诱导成牙本质样细胞在体内外的矿化研究

目的：人早期胚胎颌突外胚间充质细胞在体外能被诱导分化为成牙本质样细胞，表达牙本质特异的涎磷蛋白。本研究探讨该诱导分化细胞在体内外矿化的可能。方法：转化生长因子-βl(TGF-β1)和牙本质非胶原蛋白(DNCP)作用于三维培养的外胚间充质细胞，诱导10d，然后将诱导的成牙本质样细胞接种于裸鼠皮下，X线照相，组织切片，HE染色，观察细胞在体内的矿化情况。同时消化细胞，培养于矿化液中，观察细胞在体外的矿化能力。结果：8周后，裸鼠皮下接种的胶原细胞密度明显高于对照组。5周，胶原内的细胞为单极长突起；8周时，细胞周围可见牙本质样基质结构沉积。矿化液中的细胞3d出现复层生长，2ld，VonKossa染色阳性。结论：诱导的成牙本质样细胞在体内可以形成类似牙本质样基质，在体外能形成矿化结节，为有功能的终末分化的成牙本质细胞。     

口腔组织病理学

大鼠骨髓基质干细胞体外培养及成骨作用的实验研究；核心蛋白聚糖在幼鼠牙齿发育中的定位及意义；人牙源性间充质细胞向成牙本质细胞的诱导分化；张力对成骨样细胞PGE2表达的影响；Cyclin D1反义寡核苷酸对Tca8113／CDDP细胞基因转录表达的影响     

成牙本质细胞中上游刺激因子1表达的原位杂交研究

目的 检测、证实成牙本质细胞中上游刺激因子1(USF1)mRNA的表达。方法 用前期制备的T——USF1质粒作模板，借助特异性引物PCR扩增USF1 cDNA片段，回收、随机引物法地高辛标记；培养成牙本质细胞MDPC—23，制备细胞爬片，原位杂交方法检测。结果 成牙本质细胞脑浆中有较强的蓝紫色颗粒。结论 首次证实体外培养的成牙本质细胞中有USF1 mRNA表达，为深入研究USF1分子对成牙本质细胞生长、分化和矿化影响提供了实验依据。     

体外三维培养下诱导人胚胎面突外胚问充质干细胞向成牙本质样细胞分化

目的：探讨人胚胎面突外胚间允质干细胞向成牙本质样细胞分化的过程。方法：采用体外细胞三维立体培养的方法，在转化生长因子B1(TGFβ1)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)的诱导下，通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法，探索外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的可能性及生长因子在其中所起的作用。结果：人胚胎面突外胚间充质干细胞在胶原中生长良好。培养4d，在TGFβ1 DNCP组中细胞出现核极化，有很长的突起，细胞平行排列。诱导的细胞有许多与成牙本质细胞相似的超微结构。抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应。碱性磷酸酶活性增强。细胞在矿化液中能形成矿化结节。RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSFP)。结论：三维立体培养下，人胚胎面突外胚间充质干细胞在TGFB1及DNCP的作用下能分化为成牙本质样细胞。本结果将外胚间充质干细胞作为前体，诱导分化出成牙本质样细胞，为研究牙齿的发育及分化提供了良好的模型和实验依据。     

口腔组织病理学

rhBMP-2诱导成肌细胞表达成骨表型的研究，应用牙龈角质细胞构建组织工程化牙龈的实验研究，苯丙芘诱导口腔上皮细胞癌变过程的差异基因表达谱分析，口腔鳞癌细胞FasL表达对肿瘤浸润淋巴细胞及癌细胞凋亡的影响，人乳牙牙髓干细胞的体外培养观察，氯化镧对体外培养的犬骨髓基质细胞增殖的影响.[编者按]     

甲状旁腺激素对体外培养的大鼠牙胚分化的影响

目的：观察甲状腺旁腺激素（ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ,ＰＴＨ）对体外培养１７ｄ的胎鼠下凳第一磨牙牙胚分化发育的影响,探讨ＰＴＨ在成牙本质细胞分化和牙本质形成中的作用。方法：器官培养、组织学观察和透射电本外培养的牙可出现顾牙本质细胞分化和牙本质形成。ＰＴ可促进成牙本质细胞的分化,能活跃状态。结论：牙胚培养在观察生长因子对牙齿发育的作用研究是有效的,ＰＴＨ在牙齿发育中具有一定的促进作用。     

