过表达白血病相关蛋白16基因对前列腺癌ALVA41和DU145细胞增殖的影响

目的探讨过表达白血病相关蛋白16(LRP16)基因对人前列腺癌ALVA41和DU145细胞增殖的影响及其发生机制。方法2004-04～2005-10于解放军总医院用下列方法检测:(1)构建LRP16真核表达载体(pcDNA3.1-LRP16)并与对照空载体(pcDNA3.1)分别转染ALVA41和DU145细胞,将G418筛选获得的表达外源LRP16基因以及空载体的4组细胞(A16、A3.1、D16、D3.1)继续传代培养。(2)用四氮唑蓝染色(MTT)法测定并比较各组细胞的生长曲线。(3)提取两种细胞的总RNA,通过RT-PCR方法测定雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)和雄激素受体(AR)在两种细胞中的表达。结果(1)LRP16过表达促进DU145细胞的生长,D16组在24、48、72、96和120h的细胞生长倍数分别是对照组(D3.1)的1.03倍(P>0.05)、1.10倍(P<0.05)、1.13倍(P<0.01)、1.63倍(P<0.01)和1.55倍(P<0.01)。(2)LRP16过表达对ALVA41细胞的生长无影响,A16组在24、48、72、96和120h的细胞生长倍数分别是对照组(A3.1)的0.998、1.040、0.944、1.018和1.036倍(P值均>0.05)。(3)ERα和ERβ在ALVA41、DU145两种细胞中均有表达。AR在ALVA41细胞中有表达,而在DU145细胞中无表达。结论过表达LRP16基因促进前列腺癌DU145细胞生长,但是其机制可能不是直接通过AR发挥作用。     

RNA干扰抑制雌激素受体α亚基对雌激素诱导人成骨样细胞护骨素表达的影响

目的 探讨RNA干扰抑制人成骨样细胞株MG63中雌激素受体α亚基(estrogen receptor α subunit ERα)后，对17β-雌二醇(E2)诱导护骨素(OPG)表达的影响。方法 利用计算机辅助设计ERα特异性siRNA，体外合成siRNA基因，并将其定向克隆入真核表达载体pSilencer4．1-CMV。以脂质体法转染ERα siRNA载体至人的成骨样细胞株MG63中，鉴定后分别用不同浓度的雌激素或G蛋白抑制剂苏拉明干预经ERα siRNA转染的MG63细胞或未经ERα siRNA转染的MG63细胞，RT-PCR法检测OPG mRNA的表达水平。结果 双酶切法鉴定重组质粒后，RT-PCR法鉴定ERα siRNA载体可特异地抑制MG63细胞中ERα的表达。不同浓度的17β-E2上调MG63细胞OPG mRNA的表达，其中以10^-7mol／L的作用最强。但经ERα siRNA载体抑制MG63细胞ERα亚基后，17β-E2上调MG63细胞OPG mRNA表达的作用消失。结论 17β-E2主要经ERα亚基上调MG63细胞OPG的表达。     

过表达白血病相关蛋白16基因对前列腺癌ALVA41和DU145细胞增殖的影响

目的探讨过表达白血病相关蛋白16（LRP16）基因对人前列腺癌ALVA41和DU145细胞增殖的影响及其发生机制。方法2004—04～2005—10于解放军总医院用下列方法检测：（1）构建LRP16真核表达载体（peDNA3．1-LRP16）并与对照空载体（pcDNA3．1）分别转染ALYA41和DU145细胞，将G418筛选获得的表达外源LRP16基因以及空载体的4组细胞（A16、A3．1、D16、D3．1）继续传代培养。（2）用四氮唑蓝染色（MTT）法测定并比较各组细胞的生长曲线。（3）提取两种细胞的总RNA，通过RT—PCR方法测定雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）和雄激素受体（AR）在两种细胞中的表达。结果（1）LRP16过表达促进DU145细胞的生长，D16组在24、48、72、96和120h的细胞生长倍数分别是对照组（D3．1）的1．03倍（P〉0．05）、1．10倍（P〈0．05）、1．13倍（P〈0.01）、1．63倍（P〈0．01）和1．55倍（P〈0．01）。（2）LRP16过表达对ALVA41细胞的生长无影响，A16组在24、48、72、96和120h的细胞生长倍数分别是对照组（A3．1）的0．998、1．040、0．944、1．018和1．036倍（P值均〉0．05）。（3）ERα和ERβ在ALVA41、DU145两种细胞中均有表达。AR在ALVA41细胞中有表达，而在DU145细胞中无表达。结论过表达LRP16基因促进前列腺癌DU145细胞生长，但是其机制可能不是直接通过AR发挥作用。     

