慢性乙型肝炎患者乙型肝炎病毒外膜大蛋白与病毒复制的相关性研究

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者血清乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)与HBV-DNA、HBeAg之间的关系及临床应用价值。方法 2010年10月-2011年5月采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙型肝炎病毒患者血清中HBV-LP,化学发光免疫分析法(CLIA)检测乙型肝炎病毒标志物(HBV-M),实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测HBV DNA载量,比较分析三者间的阳性率及相关性,数据采用SPSS17.0软件进行统计分析。结果 1 036例慢性HBV感染者中,HBV-LP阳性率为84.36%,较HBV-DNA阳性率72.01%与HBeAg阳性率54.44%均高,差异有统计学意义(P<0.01);HBV-LP与HBV-DNA和HBeAg的总符合率分别为78.19%、64.48%,HBV-LP与HBV-DNA和HBeAg阳性符合率分别为93.43%、94.86%;HBV-LP表达与HBV-DNA和HBeAg之间均显著关联(χ2=101.67,χ2=65.35),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 HBVLP是反映HBV感染者体内复制程度的良好血清免疫学指标,血清中HBV-LP与HBV-DNA具有较好的相关性,特别是可作为HBeAg阴性患者检测病毒复制及预后判断的良好的指标。     

HBV感染相关蛋白Human Annexin-V在卵巢组织表达

目的:观察HBV感染相关蛋白—人膜联蛋白V(Human Annexin-V,HA-V)在卵巢组织,特别是卵细胞上的表达,探讨其在HBV感染卵巢及卵细胞中的可能作用。方法:用SP免疫组化的方法检测HA-V在引产胎儿卵巢及卵细胞,血清HBsAg阳性及阴性的成人卵巢、卵细胞上HA-V的表达及分布。结果:①所有卵巢组织均有HA-V的表达,与HBsAg阳性与否及卵巢成熟无关。阳性表达分布于卵巢的卵细胞(包括原始卵细胞、初级卵母细胞、次级卵母细胞及成熟卵母细胞)、颗粒细胞及间质细胞。②免疫组化图像分析系统显示血清HBsAg阳性成人卵巢与血清HBsAg阴性成人卵巢及胎儿卵巢HA-V表达无明显差别。结论:HA-V是卵巢组织及卵细胞上的一种固有蛋白;HA-V可能作为HBsAg的特异性受体介导了HBV与卵巢组织各种细胞,特别是卵细胞的粘附、内化等过程并最终导致了HBV对卵巢及卵细胞的感染。     

CTLA-4基因第1外显子49位点基因多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原（CTLA-4）基因第1外显子49位点基因多态性与2型糖尿病（T2DM）的相关性。方法利用聚合酶链反应（PCR）-限制性酶切长度多态性（RFLP）的方法检测T2DM组111例和对照组（NC组）39例CTLA-4基因第1外显子49位点多态性。结果T2DM组与NC组CTLA-4基因第1外显子49位点基因型分布及等位基因频率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。T2DM患者各基因型的临床资料比较：GG组的总胆固醇有下降趋势。CTLA-4基因第1外显子49位点GG基因型有起病年龄相对更早的趋势和胰岛素应用比例更高的趋势。结论CTLA-4基因第1外显子49位点基因多态性分布与T2DM发病无明显相关性，但G等位基因仍有可能是T2DM的易感因素之一。     

大肠埃希菌外膜蛋白T水解人防御素-4作用

目的 探讨外膜蛋白T(OmpT)在大肠埃希菌CFT073致尿路感染中的作用机制。方法 以人膀胱癌上皮细胞5637的cDNA为模版,扩增人防御素-4(HBD-4)基因,连接至质粒pET-28a,重组质粒经转化、诱导和纯化处理后获得His-HBD-4融合蛋白;采用琼脂糖扩散法和最小抑菌浓度方法检测HBD-4对ompT野生株、敲除株和回补株的抗菌活性,并分别观察比较ompT野生株CFT073、敲除株和回补株水解HBD-4的差异。结果 通过测序鉴定及双酶切电泳证实成功构建HBD-4原核表达载体pET-28a-HBD-4,获得HBD-4体外表达菌株;HBD-4对CFT073与ompT敲除株的最小抑菌浓度不同,野生株为10 μg/mL,敲除株为6 μg/mL;与HBD-4共同孵育后,敲除株的生长状态受到抑制,但对野生株的影响较小。结论 初步证实ompT作为毒力因子参与对人固有免疫系统成分的水解,在大肠杆菌致尿路感染的过程中发挥重要作用。     

