第四次全国结核病流行病学调查分支杆菌菌种鉴定及分析

目的 通过对第四次全国结核病流行病学抽查调查分离出的菌株进行分支杆菌菌种鉴定，进一步了解全国的分支杆菌菌种的构成和分布及其受检查者的治疗情况。方法 依照《结核病细菌学检验规程》（中国防痨协会，1995）和《Public health Mycobecteriology,a guide for the level Ⅲ Iaboratory》（U.S.Department of Health and Human Service/Public Health Service/Centers of Disease Control)对所有待测菌株进行生化试验鉴定。结果 第四次全国结核病流行病学抽样调查分离出的441株菌结核分支杆菌占11．1％（49／441）。数据提示第四次全国结核病流行病非结核分支杆菌分离率高于，90年。分离出非结核分支杆菌的受检中有30．6％（15／49）接受过抗结核治疗。结论 研究数据显示我国非结核分支杆菌分离率呈上升趋势。建立准确，快速的鉴定方法，关注体质弱者是必要的。     

采用16SrRNA序列分析方法鉴定第四次全国结核病流调的非结核分支杆菌

目的 从核苷酸序列水平建立一种非结核分支杆菌的鉴定方法，以用于其流行病学调查。方法 对第四次全国结核病流行病学抽样调查获得的49株非结核分支杆菌，采用16SrRNA基因片段序列分析的方法进行鉴定，结果 五株标准菌株的测序结果与其命名完全相符。49株流调非结核分支杆菌中．41株可明确鉴定，4株不能明确鉴定到种，4株扩增失败无法鉴定。所占比例较高的菌种为：不产色分支杆菌(7/41)，土地分支杆菌(6／41)，胞内分支杆菌(5／41)，偶然分支杆菌(4／41)。结论 在基因水平上较客观地了解我国目前可引起可疑肺结核症状的非结核分支杆菌的流行状况。16SrRNA基因片段序例分析鉴定非结核分支杆菌的方法快速、简便、准确并可发现一些新的菌种。     

结核分支杆菌重组ESAT6蛋白抗原诱发豚鼠迟发型超敏反应的研究

结核菌素纯蛋白衍生物 (ＰＰＤ)含多种蛋白成分 ,与多种分支杆菌存在交叉 ,尤其在鉴别结核分支杆菌感染和卡介苗接种阳转者上有一定的困难。所以ＰＰＤ作为结核病诊断试剂有其局限性。现已发现结核分支杆菌Ａｇ85、ＭＰＴ6 4、380 0 0、ＭＰＴ6 3、ＥＳＡＴ6等抗原 ,均能诱发豚鼠发生迟发性超敏反应 (ＤＴＨ)。具有高特异性的新的诊断试剂或许就存在它们或它们的组合中。ＥＳＡＴ6蛋白是结核分支杆菌生长中的一种小相对分子质量分泌蛋白 ,它能诱发结核分支杆菌感染的豚鼠发生很强的ＤＴＨ反应 ,大部分ＢＣＧ在减毒过程中丢失了编码该蛋白的…     

结核病耐药监测述略

据估计全球已有 5 0 0 0万人受耐药结核分支杆菌感染。当今世界约有 2 / 3的结核病人处于发生耐多药的危险之中。美国疾病控制中心 (ＣＤＣ) 1990～ 1992年报告了 12起耐多药结核病 (ＭＤＲ ＴＢ)暴发流行 ,其他国家如英国和泰国也相继发生了ＭＤＲ ＴＢ暴发流行。高耐药率和耐多药菌株的不断扩散 ,正日益成为全球结核病控制中的一个重大问题。对于耐药情况的动态监测就成为评价国家结核病控制规划(ＮＴＰ)的重要对策之一。为此 ,1994年世界卫生组织和国际防痨与肺部疾病联合会 (ＷＨＯ/ＩＵＡＴＬＤ)制定了全球结核病耐药监测指南 (1996年…     

高度重视沉着应对甲型H1N1流感的挑战

结核病是严重危害人类健康的公共卫生问题 ,近年来 ,这一古老的疾病在全世界范围卷土重来 ,引起了各方面的关注。我国自 1979年以来 ,先后组织进行了全国性结核病流行病学抽样调查 ,旨在了解全国结核病流行及其趋势 ,评价结核病防治措施的施行及其效果 ,为制定全国结核病防治规划提供依据。在世纪交替之际 ,我国于 2 0 0 0年进行了第四次全国结核病流行病学抽样调查 ,对肺结核患病情况、结核感染率、结核病死亡、结核分支杆菌菌种鉴定和耐药性等进行了调查分析 ,同时进行了有关社会学调查和评价。调查结果表明 ,我国活动性肺结核患病率 36 7…     

