急性肝衰竭大鼠高迁移率族蛋白B1的变化和意义

目的:比较高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)与其他炎症因子在急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)大鼠肝组织和血清中出现时间及持续时间,探讨其来源及作用.方法:采用腹腔内注射D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-Gal)和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)制备大鼠ALF模型,以腹腔内注射生理盐水作为对照组.于注射后3、6、12、24、48、72 h检测血清中肝功能的变化,观察肝组织病理,实时荧光定量PCR检测肝组织中HMGB1、白介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,T N F-α)m R N A变化,E L I S A法检测血清中HMGB1、IL-1β、IL-6、TNF-α水平变化,免疫组织化学检测肝组织中H M G B 1表达变化.使用重组高迁移率族蛋白B1(recombinant high mobility group protein 1,r HMGB1)单独尾静脉注射或联合D-G a l、L P S腹腔内注射,观察大鼠的一般情况并计算生存率.结果:采用D-Gal和LPS成功建立大鼠ALF模型.ALF大鼠肝组织中HMGB1 m RNA表达和血清中HMGB1水平高峰均较IL-1β、I L-6、T N F-α出现晚,但其高峰持续时间更长.D-Gal和LPS注射后的3 h,免疫组织化学可见肝细胞中HMGB1由细胞核转移到细胞质中;注射后24-48 h,肝脏正常组织结构消失,HMGB1蛋白自坏死的肝细胞被动释放.添加外源性r HMGB1使大鼠死亡时间提前,ALF大鼠在相同时间点死亡率升高.结论:大鼠ALF过程中HMGB1由坏死的肝细胞被动释放,其出现时间较其他炎症因子为晚.HMGB1与其他炎症因子相互作用,可能进一步促进ALF中的炎症反应.     

HGF及其受体c-met在肝衰竭与部分肝切除模型中表达差异性研究

目的研究HGF及其受体c-met在肝衰竭和部分肝切除两种动物模型肝组织的表达差异。方法分别采用D-GalN/LPS腹腔注射和70%肝脏外科切除术建立肝衰竭和部分肝切除模型,同时以健康大鼠作为对照组。采用ELISA法检测血清HGF水平,采用Real-time PCR和Western-blot法分别检测肝组织c-met基因和蛋白的表达水平。结果与对照组比,部分肝切除模型大鼠血清HGF及其受体c-met表达水平均有明显升高（P〈0.01）,而在肝衰竭模型大鼠血清HGF水平虽有升高,但c-met蛋白表达水平却明显降低（P〈0.01）。结论肝细胞c-met表达水平的降低是D-GalN/LPS诱导肝衰竭大鼠肝细胞再生障碍的主要原因。     

磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶在急性肝衰竭小鼠模型及HBV相关慢加急性肝衰竭患者肝组织中的表达及意义

目的研究磷酸化后的p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)在氨基半乳糖(D-Gal N)或脂多糖(LPS)诱导的急性肝衰竭小鼠模型以及HBV相关慢加急性肝衰竭(ACLF)患者肝脏中的表达及其意义。方法采用D-Gal N/LPS诱导C57BL/6小鼠构建急性肝衰竭模型,分别在给药0、0.5、1、2、4、6、8 h设立实验组,每组4只,处死小鼠取肝组织标本进行HE染色观察肝组织结构的病理变化,分别运用蛋白免疫印迹技术半定量检测及免疫组化染色定位检测肝组织中p-p38MAPK的表达;同时对照研究pp38MAPK在HBV-ACLF、乙型肝炎肝硬化、慢性乙型肝炎(CHB)患者肝组织中的表达情况。组间比较采用独立样本t检验。结果蛋白免疫印迹法检测p-p38MAPK在肝衰竭小鼠肝组织匀浆中的表达随时间变化持续增高,给药6 h组半定量分析表达量显著高于正常对照组,差异具有统计学意义(t=-2.727,P=0.034)。免疫组化染色结果显示随存活时间的延长,小鼠肝组织炎症程度逐渐加重,炎症早期主要为窦细胞表达p-p38MAPK,随着肝组织损害加重,肝细胞表达p-p38MAPK渐多,坏死肝组织附近分布大量p-p38MAPK阳性肝细胞;正常人肝组织中p-p38MAPK的表达量很低,CHB患者肝组织内可见浸润淋巴细胞及肝细胞表达pp38MAPK,并且随病程进展呈增多趋势,与临床观察病变程度逐渐加重相一致。结论 D-Gal N/LPS诱导的小鼠急性肝衰竭模型中,p-p38MAPK表达随肝组织损害加重,表明其在肝衰竭病变过程中占重要地位;在HBV-ACLF患者致病过程中,p-p38MAPK信号通路可能发挥重要作用。     