CTLA-4基因第1外显子49位点基因多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的 探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA-4)基因第1外显子49位点基因多态性与2型糖尿病(T2DM)的相关性.方法 利用聚合酶链反应(PCR)-限制性酶切长度多态性(RFLP)的方法检测T2DM组111例和对照组(NC组)39例CTLA-4基因第1外显子49位点多态性.结果 T2DM组与NC组CTLA-4基因第1外显子49位点基因型分布及等位基因频率比较差异无统计学意义(P＞0.05).T2DM患者各基因型的临床资料比较:GG组的总胆固醇有下降趋势.CTLA-4基因第1外显子49位点GG基因型有起病年龄相对更早的趋势和胰岛素应用比例更高的趋势.结论 CTLA-4基因第1外显子49位点基因多态性分布与T2DM发病无明显相关性,但G等位基因仍有可能是T2DM的易感因素之一.     

儿童2型糖尿病相关研究进展

近年来,2型糖尿病(T2DM)已经不仅仅局限于在成人中蔓延,儿童T2DM发病率也迅速增长。笔者对近年国内外儿童T2DM的流行病学、发病原因、临床特点、治疗、预防的研究情况进行综述。     

血浆分泌型卷曲相关蛋白4在慢性乙型肝炎病毒相关肝癌中的临床价值初探

目的 初步探讨血浆分泌型卷曲相关蛋白4(secreted frizzled related protein 4,SFRP4)检测在HBV相关肝癌中的临床应用价值.方法 选取2016年10月-2019年5月住院治疗的慢性HBV感染患者70例,包括慢性乙型肝炎40例、乙肝肝癌30例,另选取同期表观健康体检者30例作为正常对...     

维生素D改善2型糖尿病相关机制研究进展

2型糖尿病（T2DM）的病因和发病机制目前尚未完全阐明,但是从糖脂毒性到炎症学说,人们对其认识正逐步深化;维生素D的传统作用表现在调节钙磷代谢和促进骨质形成,随着多种细胞内1,25（OH）₂D₃受体的发现,维生素D在降低肿瘤、糖尿病、心血管疾病和肥胖等慢性疾病危险方面的作用正日益成为研究者们关注的焦点;本文将对维生素D在胰岛β细胞功能缺陷、胰岛素抵抗、免疫和炎症调节中的作用予以综述,重点介绍维生素D与T2DM相互关系的生理学机制,并从维生素D受体基因多态性方面解释人群实验中补充维生素D对2型糖尿病防治效果差异性产生的原因。     

2株分离的嗜人T细胞白血病病毒I型的PCR检测

[目的 ]用 PCR法检测嗜人 T细胞白血病病毒 I型 (HTL V- I)的分离情况。 [方法 ]采集 2例日本鹿儿岛县成人 T淋巴细胞白血病 (AL T)病人的肝素抗凝血 ,分离外周血单核细胞 (PBMCs) ,加入植物血凝素和白介素 - 2 ,与健康人 PBMCs共培养进行 HTL V- I的分离 ,然后抽提 DNA,用 HTL V- I的 gag1和 tax1两引物进行 PCR扩增 ,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳确定病原分离结果。 [结果 ]2株都扩增出了 HTL V- I前病毒 DNA的 gag1和 tax1片断 ,证明了嗜人 T细胞白血病病毒 I型的分离成功。 [结论 ]PCR法是快速、准确检测嗜人 T细胞白血病病毒感染的有效方法之一。     

