心肌功能损害的机制研究：Toll样受体4在脂多糖诱导小鼠心肌IL-1β基因表达中的作用

目的：探讨脂多糖诱导心肌炎症因子白细胞介素1β(interlukine 1β，IL-1β)的表达过程中，Toll样受体4所起的作用，寻找心肌损害的防治方法。方法：以Toll样受体4基因突变型小鼠C3H／HeJ(n=36)及野生型小鼠BALB／C(n=36)为实验对象，给以腹腔内注射脂多糖(1mg／kg)或生理盐水。注射生理盐水的小鼠作为对照。用反转录-聚合酶链反应方法，对注射脂多糖前后两组小鼠心肌Toll样受体4和IL-1βmRNA表达进行半定量检测。结果：C3H／HeJ小鼠存在Tlr4突变。两种小鼠心肌均检测到Toll样受体4表达。脂多糖刺激后，野生型小鼠心肌IL-1β mRNA表达迅速显著增加，而突变型小鼠心肌未检测到IL-1β的表达。结论：TLR4在心肌表达，并且介导了脂多糖刺激下小鼠心肌局部IL-1β的基因表达。     

失血性休克小鼠心肌Toll样受体2/4 mRNA的表达

目的 探讨无复苏对失血性休克小鼠心肌Toll样受体（TLR）表达变化的影响及其意义。方法 将45只C57BL／6小鼠随机分为失血性休克模型组、假手术组、脂多糖（LPS）组（由尾静脉注射LPS5mg／kg），每组15只；采用心脏穿刺法建立小鼠失血性休克模型。心肌TLR2mRNA和TLR4mRNA表达采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法进行分析；测定左室收缩末压（LVESP）以反映左室收缩功能。结果 ①与假手术组比较，失血性休克及LPS刺激后小鼠的动脉血压出现下降，均可导致左室收缩功能障碍；②失血性休克及LPS刺激后TLR2和TLR4的mRNA表达水平均出现不同程度上调，而假手术组在各时间点未见明显改变。结论 ①失血性休克及LPS刺激后心肌TLR2及TLR4的mRNA表达上调与心功能障碍存在密切联系，但这两种病理状态下的信号转导通路可能存在差异；②失血性休克和LPS刺激后TLR2、TLR4的mRNA升高增强了机体的天然免疫功能，提高了机体对急性炎症的应激能力，对机体具有保护作用，但其过度表达也可能对组织、器官功能产生损害。     

失血性休克小鼠心肌Toll样受体的表达

目的：探讨小鼠失血性休克（无复苏）对心肌Toll样受体（toll-like receptor,TLR）表达变化的影响及其可能的意义.方法：45只C57BL/6的小鼠随机分为3组：失血组、假手术组、脂多糖（LPS）组（尾静脉注射LPS 5mg/kg）,每组15只小鼠,采用心脏穿刺法建立小鼠失血性休克模型;心肌TLR-2 mRNA和TLR-4 mRNA的表达利用RT-PCR的方法进行分析;左室收缩功能以测定的左室收缩末压（left ventricular end-systolic pressure,LVESP）作为指标.结果：①与假手术组比较,失血性休克及LPS刺激后小鼠的动脉血压出现下降;②与假手术组比较,失血性休克及LPS刺激后均可导致左室收缩功能障碍;③失血性休克及LPS刺激后TLR2和TLR4基因的表达水平均出现不同程度的上调,而假手术组在各时间点未见明显改变.结论：①失血性休克及LPS刺激后心肌TLR2及TLR4基因表达的上调与心功能障碍存在密切联系,但这两种病理状态下的信号转导通路可能存在差异;②失血性休克和LPS刺激后TLR2、TLR4升高增强了机体的天然免疫能力,提高了机体对急性炎症的应激能力,对机体具有保护作用,但其过度表达也可能对组织、器官功能产生损害.     