抗肝衰复方对急性肝衰竭大鼠高迁移率族蛋白-1和增殖细胞核抗原表达的影响

目的:观察抗肝衰复方对急性肝衰竭大鼠肝组织高迁移率族蛋白-1(HMGB1)和增殖细胞核抗原(PCNA)的影响,探讨抗肝衰复方对大鼠急性肝衰竭的作用机制.方法:健康雄性Wistar大鼠110只,随机分为正常组10只、模型组20只、促肝细胞生长素(PHGF)对照组20只、茵陈蒿汤(YCHT)组20只、抗肝衰复方小剂量组20只、抗肝衰复方大剂量组20只.除正常组外其余各组分别给予D-氨基半乳糖(D-GalN)800mg/kg和内毒素脂多糖(LPS)0.1mg/kg的剂量,腹腔注射1次成模.正常组给予等量生理盐水腹腔注射.各组均于造模后2小时用药,按每次1.5mg/100g,每天2次灌胃.模型组和正常组均分别按1.5ml/100g灌服生理盐水,2次/d,连用3天.造模后72小时取材.观察造模后72小时内大鼠病死率.检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)与总胆红素(TBil)含量.HE染色观察肝组织病理变化,蛋白印迹法分析肝组织HMGB1表达,免疫组织化学染色法检测肝组织PCNA蛋白表达.结果:抗肝衰复方大剂量组病死率及血清ALT、AST、TBil含量降低;肝细胞坏死、炎性浸润程度显著改善;HMGB1表达水平明显降低,PCNA表达水平明显升高,与模型组相比P＜0.01或P＜0.05.结论:抗肝衰复方对急性肝衰竭大鼠模型的防护作用,可能与抑制HMGB1的释放,降低内毒素血症,促进肝组织PCNA表达有关.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215对急性肝衰竭小鼠肝脏炎症反应的影响

目的观察D-氨基半乳糖/脂多糖(D-Gal N/LPS)诱导的急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)模型小鼠在组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215的作用下,炎症相关指标降钙素原(procalcitonin,PCT)、高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)、微小RNA-141(microRNA-141,miR-141)的表达情况。方法将18只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组(n=6)、ALF模型组(n=6)、ACY1215干预组(n=6),ALF模型组和ACY1215干预组采用D-Gal N/LPS联合诱导ALF小鼠模型,其中ACY1215干预组在造模前2 h腹腔注射ACY1215。24 h后检测各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBIL)水平,取肝组织进行HE染色观察肝组织结构变化并检测肝组织PCT、HMGB1、miR-141的表达情况。结果与ALF模型组相比,ACY1215干预组小鼠肝组织结构破坏程度明显减轻,炎性细胞浸润明显减少;血清AST、ALT、TBIL水平显著下降,肝组织HMGB1及PCT表达显著降低,miR-141表达显著升高。结论 ACY1215对ALF小鼠肝组织具有保护作用,可能与其能减轻肝组织炎症反应有关。     