结核病人外周血结核分支杆菌聚合酶链反应检测及临床意义

采用巢式聚合酶链反应 (ＰＣＲ)方法扩增结核病人外周血单核细胞 (ＰＢＭＣ)结核分支杆菌 (ＭＴＢ)ＩＳ6 110部分序列 ,并将其克隆与测序 ,结合临床资料分析探讨其临床意义。材料与方法　①对象 :我院 1999年住院的 77例活动性肺结核病人。另以同期住院的非结核病人 (10例肝炎 ,30例肺炎和慢性阻塞性肺疾病 )作对照。②ＰＣＲ引物 :根据Ｔｈｉｅｒｒｙ等[1] 报道的结核分支杆菌ＩＳ6 110序列 ,采用Ｇｏｌｄｋｅｙ软件 ,在其保守区设计两对套式引物 ,委托上海生工生物工程公司合成。引物序列为 :ＴＢ15′ＣＧＴＧＡＧＧＧＣＡＴＣＧＡＧＧＴ…     

结核分支杆菌利福平耐药基因突变的研究

目的了解我国结核分支杆菌耐利福平（ＲＦＰ）分离株ｒｐｏＢ基因突变情况，建立快速检测结核分支杆菌耐药基因型的分子药敏试验方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ－直接测序法（ＰＣＲ－ＤＳ）分析５０株结核分支杆菌临床分离株的ｒｐｏＢ基因。结果３株结核分支杆菌药物敏感株和２株非ＲＦＰ耐药株中，仅１株ｒｐｏＢＳＳＣＰ图谱异常的药物敏感株出现５３１位密码子ＴＣＧ→ＴＴＧ突变。４５株ＲＦＰ耐药株中，１０株ＳＳＣＰ和ＤＳ分析均未见ｒｐｏＢ突变，３５株ＳＳＣＰ和ＤＳ分析异常，其中１４株为５３１位密码子ＴＣＧ→ＴＴＧ或ＴＧＧ或ＴＡＣ突变，１４株为５２６位ＣＡＣ→ＴＡＣ或ＧＡＣ或ＣＣＣ或ＣＴＣ或ＧＴＣ突变，２株为５１６位ＧＡＣ→ＧＴＣ或ＴＡＣ突变，２株为５１６位和５２６位及５１５位和５１６位密码子双点突变，３株ｒｐｏＢ序列与结核分支杆菌不同。结论大多数结核分支杆菌耐ＲＦＰ是由于其ｒｐｏＢ基因突变所致，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－ＤＳ方法可快速测定结核分支杆菌ＲＦＰ耐药基因型     

耐药结核病的治疗

在众多疗效确切的抗结核药物相继问世 ,临床药理学、细菌学等结核病基础学科发展的基础上 ,以化疗为主的结核病治疗学取得了巨大的成就和举世瞩目的流行病学效应。本世纪 70～ 80年代初 ,结核病的发病、患病曾降低到较低水平 ,但不幸的是 ,80年代中期因种种原因 ,导致结核病疫情迅猛回升 ,其中危害性最大、预后最差的两种情况是ＨＩＶ/ＡＩＤＳ与结核分支杆菌双重感染的增加 ,引发了结核病较高的死亡率 ;耐药和耐多药结核病 (ＭＤＲ ＴＢ)的传播 ,特别是在ＡＩＤＳ患者中暴发流行 ,给结核病防治带来灾难性挑战。ＭＤＲ ＴＢ不仅医疗费用惊人…     

分支杆菌鉴定方法的比较研究

比较了微菌落法、多重聚合酶链反应 (ＰＣＲ)法和传统法用于分支杆菌临床分离物菌种鉴定的效果 ,现报告如下。材料与方法 :试验菌株 :(1)标准菌株 :结核分支杆菌Ｈ37ＲＶ、牛分支杆菌、鸟分支杆菌、胞内分支杆菌、堪萨斯分支杆菌、瘰疬分支杆菌、偶然分支杆菌和耻垢分支杆菌标准株 ,均购自北京结核病胸部肿瘤研究所。 (2 )临床分离株 :来自我院结核病住院患者的痰、胸液和脑脊液。传统分型鉴定试验 :(1)培养鉴定试验 :按常规制备对硝基苯甲酸 (ＰＮＢ)和噻吩 2 羧酸肼 (ＴＣＨ)培养基 ,取试验菌株菌悬液 (10 -2 /ｍｌ) 0 1ｍｌ接种 ,37℃…     

