用PCR技术检测痰液中结核菌的研究

对１８８例肺结核人的痰标本进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＴＢ－ＤＮＡ，并同时行痰直接涂片糖结核菌，其中７２例痰标本做了结核菌培养，结果提示：ＰＣＲ阳性率为５２．６６％（９９／１８８），直接涂片阳性率为２３．４％（４４／１８８），培养阳性率为１２．５％（９／７２）。表明ＰＣＲ特异性高，重复性好，敏感性强，与临床符合率高。我们的试验结果证实，ＰＣＲ可作为肺结核早期，快速的诊断方法，尤其适用于菌阴肺结核     

噬菌体法直接检测痰中结核分枝杆菌敏感性的研究

目的探讨噬菌体生物扩增法结合痰涂片在快速测定结核药敏中的可行性和实用性。方法收集痰厚涂片抗酸染色3＋阳性标本与一定浓度的利福平作用后，加入结核分枝杆菌噬菌体，观察噬菌体斑数量，来测定对利福平的敏感性，同时以改良罗氏法作结核药敏对照。结果从收到标本到药敏报告需时仅3d，93份标本中85份噬菌体生物扩增药敏试验成功，污染2份，6份失败，有效率91．4％（85／93），与改良罗氏法药敏试验比较，敏感性96．9％（31／32），特异性92．5％（49／53），报告时间缩短了近20倍。结论应用噬菌体法直接测定痰中结核分枝杆菌利福平敏感试验，快速、敏感、特异性高，适宜基层正常开展。     

结核分支杆菌对抗痨药物依赖性的初步观察

目的：调查临床结核菌分离株对抗痨药物依赖状况。方法：采用双向匡氏琼脂培养基分离痰结核菌和作结核菌依赖性测定。采用匡氏琼脂培养基检测结核菌耐药性。结果：依赖S11．4l％（2l／184）．依赖R14．13％（26／184），依赖H6．52％（12／184），依赖K2．17％（4／184），依赖E10．87％（20／184），依赖P4．89％（9／184），依赖O5．43％（10／184），依赖Z8．15％（15／184）；HR、HRS、HRE的依赖率分别为13．04％（24／184）、9．78％（18／184）、7．07％（13／184）。结论：结核杆菌对8种药物都存在不同程度的依赖现象，结核杆菌对3种药物组合均有不同程度的依赖性；对抗痨药物E、P、O、Z和抗痨药物组合HR、HRS、HRE的依赖现象国内未见报道。结核杆菌对不同药物的依赖率不同，对R依赖率最高，组合药物依赖中对HR的依赖率最高。     

基因芯片技术检测结核杆菌耐药的临床研究

目的 评价基因芯片技术在结核病防治工作中对结核分枝杆菌异烟肼和利福平耐药性的检测效果.方法 利用基因芯片技术对38例涂阳肺结核患者的痰标本进行异烟肼和利福平耐药检测,以传统罗氏药敏试验为金标准,对基因芯片技术的检测效果进行评价.结果 在38例菌株中,用基因芯片法进行异烟肼耐药基因检测,与罗氏药敏的符合率为84.2％,对38例进行利福平耐药基因检测,符合率为89.5％.结论 基因芯片检测异烟肼和利福平的耐药性与罗氏药敏方法具有很好的一致性,具有简便快速,灵敏度高,特异性好的优点,对临床及时准确进行抗结核治疗具有重要意义.     

全自动细菌鉴定仪直接鉴定血培养阳性标本的临床应用

目的探讨全自动细菌鉴定仪对血培养阳性标本直接鉴定和药敏试验的临床应用价值及其与常规法（转种后取得的纯菌落上机鉴定及药敏试验）的符合率。方法将血培养阳性标本的培养液混匀于专用接种水中，接种于专用鉴定板上直接上机做细菌鉴定和药敏试验，并与转种后取得的纯菌落上机鉴定及药敏结果进行比较。结果86例血培养阳性标本直接上机与转种菌落上机鉴定结果差异无统计学意义（P〈0．01），血培养阳性标本直接上机与转种菌落上机的药敏试验结果符合率大于95．5％。而直接法比常规法约提前24h。结论对血培养阳性标本进行直接鉴定及药敏试验缩短了检验时间，为菌血症的治疗争取了时间，且与常规法的实验结果符合率高。     