清肠利肝方对D-氨基半乳糖/脂多糖所致急性肝衰竭小鼠的防护作用

目的:探讨中药组方清肠利肝方对D-氨基半乳糖/脂多糖(D-Gal N/LPS)所致急性肝衰竭小鼠的防护作用并探究其相关机制。方法:将野生型健康C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、急性肝衰竭模型组(简称模型组)和清肠利肝方干预组(简称干预组)。模型组和干预组小鼠腹腔注射D-Gal N(700 mg/kg)LPS(10μg/kg)诱导肝衰竭;干预组小鼠注射D-Gal N/LPS前3天以清肠利肝方灌胃,1次/d。D-Gal/LPS给药6小时后收集小鼠肝脏组织和血清。观察各组小鼠肝脏损伤变化及相关炎症分子的变化情况。结果:模型组小鼠肝脏损伤严重,大片肝组织充血坏死;干预组小鼠肝脏损伤较模型组减轻,促炎因子水平低于模型组,MAPK通路炎症相关蛋白表达降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:清肠利肝方对D-Gal N/LPS所致小鼠急性肝衰竭有明显防护作用,其机制可能与调节MAPK通路而发挥抗炎作用有关。     

生脉散对急性肝衰竭大鼠内毒素诱导抑制性-κBα及细胞因子的影响

目的:探讨生脉散对急性肝衰竭大鼠内毒素(LPS,即大肠杆菌脂多糖)诱导细胞因子水平及大鼠肠道组织抑制性-κBα(I-κBα)蛋白表达的影响.方法:采用D-氨基半乳糖(D-Gal)腹腔注射复制急性肝衰竭大鼠模型,观察LPS诱导2小时及8小时后生脉散对血清内毒素、细胞因子水平及大鼠肠道组织I-κBα蛋白表达的影响.结果:D-Gal能明显增加大鼠血清白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和白细胞介素1β(IL-1β)水平(P＜0.001),随着D-Gal作用时间延长,其增加的趋势明显减弱,但对血清LPS、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平无明显影响(P＞0.05);生脉散能显著降低D-Gal肝衰竭大鼠血清IL-6、ICAM-1和IL-1β水平(P＜0.001,P＜0.05).LPS攻击2小时和8小时,能明显升高D-Gal大鼠血清LPS、TNF-α、IL-6、ICAM-1和IL-1β水平(P＜0.001);除在8小时对TNF-α无影响外(P＞0.05),生脉散能明显减轻LPS攻击D-Gal大鼠后对血清LPS、TNF-α、IL-6、ICAM-1和IL-1β水平的影响(P＜0.001,P＜0.05);采用Western blot方法,检测大鼠肠道组织胞浆蛋白I-κBα表达发现,LPS可调节肠道组织I-κBα蛋白表达,诱导NF-κB激活,生脉散可抑制NF-κB激活.结论:在急性肝衰竭模型中,LPS能增加TNF-α、IL-1β、IL-6和ICAM-1等炎症因子水平,诱导I-κBα表达;生脉散可降低LPS水平,并抑制LPS诱导的炎症因子水平和I-κBα在胞浆内的表达,阻断了炎性介质及LPS本身对机体的损伤.     

D-氨基半乳糖大鼠急性肝衰竭并发内毒素血症对糖代谢的影响及其机制

目的：探讨大鼠急性肝功能衰竭时内毒素血症对糖代谢的影响及其机制。方法：利用D-氨基半乳糖（D—GaLN）诱导建立大鼠肝衰竭模型,24只雄性Wistar大鼠随机分为对照组（等渗盐水）、低剂量组（100mg／kgD—GaLN）、中剂量组（200mg／kgD—GaLN）、高剂量组（300rag／kgD—GaLN）,收集各组血清和肝组织,检测内毒素、血糖、肝功能,采用半定量PCR方法检测大鼠肝组织中葡萄糖-6-磷酸酶（G6P）和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶（PEPCK）的基因转录,6-磷酸葡萄糖法检测葡萄糖激酶（GCK）活性。结果：200mg／kg以上剂量D—GaIN可诱导大鼠急性肝衰竭,并出现低糖血症,内毒素水平随着D—GaIN浓度升高而升高;实验组大鼠GCK活性较对照组均升高,而G6P、PEPCK的mRNA表达随D—GaIN浓度升高而下调。结论：急性肝功能衰竭大鼠并发内毒素血症可能通过促进糖酵解、抑制糖异生导致低血糖的发生。     

