌细胞损伤,其可能通过激活Nrf2抗氧化信号通路,增加细胞内源性抗氧化能力,抑制氧化应激损伤,保护线粒体功能以阻止细胞凋亡的发生。