甲状腺乳头状癌组织中雌激素受体亚型与表皮生长因子受体-2表达的关系

目的研究人甲状腺乳头状癌(PTC)组织中雌激素受体(ER)亚型(ERα、ERβ1、ERβ2)与表皮生长因子受体-2(HER-2)表达的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测20例PTC组织中ERα、ERβ1、ERβ2的mRNA的表达水平,应用免疫组织化学的方法检测PTC组织中HER-2表达水平。结果 HER-2阳性表达的PTC患者ERαmRNA明显高于HER-2阴性者,ERβ2 mRNA明显低于HER-2阴性者。结论 PTC患者中ER亚型的表达可能受HER-2调节,HER-2过表达,可上调ERα、下调ERβ1和ERβ2,促进肿瘤发生发展。     

人白血病相关蛋白16基因对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取及过氧化物酶体增殖物激活受体γ活性的影响

目的探讨人白血病相关蛋白（LRP）16对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取及过氧化物酶体增殖物激活受体（PRAR）γ活性的影响。方法利用脂质体转染及慢病毒介导的RNA干扰技术构建LRP16过表达、抑制表达及对照细胞系。检测LRP16对细胞葡萄糖摄取的影响。Luciferase法检测LRP16对PPAR反应元件（PPRE）相对荧光素酶活性的影响。Western Blot法检测LRP16对PPARγ及葡萄糖转运蛋白（GluT）-4表达的影响。结果（1）成功构建LRP16过表达、抑制表达及对照细胞系。（2）过表达LRP16抑制细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取;抑制表达LRP16促进细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取。（3）LRP16剂量依赖性的抑制COS-7细胞PPRE的相对荧光素酶活性;（4）LRP16抑制脂肪细胞PPARγ及GluT-4蛋白表达。结论LRP16通过下调PPAR7活．眭抑制3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取导致胰岛素抵抗。     

人乳腺癌细胞中HPV16 E6/E7与COX-2表达的关系

目的 探讨人乳腺癌细胞中高危型人乳头瘤病毒16型(HPV16) E6/E7与COX-2表达的关系.方法 以HPV16 E6/E7表达阴性的人乳腺癌细胞系MCF-7和分别稳定高表达HPV16 E6、E7和同时高表达E6/E7的乳腺癌细胞系MCF-7-E6、MCF-7-E7、MCF-7-E6/E7及空转细胞MCF-7-vec为研究对象,通过RT-PCR和Western印迹方法检测各乳腺癌细胞系中COX-2基因及蛋白的表达情况.结果 所有细胞系中COX-2 mRNA及蛋白均有阳性表达,且MCF-7-E6、MCF-7-E7和MCF-7-E6/E7细胞中的表达水平要显著高于MCF-7-vect和MCF-7亲本细胞(mRNA:F=135.236,P ＜0.01;蛋白:F =146.125,P＜0.01),而MCF-7-E6、MCF-7-E7和MCF-7-E6/E7细胞中COX-2 mRNA及蛋白的表达水平无显著性差异,MCF-7-vect空转和MCF-7亲本细胞中COX-2 mRNA及蛋白的表达水平也无显著性差异.结论 人乳腺癌中HPV16 E6/E7与COX-2的表达间可能存在密切关系.     

血管紧张素受体1阻断剂替米沙坦、厄贝沙坦具有激活PPARα的作用

目的 通过观察替米沙坦、厄贝沙坦对PPARa转录活性的影响以探讨其改善糖脂代谢的机制.方法 将构建的PPARa表达质粒、PPAR反应元件(PPRE)调控的荧光素酶表达质粒与pRL表达载体以脂质体(SuperFect)瞬时共转染COS-7细胞后,分别加入不同浓度的替米沙坦及厄贝沙坦,继续培养细胞不同时间,用双荧光索酶基因报告系统检测荧光素酶活性以反映PPARa转录活性.不同浓度的厄贝沙坦及替米沙坦孵育3T3-L1脂肪细胞,分别应用RT-PCR和Western印迹测定细胞的PPARα mRNA和蛋白表达水平.结果 (1)替米沙坦和厄贝沙坦均呈剂量和时间依赖性地增加COS-7细胞的PPARα转录活性,在60 h作用均达高峰,两者在100μmol/L浓度时PPRE调控的荧光素酶活性较对照组增高3.8倍和2.6倍(均P<0.01);(2)替米沙坦及厄贝沙坦激活PPARα的作用不能被PPARγ脚特异性抑制剂GW9662抑制;(3)替米沙坦和厄贝沙坦呈剂量依赖性增加3T3-L1脂肪细胞PPARα mRNA和蛋白表达水平.结论 血管紧张素受体阻断剂替米沙坦和厄贝沙坦增加PPARα转录活性,可能通过此途径改善糖脂代谢.     