成牙本质细胞的基本特征及其研究进展

成牙本质细胞作为牙髓细胞的主要成分，具有在牙发育期间和成熟牙内生成牙本质的功能。目前的研究多基于牙髓细胞的二维体外培养，随着对牙髓组织研究的不断深入，牙髓细胞体外三维立体模型的建立将是未来研究的热点。作者回顾了近年来对成牙本质细胞的研究情况，主要阐述了成牙本质细胞的形态、超微结构、功能、蛋白表达的特征及其研究进展和今后的研究方向。     

小鼠成牙本质样细胞的原代培养及鉴定

目的:原代培养小鼠成牙本质细胞,为诱导胚胎干细胞(ES细胞)向成牙本质细胞分化提供基础。方法:取材于出生1周昆明小鼠的下颌切牙牙胚,分离牙乳头组织,采用消化法对小鼠牙乳头细胞进行分离培养;用细胞平板克隆技术,挑选具有成牙本质细胞形态特征的细胞克隆,扩大培养;并从光镜观察、电镜观察和小鼠牙本质涎磷蛋白(dentinsialophoprotein,DSPP)在mRNA水平上的表达等方面进行鉴定。结果:培养细胞胞质丰富,形态呈梭形,具有较长的细胞突起。超微结构观察,细胞富含高尔基复合体、核糖体和粗面内质网,并特异性表达DSPPmRNA。结论:该研究成功培养出小鼠成牙本质样细胞,该方法可用于成牙本质细胞的体外研究。     

人牙齿切片器官培养模型的建立

目的建立人牙齿切片体外器官培养模型。方法收集年轻人健康前磨牙或第三磨牙,用慢速切锯制备2mm厚的牙齿横切片,将切片用含1%琼脂糖的半固体培养基包被后采用Trowel器官培养方法在体外培养2～14天,对培养切片的细胞及组织形态进行组织学观察。结果实验成功的将牙齿切片在体外培养了两周,成牙本质细胞在培养一周之内能够很好的维持原来的形态。一周之后成牙本质细胞逐渐萎缩,细胞密度减小。结论实验成功的建立了人牙齿切片体外器官培养的模型,为后期进行组织损伤和修复、第三期牙本质的形成等方面的研究奠定了基础。     

口腔组织病理学

骨髓间充质干细胞与PLGA体外附着的实验研究，牙本质胞外基质对体外血管形成的影响，端粒酶在体外培养人表皮干细胞中的表达，绿色荧光蛋白基因转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究[编者按]     

血管生成素4对牙髓干细胞成牙本质向分化的作用

目的 探讨血管生成素4(angiopoietin 4,ANGPT4)对牙髓干细胞成牙本质向分化的影响。方法 本实验研究已通过单位伦理委员会审查批准,并获得患者知情同意。将人前磨牙进行固定、脱钙、脱水、包埋和切片,免疫荧光染色观察ANGPT4的表达及定位。体外分离培养人牙髓干细胞（human dental pulp stem cells,hDPSCs）,于倒置相差显微镜下观察hDPSCs的生长状态及形态;流式细胞术检测细胞表面相关分子标志物的表达;碱性磷酸酶和茜素红S染色鉴定h DPSCs成牙本质向分化的潜能;油红O染色鉴定hDPSCs成脂向分化潜能。提取hDPSCs成牙本质向诱导后不同时间点的RNA,采用RT-qPCR分析hDPSCs体外成牙本质向分化过程中ANGPT4基因及成牙本质细胞相关基因的表达。采用siRNA基因沉默技术沉默hDPSCs中ANGPT4基因的表达,通过RT-qPCR和Western blot检测沉默效率;在hDPSCs中沉默ANGPT4基因表达24 h后进行成牙本质向诱导,在诱导的第7天和14天分别进行碱性磷酸酶和茜素红S染色,检测沉默ANGPT4后hDPSCs的...     