内毒素预适应减轻急性肝功能衰竭中热休克蛋白27的作用

目的研究热休克蛋白27（HSP27）介导内毒素（LPS）预适应减轻急性肝功能衰竭（ALF）的作用机制。方法实验动物为雄性C57BL/6小鼠。将小鼠分为5组,对照组为正常C57BL/6小鼠;肝功能衰竭组小鼠以LPS10μg/kg＋D-半乳糖胺700 mg/kg,用1 mL0.9%氯化钠溶液溶解后腹腔内注射,建立急性肝功能衰竭的模型;LPS预处理组小鼠经LPS预适应24 h后,建立急性肝功能衰竭的模型;HSP27干扰组小鼠和转染对照组小鼠分别以尾静脉注射包装有干扰HSP27表达的短发夹RNA的重组腺病毒以及对照空病毒,成功干扰HSP27表达后,经LPS预处理,建立急性肝功能衰竭模型。通过比较各组ALT和AST水平,评价肝组织病理损伤程度,以及检测肝组织内TNF-α、IL-6mRNA水平,观察HSP27对LPS预适应减轻急性肝功能衰竭的影响。结果 LPS预适应可明显减轻Galn/LPS所致的肝损伤,干扰HSP27的表达后,小鼠血清ALT和AST明显升高,肝组织病理损伤和炎性反应加重（P〈0.05）。下调HSP27的表达水平后,LPS预适应的保护作用几乎完全消失。结论 LPS预适应可以减轻小鼠的急性肝损伤,HSP27在这一效应中发挥重要作用。     

磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶在急性肝衰竭小鼠模型及HBV相关慢加急性肝衰竭患者肝组织中的表达及意义磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶在急性肝衰竭小鼠模型及HBV相关慢加急性肝衰竭患者肝组织中的表达及意义

目的：研究磷酸化后的p38丝裂原活化蛋白激酶（p－p38MAPK）在氨基半乳糖（D－GalN）或脂多糖（LPS）诱导的急性肝衰竭小鼠模型以及HBV相关慢加急性肝衰竭（ACLF）患者肝脏中的表达及其意义。方法采用D－GalN／LPS诱导C57BL／6小鼠构建急性肝衰竭模型,分别在给药0、0．5、1、2、4、6、8 h设立实验组,每组4只,处死小鼠取肝组织标本进行HE染色观察肝组织结构的病理变化,分别运用蛋白免疫印迹技术半定量检测及免疫组化染色定位检测肝组织中p－p38MAPK的表达;同时对照研究p－p38MAPK在HBV－ACLF、乙型肝炎肝硬化、慢性乙型肝炎（CHB）患者肝组织中的表达情况。组间比较采用独立样本t检验。结果蛋白免疫印迹法检测p－p38MAPK在肝衰竭小鼠肝组织匀浆中的表达随时间变化持续增高,给药6 h组半定量分析表达量显著高于正常对照组,差异具有统计学意义（t＝－2.727,P＝0．034）。免疫组化染色结果显示随存活时间的延长,小鼠肝组织炎症程度逐渐加重,炎症早期主要为窦细胞表达p－p38MAPK,随着肝组织损害加重,肝细胞表达p－p38MAPK渐多,坏死肝组织附近分布大量p－p38MAPK阳性肝细胞;正常人肝组织中p－p38MAPK的表达量很低,CHB患者肝组织内可见浸润淋巴细胞及肝细胞表达p－p38MAPK,并且随病程进展呈增多趋势,与临床观察病变程度逐渐加重相一致。结论 D－GalN／LPS诱导的小鼠急性肝衰竭模型中,p－p38MAPK表达随肝组织损害加重,表明其在肝衰竭病变过程中占重要地位;在HBV－ACLF患者致病过程中,p－p38MAPK信号通路可能发挥重要作用。     