乙肝患者血清大蛋白检测的临床意义

目的:通过检测乙型肝炎患者血清中HBV-DNA、乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)、乙型肝炎病毒前S1抗原(Pre-S1)和乙肝病毒标志物,比较HBV-LP与Pre-S1的差异,探讨HBV-LP与乙肝病毒复制的关系。方法:对202例乙型肝炎患者和80例正常对照血清采用酶联免疫方法检测HBV-LP、Pre-S1以及HBV标志物,采用实时荧光定量PCR检测血清中HBV-DNA含量。结果:202例乙肝患者血清中HBV-LP阳性率为84.65%,与HBV-DNA阳性率为82.67%无显著性差异,明显高于Pre-S1的阳性率58.41%。同时在HBV-DNA阳性乙肝患者中,HBV-LP阳性率为94.61%,显著高于HBeAg的阳性率。HBV-DNA拷贝数的对数与HBV-LP含量具有相关性(r=0.928)。结论:HBV-LP与HBV-DNA相关性好,是能反映乙肝病毒复制的血清学指标。     

动态监测乙型肝炎病毒大蛋白在乙肝治疗中的作用

目的观察乙型肝炎病毒大蛋白(HBV-LP)在乙肝治疗中的动态变化,为临床应用提供依据。方法收集衡阳市中心医院自2008年1月至2010年6月间收治的乙肝患者共160例。分别在抗病毒治疗0,3,6,9,12个月时进行血清HBV DNA和HBV-LP检测。结果乙肝患者中HBV-LP与HBV DNA的阳性率及治疗后HBV-LP与HBV DNA的转阴率无显著差异,但HBV DNA的平均转阴时间短于HBV-LP。治疗有效的患者在治疗过程中HBV-LP与HBV DNA均下降,但HBV DNA下降的幅度要快于HBV-LP下降的幅度;而治疗无效的患者在治疗过程中HBV-LP与HBV DNA表达无显著变化。结论动态监测乙型肝炎病毒大蛋白可作为病毒复制和疗效判定的重要指标。     

乙型肝炎病毒核酸载量与乙型肝炎病毒大蛋白的相关性研究

目的 探讨慢性乙型肝炎e抗原( HBeAg)阴性患者血清中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)病毒核酸载量与乙型肝炎病毒大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,LHBs)之间的相关性,从而探讨LHBs是否可以用作HBeAg阴性乙型肝炎患者病毒复制程度的判定指标.方法 采集83例HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清,采用ELISA进行LHBs检测,全自动免疫分析仪进行HBeAg检测,实时荧光定量PCR方法进行HBV DNA检测.分析HBV DNA无拷贝数组、低拷贝数组及高拷贝数组3组中LHBs的检出率以及HBV DNA不同拷贝数组与LHBs的相关性.结果 在HBV DNA无拷贝数组,LHBs的阳性率为6.4％;低拷贝数组,LHBs的阳性率为56.3％,吸光度值与拷贝数对数值呈正相关,但无统计学意义(r=0.25,P=0.362);高拷贝数组,阳性率为95.0％,吸光度值与拷贝数对数值有良好相关性(r=0.90,P＜0.001).结论 检测HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清LHBs,有助于判断患者体内HBV的复制程度,但是否能够作为HBeAg阴性乙型肝炎抗病毒治疗终点的有效判定指标,尚有待进一步探讨.     

HBeAg阴性乙型肝炎患者HBV-LP及HBV-DNA检测分析

目的 分析HBeAg阴性的乙型肝炎患者血清HBV-LP及HBV-DNA检测的价值.方法 收集64份HBeAg阴性的乙型肝炎患者血清标本,分别采用实时荧光定量PCR检测HBV-DNA、ELISA法检测HBV-LP.结果 64例HBeAg阴性的乙型肝炎患者血清中,HBV-DNA阳性36例,总检出率为56.3％;HBV-LP阳性44例,总检出率为68.8％;HBV-DNA与PreS1抗原具有较好的相关性,HBeAg阴性的乙型肝炎患者血清HBV-DNA、HBV-LP阳性率差异无统计学意义,HBV-DNA复制拷贝数为＜103、103-5、106-7、＞107拷贝/ml,HBV-LP 检出率分别为60.7％、82.6％、60.0％、66.7％.结论 HBeAg阴性的乙型肝炎患者血清中HBV-LP检测可以作为HBV-DNA检测的有效补充.     