显微镜观察药物敏感性试验在结核性淋巴结炎中的应用评价

摘要：目的：探讨显微镜观察药物敏感性试验（MODS）用于结核性淋巴结炎的诊断价值及直接进行结核分枝杆菌（MTB）耐药性检测的可能性。 方法：对94例细针针吸细胞学（FNAC）诊断为结核性淋巴结炎患者,用MODS法、抗酸染色和改良罗氏培养基培养（以下简称罗氏法）对穿刺吸出物进行MTB检测;抗酸染色阳性标本同时用MODS法和绝对浓度法检测药敏,对两法检测结果不符的菌株进行最低抑菌浓度（MIC）测定。 结果：MODS法、罗氏法和抗酸染色法检测结核性淋巴结炎的阳性率分别为51.1%、39.4%和22.3%,MODS法阳性率均显著高于罗氏法和抗酸染色法（χ² =7.69与25.04,P均＜0.01）。MODS法和罗氏法检测结果的符合率为86.2%。MODS检测时间中位数为13 d,明显短于罗氏培养法的29 d。MODS检测21株MTB对利福平、异烟肼、乙胺丁醇和链霉素药敏结果与罗氏药敏结果符合率分别为95.0%、85.7%、85.7%、100%。7个MODS药敏结果与罗氏药敏检测结果不符,经MIC检测5个药敏结果支持MODS法结果。 结论：MODS技术对结核性淋巴结炎诊断和MTB药敏试验检测有较高的敏感性和准确性,在结核病防控中有较好的应用价值。     

痰直接厚涂片法和改良罗氏培养法检查结果的比较

目的探讨结核茵细菌学检查方法对肺结核的诊断价值。方法收集荆门市疾病预防控制中心结核病防治所2008年1—5月的30例临床肺结核患者的合格痰标本,对其采用直接厚涂片法（即在薄涂片法的基础上把痰液体积增加1．5—2．0倍量进行涂片）,同时将标本接种到改良罗氏培养基上进行分支杆菌分离培养,并对涂片与培养结果进行比较与分析。结果30例肺结核患者的痰标本细菌学报告为：直接厚涂片法15例阳性,15例阴性;改良罗氏培养基法28例阳性,2例阴性。其中15例属涂片阳性培养阳性,13例属涂片阴性培养阳性,2例属涂片阴性培养阴性。结论痰涂片简便、快捷、成本低,是可以直接发现病原茵的检查方法,但其敏感性低;而传统的改良罗氏培养基法敏感性明显高于涂片法,精确可靠且特异性高,不仅能了解分枝结核杆菌有无生长繁殖能力,还为进一步试验（药敏、菌型鉴定）提供了基础。     

快速玻片法结核杆菌药敏试验探讨

结核杆菌药物敏感试验在结核病防治工作中有重要意义。但由于国内多采用改良罗氏培养基间接药敏法为主，从痰标本分离培养菌落生长后再做药敏试验一般耗时2-3个月才能出检验结果，给临床防治工作和患者都带来不便，Bactec自动快速细     

痰结核菌阳性直接药敏试验150例

结核病为常见的慢性疾病,其疗程长,易产生耐药性,结核菌在培养基上生长缓慢,为了更早地协助临床医生选择有效的抗痨药物,特做150例痰结核菌阳性标本直接药敏试验,现报告如下。     

聚合酶链反应检测痰标本中结核菌的临床应用--附284例检测结果

目的：探讨ＰＣＲ检测痰标本中结核菌诊断肺结核的价值。方法：收集１９９３年４月至１９９６年６月我科用ＰＣＲ检测２８４例肺部疾病患者痰标一中结核菌的资料与涂片及结核菌培养比较，结果：肺结核病组ＰＣＲ检测结核菌阳性率明显高于涂片（６３．８％比２４．３％）及培养法（６８．９％比３３．８％）。结论：ＰＣＲ检测痰标本中结核菌培养法灵敏性，特异性高。     