Oridonin对急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡的影响及其机制研究*

目的 探讨冬凌草甲素（oridonin）对脂多糖/D-氨基半乳糖氨（LPS/D-Gal）联合诱导的急性肝衰竭（ALF） 小鼠肝细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 取25只小鼠,随机分成5组,每组5只。采用LPS/D-Gal腹腔注射建立小鼠ALF模型,设生理盐水对照组、LPS/D-Gal诱导模型组、LPS/D-Gal诱导和不同剂量oridonin干预组及oridonin处理组。采用末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测肝细胞凋亡,采用real-time PCR法检测肝组织TNF-α mRNA水平,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白的变化。结果 模型组小鼠肝细胞凋亡率为（36.4±1.8） %,显著高于两个oridonin干预组的[（19.4±3.3）%和（11.4±0.3）%,P<0.01];模型组小鼠肝组织TNF-α mRNA水平显著高于正常对照组（P<0.01）,而两个oridonin干预组肝组织TNF-α mRNA水平显著低于模型组（P<0.01）;模型组小鼠线粒体凋亡通路相关的促凋亡蛋白c-Jun氨基末端激酶（JNK）、bax、细胞色素C、cleaved caspase9/3活化水平显著高于两个oridonin干预组（P<0.01）,模型组小鼠抗凋亡蛋白bcl-xl水平显著低于两个oridonin干预组（P<0.01）,模型组小鼠死亡受体凋亡通路相关的促凋亡蛋白caspase8活化水平与两个oridonin干预组并无明显差异（P>0.01）。结论 Oridonin可抑制LPS/D-Gal诱导的ALF小鼠肝细胞凋亡,其机制可能与下调促凋亡细胞因子TNF-α水平和抑制JNK介导的线粒体凋亡信号通路有关。     

大鼠慢加急性肝功能衰竭模型的制备

目的：探索建立大鼠慢加急性肝功能衰竭模型的方法。方法SD 大鼠40只,随机分为正常对照组、模型1组、模型2组和模型3组,每组各10只。模型1组：每周二、五腹膜内注射40％ CCl41 mL/kg;持续4周;模型2组：每周二、五腹膜内注射40％ CCl41 mL/kg,每周三腹膜内注射猪血清0．5 mL,持续4周;模型3组：每周二、五腹膜内注射40％CCl40．7 mL/kg,每周三腹膜内注射猪血清0．3 mL,持续4周,以5％乙醇代水,自由饮用;正常对照组：不注射任何药物。实验第29天,各模型组大鼠均腹膜内注射脂多糖（LPS）30μg/kg＋犇-氨基半乳糖（犇-Gal ）0．3 g/kg。以全自动生化分析仪检测大鼠血清 ALT、AST 和 TBil 水平。肝组织切片 HE 染色后光学显微镜镜下观察病理学变化。结果造模4周后各模型组大鼠血清 ALT、AST 和 TBil 水平均明显高于正常对照组（均P＜0．01）,以模型3组最高、模型2组其次,3组间差异均有统计学意义（均P＜0．01）。注射 LPS＋犇-Gal 后24 h,模型3组中有3只动物死亡,3个模型组大鼠的 ALT、AST和 TBil 水平均较注射前明显升高（均P＜0．01）,3组间差异均有统计学意义（均P＜0．01）。注射 LPS＋犇-Gal 后72 h,各模型组大鼠 ALT、AST 和 TBil 水平均较前明显降低（均P＜0．01）,但仍明显高于正常对照组（均P＜0．01）,3组间差异仍均有统计学意义（均P＜0．01）。注射 LPS＋犇-Gal 后24 h,肝窦明显扩张、充血,大量炎性细胞浸润于汇管区,小叶内见肝细胞坏死。结论采用40％ CCl4＋猪血清诱导慢性肝损伤后,再以 LPS 30μg/kg＋犇-Gal 0．3 g/kg 攻击,可成功制备大鼠慢加急性肝功能衰竭模型。     