雌激素和他莫昔芬对大鼠动脉血管平滑肌细胞雌激素受体及表型蛋白的影响

目的 探讨雌激素(E2)和他莫昔芬(TAM)对血管平滑肌细胞(VSMC)雌激素受体(ERs)及表型蛋白的影响.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMC,应用浓度为10-9、10-8和10-7 mmol/L的17β-雌二醇和浓度为10-8、10-7和10-6 mmol/L的TAM作用于VSMC 24 h.RT-PCR法检测实验后VSMC ERα、ERβ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和骨桥蛋白(OPN) mRNA表达情况.     

雌激素通过受体介导的通路影响大鼠心脏心钠素表达

目的研究雌激素对卵巢切除大鼠心脏雌激素受体(ER)α和β的调控及对血压、心率、心肌细胞心钠素(ANP)基因表达、合成和释放的影响。方法成年雌性Wistar大鼠随机分成5组假手术组,卵巢切除组和卵巢切除不同剂量17β-雌二醇组(80、800、8000ng·g-1·d-1)。测量大鼠收缩期血压(SBP)、心率;采用半定量RT-PCR和Western印迹方法,探讨不同剂量的17β-雌二醇对卵巢切除大鼠心脏ERα和ERβmRNA、ER蛋白质的表达调控及对ANPmRNA表达的影响;放射免疫方法测定血浆和心房组织ANP含量。结果超生理剂量的17β-雌二醇能降低卵巢切除大鼠SBP,减慢心率;成年雌性大鼠心脏ERαmRNA高于ERβmRNA的表达水平,而心房ERαmRNA表达又明显超过心室;卵巢切除减少心房ERαmRNA和蛋白质的表达,下调ANPmRNA,使心房组织和血浆ANP含量明显降低[(121±19)ng/mg组织vs(184±12)ng/mg组织,(196±21)ng/Lvs(288±36)ng/L,P<0.01];生理剂量17β-雌二醇能逆转上述改变。随剂量增加,17β-雌二醇的这种作用在一定程度上呈剂量依赖性关系。但卵巢切除和17β-雌二醇替代并不影响心脏ERβmRNA、心室ERαmRNA表达。结论超生理剂量雌激素可降低卵巢切除大鼠SBP,心率;ERα的高水平表达说明ERα是雌激素对心脏调控的优势受体;雌激素对心脏作用的主要靶部位是心房;雌激素促进心房肌细胞ANPmRNA的表达、合成和释放,通过受体依赖的ANP介导的通路发挥作用。     

17β-雌二醇及Wnt/β-catenin信号通路对人成骨肉瘤细胞基质Gla蛋白表达的影响

目的观察17β-雌二醇(17β-E2 17β-estradiol)对骨肉瘤细胞(osteosarcoma MG 63)基质Gla蛋白(MGP Matrix GLA protein)表达的影响及Wnt/β-catenin信号通路在其中的作用,探讨MGP在骨质疏松症发病过程中的可能机制。方法 17β-E2 10~(-10)、10~(-8)、10-6mol/L及雌激素受体抑制剂氟维司群(Faslodex简称ICI)10-7mol/L,ICI 10-7mol/L+17β-E2 10~(-8)mol/L干预MG63细胞48 h。用10~(-8)mol/L的17β-E2及200 ng/m L Wnt/β-catenin信号通路阻断剂Dickkopf1分泌蛋白-1(DKK-1)干预MG63细胞48 h。用10~(-8)mol/L17β-E2及MGP抑制剂华法林10μmol/L干预MG63细胞48 h。干预后的细胞提取蛋白及总RNA,后用荧光定量PCR及Western blotting观察MGP、β-catenin、Runx2、LRP5蛋白及基因的表达。结果 17β-E2能上调MGP的表达,10~(-10)、10~(-8)、10-6mol/L 17β-E2干预后,MGP mRNA的表达是对照组的4.63、7.16、2.95倍(P0.05),MGP蛋白的表达分别是对照组的1.17、1.58、1.28倍(P0.05),以10~(-8)mol/L 17β-E2的作用最明显。ICI能阻断17β-E2对MGP的上调作用,与单用17β-E2相比,差异有统计学意义(P0.05)。17β-E2能增加Wnt/β-catenin经典信号通路中相关蛋白的表达,β-catenin及Runx2 mRNA及蛋白的表达与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。DKK-1则阻断17β-E2对MGP、β-catenin、Runx2、LRP5的上调作用,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05)。华法林可阻断17β-E2的作用,与对照组相比MGP、β-catenin、Runx2、LRP5的表达均下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论 17β-E2调节成骨肉瘤细胞内Wnt/β-catenin信号通路同时也调节MGP表达,该作用可能是骨质疏松症发病的机制之一。     