检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究

目的：建立聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法，并评价共临床应用的价值。方法：依据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物，用PCR从临床分离株和直接从痰标本中扩增rpoB基因片段；对扩得的rpoB基因片段做DNA SSCP分析，并随机测定rpoB片段的序列。结果：PCR从所有212株结核分枝杆菌中均扩得230bp片段135份抗酸染色阳性的痰标本中，有113份扩得阳性片段（83．7％），在SSCP分析中，140份经L－J药敏试验检测为利福平耐受的结核分枝杆菌，有130份有rpoB基因突变（符合率为92．9％），72份经L－J药敏试验检测为利福平敏感的菌，有67份的rpoB基因无突变（符合率为93．1％），测序分析发现57份经SSCP检测为突变的rpoB片段均有序列改变，10份经SSCP分析为无突变的有8份无序列改变，SSCP与测序结果的符合率为94．0％，在本研究的菌株中，耐多药结核病（MDR－TB）占76．4％（107／140），有92．5％（99／107）耐多药菌株经SSCP检测有rpoB突变。结论：建立的PCR－SSCP分析方法，是一种较准确和稳定的检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法，可用于临床快速分析患者结核分枝杆菌对利福平的耐药性，并可作为MDR－TB判断的一个重要指标。     

156株洋葱伯克霍尔德菌的临床分布及耐药性分析

目的了解2003--2006年我院临床分离的洋葱伯克霍尔德菌的标本来源、临床分布和耐药性。方法用MicroScanWalkAway-4-0全自动微生物鉴定和药敏系统对我院临床分离的洋葱伯克霍尔德菌进行鉴定和药敏试验，并分析结果。结果20032006年共分离出156株洋葱伯克霍尔德菌，痰标本中分离菌株数占84．0％（131／156），血液中占5．1％（8/156）。药敏试验结果显示，多数测试的抗菌药物耐药率均大于50％；耐药率小于50％有哌拉西林他唑巴坦（4．8％～21．4％）、复方磺胺甲嗯唑（5．6％～23．8％）和头孢他啶（17．2％～40．0％）。结论洋葱伯克霍尔德菌对多数抗菌药物具有较高的耐药性，临床抗感染治疗应以分离菌株的体外抗菌药物敏感性为依据。     

女性泌尿生殖道假丝酵母菌感染及耐药性研究

目的探讨女性泌尿生殖道假丝酵母菌感染及耐药情况。方法对825例女性患者的阴道分泌物标本经过真菌培养后确定234例为假丝酵母菌（念珠菌）感染，然后进行菌株分类、鉴定及10种抗生素的体外药物敏感试验，并将其结果经过统计学分析。结果825例标本中234例标本分离出致病性假丝酵母菌，阳性率占28．4％（234／825）。其中白色念珠菌占86．3％（202／234）；异常汉逊酵母菌5．6％（13／234）；光滑球拟酵母菌占2．6％（6／234）；链形念珠菌占2．4％（5／234）；克柔念珠菌占1．3％（3／234）；热带念珠菌占1．3％（3／234）；溶脂念珠菌占0．9％（2／234）。结论对于泌尿生殖道感染患者应做真菌培养并根据药敏试验结果选择抗菌药物，药敏试验结果提示，真菌感染应首选制霉菌素、两性霉素、灰黄霉素、益康唑、克霉唑等。     

继发耐药肺结核104例分析

目的：分析抗结核治疗过程中出现的耐药情况。方法：对化疗超过1个月的患者痰标本进行酸性罗氏培养基培养;采用改良罗氏培养基用浓度比例法进行药物敏感测定。结果：789例痰标本培养出分枝杆菌220例,其中耐药菌104例,总耐药率47．2％,其中异烟肼（H）、链霉素（S）、乙胺丁醇（E）和利福平（R）耐药率分别为29．5％,26．8％,19．5％和15．5％,耐多药率10．5％。结论：本地区继发耐药率及耐多药率与全国第四次结核病流行病学抽样调查报告接近,提示NTP在我地区有效发挥作用,结核病控制取得一定成效。     

血培养阳性标本直接药敏试验的评估

目的评价血培养阳性标本快速直接药敏试验的准确可行性。方法我院2007年1月至2008年8月期间200份阳性血液标本,进行直接药敏试验,然后与常规标准药敏试验进行比较。结果200份阳性血液标本,革兰阳性球菌107株,革兰阴性杆菌89株。比较直接药敏试验和常规标准药敏试验,其中葡萄球菌属的平均符合率为96．0％,革兰阴性杆菌平均符合率为96．2％,但是链球菌属平均符合率为71．7％,出现了28．3％的误差。结论血培养阳性标本除链球菌属外,直接药敏试验能为临床提供了准确快速的结果。     