牙本质非胶原蛋白诱导颅神经嵴干细胞向成牙本质细胞表型分化

目的探讨颅神经嵴干细胞(CNCSC)用于牙再生研究的可行性,观察牙本质基质非胶原蛋白(DMNCP)对CNCSC的成牙本质样细胞表型分化的影响。方法小鼠神经管组织块无血清条件培养法获取颅神经嵴干细胞,以DMNCP体外诱导CNCSC的分化,形态学、免疫细胞化学、茜素红特染等方法,分别从Ⅰ型胶原表达、牙本质涎磷蛋白(DSPP)表达、碱性磷酸酶(ALP)活性及钙结节形成情况,鉴定CNCSC的成牙本质样细胞表型。结果诱导后的CNCSC呈现I型胶原、DSPP阳性表达,ALP活性增高,钙结节形成,具有成牙本质细胞表型特征。结论DMNCP具有诱导CNCSC向成牙本质细胞表型分化的作用,利用CNCSC开展牙再生研究是可行的。     

转化生长因子β1对体外成牙本质细胞分化的影响

目的：观察转化生长因子β1（transforming growth factorβ1，TGF－β1）对体外培养鼠牙乳头成本本质细胞分化的影响。方法：取17d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚，胰腺蛋白消化分离牙乳头，置半固态培养基培养6d，半固态培养基中加入重组转化生长因子β1和肝素，组织学观察。结果：TGF－β1加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化，并分泌胸外基质，单独加入TGF－β1未见细胞极化，但基质分泌增加，结论：TGF－β1能诱导前成牙本质细胞的细胞学和功能上分化。     

体外三维培养下诱导人胚胎面突外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化

目的: 探讨人胚胎面突外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的过程.方法:采用体外细胞三维立体培养的方法在转化生长因子β1(TGFβ1)、牙本质非胶原蛋白(DNCP)的诱导下通过形态学观察、免疫组化、RT-PCR等方法探索外胚间充质干细胞向成牙本质样细胞分化的可能性及生长因子在其中所起的作用.结果:人胚胎面突外胚间充质干细胞在胶原中生长良好.培养4 d在TGFβ1+DNCP组中细胞出现核极化有很长的突起细胞平行排列.诱导的细胞有许多与成牙本质细胞相似的超微结构.抗牙本质涎蛋白(DSP)呈阳性反应.碱性磷酸酶活性增强.细胞在矿化液中能形成矿化结节.RT-PCR显示mRNA水平表达成牙本质细胞特异的牙本质涎磷蛋白(DSPP).结论:三维立体培养下人胚胎面突外胚间充质干细胞在TGFβ1及DNCP的作用下能分化为成牙本质样细胞.本结果将外胚间充质干细胞作为前体诱导分化出成牙本质样细胞为研究牙齿的发育及分化提供了良好的模型和实验依据.     

永生化人成牙本质细胞样细胞系的生物学特征

目的 明确永生化人成牙本质细胞样细胞系hTERT-hOd-1的生物学特征。方法在连续体外培养过程中，观察细胞的形态学特征和生长增殖特征并与人成牙本质细胞样细胞比较。结果细胞形态为成纤维细胞样，细胞器发达，生长增殖活跃，具有克隆形成能力。结论hTERT-hOd-1保持了人成牙本质细胞样细胞的生物学特征。     

鼠牙胚的体外培养的实验观察

目的：组织学观察鼠牙胚的体外发育．方法：１７天大鼠（ＳＤ）胚胎的下颌第一磨牙置于微孔滤膜上培养，培养液为ＤＭＥＭ＋１０％ＦＣＳ，５０μｇ／ｍｌＶｉｔＣ．结果：体外牙胚可进一步发育，间质细胞分化为成牙本质细胞和形成前期牙本质．结论：这种培养条件可保持鼠磨牙的体外发育     