Toll样受体在脂多糖耐受性机制作用中的研究进展

脂多糖(LPS)耐受性是指机体或细胞经低剂量LPS刺激后，对LPS的再次刺激呈低反应或无反应状态，它与LPS信号转导变化密切相关。LPS细胞外信号转导是通过脂多糖结合蛋白(LBP)呈递给CD4^ 来实现的，但对LPS跨膜转导机制一直不明确。近年来Toll样受体(TLRs)的发现为此提供了新的线索。TLRs表达量和功能下调及TLR4信号通路中各个环节的功能缺陷，     

Toll样受体在脓毒症心肌损伤中的作用及机制研究进展

脓毒症是 ICU 病房中的一种高致死率疾病。心肌损伤是脓毒症重要表现之一,并且研究[1]表明其与脓毒症致死率明显相关。随着近十几年来科技手段的进步和医学水平的提高,在分子生物学层面上逐渐揭示了脓毒症心肌损伤的一些发病机制,而Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）学说正是其中之一,它也是当今脓毒症心肌损伤研究的热点。现就近年来TLRs和脓毒症心肌损伤之间关系的研究进展作一综述。     

Toll样受体4在四氯化碳致大鼠慢性肝损伤中的作用机制研究

目的:动态观察肝Kupffer细胞(KCs)Toll样受体4(TLR4)mRNA及蛋白在四氯化碳(CCl4)致大鼠慢性肝损伤中的表达及作用.方法:以CCl4诱导慢性肝损伤大鼠模型,于0、4、6、8、10周采集标本,分离肝组织KCs并以逆转录聚合酶链反应检测TLR4mRNA的表达;用基质显色法测定大鼠血清内毒素水平:放射免疫法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素1-β(IL1-β)水平;TLR4蛋白和核因子kB(NF-kB)蛋白采用免疫组化SP法检测.结果:0周组肝组织TLR4蛋白、KCs,TLR4 mRNA几乎无表达,NF-kB蛋白和炎症积分水平也处于较低水平;4、6、8、10周组肝组织TLR4蛋白、NF-kB蛋白、炎症积分和KCs TLR4 mRNA以及血清内毒素、TNF-α、IL-1β水平明显升高,同0周组比较差异有显著性(P<0.001).NF-kB蛋白、TLR4蛋白、KCs TLR4 mRNA和TNF-α在第10周时较第8周有轻度下降:肝KCs TLR4 mRNA的表达与血浆内毒素水平呈正相关(r=0.845,P<0.001).结论:CCl4诱导的慢性肝损伤中,内毒素可上调KCs TLR4的表达,而TLR4的高表达进一步造成肝脏的损伤.     

脂多糖刺激前后小鼠肺肝脾组织中Toll样等受体基因表达情况

目的了解脂多糖(LPS)对肺、肝、脾组织中与LPS信号转导有关的受体的基因表达情况的影响。方法LPS刺激前后取小鼠肺、肝、脾组织总RNA，采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量测定脂多糖结合蛋白(LBP)、CD14、Toll样受体2(TLR2)、TLR4和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等基因的表达情况。结果正常组织中，肺有TLR2的表达，肝有TLR2、CD14、LBP的表达，脾有TLR2的表达；注射LPS后的5h内，肺组织TLR2、TLR4、CD14和TNF-α，肝组织TLR2、CD14、LPB和TNF-α，脾组织TLR2、TLR4、CD14和TNF-α的基因表达均呈逐渐增加趋势。结论正常情况下TLR2等基因在不同组织中的表达有差异，LPS刺激5h内各基因的表达提高，从而提高机体对LPS等病原体模式识别分子的反应性。     