分子诊断技术在分支杆菌菌种鉴定中的应用价值

在微生物分类中 ,分支杆菌属于裂殖菌纲、放线菌目、分支杆菌科、分支杆菌属。分支杆菌种类繁多 ,《伯杰系统细菌学手册》(第九版 )所确认的分支杆菌有 5 4种 ,临床可见能引起人类疾病的主要是结核分支杆菌 (ＭＴＢ) ,此外还有堪萨斯、鸟、胞内、猿猴、蟾蜍、海、溃疡、瘰疬、马尔摩、苏加、偶然、龟、脓肿等 10余种非结核分支杆菌 (ＮＴＭ)。ＮＴＭ病具有与结核病临床表现相似的全身中毒症状和局部损害 ,在无菌种鉴定结果的情况下 ,与结核病难以鉴别。ＮＴＭ与ＭＴＢ药物敏感性大不相同 ,许多ＮＴＭ对抗结核药物天然耐药 ,不同ＮＴＭ菌种对…     

三种快速检测结核分支杆菌方法的评价

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术、单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＴＢ１５－Ｃ３经酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及抗酸染色等３种方法，对１０种抗酸杆菌及２种非分支杆菌进行检测。ＰＣＲ仅对结核分杆菌复合体扩增出２４５ｂｐ特异性条带，ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测除人型结核分支杆菌外，还与ＢＣＧ、鸟型及瘰疠分支杆菌反应阳性，抗酸染色则所有分支杆菌均呈阳性。用ＰＣＲ、ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ及抗酸染色检测了１２４份监床标本，Ｐ     

结核分支杆菌重组38 000蛋白的免疫原性特征

目的了解结核分支杆菌重组３８０００蛋白（ｒＭＴ３８）诱发家兔产生抗体的能力及作为血清学诊断试剂的价值。方法将家兔分为６组：ＰＰＤ＋生理盐水（Ａ组）,ｒＭＴ３８＋生理盐水（Ｂ组）ｒＭＴ３８＋佐剂（Ｃ组）,１／２ｒＭＴ３８＋１ｒＭＴ１６＋生理盐水（Ｄ组）,１／２ｒＭＴ３８＋１／２ｒＭＴ１６＋佐剂（Ｅ组）,ｒＭＴ１６＋佐剂（Ｆ组））。用ＥＬＩＳＡ法测Ｃ、Ｅ两组血清是否与分支杆菌ＰＰＤ有效叉反应。双向扩散     

耐药结核病的流行趋势

50年来 ,化学疗法在控制结核病的流行上发挥巨大作用 ,使 90 %以上的初治肺结核患者获得治愈。然而随着化学药物的广泛应用 ,耐药结核病 ,尤其是耐多药结核病(ＭＤＲ ＴＢ)对全球结核病控制造成严重威协。目前估计全球已有 5 0 0 0万人受耐药结核分支杆菌感染。 1985～ 1994年 ,Ｃｏｈｎ等[1] 统计 6 3个调查结果发现 :原发耐药率 :ＩＮＨ 4 1%(0～ 16 9% ) ,ＳＭ 3 5 % (0 1%～ 2 3% ) ,ＲＦＰ 0 2 % (0～3 0 % ) ,ＥＭＢ 0 1% (0～ 4 2 % ) ;获得性耐药率 :ＩＮＨ 10 6 %(4 0 %～ 5 3 7% ) ,ＳＭ 4 9% (0～ 19 4% ) ,ＲＦＰ 2 4% (0…     

13种分支杆菌菌体抗原成份分析及应用

目的分析比较结核分支杆菌与其它分支杆菌菌体多肽抗原的共性和个性，寻找与结核病诊断相关的多肽抗原。方法采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）和免疫印迹技术分析多肽抗原，并提取特异性抗原用于５７５例结核患者、４５０名正常人和２５０例非结核患者的抗体检测。结果结核分支杆菌、牛结核分支杆菌菌体多肽成份不仅具有相似的多肽区带，而且各主要抗原多肽具有相似的免疫原性。主要多肽成份分子量为７６０００、６５０００和２５０００等，其中分子量为７６０００、６５０００和２５０００多肽成份是１３种分支杆菌的共同抗原。提纯的特异性抗原成份用于结核病的诊断，其敏感性为８９．７％，特异性为９５．７％。结论分支杆菌菌体多肽成份经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，区带之间差异较大，提示可以用于分支杆菌菌种的鉴定。结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ株特异性抗原的抗体检测，对肺外结核、菌阴结核患者的辅助诊断具有较高的应用价值。     

非结核分支杆菌病不容忽视

非结核分支杆菌病系由结核分支杆菌和麻风分支杆菌以外的非结核分支杆菌(ｎｏｎｔｕｂｅｒｃｕｌｏｕｓｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉａ,ＮＴＭ)引起的疾病。ＮＴＭ迄今已发现100多种,其中有37种已见致病病例报道。ＮＴＭ病多发于发达国家,少见于发展中国家,故有人认为ＮＴＭ病与结核病呈相印而相反的关系[1]。由于我国结核病控制项目的实施和取得的经验进一步完善了现代结核病控制的策略和方法[2],可以预期在新世纪,我国结核病的疫情将会有明显的下降。且由于人类免疫缺陷病毒/艾滋病(ＨＩＶ/ＡＩＤＳ)正迅速在亚洲蔓延,将会对ＮＴＭ病的发生带来…     

16S rRNA基因突变与结核分支杆菌耐链霉素的研究

我们已证实大多数结核分支杆菌耐链霉素（ＳＭ）是由于其核糖体Ｓ１２蛋白编码基因（ｒｐｓＬ）错义突变所致［１］，在此基础上，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ直接测序法（ＤＳ）进一步研究其１６ＳｒＲＮＡ编码基因（ｒｓ）的突变...     