Construction and immunogenicity of recombinant swinepox virus expressing capsid protein of PCV2

To explore development of a vaccine against PCV2 infections, the gene of capsid protein (Cap) was inserted into the swinepox virus (SPV) genome by homologous recombination. The recombinant swinepox virus expressing capsid protein (rSPV-cap) was verified by PCR, western blot and immunofluorescence assays. To evaluate the immunogenicity of rSPV-cap, twenty-four PCV2 seronegative minipigs were immunized with rSPV-cap, wild type SPV (wtSPV; negative control), or PBS (challenge control). After inoculation with PCV2, pigs in the rSPV-cap immunized group showed significantly higher average daily weight gain (ADG) and shorter fever duration compared with the wtSPV treated group (P<0.05). Cap-specific antibody in the rSPV-cap immunized group increased dramatically after vaccination and increased continuously over time. PCV2 genomic copies in the serum of rSPV-cap immunized pigs were significantly less compared with the wtSPV treated group at all time points after inoculation (P<0.01). Significant reduction in gross lung lesion scores, histopathological lung lesion scores, and lymph node lesion scores were noted in the rSPV-cap immunized group compared with the wtSPV treated group (P<0.01). The results suggested that the recombinant rSPV-cap provided pigs with significant protection from PCV2-associated disease; thus, it offers proof-of-principle for the development of a vaccine for the prevention of PCV2-associated disease in pigs.     

Live recombinant Lactococcuslactis expressing avian hepatitis virus ORF2 protein: Immunoprotection against homologous virus challenge in chickens

Avian hepatitis E virus (aHEV) is a pathogen associated with hepatitis-splenomegaly syndrome in chickens. To date, no commercial vaccine is available for preventing aHEV infection. In this study, three recombinant LactococcuslactisNZ9000experimental live vaccines expressing cytoplasmic, secreted, and cell wall-anchored forms of aHEV truncated ORF2 protein spanning amino acids 249–606 (ΔORF2) were constructed using pTX8048 vector and characterized. Each chicken was immunized three times at two-week intervals with one of the three live aHEV ORF2 vaccines (experimental group) or with live vaccine containing empty vector only (control group). Both groups were then challenged with aHEV and evaluated to compare immune responses and immunogenic effects. Serum IgG levels, secretory IgA (sIgA) levels in bile and jejunal lavage fluid, and mRNA expression levels ofIL-2 and IFN-γ in liver and spleen were significantly higher in experimental chickens than in controls. Meanwhile, post-challenge serum and fecal virus loads were significantly lower in experimental chickens versus controls. Moreover, on day 7 post infection (PI), serum lactose dehydrogenase (LDH) levels were significantly higher in controls than experimental chickens. Furthermore, at day 28 PI, obvious gross pathological lesions and histopathological changes typical for aHEV infection were observed in control livers and spleens, with only moderate pathological changes observed in the experimental group. The results of this study collectively demonstrate that an oral vaccineusing L.lactisNZ9000 as a delivery vector for aHEV immunogenic antigen could effectively control aHEV infection of chickens.     

乙型肝炎肝硬化患者与乙型肝炎病毒携带者乙型肝炎病毒X基因序列比较研究

目的研究乙型肝炎肝硬化患者与乙型肝炎病毒（HBV）携带者HBV X基因序列的差异。方法对20例标本的PCR产物进行直接测序;并对3例乙型肝炎肝硬化患者和3例无症状HBV携带者HBV DNA的扩增片段进行克隆测序,并分析比较。结果肝硬化患者中X基因核心启动子双突变T1762/A1764、G1719T、T1727G/A、G1730C、T1753C等变异高于HBV携带者;前者X启动子区变异率明显高于后者;乙型肝炎肝硬化同一患者X区不同克隆之间的碱基序列同源性为91.3%-99.7%,而HBV携带者为96.0%-100.0%。结论乙型肝炎肝硬化患者,HBV DNA X区的CP启动子区以及X启动子区变异程度明显高于HBV携带者,同时乙型肝炎肝硬化患者体内存在变异程度更大的HBV准种群。     

