用双蒸水代替磷酸缓冲液进行电镜样品制备

目的 探讨电镜样品制备中消除污染物实验新方法。方法 SD大鼠用4％多聚甲醛灌注固定后，取1mm^3大小的肝脏组织数块，分2组进行对比实验：A组，常规制样；B组，锇酸固定后将磷酸缓冲液漂洗改为双蒸水漂洗。结果 A组：反差一般，在组织表面密布细砂样沉淀，局部可见针尖状沉淀，超微结构界限不清晰。B组：反差较好，结构清晰，未见电子致密沉淀。结论 用双蒸水代替磷酸缓冲液进行锇酸固定后漂洗，避免了磷酸缓冲液与乙醇及醋酸铀反应产生沉淀物．消除了对细胞组织的污染。     

微波技术在快速电镜标本制备中的应用

目的 为探讨微波技术在电镜及时诊断中的实用价值。方法 利用微波技术,对正常及病变组织进行辐射、固定、脱水、浸透及包埋聚合过程实验研究。结果 采用微波辐射从固定到聚合过程只需要３．７ｈ,细胞的各种超微结构得到优良保存。结论 微波技术应用于电镜标本制备具有快速、省时,质量稳定可靠的特点,对临床医学用电镜及时诊断具有重要使用价值。     

胶体金标记游离细胞表面抗原的电镜样品制备方法

目的 胶体金标记游离细胞表面抗原研究的样品制备方法。方法 对白血病细胞如耐药株K562／ADM细胞和敏感株K562细胞进行离心，前固定，清洗，冰冻切片，后固定，漂洗，脱水，包埋聚合，超薄切片，染色等电镜样品制备过程的研究。结果 在阳性细胞（耐药株K562／ADM细胞）实验组表面发现大量胶体金颗粒，而对照组没有发现胶体金颗粒。阴性细胞（敏感株K562细胞）实验组发现极少量胶体金颗粒，而对照组没有发现胶体金颗粒。结论 白血病细胞表面抗原可以用胶体金来标记。此种方法也适合游离细胞表面特异性抗原的技术定位。     

618环氧树脂平板在免疫电镜包埋中的应用

免疫电镜超薄切片在样品的制备过程中过去常采用载玻片摊片,该法使硬化后摊在栽玻片上的组织与样品头不易剥离,成功率较低,我们在工作中摸索应用６１８环氧树脂包埋剂制备的薄片进行摊片,较好的解决了剥离困难,提高了制样的成功率,现将该方法简介如下。１　操作步骤　　①切片１０～２０μｍ,用３％的戊二醛固定,如为包埋前染色则在染色后用冷二钾砷酸钠缓冲液漂洗,转入３％戊二醛固定;②冷二钾砷酸钠缓冲液漂洗;③１％ＯｓＯ４后固定２ｈ;④５０％,７０％丙酮各脱水８～１０ｍｉｎ;⑤饱和醋酸铀过夜;⑥９０％丙酮脱水８～１…     

骨肉瘤石蜡包埋组织标本FCM单细胞悬液样品的制备

采用１０例骨肉瘤石蜡包埋组织标本，以Ｈｅｄｌｅｙ报道的方法为基础，进行单细胞悬液样品的制备和流式细胞术检测。每例组织块经切片、脱蜡、水化、漂洗等过程，并用０．５％ｐｅｐｓｉｎ（ｐＨ１．５）作为组织片的消化液，放入３７℃恒温磁力搅拌装置中进行孵育消化６０ｍｉｎ，经高速和低速短时离心去除未消化完的组织块和细胞碎片，加７０％＾冷乙醇固定。上机前用碘化丙啶作一步插入ＤＮＡ荧光染色。结果显示消化良好，镜检细     

介绍一种观察组织内小血管的电镜制样方法

电镜观察血管标本，一般比较容易做的是游离血管，如主动脉、肾动脉或毛细血管，前者可直接取材，后者数量众多。如果要观察组织内一定直径的小血管，则比较麻烦，因为要找到一定直径的小血管不容易，用常规方法进行，工作量很大。我们摸索了一种方法，现介绍如下。１　材料和方法１．１　组织取材　拟观察的组织内血管为大鼠肾脏内直径１００～２００μｍ的小动脉，应用灌流方法固定，固定液为４％多聚甲醛，灌流５ｍｉｎ后取下肾脏切成两半，继续固定，固定４ｈ后漂洗，用振荡切片机将组织切成５０～１５０μｍ薄片，锇酸后固定，脱水、树…     