生脉散对急性肝衰竭大鼠内毒素诱导细胞因子的影响

[目的]探讨生脉散对急性肝衰竭大鼠内毒素（LPS）诱导细胞因子水平的影响。[方法]采用胁氨基半乳糖腹腔注射法制作急性肝衰竭大鼠模型。予生脉散灌胃2h及8h后,检测血清LPS与细胞因子水平。[结果]D-氨基半乳糖能明显增加大鼠血清白细胞介素6（IL-6）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）和IL-1β水平（P〈0．01）,随着D-氨基半乳糖作用时间延长的趋势明显减弱,但对血清LPS、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平无明显影响（P〉0．05）;生脉散能显著降低D氨基半乳糖肝衰竭大鼠血清IL-6、ICAM-1和IL-1β水平（P〈0．01,〈O．05）。LPS攻击2h和8h后,能明显诱导D-氨基半乳糖大鼠血清LPS、TNF-α、IL-6、ICAM-1和IL-1β水平增加（P〈0．01）;除在8h对TNF-α无影响外,生脉散能明显减轻LPS攻击D-氨基半乳糖大鼠后对血清LPS、TNF-α、IL-6、ICAM-1和IL-1β水平的影响（P〈0．01,〈O．05）。[结论]SD大鼠在急性肝衰竭状态下,存在严重LPS血症,并引起细胞因子水平变化的炎症级联反应,生脉散可通过调节细胞及炎症因子水平起到治疗作用。     

乌司他丁对急性肝功能衰竭大鼠肝组织中血红素加氧酶-1 mRNA和蛋白表达的影响

目的 探讨乌司他丁对急性肝功能衰竭的保护作用及对血红素加氧酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)的影响.方法 66只S-D大鼠分为对照组、模型组和乌司他丁干预组,通过腹腔注射D-氨基半乳糖(D-Gal)及脂多糖(LPS)建立大鼠急性肝功能衰竭模型,动态观察(6、12、24、36和48 h)大鼠血清ALT、AST和丙二醛(MDA)含量变化,RT-PCR检测肝脏HO- mRNA变化,免疫组织化学方法检测HO-1蛋白表达.多组间差异比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法.结果 D-Gal/LPS联合注射成功诱导大鼠急性肝功能衰竭模型,表现为造模6 h后血清ALT、AST水平以及肝组织MDA浓度均显著升高(F值分别为23.864、38.446、18.051,均P＜0.01),以12至24 h之间最为显著.造模24 h后,模型组与干预组ALT、AST、MDA分别达到(8 346.7±1 363.1)U/L、(9 766.7±1 274.1)U/L、(8.34±1.13)μmol/g与(4 151.3±970.0)U/L、(4 696.7±1 476.9)U/L、(4.66±0.91)μmol/g,均较对照组的(24.0±2.0)U/L、(82.3±16.9)U/L、(2.55±0.22)μmol/g高(F值分别为55.684、55.501、47.843,均P＜0.01),但干预组显著低于模型组(P＜0.01);与对照组相比,模型组HO-1 mRNA及其蛋白表达增加(P＜0.01),干预组的上升更加显著(P＜0.01).结论 乌司他丁能上调HO-1 mRNA和蛋白表达,提示乌司他丁可能通过HO-1通路发挥其在急性肝功能衰竭中抗炎抗氧化的保护作用.     

天然蒙脱石对急性肝衰竭大鼠的肠道干预实验

目的建立大鼠急性肝衰竭模型,并给予天然蒙脱石进行肠道干预研究。方法随机将40只大鼠分为正常对照组、模型组、思密达预防组和思密达治疗组,采用腹腔注射半乳糖胺法建立大鼠急性肝衰竭模型,观察大鼠肝功能、内毒素（LPS）及肝脏和回肠组织的病理学变化。结果与正常对照组比,模型组、思密达预防组和治疗组大鼠血ALT、AST、TBiL和LPS升高,Alb下降（P〈0．05）;与模型组比,思密达预防组和治疗组大鼠血ATJT、AST、TBiL和LPS下降,Alb升高（P〈0．05）;思密达预防组比治疗组大鼠血ALT、AST、TBiL和LPS更低（P〈0．01）;模型组大鼠肝脏形态学发生严重的病变,而预防组和治疗组病变较轻。结论应用天然蒙脱石进行肠道干预急性肝衰竭大鼠可明显减轻肝脏病理学改变,改善肝功能,降低LPS水平。     