力克肺疾与异烟肼、对氨基水杨酸的交叉耐药性试验

目的 了解力克肺疾（DIP）对耐异烟肼（INH）及耐对氨基水杨酸钠（PAS）菌株的交叉耐药情况，作为耐药病人对3种药物的选择依据。方法 对临床所获得522林痰分枝结核杆菌采用罗氏绝对浓度间接法进行3种药物的平行药物敏感试验。结果 DIP、INH、PAS的耐药率分别为26．5％、51、4％、29、9％耐INH或耐PAS菌株中对DIP的耐药符合率为44．18％、85．6％。结论 对已耐INH的肺结核病人仍有55．82％对DIP敏感，因此，此类病人半数以上可选择DIP作为一个敏感的新药。     

痰标本中培养出真菌的特点及药敏分析

目的 了解真菌在痰标本中的临床分离特点及对抗真菌药物的耐药情况。方法 运用ID32C酵母菌鉴定板和ATB—Fungus药敏、VITEK—ATB半自动细菌鉴定和药敏分析系统进行菌种鉴定与药物敏感试验。结果 1819例痰标本中共检出真菌313株，检出率17．2％。临床分离的白色念珠菌居多（84．0％）；其次为热带念珠菌（7％）；较少的有克柔念珠菌（4．2％）与光滑念珠菌（2．9％），偶见其他念珠菌（1．9％）。药敏试验显示：两性霉素B、5-氟宝嘧啶药敏性94％以上，耐药率以伊曲康唑最高（23％）、其次为氟康唑（18％）。结论 真菌在痰标本中的临床分离除白色念珠菌外，尚有热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌等菌种，药敏5-氟宝嘧啶。两性霉素对真菌敏感性较好，而伊曲康唑、氟康唑耐药率比较高，应引起临床医师的重视。     

痰涂片检查在结核病控制项目工作中的实验评价

目的评价痰涂片检查在世界银行贷款结核病控制项目中的作用。方法分别采用直接涂片抗酸染色法和经典改良罗氏培养基培养法对120例患者痰标本进行平行试验并比较结果。结果120例符合项目要求合格痰直接涂片抗酸染色法阳性率为30%（36/120）,并经省、市项目参比实验室复核证实,改良罗氏培养法阳性率为34.17%（41/120）。另对不符合项目质控要求的80例黏液唾液痰进行涂片检查和培养,结果直接抗酸涂片阳性率仅为1.25%（1/80）,改良罗氏培养法阳性率为3.75%（3/80）,均明显低于合乎项目质控要求的120例痰标本阳性率（P〈0.01）。结论用直接涂片抗酸染色法查痰出结果时间短、简便、费用低,只要痰标本质量符合项目要求,痰检质控好,并且镜检认真判读,就能最大限度地提高阳性率、减少排菌患者漏诊,反映出项目中痰涂片查菌是可信的。     

结核分枝杆菌两种药敏方法的比较

目的：比较两种药敏方法的差异。方法：BACTEC MGIT960与改良罗氏培养法。结果：128例有8例不相符，符合率为94．1％，两者无明显差异（P〉0．05）。结论：建议用MGIT960做初代培养再用改良罗氏培养法做药敏。     

非小细胞肺癌体外药敏试验与术后NP方案化疗疗效的相关性研究

目的采用四唑盐药敏试验（MTr）方法评价非小细胞肺癌（NSCLC）术后NP方案化疗的有效性，筛选敏感病例，指导NSCLC的个体化治疗。方法共收集144例病理证实为ⅠB～ⅢA期NSCLC患者的临床资料，术后均接受3～4个周期的NP方案化疗，且随访数据完整。M＇IT法检测各病例的肿瘤组织对顺铂（DDP）及长春瑞滨（NVB）的药物敏感性。结果①体外药敏试验的结果与临床治疗疗效的总体符合率为76．4％，体外MTT药敏试验的敏感度为87．4％，特异度为55．1％。②鳞癌体外药敏试验的结果与临床治疗疗效的总体符合率为85．3％，敏感度为92．6％，特异度为57．1％；腺癌体外药敏试验的结果与临床治疗疗效的总体符合率为62．7％，敏感度为86．2％，特异度为31．8％；腺鳞混合型体外药敏试验的结果与临床治疗疗效的总体符合率为78．3％，敏感度为66．7％，特异度为90．9％。结论①体外药敏试验与临床治疗敏感性有很好的相关性，是指导临床化疗的一种可行而又重要药物筛选方法。②体外药敏试验对非小细胞肺癌患者术后选择NP方案化疗提供了依据。