骨髓移植供受者MLR与HLA—D基因配型相关性分析

用血清学、混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）和基因配型法分析了骨髓移植供受ＨＬ－ＩＩ类抗原的匹配程序。结果ＨＬＡ－ＤＲ血清型相合的８５对供受中仅有３１对基因配型相合；ＤＲ血清不合的８对中有７对ＤＲβ１基因不合。说明基因配型较血清配型有较高的不匹配率和灵敏度。混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）的配对刺激指数（ＲＲＩ）〉１５％时大部分供受对的ＨＬＡ－Ｉ类基因配型是不合的，而ＲＲＩ〈１５％时则涌步定地反映供受对     

造血干细胞移植供受者HLA配型结果分析

人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)是人类最强的同种抗原,是主要组织相容性抗原之一.近年来其结构和功能的研究,不仅给免疫学基础研究带来了突破性的进展,而且使器官移植成为一项有效的治疗手段.     

异基因骨髓移值HLA配型分析

异基因骨髓移值ＨＬＡ配型分析５１０５１５第一军医大学南方医院武大林兰炯采１黄志光异体骨髓移植（Ａｌｏ ＢＭＴ）是治疗多种髓髓衰竭或恶性疾患的有效措施。移植排斥（ｇｒａｆｔｒｅｒｓｕｓｈｏｓｔｄｉｓｅａｓｅ，ＧＶＨＤ）是影响移植成功的严重问题，供／受者...     

骨髓移植供受者HLA－DRB的单链构型多态性配型

用ＰＣＲ和单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）法检查供受者的ＨＬＡ－ＤＲＢ－１基因座的多态性的一致性，以此做ＤＲＢ的基因配型。１６例同胞供受者对的ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型，有６对相合（６／１６），１０对不合（１０／１６）。此基因配型结果与其它配型结果比较，说明ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型在区分同胞供受者对的Ⅱ类抗原多态性上有较高的灵敏度，同时表明此类配型在应用于骨髓移植前检查同胞供者的意义。     

应用PCR－SSP对异基因骨髓移植供受者HLA－DQA1位点的基因分型

为探索一种可靠性和灵敏性高的ＨＬＡⅡ类基因的配型方法，根据Ｏｌｅｒｕｐ提出的１６个特异性引物序列，用多聚酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对ＤＱＡ＿１基因位点的多态性进行检测和分型，并与多聚酶链反应－序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ－ＳＳＯＰＨ）及多聚酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测结果进行比较，获得了一致的分型结果。ＰＣＲ－ＳＳＰ可分辨出ＤＱＡ＿１位点的纯合体和杂合体等位基因，并能检测出单一碱基的点突变；它将ＰＣＲ扩增和检测两个步骤合并为一次完成，操作更简便、快速。并已将ＰＣＲ－ＳＳＰ方法成功地用于１５对异基因骨髓移植的供、受者的分型。ＰＣＲ－ＳＳＰ作为基因分型的有效技术，可为骨髓来源提供直接的科学依据。     

PRA和HLA配型与移植肾功能延迟

目的 研究肾移植术后移植肾功能延迟的患者与PRA、HLA配型的关系。方法 应用美国OneLambda公司单抗湿板进行供受者HLA-Ⅰ类分型;应用微量序列特异性引物进行HLA-Ⅱ类基因分型;通过补体依赖微量细胞毒性试验检测受者的群体反应性抗体（PRA）。分析54例肾移植术后发生移植肾功能延迟的患者与PRA、HLA配型的关系。结果 54例肾移植术后发生移植肾功能延迟患者中,有45例PRA阳性,占83．3％。但仅有12例PRA值超过30％,其中9例术前、术后PRA值均阳性;3例术后阳性,但其抗体强度较弱。而另#b30例中,6例术前、术后阳性（3例为Ⅱ类抗体）;24例PRA值均低于30％,且反应强度较弱。HLA-A、B、DR和DQ8个抗原的比较显示,0～4个抗原错配的占38．9％（21／54）;5～8个抗原错配的占61．1％（33／54）。在肾移植术后移植肾功能延迟患者中HLA-Ⅰ类和Ⅱ类抗原均无0错配,可见HLA抗原0错配在移植肾功能延迟患者中具有重要的意义。结论 肾移植患者与供者HLA错配率高,PRA阳性患者所发生的移植肾功能延迟就相对高,良好的HLA配型和PRA阴性可降低移植肾功能延迟。     