Orionin对急性肝衰竭小鼠的保护作用及其对肝组织细胞因子水平的影响*

目的 探讨冬凌草甲素（Oridonin）对脂多糖/D-氨基半乳糖氨（LPS/D-Gal）联合诱导的急性肝衰竭（ALF）小鼠的保护作用及其对肝组织细胞因子水平的影响。方法 取150只小鼠,随机分成5组,每组 30 只。采用LPS/D-Gal腹腔注射建立小鼠ALF模型,设生理盐水对照组、Oridonin对照组、LPS/D-Gal诱导模型组和LPS/D-Gal处理及不同剂量Oridonin干预组。采用Real-time PCR法检测肝组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1α、IL-1β和IL-6 mRNA水平。结果 模型组小鼠48 h存活率为0.0% （0/30）,而两个Oridonin干预组小鼠48 h存活率分别提高至64.5% （19/30）和80.6% （24/30,P<0.01）; 组织病理学检查显示模型组小鼠肝细胞呈大块或/和亚大块坏死,肝小叶结构消失,残存肝细胞肿胀、空泡变性,肝窦肿胀充血,炎细胞浸润。Oridonin干预组小鼠肝细胞坏死、空泡变性和炎细胞浸润等较模型组有明显的改善;模型组小鼠血清ALT和AST水平分别为（345.3 ± 54.1） U/L和（500.2±53.5） U/L,明显高于对照组的[（42.3±0.6）U/L和（117.1±9.8）U/L,P<0.01],两个Oridonin干预组分别为 （303.9±39.5） U/L和（340.6±2.8） U/L及[（130.2±38.3） U/L和 （209.8±36.2） U/L,P<0.05];模型组小鼠肝组织TNF-α、IL-1α、IL-1β和IL-6 mRNA水平显著高于正常对照组（P<0.01）,而两个Oridonin干预组肝组织TNF-α、IL-1α、IL-1β和IL-6 mRNA水平显著低于模型组 （P<0.01）。结论 Oridonin对LPS/D-Gal诱导的ALF小鼠具有显著的保护作用,其作用机制可能与降低肝组织细胞因子水平有关。     

急性肝功能衰竭大鼠肝组织内巨噬细胞形态变化特点

目的探讨肝组织内巨噬细胞在急性肝功能衰竭（acuteliverfailure,ALF）大鼠模型中的形态变化及其在肝脏炎性损伤中的意义。方法Wistar大鼠分为两组：实验对照组6只,模型组24只。通过腹腔注射D-氨基半乳糖（D-GalN）及脂多糖（LPS）建立大鼠急性肝功能衰竭模型,动态观察各时间点（4、8、16、24h）大鼠肝组织的病理变化以及ALT、AST、TBil和TNF-a的含量变化,通过透射电镜观察各时间点大鼠肝组织中巨噬细胞的形态变化。结果D-GalN／LPS联合注射成功诱导大鼠急性肝功能衰竭模型,表现为建立模型后ALT、AST及TBil水平显著上升,于造模后24h表达最高（P〈O．01）,病理变化符合急性肝功能衰竭的病理特点。以细胞体积增大、形状不规则、胞质伸出较多微绒毛和伪足者为激活的巨噬细胞判断标准。建立模型后,在同样放大倍数下,肝组织中巨噬细胞形态发生变化,以8h模型组的大鼠肝组织中巨噬细胞的形态变化最为明显,随着炎性反应的进一步发展,其形态变化反而减弱。与此同时,TNF-a建立模型后其含量逐渐升高,以8h模型组的大鼠血清内含量最高,此后逐渐下降。结论肝组织中巨噬细胞参与急性肝功能衰竭的病理生理过程,其在急性肝功能衰竭的初始阶段及促进炎性反应发展中发挥了重要的作用。     

Inhibition of sphingosine kinase 1 ameliorates acute liver failure by reducing high-mobility group box 1 cytoplasmic translocation in liver cells