雌激素对老年雌鼠阴道NOS及雌激素受体的影响

目的 研究雌激素对老年雌性大鼠阴道组织一氧化氮合酶(NOS)活性及雌激素受体(ER)亚型的影响,探讨雌激素作用于女性性功能的可能机制.方法 SD雌性大鼠分三组:青年组(3月龄)、老年组(20月龄)、苯甲酸雌二醇治疗组,比色法检测阴道组织NOS的活性,免疫组化法检测ER α和β的表达.结果 老年大鼠阴道NOS活性下降,而阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ表达增加,雌激素治疗能逆转这些变化.大鼠血清雌二醇浓度与阴道组织NOS活性呈正相关,两者均与阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ呈负相关,而与大鼠阴道上皮细胞ERβ、基质纤维细胞ERα和ERβ无相关性.结论 雌激素可以通过调节阴道NOS维持女性性功能,这一过程与阴道上皮细胞ERα、平滑肌细胞ERα和ERβ密切相关.     

金雀异黄素对D-半乳糖损伤的乳鼠皮肤成纤维细胞的作用

目的 观察金雀异黄素(Gen)对D-半乳糖(D-gal)损伤的小鼠皮肤成纤维细胞(MSFs)模型的作用,并探索其机制.方法 体外培养MSFs,D-gal制作细胞损伤模型,并用Gen进行干预.显微镜下观察各组MSFs生长形态变化;试剂盒法检测MSFs上清液中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性;RT-PCR法检测MSFs的雌激素受体雌激素受体(ER)α和ERβ mRNA的表达.结果 与模型组相比,浓度为0.5 mg/L Gen能显著提高SOD活性,同时亦提高MDA含量和LDH活性(P＜0.01);明显下调ERα mRNA表达(P＜0.05),上调ERβmRNA表达(P＜0.05).结论 浓度为0.5 mg/L Gen可以通过改善模型细胞ER mRNA的表达,提高SOD活性和抗氧化作用;同时升高MDA含量和LDH活性,改变MSFs的生物学特性,抑制其过度增殖.     

非诺贝特与过氧化体增殖物激活型受体α对人肝瘤细胞1型纤溶酶原激活物抑制剂表达的影响

目的探讨非诺贝特对人肝瘤细胞株(HepG2)细胞1型纤维酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达的影响及机制。方法用不同浓度非诺贝特刺激HepG2细胞,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PAI-1mRNA水平,发色底物法检测PAI-1的活性变化。构建4个荧光素酶报告基因质粒,分别由PAI-1启动子序列从-804至+17间不同长度片段驱动,体外转染HepG2细胞,检测荧光素酶的活性。结果非诺贝特能使HepG2细胞PAI-1mRNA表达及蛋白活性显著降低,且呈一定剂量依赖性;还可使PAI-1转录活性显著降低;当转染质粒含有PAI-1启动子序列-636~+17、-449~+17-、276~+17 bp 3个片段时,荧光素酶活性显著增高;共转染过氧化体增殖物激活型受体α(PPARα)表达质粒(PPAR-αpSG5)的细胞在非诺贝特诱导下PAI-1转录活性显著降低。结论非诺贝特可以抑制HepG2细胞PAI-1mRNA表达及其活性,调节PAI-1的基因转录,PPARα参与非诺贝特对PAI-1基因的表达调控。     