HLA—DQA反相杂交法分型与多聚酶链反应—单链构象多态性配型的…

为了验证多聚酶链反应－单链构象多态性方法在骨髓移植型中的可靠性和准确性，采用掺入生物素的多聚酶链反应对ＨＬＡ－ＤＱＡ位点基因进行特异性扩增。将所选区分ＨＬＡ－ＤＱＡ位点等位基因的特异性探针点于尼龙膜上，用标记的扩增产物与膜上探针杂交，并用碱性磷酸酶显色法杂交信号，确定待测标本的基因型。     

骨髓移植供受者HLA—DRB的单链构型多态性配型

用ＰＣＲ和单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）法检查供受的ＨＬＡ－ＤＲＢ－１基因座的多态性的一致性，以此做ＤＲＢ的基因配型。１６例同胞供受对的ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型，有６对相合（６／１６），１０对不合（１０／１６）。此基因配型结果与其它配型结果比较，说明ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型在区分同胞供受对Ⅱ类抗原多态性上有较高的灵敏度，同时表现此类配型在应用于骨髓移植前检查同胞供的意义     

骨髓移植HLA基因分型程度探讨

自20世纪90年代末期起,HLA基因分型技术日趋成熟.由于HLA基因分型方法比传统的HLA血清学分型方法准确,故已取代后者并被广泛用于骨髓移植中的HLA分型.根据HLA基因分型的精细程度,一般被分为低分辨分型和高分辨分型两种.低分辨分型是指被鉴定的等位基因相当于HLA抗原分解物(split)水平,即通常所说的HLA亚型(即组基因).在WHO基因命名中,HLA亚型相当于星号后2位数的水平.高分辨分型是指精确到核苷酸顺序水平,即WHO命名的星号后4位数.     

清除小鼠特异性活化淋巴细胞预防急性移植物抗宿主病的研究

试图通过消除异基因Ｔ细胞中能够识别宿主主要组织相容性抗原复合物（ＭＨＣ）的Ｔ细胞克隆细胞，以抑制移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）．异基因供者经宿主来源的细胞特异性致敏后，用ＩＬ－２Ｒ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）联合补体杀伤骨髓移植物中活化Ｔ细胞，能明显抑制供者淋巴细胞在宿主脾脏中的增殖，并使异基因骨髓移植受体小鼠生存时间明显延长。本研究结果证明，清除特异活化的Ｔ细胞可以有效地预防ＧＶＨＤ。     

异基因骨髓移植治疗重型再生障碍性贫血

采用大剂量抗淋巴细胞球蛋白、环磷酰胺的非照射预处理方案对３例重型再生障碍性贫血患者进行了异基因骨髓移植（ａｌｌｏ－ＢＭＴ）治疗。３例患者均为男性，年龄分别为２８岁，２１岁，２０岁，病程分别为２周，３周，８周。诊断到骨髓移植平均为２４日。移植后均给予ＧＣＳＦ３００μｇ·ｍ￣（－２）·ｄ￣（－１）和的Ｍ－ＣＳＦ８００ＩＵ／ｄ。两例患者已分别正常生存３４￣＋月和３２￣＋月，其染色体及红细胞酶检查，均为供者型（４６ＸＸ）。另一例输血后移植的病例发生免疫排斥反应而死亡。２例移植成功的患者骨髓恢复造血的时间提前，中性粒细胞达＞０．５×１０￣９／Ｌ分别是１３日和１５日，免疫功能恢复时间也提前，Ｔ细胞亚群在术后３个月内恢复正常。作者阐述了预处理方案的机制，并指出联合应用细胞因子有协同造血和促进免疫恢复的功能，认为ａｌｌｏ－ＢＭＴ后６个月内不直接种疫苗。     

应用序列特异引物PCR法对广西壮族HLA－DQA_1进行基因分型

应用序列特异引物多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法对８２名无血缘关系的广西壮族健康人的ＨＬＡ－ＤＱＡ＿１进行基因分型。共检出７种ＤＱＡ＿１等位基因，以ＤＱＡ＿１＊０３０１的频率最高，达３１％，其次为ＤＱＡ＿１＊０１０４，０１０２和０５０１，检出率分别为２４．３％，１６．９％和１１．７％。未检出的等位基因有ＤＱＡ＿１＊０２０１，０３０２和０６０１。结果表明，壮族的ＨＬＡ－ＤＱＡ＿１等位基因频率分布除与中国南方人相似外，尚有其特点。序列特异引物ＰＣＲ方法不需要放射性同位素，简便快速、准确可靠的ＨＬＡ－ＤＱＡ＿１基因分型新方法。     