脂多糖诱导小鼠肝组织白细胞介素6表达的动态变化及意义

目的:探讨不同剂量脂多糖诱导肝组织中白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)水平的动态变化及意义。方法:40只清洁级健康昆明种小鼠按每组4只随机分组为:脂多糖尾静脉注射3h的量效关系:正常对照组和低(1mg/kg)、中(5mg/kg)、高(10mg/kg)3个脂多糖剂量组;注射5mg/kg脂多糖的时效关系:正常对照,0.5,1,3,5,8h组。然后处死动物取肝脏,采用酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测不同剂量脂多糖诱导肝组织中IL-6水平的动态变化。结果:注射脂多糖3h,肝组织中IL-6水平随内毒素剂量的增加,表现为先升高后降低,中剂量组IL-6水平(ng/g)达峰值。低(1mg/kg)、中(5mg/kg)、高(10mg/kg)3剂量组IL-6水平(79.4±1.2),(112.0±1.4),(82.1±0.5)ng/g与正常对照组(44.3±1.2)ng/g相比较差异有显著性意义(t=6.058,P<0.01)。肝组织中IL-6水平随时间的推移表现为先升高后降低,用5mg/kg脂多糖处理后3hIL-6水平达峰值。各时相点IL-6水平犤0.5,1,3,5,8h:(53.5±1.3),(62.0±0.5),(112.0±1.4),(103.0±0.7),(80.9±0.5)ng/g犦与正常对照组(44.3±1.2)ng/g相比较差异有显著性意义(t=4.218,P<0.01)。在注射5mg/kg脂多糖后3h,肝组织IL-6的水平达峰值。结论:不同剂量的脂多糖均在一定程度上促进IL-6的表达,且脂多     

Toll样受体与临床疾病关系的研究进展

Toll样受体（Toll like receptors，TLRs）是一类表达于细胞膜上与微生物识别有关的受体家族。它们能够识别特定类型微生物保守的分子成分，即病原体相关分子模式（pathogen associated molecular patterns，PAMPs），通过激活细胞信号传导途径，激活天然免疫反应，还可以通过提供刺激分子和诱导T细胞分化的细胞因子，帮助机体建立获得性免疫。     

内毒素血症小鼠骨骼Toll样受体4基因的变化

目的 通过检测内毒素血症模型动物骨骼相关基因表达变化,进一步明确内毒素对机体的损害机制,为下一步研究骨骼变化对脏器产生何种影响奠定基础.方法 腹腔注射内毒素脂多糖(LPS)制作内毒素血症小鼠模型.将48只小鼠随机分为正常组和LPS处理4、6、8、12、24、48和72 h组,每组6只.采尾血计数全血白细胞;取眼眶血检测肝、肾功能;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨骼中TLR4 mRNA表达;苏木素-伊红(HE)染色,镜下观察骨骼病理学变化.结果 与正常组比较,LPS 4 h组白细胞计数显著下降(P＜0.01),之后逐渐升高,于72 h时显著高于正常组(P＜0.05);LPS 4 h和6 h组丙氨酸转氨酶(ALT)水平显著升高(P均＜0.05),于8 h降至正常水平(P＞0.05);LPS 6 h组血尿素氮(BUN)水平逐渐升高(P＜0.05),于8 h达峰值(P＜0.05),然后下降,12 h趋于正常(P＞0.05);LPS 6 h组TLR4 mRNA表达增加(P＜0.01),24 h达峰值(P＜0.01),然后逐渐下降,72 h仍处在较高水平(P＜0.05).LPS作用于骨骼后,HE染色显示骨骼无明显改变.结论 内毒素血症中骨骼TLR4 mRNA表达量显著增加.     

IL-21诱导SUDHL-4细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨IL-21对弥漫大B淋巴瘤(DLBCL)细胞系SUDHL-4细胞凋亡的影响及其相关机制.方法 用不同浓度IL-21(终浓度1、10、100、1000 ng/m1)处理SUDHL-4细胞不同时间(24、48、72 h),用CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率,绘制细胞增殖抑制曲线,计算Ic50值;用流式细胞术检测细胞凋亡;用Western blot法检测IL-21处理后SUDHL-4细胞caspase-9、caspase-3、cleaved caspase3、Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax和c-myc蛋白表达.用RT-PCR法检测Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax、c-myc和Survivin基因mRNA表达.结果 IL-21可明显抑制SUDHL-4细胞增殖,且呈时间.剂量依赖性,其48 h半数抑制浓度(1C50)为140.9 ng/ml.流式细胞术分析发现100.g/ml IL-21处理的SUDHL-4细胞48 h凋亡率(Annexin V-FITC+细胞率)明显增加[(19.7±2.3)%],同时caspase-9、caspase.3、Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达减低,均呈时问依赖性.cleaved caspase-3从48 h开始出现明显的剪切带;Bax和c-myc蛋白表达明显增高,而Bid蛋白表达变化不明显.RT-PCR检测显示IL-21上凋c-myc和Bax基因mRNA的表达,下调Bcl-2和Bci-XL基因mRNA的表达,Bid和Survivin基因mRNA表达变化不明显.结论 IL-21可抑制SUDHL-4细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用可能是通过c-myc和Bcl-2基因调节的线粒体途径实现.     