雌二醇对成骨细胞OPG和RANKL的影响

目的探讨不同浓度17β-雌二醇(E2)作用下体外培养大鼠成骨细胞护骨素(OPG)、细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)的表达及雌激素治疗骨质疏松的机制。方法采用不同浓度(10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)17β-E2刺激培养的大鼠成骨细胞(OB),RT-PCR方法检测OPG、RANKL mRNA的表达。结果原代OB呈多角形、梭形,传代OB胞核较大,细胞质内见黑色颗粒,细胞形态为多角形或梭形,见突起,三代细胞碱性磷酸酶染色阳性,胞质见大量灰黑色颗粒,细胞鉴定符合成骨细胞特征。不同浓度(10-9、10-8、10-7mol/L)17β-E2对OB OPG mRNA表达具有显著的增强作用(P<0.05),其中10-8mol/L 17β-E2对OB OPG mRNA表达最高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而10-10mol/L 17β-E2对成骨细胞OPG mRNA表达几乎无影响,与对照组比较无显著差异(P>0.05),10-10、10-9、10-7mol/L 17β-E2对成OB RANKL mRNA表达几乎无影响,与对照组比较无明显差异(P>0.05),其中10-8mol/L17β-E2对OB RANKL mRNA的表达具有明显的抑制作用,其与对照组比较差异明显(P<0.05)。结论雌激素治疗骨质疏松的作用可能与其促进成骨细胞OPG表达、抑制RANKL表达相关。     

益坤宁对围绝经期大鼠卵巢雌激素受体、caspase-3及细胞凋亡率的影响

目的探讨益坤宁对围绝经期大鼠卵巢雌激素受体(ER)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3及细胞凋亡率的影响。方法选取30只13～14月龄雌性Wistar大鼠和10只5月龄且有规律动情周期的雌性Wistar大鼠。将30只13～14月龄雌性大鼠制备围绝经期大鼠模型,并采用随机数字表法分为模型组(10只)、替勃龙片(利维爱)组(10只)、益坤宁组(10只),将5月龄的大鼠纳入对照组(10只)。检测各组大鼠卵巢中的细胞凋亡率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组大鼠卵巢中caspase-3、ERα、ERβmRNA的表达,采用蛋白印迹法检测caspase-3、ERα、ERβ蛋白的表达。结果益坤宁组、利维爱组、对照组细胞凋亡率显著低于模型组(P0.05);益坤宁组、利维爱组、对照组细胞凋亡率两两比较差异无统计学意义(P0.05)。益坤宁组、利维爱组、对照组caspase-3 mRNA及蛋白表达显著低于模型组,ERα、ERβmRNA及蛋白表达显著高于模型组(P0.05),益坤宁组、利维爱组caspase-3 mRNA及蛋白表达、ERαmRNA、ERβmRNA均显著高于对照组(P0.05)。结论中药益坤宁能下调caspase-3表达,降低细胞凋亡率,上调ERα、ERβ表达,这可能是其治疗围绝经期综合征的作用机制之一。     

雌激素受体基因在乙菧酚诱发的大鼠催乳素瘤中的表达

目的 研究雌激素受体（ER）α、ERβ和断裂的雌激素受体产物－1（TERP－1）在乙Di酚（DES）诱发的大鼠催乳素瘤中的表达。方法 雌性Wistar大鼠摘卵巢后皮下植入含DES20mg的硅胶管,以空白硅胶管作对照。8周后处死动物,用放免法测定大鼠血清催乳素,观察大鼠垂体组织学改变,并用免疫组化方法检测催乳素染色阳性细胞,用逆转录－聚合酶链反应分析垂体组织中ERα、ERβ和TERP－1 mRNA的转录水平。结果 实验组大鼠血清催乳素水平、垂体重量和垂体组织催乳素阳性细胞均明显高于对照组（P＜0.001),ERα、ERβ和TERP－1 mRNA在两组大鼠垂体组织中均有转录,其中ERα和TERP－1 mRNA在实验组中的转录水平比在对照组高（P＜0.001和P＜0.05)。结论 雌激素可以通过雌激素受体直接影响垂体催乳素细胞。正常的雌激素受体与异常的雌激素受体的共同存在提示雌激素调节作用的异质性,它们之间的朴素关系及与垂体肿瘤发生的关系,有待进一步阐明。     

雌激素受体在胃腺癌细胞株和胃癌高侵袭转移细胞系中的表达

目的 测定雌激素受体(ER)在人胃腺癌细胞系SGC-7901以及高转移株OCUM-2MD3上的表达.方法 用免疫细胞化学方法、RT-PCR和免疫印迹方法检测ER在人胃腺癌细胞上的表达,并对其表达量进行相对定量分析.结果 ER在人胃腺癌细胞上有表达;ERα在OCUM-2MD3细胞系的表达强于SGC-7901;而ERβ表达在SGC-7901和OCUM-2MD3中相同,并且ERα/ERβ比值在胃癌高侵袭转移细胞系OCUM-2MD3中升高.结论 雌激素有可能通过它的受体对人胃腺癌细胞产生一定的影响,ERα/ERβ比值的改变在胃腺癌发生和转移过程中可能起一定作用.     