病理制片中固定液的选择

在病理组织诊断中制片过程尤为重要,而在病理制片的过程中组织的固定更为关键,故而对于石蜡切片,组织的固定则是必不可少的重要步骤。在多年的临床经验中,笔者对AF、AAF及甲醛-生理盐水三种混合固定液的优劣进行仔细分析、对比,从而认为混合固定液与其他固定剂固定效果相比之下较为优越。     

不同程度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者腭咽肌组织病理形态的比较

目的:分析不同程度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)患者腭咽肌组织的病理形态学变化。方法:选取128例接受悬雍垂腭咽成形术治疗的OSAHS患者作为观察对象。根据多导睡眠监测结果中的呼吸暂停低通气指数(AHI)将其分为轻度组40例(5次/h30次/h)。选取无口咽部阻塞疾病,且行腭肿物或腭良性肿瘤切除术的患者46例作为对照组。通过前固定、制片、漂洗、后固定、漂洗、脱水、聚合、修块、染色各步骤将四组腭舌弓、腭咽弓组织制成标本,在显色镜下观察其形态学改变。比较各组腭舌弓、腭咽弓、腭舌弓线粒体、腭咽弓线粒体的病变程度。结果:中度组、重度组舌腭弓肌纤维、咽腭弓肌纤维正常者比例均显著低于轻度组和对照组,差异有统计学意义(P<0.05);中度组、重度组明显变化者比例显著高于轻度组、对照组,重度组显著变化者比例显著高于其他三组,差异均有统计学意义(P<0.05)。舌腭弓线粒体、咽腭弓线粒体正常者比例:重度组<中度组<轻度组<对照组,舌腭弓线粒体、咽腭弓线粒体显著变化者比例:重度组>中度组>轻度组>对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:腭咽肌组织及肌间线粒体形态学改变与OSAHS病情关系密切,可能是导致OSAHS病情加重的原因之一。     

显示脑组织的星蓝染色法

为了能以肉眼观察人体脑组织的形态结构，采用提高脑灰、白质之间的对比度的方法，以往多采用马利根（Mulliggn）法制作，方法较复杂，时间较长。现我们应用星蓝（Astrablue）染脑组织，效果理想，时间短，适用于教学、科研的需要，方法如下。（l）取材固定：开颅取脑，人15％福尔马林内固定数日，剥去血管及脑膜，更换新固定液充分固定1周至数月。（2）流水冲洗脑至无福尔马林味为止（约24小时）。（3）切片：徒手法将脑组织切成数毫米的厚度。（4）流水冲洗24小时。（5）漂洗：用过氧甲酸漂洗至脑切片呈白色为止（约1／J’时）。甲酸（f…     

银染色法检测PAGE分离的超微量蛋白质

作者以固定、还原剂的选用等几个步骤入手,改进了常用的Sammoms法,缩短了固定时间,并增加了水漂洗步骤,效果较为满意。本法的优点为:1.血清白蛋白易被染色;2.蛋白     

石蜡半薄切片制作透射电镜的方法

[目的]介绍石蜡半薄切片转制透射电镜的制样方法。[方法]对石蜡半薄切片进行脱蜡、水化、锇酸固定、缓冲液漂洗、梯度酒精脱水、环氧树脂包埋、超薄切片机切片、透射电镜下观察。[结果]组织细胞的超微结构保存完好,足以满足病理诊断之用。[结论]用石蜡半薄切片转制电镜比用石蜡组织块转制电镜方法简单,快速易行。     

B—5固定液对淋巴组织的固定效果

在淋巴瘤组织的制片过程中,采用常规H、E染色其细胞核细微结构显示不甚清楚。近年来我们应用B—5固定液固定获得了很好的效果。特作以下介绍: 一、材料来源和 B—5 固定液的配制动物新鲜淋巴结组织和人的新鲜淋巴结炎性组织及淋巴瘤组织,同样条件下,同一块组织分别用不同的固定液进行固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、制片、H、E染色。     