Toll样受体4单克隆抗体预处理对脂多糖诱发小鼠急性肺损伤的影响

目的 探讨预先使用Toll样受体4单克隆抗体(TLR4mAb)对LPS诱发的小鼠脓毒症肺损伤的保护作用.方法 45只健康清洁级雄性BALB/c小鼠以随机数字法分为对照组(C 组)、脓毒症组(S组)、预处理组(P组),每组15只.P组小鼠在造模前1h预先腹腔注射TLR4mAb 5 μg/g.S组、P组均腹腔注射LPS 10 mg/kg以制备脓毒症急性肺损伤模型,C组经腹腔注射等量生理盐水.各组分别于注射后6,12,24h,采用酶联免疫吸附法测定血清TNF-a和IL-6浓度;取肺脏组织,分别检测TLR4 mRNA的表达、肺组织含水量、病理学改变.组内比较采用双因素方差分析,组间比较采用单因素方差分析,以P ＜0.05为差异有统计学意义.结果 与C组比较,S组、P组肺组织含水量在12,24h时均显著性升高;与S组比较,P组肺组织含水量在12,24h时均显著性降低.与C组比较,S组、P组血清IL-6,TNF-α质量浓度在各时点均显著性升高;与S组比较,P组IL-6,TNF-α质量浓度在各时点均显著性降低.与C组比较,S组、P组TLR4 mRNA在各时点时均显著性升高;与S组比较,P组TLR4mRNA在各时点均显著性降低.与S组比较,P组病理改变程度均明显减弱.结论 预先使用TLR4mAb可以减轻LPS所诱发的急性肺损伤程度,可抑制炎性因子的过度表达;调控TLR4通路可能是治疗脓毒症及其肺损伤的有效靶点.     

Toll样受体在类风湿关节炎中的作用及治疗进展

类风湿关节炎（RA）是一种慢性自身免疫性疾病,可累及手和脚的多个关节疼痛、僵硬以及进行性骨和软骨的破坏,甚至严重畸形,同时也有许多关节外表现。RA是一种多因素疾病,与遗传、环境因素,感染和组织损伤等具有相关性,但其发病机制仍不清楚。Toll样受体（Tolllikereceptor;TLRs）是介导感染和损伤重要组成部分,参与RA发生发展过程_1]。现就TLR在RA发病机制中的作用和靶向治疗进展综述如下。     

IL-1β在痛风性关节炎中的致炎作用及临床意义

近年来国内外许多学者对痛风性关节炎与炎性因子的关系进行了探讨,大多数观点认为急性痛风性关节炎是由于体内沉积的尿酸盐结晶促使单核巨噬细胞黏附渗出,并吞噬尿酸盐微晶体后分泌炎症因子,从而诱发的免疫反应。IL-1β作为体内重要的致炎因子,在许多自身免疫性疾病中发挥着重要作用,也在尿酸盐晶体沉积引起的痛风性关节炎的关节损害过程中扮演了关键角色。随着对IL-1β在痛风性关节炎发病机制中作用的深入研究,应用抗IL-1类生物制剂治疗痛风已受到医学界高度关注,为治疗痛风带来了新希望,有助于进一步改善痛风的结局。     

IL-1β反义RNA在肝癌细胞中对NK细胞固有免疫杀伤的影响

目的：探讨将所获IL-1β反义RNA真核表达载体导入HepG2细胞后．肝癌细胞对NK细胞杀伤敏感性的变化。方法：转染后用RT—PCR法检测反义基因片段的表达，MTT比色法分析NK一92细胞杀伤活性的变化。结果：转染后反义RNA均得到高水平表达，并使NK细胞的杀伤活性提高约15％。结论：IL-1β反义RNA可在一定程度上恢复肝癌细胞对NK细胞的杀伤敏感性。     