乙型肝炎病毒C基因多态性及其蛋白特性分析

目的 调查中学生人群乙型肝炎病毒(HBV)C基因多态性及其乙型肝炎病毒C蛋白(HBc)特性变化,为了解乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)变异提供理论依据.方法 采用HBV-C基因特异性引物对23份义乌地区大学生HBV携带者(血清学检测为大三阳患者)血清标本进行PCR扩增鉴定,并取21份PCR检测阳性产物直接测序;进一步用Vector NTI 8.0和DNA Star软件分析HBV-C基因多态性及HBc蛋白特性的变化.结果 23份标本中,HBV-C DNA阳性率91.30％;与标准基因序列(Gen Bank X01587)比较,HBV-C基因同源性为93.3％～95.1％;分别形成54种突变模式,其中一处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也发生了相应的改变,此处氨基酸序列的第130处脯氨酸(P)突变为苏氨酸(T),其余标本均为同义突变;但突变处编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性与标准株相比较无明显变化.结论 义乌市大学生HBV携带者HBV-C基因序列有一定程度的变异.     

乙型肝炎病毒外膜大蛋白对HBeAg阴性和低水平HBV-DNA乙型肝炎患者的检测意义

目的探讨HBV感染者血清中乙型肝炎病毒外膜大蛋白(BHV-LP)与HBV-DNA、HBeAg、PreS1-Ag之间的关系及在判断病毒复制中的临床应用价值。方法对235例HBV感染及80例例健康对照血清采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法检测HBV-LP、HBeAg、PreS1-Ag,采用实时荧光定量PCR方法检测HBV-DNA。结果在235例HBV患者血清中,HBV-LP与HBV-DNA、PreS1-Ag、HBeAg关联显著(均P0.05),HBV-LP阳性率85.11%,较HBV-DNA、PreS1-Ag、HBeAg敏感,差异有统计学意义(均P0.01);HBeAg阴性组中,HBV-LP阳性率为75.20%,较HBV-DNA、PreS1-Ag敏感,差异有统计学意义(均P0.01);HBV-LP水平与HBV-DNA拷贝数变化相一致,两者呈正相关(r=0.9638,P0.05);HBV-DNA阴性组中HBV-LP阳性率为71.43%,较PreS1-Ag、HBeAg敏感,差异有统计学意义(均P0.01)。结论HBV-LP能够反映HBV的复制情况,是反映HBeAg阴性和低水平HBV-DNA乙型肝炎患者体内病毒复制、疾病进程、疗效与预后判断的新的敏感指标。     

乙型肝炎病毒大蛋白在慢性乙型肝炎患者中检测的临床价值探讨

目的探讨乙型肝炎病毒表面抗原大蛋白(HBV-LP)反映HBV复制的可靠性及其检测的临床价值和意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测304份慢性乙型肝炎患者血清标本的HBV-LP和乙型肝炎两对半结果,并应用实时荧光定量PCR方法平行检测HBV-DNA结果。结果 304例慢性乙型肝炎患者标本中,HBV-DNA的阳性率67.76%,HBV-LP的阳性率75.66%,两者差异无统计学意义;其中186例HBeAg阴性患者HBV-LP阳性率65.59%,高于HBV-DNA的阳性率(50.54%),差异有统计学意义(P<0.01);186例HBeAg阴性患者中,HBV-DNA和HBV-LP检出一致率为76.34%;血清中HBV-LP(OD值)与HBV-DNA拷贝数之间具有良好的相关性,相关系数(r)=0.853。结论 HBV-LP能反映出乙型肝炎病毒的复制情况;在HBeAg阴性乙型肝炎患者中,HBV-LP较HBV-DNA更能敏感反映HBV的感染复制状态;在无条件开展HBV-DNA检测的一些基层医院,HBV-LP可以作为反映乙型肝炎病毒的复制情况的一个很好的血清学指标。