不同结核分支杆菌抗原对结核病的诊断价值

目的　研究不同结核分支杆菌单体蛋白抗原在结核病体液免疫诊断中的价值。方法以快速免疫色谱法（ＩＣＴＴＢ卡） 检测结核分支杆菌５ 种单体蛋白的抗原性，观察其在结核病诊断中的敏感性和特异性，并与ＰＰＤ 皮试及脂阿拉伯糖甘露糖（ＬＡＭ） 相比较。结果　ＩＣＴＴＢ 卡、ＬＡＭ 及ＰＰＤ皮试诊断结核病的敏感性分别为５５．９％ 、５２．６％ 、７５．０％ ，后者与前二者间差异均有显著意义（ Ｐ＜０ ．０５）；ＩＣＴＴＢ卡、ＬＡＭ、ＰＰＤ皮试诊断肺结核的特异性为８７ ．６％ 、６２．９％ 、６８．９％ ，前者与后二者间差异均有非常显著意义（ Ｐ＜ ０．０１）；ＩＣＴＴＢ卡诊断肺结核病的临床阳性预计值为８８ ．５％ ，临床阴性预计值为５３ ．８ ％ ；非结核病例中的ＩＣＴＴＢ阳性主要由抗原４、５ 阳性所致，如果去除抗原４ 、５，那么ＩＣＴＴＢ诊断结核病的特异性将提高到９８．９％ 。结论　血清结核分支杆菌单体蛋白抗原性的测定是肺结核病一项有用的辅助诊断手段。     

耐多药结核病的诊断与化疗

耐多药结核病（ＭＤＲ－ＴＢ）是结核病中最为严重的一种类型,人类将因此在２１世纪面临较２０世纪５０年代中叶更为严峻的结核病疫情。据估计,全球可能有５０００万人已被感染耐一药以上的结核分支杆菌,约三分之二的结核病人处于发生耐多药的危险之中,结核病合并ＨＩＶ／ＡＩＤＳ更是加速了ＭＤＲ－ＴＢ发生率的上升和传播,严重危害人民的身心健康,给结核病控制工作带来了难以估量的负面影响和挑战。即便是世界卫生组织对此也感到有些力不从心,于是曾一度只给予ＭＤＲ－ＴＢ患者所谓人道主义的处理,甚至还担忧ＭＤＲ－ＴＢ有可能成…     

结核病合并人类免疫缺陷病毒感染/艾滋病的流行病学

结核病与人类免疫缺陷病毒感染 /艾滋病 (ＨＩＶ/ＡＩＤＳ)是相互促进病变进展、恶化、迅速导致患者死亡的伴发病。目前 ,全球 6 0亿人口中有 1/ 3感染结核分支杆菌 (ＭＴＢ) ,现有结核病患者 2 0 0 0万 ,每年新发患者 180 0万 ,每年因结核病死亡者达 30 0万。而ＨＩＶ感染人数 ,1998年底全球估计为334 0万 ,ＡＩＤＳ患者达 2 0 0万。我国结核病疫情严重 ,全国有 5亿以上人口感染ＭＴＢ ,有活动性结核患者 6 0 0万 ,其中传染性肺结核患者 2 0 0万。每年有 113万新发结核患者 ,每年因结核病死亡者达 2 5万 ,是世界上第二个结核病负荷最严重的…     

三种快速检测结核分支杆菌方法的评价

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术、单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＴＢ１５－Ｃ＿３经酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及抗酸染色等３种方法，对１０种抗酸杆菌及２种非分支杆菌进行检测。ＰＣＲ仅对结核分支杆菌复合体扩增出２４５ｂｐ特异性条带，ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测除人型结核分支杆菌外，还与ＢＣＧ、鸟型及瘰疬分支杆菌反应阳性，抗酸染色则所有分支杆菌均呈阳性。用ＰＣＲ、ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ及抗酸染色检测了１２４份临床标本，ＰＣＲ的检出率高于抗酸染色涂片的阳性率（Ｐ＜０．０５），ＭｃＡｂ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率明显高于抗酸染色涂片和ＰＣＲ的阳性率（Ｐ＜０．０１）。认为三种方法在使用中各自有其优点，不可偏废。