乙型肝炎病毒荧光PCR基因分型方法的建立和应用

[目的]建立一种在临床上准确、快速、简便地对乙型肝炎病毒进行基因分型（BCD三型）的方法。[方法]大量分析已分型的HBV基因组序列，寻找出HBV各基因型的型特异性碱基的分布规律，设计型特异性的引物和探针，利用已知全序列HBV建立荧光PCR的基因分型方法。并与PCR-RFLP及S基因测序等分型方法作比较。[结果]荧光PCR方法对已知基因组序列的HBV分型结果与基因组分析完全一致，利用大量随机临床标本摸索的最佳反应条件为94℃，1min；94℃，10s，60℃，30s，40个循环。与PCR-RFLP相比，分型结果一致性在84．0％；与S基因测序分型相比，一致性为96．2％。[结论]利用荧光PCR能灵敏、快速、准确地进行乙型肝炎病毒基因分型，方便临床应用和流行病学调查。     

骨髓移植患者外周血淋巴细胞亚群和免疫功能的动态变化

用免疫酶标（ＡＰＡＡＰ）法和淋巴细胞转化试验（ＬＴ）等方法对１５例骨髓移植（ＢＭＴ）患者的免疫功能变化进行动态观察。急性白血病化疗诱导缓解后即有ＣＤ＿４￣＋细胞，ＣＤ＿４／ＣＤ＿８比值和ＬＴ值异常。强化巩固治疗后上述异常进一步加重。ＢＭＴ后早期（９０天内）淋巴细胞亚群绝对值，血清ＩｇＧ、ＩｇＡ和ＩｇＭ水平以及ＬＴ值均低于正常，而激活淋巴细胞增加。ＢＭＴ后２年仍有ＣＤ＿４￣＋细胞、ＣＤ＿４／ＣＤ＿８比值和ＯＴ试验异常。ＢＭＴ的淋巴细胞亚群的百分比和绝对值的改变不是平行的，因此，应综合地评价两者的变化。     

骨髓移植患者血及尿中巨细胞病毒感染核酸标志物的检测

目的　为骨髓移植患者寻找较好的诊断和治疗巨细胞病毒（ＣＭＶ） 感染的分子生物学依据。方法　用聚合酶链反应（ＰＣＲ） 方法测尿中ＣＭＶＤＮＡ,逆转录（ＲＴ）ＰＣＲ 法测血中ＣＭＶ即刻早期抗原（ＩＥ）ｍＲＮＡ。结果　在被测的２７ 例患者１０３ 份标本中,发现１０ 例ＣＭＶ 感染者的尿ＣＭＶＤＮＡ 及血ＩＥ ｍＲＮＡ 几乎同时阳转。在连续使用抗病毒药甘昔洛瓦（ＤＨＰＧ） 治疗的６ 例患者中,ＩＥ ｍＲＮＡ 约一周左右阴转,而ＤＮＡ 约２０ 天左右阴转。结论　ＣＭＶＩＥｍＲＮＡ 可能反映病毒即刻早期转录的停止,对临床抗病毒治疗可能是一个较好的参考指标。     

HLA单倍体相合骨髓移植成功治疗2例幼儿急性白血病的护理

目的探讨和总结HLA单倍体骨髓移植治疗幼儿白血病的护理。方法根据患儿年龄较小的特点,让其母亲进入层流间,以改善儿童的心理状态,通过针对性的进行预处理、锁骨下静脉插管、预防感染及各种并发症观察和护理。结果2例患儿移植期间心情愉快,未出现哭闹要出层流间的现象,未发生感染,在 10d和 14d造血干细胞功能恢复, 37d和 64d顺利渡过急性GVHD排异期,经检测HLA为供者型,分别于 108d和98d出院。结论针对性护理措施是2例幼儿单倍体移植成功关键之一。     