电镜样品制作中的人为假象分析

目的：对电镜样品制作中出现的人为假象进行分析，并提出预防和解决办法。方法：将我室在1990年1月－2000年12月样品制作记录进行整理，分别从取材、固定脱水、浸泡、聚合等各个步骤中找出所致人为假象的原因所在，并提出相应的处理办法。结果：2318例中产生人为假象的，取材及前固定占25％，常规制作过程占14％，超薄切片占6％。结论：以取材及前固定不规范造成的人为假象最为严重，其次是常规制作过程，超薄切片占少数。     

培养细胞电镜定向包埋法

本法完全保持细胞的培养形态及细胞连接,可以连续在不同方位切片。对同一标本的不同对象以不同方式灵活包埋,大大提高成功率。本法制作过程中的固定、脱水、浸透、聚合、切片、染色等基本与常规相同,下面仅重点介绍包埋和修块。     

聚合甲醛的一种简易解聚法

本文介绍聚合甲醛的稀释加热解聚法。经过反复实验,解聚后的甲醛溶液含量与市售的甲醛含量基本一致,组织固定性能正常。本解聚法操作简单易行、安全,不需要特殊设备。本法可以节省原材料和经费。     

环氧树脂618在生物样品中的快速包埋法

为达到对临床活检标本快速诊断的目的,我们通过反复实验,改进了生物透射电镜样品传统的制备方法,采用了环氧树脂618快速包埋法。材料与方法按照常规透射电镜取材方法进行取材,样品应小于1ｍｍ3,固定于2.5%,戊二醛(ＧｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅＣ5Ｈ8Ｏ2)液中。经甲醛固定的大体标本表层固定最佳,应从表层取材[1]。切取1ｍｍ3小块,经磷酸缓冲液充分漂洗后用1%酸(ＯｓｍｌｕｍｔｅｔｒｏｘｉｄｅＯｓＯ4)后固定。制成腊块的标本,选取蜡块的最佳部位切取1ｍｍ3的小块,用二甲苯脱腊再经乙醇梯度脱水。用0.1ｍｏｌ/Ｌ二甲胂酸钠缓冲液充分漂洗后…     

单细胞悬液制备应注意的问题

流式细胞仪（FlowCytometry，FCM）是目前常用来测量细胞表面荧光免疫标志、DNA含量和钙离子变化的大型精密仪器，但是，利用FCM来做实验分析最常见的问题就是测试时细胞数太少（实验要求为1×106／ml），尤其是用固定剂固定过的细胞。本人发现在离心时如果不采用正确的方法，细胞损失料相当严重。例如，将乙醇固定过的胸腺细胞（1．12×107／ml）在垂直离心机上1000rpm离心10分钟，去固定液，发现细胞只剩下6．4×106／ml；然后用PBS漂洗，离心后去PBS液，细胞剩下3．2×106／nd，经PBS第二次次漂洗，离心后细胞则只有6×105／ml。…     

尸检组织的固定、脱水及制片

目的探讨改进尸检切片质量的方法。方法调整组织固定液的配方、固定时间、浸蜡的时间及脱水透明程序。结果组织固定效果好,脱水彻底无变形,染色后切片效果好,便于观察。结论只有不断优化尸检切片制作过程中的每一环节,才能制作出比较满意的切片。     

胚胎肝脏微量元素测定

我们对昌吉地区4～7个月汉族正常胎儿(经福尔马林固定1个月内的胎儿,尽量用新鲜固定组织)完整的肝脏和脑85例(取材时防止损伤肝、脑表面被膜)先经去离子水漂洗三次后置烧杯中,在60℃低温下一周烘干。中间不调换温度,分别粉碎后,精密称取本品1克入试管中,缓缓加热至炭化,然后加入消化液(HNO_3: H_3SO_4: HClO_43: 1: 1)10ml于电炉上缓慢加热消化至干,沉淀     

环戊二烯选择加氢制聚合级环戊烯研究中的气相色谱分析

本文介绍了环戊二烯选择加氢制聚合级环戊烯研究中的气相色谱分析方法。采用热导池鉴定器,以ββ′-氧二丙腈为固定液,在3米长的色谱柱上,在不同操作条件下,测定反应原料、产品及催化剂硫化尾气。采用氢火焰离子化鉴定器,以ββ′-氧二丙腈为固定液,在8米长的色谱柱上,测定聚合级环戊烯中的微量杂质。