雌激素对同型半胱氨酸水平和心肌雌激素受体的影响

目的雌激素对大鼠血浆高同型半胱氨酸(Hcy)水平和心肌雌激素受体(ER)mRNA表达水平的影响.方法蛋氨酸饮食喂养去势雌性Wistar大鼠构建高Hcy血症动物模型,造模同时给予皮下注射雌激素干预的为预防组,造模后再给予皮下注射雌激素干预的为治疗组.高压液相色谱法测定血浆Hcy水平,逆转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)半定量检测心肌ER mRNA表达水平.结果高蛋氨酸饮食喂养90 d后,造模组大鼠Hcy水平明显高于对照组(P＜0.05),2组ERα和ERβ基因转录水平差异无统计学意义.预防组血浆Hcy水平低于造模组,心肌ERα mRNA水平高于造模组;预防组和治疗组心肌ERβ mRNA水平和造模组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论预防应用雌激素可以降低血浆Hcy水平,升高心肌ERα mRNA水平,但对其心肌ERβmRNA水平未见影响.     

补中益气汤在转移性乳腺癌他莫昔芬耐药中的作用及机制

目的研究补中益气汤在转移性乳腺癌他莫昔芬(TAM)耐药(R)中的作用及机制。方法实验分为5组,MCF-7、MCF-7+TAM、MCF-7+补中益气汤、MCF-7/TAM-R、MCF-7/TAM-R+补中益气汤。TAM培养液持续培养6个月以上,即诱导产生耐TAM人乳腺癌细胞系MCF-7/TAM-R,TAM用量为5μg/ml。补中益气汤用量为1. 5μg/μl。MCF-7细胞平均种于35 cm培养皿,细胞贴壁后药物处理18 h,MTT比色法检测细胞的存活率; Western印迹法检测雌激素受体(ER)、血管内皮生长因子受体(EGFR)、人类表皮生长因子受体(HER)-2、Akt蛋白含量; q RT-PCR法检ER、EGFR、HER-2、Akt的m RNA表达。结果与MCF-7组相比,MCF-7+TAM和MCF-7+补中益气汤组细胞存活率、ER、EGFR、HER-2、Akt的基因表达及蛋白含量显著下降(P0. 05); MCF-7/TAMR组无显著差异(P0. 05); MCF-7/TAM-R+补中益气汤组显著下降(P0. 05)。结论补中益气汤通过下调ER、EGFR、HER-2及下游Akt的基因表达及蛋白含量,而逆转了MCF-7细胞对TAM耐药,从而进一步促进乳腺癌细胞的凋亡,达到控制乳腺癌的效果。     

甲状腺肿瘤组织中雌激素受体β1和β2的表达及其意义

采用RT-PCR检测10例甲状腺乳头状腺癌(PTC)和10例癌旁正常甲状腺组织雌激素受体(ER)β1、ERβ2以及ERα的表达,同时用免疫组织化学方法检测107例甲状腺癌、56例甲状腺腺瘤和10例正常甲状腺组织中ERβ1和ERβ2表达,并结合甲状腺癌ERα表达及其它主要临床病理参数进行分析.结果显示,ERα mRNA在PTC组织的表达明显高于癌旁正常组织,ERβ2 mRNA在PTC组织的表达明显低于癌旁正常组织(P＜0.05);正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤和甲状腺癌中3种ER的表达差异均有统计学意义( P＜0.05);ERβ1和ERβ2在甲状腺癌中的表达与其组织类型有关;甲状腺组织中ERβ1和ERβ2的表达与ERα呈低、中度负相关(ERβ1:r=-0.206,P=0.042;ERβ2:r=-0.545,P＜0.01);ERβ2的表达还与淋巴结转移以及TNM分期有关.提示ERβ2的表达缺失可能导致甲状腺滤泡上皮细胞的增生和癌变以及肿瘤的演进,并且有一定的预后评估价值.