HLA半相合未去除T细胞骨髓移植治疗白血病的初步观察

目的探索半相合未去除T细胞骨髓移植治疗白血病的可行性.方法15例白血病患者接受HLA2～3个位点不匹配亲缘骨髓移植.用阿糖胞苷、环磷酰胺和γ射线全身照射进行预处理,供者应用G-CSF250μg/d,连用7d后采髓,移植物抗宿主病(GVHD)预防除用环孢菌素A(CsA)和甲氨蝶呤(MTX)外,在移植前第4天～第1天用抗胸腺细胞球蛋白ATG5mg@kg-1@d-1,移植后第7天开始加用霉酚酸酯1.0g/d.结果患者移植后均获得造血重建,中性粒细胞＞0.5×109/L和血小板＞20×109/L的中位时间分别是19d(13～23d)和21d(16～32d).5例(33.3%)发生急性Ⅱ～Ⅳ度GVHD,其中急性Ⅱ度肠道GVH2例,急性Ⅲ度肠道GVHD2例,急性肠道和肝脏Ⅳ度GVHD1例.可评价的9例患者中8例发生慢性GVHHD,无一例发生广泛性慢性GVHD.中位随访时间395d(110～690d),死亡6例,其中死于急性GVHD3例,死于感染2例,复发死亡1例.无病存活9例,其中6例存活在1年以上.结论供者应用G-CSF后采髓,多种免疫抑制剂联合应用的HLA半相合未去除T细胞骨髓移植,在治疗自血病过程中,有效地降低了急性重症GVHD发生,提高了无病生存,对拓宽供髓来源有重要实用价值.     

GVHD病因学的新视野:HLA分子三维结构研究

目的 :进一步探索GVHD的发病机理 ,提高临床移植疗效。方法 :采用国际通用的微量淋巴细胞毒试验和混合淋巴细胞培养方法 ;基因分型采用PCR SSP方法 ,对基因亚型进行DNA测序 ,再进行HLA三维结构模拟。结果 :① 4名骨髓移植患者中 ,例 1供 受体间HLA Ⅰ、Ⅱ类血清学分型相合 ,DQB1基因亚型不同 ,例 2、3、4均有 1个Ⅰ类抗原 (分别为HLA A、B和A)血清学分型不合和 1个基因亚型不同。HLA三维结构模拟例 1、3、4供 受者差别明显 ,骨髓移植后发生了Ⅲ～Ⅳ度GVHD ;例 2三维结构模拟差别不明显 ,仅发生Ⅰ度GVHD ;② 4个病例供 受体间HLA分子分别相差 14、17、2 0、12个氨基酸 ,相差数量与GVHD无相关性 ;3例重度GVHD供 受体的HLA分子三维结构均在抗原结合区的β转角处出现明显差异 ,而 1例轻度GVHD则无明显差异。 结论 :当异基因骨髓移植供 受体间HLA基因亚型不同时 ,移植后发生GVHD的程度与HLA分子三维结构差别大小有密切关系 ;三维结构的差别又与差异氨基酸所处的位置有关 ;GVHD与抗原氨基酸差别的数量多少没有直接关系。     

HLA基因位点全相合和1～2个位点不合无血缘关系异基因骨髓移植的临床疗效比较

目的　比较HLA基因位点全相合与HLA 1～ 2个基因位点不合无血缘关系供者异基因骨髓移植 (URD BMT)的临床疗效。方法　病例包括急性白血病 2 2例 ,慢性髓系白血病慢性期 32例 ,骨髓增生异常综合征 (MDS) 6例。其中HLA基因位点全相合URD BMT 39例 ,1～ 2个位点不合URD BMT 2 1例。预处理方案均为Bu Cy2方案 ,急性移植物抗宿主病 (aGVHD)预防方案均为霉酚酸酯(MMF)、环孢菌素A(CsA)加甲氨蝶呤 (MTX)联合方案。结果　HLA基因位点全相合组造血重建 38例 ,中位随访时间 11(2 .5～ 5 2 .0 )个月 ,3年无病生存率 (79.2± 7.1) % ,HLA 1～ 2个位点不合组造血重建18例 ,中位随访时间 9(2～ 4 6 )个月 ,3年无病生存率 (45 .8± 15 .5 ) % (P <0 .0 5 )。Ⅱ～Ⅳ度aGVHD发生情况 :HLA基因位点全相合组 10例 (2 6 .3% ) ,HLA 1～ 2个基因位点不合组 6例 (33.3% ) (P >0 0 5 )。结论　URD BMT是治疗白血病和MDS的有效方法 ,HLA基因学配型技术可提高URD BMT的疗效。