AIM: To determine the therapeutic potential of sphingosine kinase 1(Sphk1) inhibition and its underlying mechanism in a well-characterized mouse model of D-galactosamine(D-Gal N)/lipopolysaccharide(LPS)-induced acute liver failure(ALF).METHODS: Balb/c mice were randomly assigned to different groups,with ALF induced by intraperitoneal injection of D-Ga IN(600 mg/kg) and LPS(10 μg/kg). The Kaplan-Meier method was used for survival analysis. Serum alanine aminotransferase(ALT) and aspartate aminotransferase(AST) levels at different time points within one week were determined using a multi-parametric analyzer. Serum high-mobility group box 1(HMGB1),tumor necrosis factor-α(TNF-α),interleukin(IL)-1β,IL-6,IL-10,and sphingosine-1-phosphate were detected by enzyme-linked immunosorbent assay. Hepatic morphological changes at 36 h after acute liver injury induction were assessed by hematoxylin and eosin staining. HMGB1 expression in hepatocytes and cytoplasmic translocation were detected by immunohistochemistry. Expression of Sphk1 in liver tissue and peripheral blood mononuclear cells(PBMCs) was analyzed by Western blot.RESULTS: The expression of Sphk1 in liver tissue and PBMCs was upregulated in Gal N/LPS-induced ALF. Upregulated Sphk1 expression in liver tissue was mainly caused by Kupffer cells,the resident macrophages of the liver. The survival rates of mice in the N,Ndimethylsphingosine(DMS,a specific inhibitor of Sph K1) treatment group were significantly higher than that of the control group(P 0.001). DMS treatment significantly decreased the levels of serum ALT and AST at 6,12,and 24 h compared with that of the control group(P 0.01 for all). Serum HMGB1 levels at 6,12,and 24 h,as well as serum TNF-α,IL-6,and IL-1β levels at 12 h,were significantly lower in the DMS treatment group than in the control group(P 0.01 for all). Furthermore,hepatic inflammation,necrosis,and HMGB1 cytoplasm translocation in liver cells were significantly decreased in the DMS treatment group compared to the control group(43.72% ± 5.51% vs 3.57% ± 0.83%,χ2 = 12.81,P 0.01).CONCLUSION: Inhibition of Sph K1 ameliorates ALF by reducing HMGB1 cytoplasmic translocation in liver cells,and so might be a potential therapeutic strategy for this disease.     

M2-like Kupffer cells in fibrotic liver may protect against acute insult

AIM To investigate the mechanism of hepatoprotection conferred by liver fibrosis through evaluating the activation phenotype of kupffer cells.METHODS Control and fibrotic mice were challenged with a lethal dose of D-Gal N/lipopolysaccharide(LPS),and hepatic damage was assessed by histology,serum alanine transferase(ALT)levels,and hepatic expression of HMGB1,a potent pro-inflammatory mediator.The localization of F4/80(a surrogate marker of KCs),HMGB1,and type I collagen(Col-1)was determined by immunofluorescence staining.The phenotype of KCs was characterized by real-time PCR.KCs isolated from control or fibrotic mice were challenged with LPS or HMGB1 peptide,and HMGB1 translocation was analyzed.RESULTS Liver fibrosis protected mice against D-Gal N/LPS challenge,as shown by improved hepatic histology and reduced elevation of ALT compared with the normal mice treated in the same way.This hepatoprotection was also accompanied by inhibition of HMGB1 expression in the liver.Co-localization of F4/80,HMGB1,and Col-1 was found in fibrotic livers,indicating the close relationship between KCs,HMGB1 and liver fibrosis.KCs isolated from fibrotic mice predominantly exhibited an M2-like phenotype.In vitro experiments showed that HMGB1 was localized in the nucleus of the majority of M2-like KCs and that the translocation of HMGB1 was inhibited following stimulation with LPS or HMGB1 peptide,while both LPS and HMGB1 peptide elicited translocation of intranuclear HMGB1 in KCs isolated from the control mice.CONCLUSION M2-like Kupffer cells in fibrotic liver may exert a protective effect against acute insult by inhibiting the translocation of HMGB1.