强直性脊柱炎患者Toll样受体4及基质金属蛋白酶-3的分析

目的：探讨强直性脊柱炎（AS）患者Toll样受体4（TLR4）、血清基质蛋白酶-3（MMP-3）、白细胞介素-6（IL-6）、可溶性血管细胞黏附分子-1（sVCAM-1）和人类白细胞抗原-B27（HLA-B27）水平的临床意义。方法：采用双抗体夹心法（ELISA）测定62例AS患者和45例正常对照者的血清MMP-3、IL-6、TNF-α、sVCAM-1及用流式细胞仪检测Toll样受体4和HLA-B27的水平,并分析AS患者各指标间的相关性。结果：Toll样受体4、血清MMP-3、TNF-α、IL-6、sVCAM-1、HLA--B27水平AS患者组均明显高于正常对照组（P〈0.01）。结论：Toll样受体4、MMP-3、IL-6、sVCAM-1在AS发病机制中可能起重要作用,可以作为评估AS病情的有价值的血清指标。     

Toll样受体4在失血性休克小鼠肺组织HO-1表达中的作用

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)在失血性休克并发急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织血红素加氧酶-1(HO-1)表达中的作用.方法 采用小鼠失血性休克复苏模型,48只TLR4基因突变型小鼠C3H/HeJ和野生型小鼠C3H/HeN随机分为2组:①假手术组;②失血休克复苏组.分别于失血性休克复苏后6 h、24 h和48 h取颈动脉血行血气分析,检测肺组织HO-1蛋白和mRNA的表达、肺组织IL-6含量及髓过氧化物酶(MPO)活性.采用方差分析进行数据统计.结果 失血休克复苏后24 h C3H/HeN和C3HL/HeJ的肺组织中HO-1 mRNA和蛋白含量的表达、IL-6含量、MPO活性与假手术组比较显著增加(P＜0.01或P＜0.05);与C3H/HeN鼠比较,休克复苏后24 h C3H/HeJ鼠的HO-1mRNA和蛋白含量、IL-6含量和MPO活性明显降低(P＜0.01或P＜0.05).C3HL/HeN鼠休克复苏后24 h并发ALI并且PaO2/FiO2＜300 mmHg.结论 TLR4受体激活在失血性休克致ALI肺组织HO-1的表达中扮演重要角色.     

Toll样受体4在脓毒症大鼠胰岛中的表达

目的 研究Toll样受体4(TLR4)在脓毒症大鼠胰岛中的表达变化及其对血糖的影响.方法 SPF级SD雄性大鼠腹腔内注射脂多糖(LPS)5 mg/kg,间隔3h注射第2次,制备脓毒症模型.大鼠被随机(随机数字法)分为正常对照组(n=5)、LPS组(n=5)、抗TLR4抗体组(n=5)和抗TLR4抗体+LPS组(n=5),分别采用RT-PCR法、Western-blot法和免疫组化法检测大鼠胰岛TLR4的表达.大鼠给药处理6h后行葡萄糖静脉试验(IVGTT)测定静脉全血葡萄糖和胰岛素水平,计算胰岛素、血糖曲线下面积(AUC).结果 正常组大鼠胰岛细胞有TIR4表达,LPS处理大鼠6h后胰岛组织中TLR4蛋白和mRNA的表达升高,与对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.01),注射抗TLR4抗体预处理后用LPS刺激,LPS诱导的TLR4蛋白及mRNA水平的升高均被抑制(P＜0.01).LPS处理后与正常对照组比较,大鼠IVGTT 10、30、60、120 min血糖明显升高,30、60、120 min胰岛素分泌降低(P＜0.01).抗TLR4抗体干预后能降低30 ～ 120min血糖的升高,改善LPS对胰岛素分泌的抑制(P＜0.01).结论 脓毒症大鼠胰岛细胞TLR4表达升高,LPS-TLR4系统可能是应激性高血糖的发生机制.