尼古丁抑制成牙本质细胞增殖及作用机制的研究

目的观察尼古丁对成牙本质细胞增殖的抑制作用,并检测其对成牙本质细胞中Ca2+浓度的影响,以探讨尼古丁抑制成牙本质细胞的分子机制。方法体外培养成牙本质细胞系MDPC- 23细胞, 按每毫升2×104个接种,随机分为实验组和对照组,对照组不加任何刺激,实验组施加质量浓度为100 μg/mL尼古丁,并于8 h后加入浓度为10 μmol/L BrdU进行细胞周期标记,刺激24 h后固定细胞,行免疫荧光抗BrdU染色,碘化丙锭（PI）复染胞核,荧光显微镜下计数细胞总数与BrdU阳性细胞数,计算S期阳性细胞率并进行统计学分析。培养成牙本质细胞于特制培养皿中,施加质量浓度为100 μg/mL尼古丁刺激,激光共聚焦显微镜下检测成牙本质细胞中Ca2+浓度的动态变化。结果实验组、对照组S期阳性细胞率分别为36.3%、48.2%,实验组显著低于对照组。尼古丁刺激后,成牙本质细胞中Ca2+浓度迅速升高,在较高水平维持一段时间后缓慢下降。结论尼古丁可抑制成牙本质细胞增殖,这种作用同尼古丁升高成牙本质细胞中Ca2+浓度有关。     

成体人牙髓干细胞的分离与鉴定

目的从成体人牙髓组织中分离培养牙髓干细胞，初步探讨其分化潜能。方法选取年轻患者因正畸或阻生拔除的健康第三磨牙，取出牙髓，采用酶消化及过滤法得到单细胞悬液，有限稀释法原代培养。扩大培养细胞克隆，检测STRO-1的表达。体外诱导分化后对各克隆从碱性磷酸酶(ALP)活性、矿化结节形成、牙本质涎蛋白(DSP)表达、Oil Red—O染色、PPARr2基因表达等方面进行检测。结果克隆来源细胞STRO-1表达阳性。在矿化液诱导下，克隆细胞呈现明显高的ALP活性；能够形成矿化结节；可以分泌表达DSP，已向成牙本质细胞方向发生了分化。成脂肪诱导后，Oil Red—O染色阳性，可检测到PPARr2基因表达。结论从成体人牙髓组织中可以分离培养出干细胞，在体外能有效增殖并保持低分化状态。     

永生化成牙本质细胞表达牙本质基质蛋白的实验研究

目的　探讨永生化人成牙本质细胞样细胞系hTERT-hOd-l表达牙本质基质蛋白的情况。方法　矿化液培养hTERT-hOd-l细胞5周,检测骨钙素(OC)分泌量和碱性磷酸酶(ALP)活性。采用免疫组织化学、RT-PCR和原位杂交方法检测Ⅰ型胶原、骨涎蛋白(BSP)、牙本质基质蛋白1 (DMP1)以及成牙本质细胞标志物牙本质涎磷蛋白(DSPP) 和牙本质涎蛋白(DSP)在细胞中的表达。结果　在矿化液诱导下,hTERT-hOd-l细胞ALP活性和OC分泌量升高。 hTERT-hOd-l细胞在mRNA水平上表达BSP、DMP1和DSPP,在蛋白质水平上表达DSP和Ⅰ型胶原。结论　hTERT- hOd-l细胞在体外表达牙本质基质蛋白,具有矿化的潜能。     

组蛋白去甲基化酶FBXL11抑制牙髓干细胞成骨和成牙本质分化

目的 研究组蛋白去甲基化酶FBXL11对牙髓干细胞定向分化能力的影响.方法 成骨分化诱导培养基诱导牙髓干细胞体外成骨/成牙本质分化.逆转录病毒转染构建过表达FBXL11的牙髓干细胞稳定转染细胞,进行FBXL11获得性功能研究.碱性磷酸酶活性实验及碱性磷酸酶染色检测成骨/成牙本质分化早期分化指标-碱性磷酸酶活性.茜素红染色及钙离子定量分析检测牙髓干细胞体外成骨/成牙本质分化能力.实时定量RT-PCR检测FBXL11及成骨/成牙本质分化相关基因-骨涎蛋白、骨桥蛋白和骨钙素的表达.结果 成骨诱导牙髓干细胞抑制FBXL11的表达.过表达FBXL11明显抑制牙髓干细胞的碱性磷酸酶活性、牙髓干细胞体外矿化能力以及骨涎蛋白和骨桥蛋白的表达.结论 组蛋白去甲基化酶FBXL11具有抑制牙髓干细胞成骨和成牙本质分化的潜能.