牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞表达IL-34mRNA的影响

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对成骨细胞产生白介素34(interleukin-34,IL-34)mRNA表达的影响及此过程是否有p38MAPK、ERK1/2、NF-κB和SIRT1蛋白的参与.方法:以不同浓度P.e-LPS(0～50 mg/L)刺激MC3T3-El细胞和以20 mg/L P.e-LPS作用细胞不同时间(0～24 h)后,采用实时反转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测IL-34 mRNA的表达.以同样方法检测NF-κB抑制剂BAY 11-7082、p38MAPK抑制剂SB203580、ERK1/2抑制剂PD98059、沉默调节蛋白1(sirtuin1,SIRT1)激动剂白藜芦醇(resveratrol,RES)和SIRT1抑制剂EX-527对Re-LPS刺激MC3T3-El细胞后IL-34 mRNA表达的影响.采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验.结果:不同浓度P.e-LPS (0～50 mg/L)刺激MC3T3-El细胞后,IL-34 mRNA的表达具有剂量依赖性.20 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-El细胞24 h时,IL-34 mRNA的表达量最大;48 h时,IL-34 mRNA的表达量有所下降.10 mol/LBAY-117082、SB203580、PD98059预处理细胞1h,可以降低P.e-LPS诱导的IL-34 mRNA的表达水平.50 mol/L RES下调P.e-LPS诱导小鼠成骨细胞表达IL-34 mRNA,而10 mol/L EX-527则上调IL-34 mRNA的表达.结论:Re-LPS可诱导成骨细胞表达IL-34 mRNA,其机制可能是激活p38MAPK、ERK1/2、NF-κB和SIRT1信号通路.     

TNF-α在慢性根尖周炎骨破坏中的机制探讨

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.e)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是否诱导成骨细胞产生肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及TNF-α是否通过核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路上调巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)的产生.方法:以不同浓度P.e-LPS (0～50 mg/L)刺激MC3T3-E1细胞和以10 mg/L P.e-LPS作用细胞不同时间(0～24 h)后,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TNF-α mRNA的表达;以不同浓度TNF-α(0～ 10 ng/L)刺激MC3T3-E1细胞后,采用RT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测M-CSF mRNA和蛋白的表达;再以ELISA方法检测BAY 11-7082对TNF-α刺激MC3T3-E1细胞后M-CSF蛋白表达的影响.采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验.结果:不同质量浓度的P.e-LPS (0～50 mg/L)刺激MC3T3-E1细胞后,TNF-α mRNA的表达具有剂量依赖性;10 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-E1细胞6h时,TNF-α mRNA的表达量最大.随着作用时间的延长,TNF-α mRNA的表达量逐渐下降;不同质量浓度TNF-α(0～10 ng/L)刺激MC3T3-E1细胞后,M-CSF mRNA和蛋白的表达具有剂量依赖性,蛋白表达量从(37±2) ng/L(空白对照组)增加到(301±8) ng/L(10 ng/L组);10 mol/L BAY 11-7082预处理1h可以降低TNF-α诱导成骨细胞M-CSF蛋白的表达水平,蛋白表达量从(253±14) ng/L(TNF-α组)下降到(154±2)ng/L(BAY+TNF-α组),而单独使用BAY 11-7082组与空白对照组相比差异无显著性.结论:P.e-LPS诱导成骨细胞产生TNF-α,而TNF-α上调M-CSF可能通过NF-κB信号通路,这意味着TNF-α可能在P.e-LPS致慢性根尖周炎骨破坏中对成骨细胞发挥自分泌作用.     

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对成骨细胞CD14表达的影响

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(P.e)脂多糖(LPS)对小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞CD14表达的影响.方法:在有血清和无血清存在的情况下,用10μg/mL P.e-LPS作用于MC3T3-E1细胞24h,流式细胞术检测CD14的表达;10μg/mL P.e-LPS刺激MC3T3-E1细胞后,观察不同时间(0、1、3、6、12及24h)后检测细胞膜结合型CD14 mRNA表达的变化.应用SPSS13.0软件包对结果进行两样本t检验、单因素方差分析和Dunnett t检验.结果:流式细胞术分析P.e-LPS作用24h后,CD14蛋白表达量增加,但无血清组增加更明显;随着P.e-LPS作用时间的增加,MC3T3-E1细胞膜结合型CD14 mRNA的表达量逐渐增加,作用3h时表达最明显,作用大干6h后表达量逐渐降低.结论:P.e-LPS可诱导成骨细胞MC3T3-E1的CD14表达增强,表明P.e-LPS可能通过CD14对成骨细胞发挥作用.     

白藜芦醇对牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导成骨细胞产生MIP-2的影响

目的 研究牙髓卟啉单胞菌（Porphyromonas endodontalis,P.e）脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）影响成骨细胞产生巨噬细胞炎性蛋白2（macrophage inflammatory protein-2,MIP-2）mRNA和蛋白分泌的作用,以及白藜芦醇对P.e-LPS诱导分泌MIP-2产生的抑制作用。方法 以不同剂量的P.e-LPS (0~50 mg/L)作用于MC3T3-El细胞,并以20 mg/L P.e-LPS作用MC3T3-El细胞不同时间(0~48 h),采用实时反转录PCR(real-time RT-PCR)和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测MIP-2 mRNA和蛋白的表达;采用ELISA方法检测白藜芦醇对20 mg/L P.e-LPS 刺激MC3T3-El细胞24 h后MIP-2 蛋白表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果 当不同剂量P.e-LPS (0~50 mg/L) 刺激MC3T3-El细胞时,MIP-2 mRNA 的表达和蛋白的分泌随剂量的提高而升高;其中,蛋白表达从（41.86±2.49）ng/L升高到（3126.74±158.30）ng/L,差异显著（P<0.05）。在观察时间内（0~48 h）,20 mg/L P.e-LPS刺激MC3T3-El细胞后,MIP-2 mRNA 的表达和蛋白的分泌随时间的延长而增高,48 h时蛋白表达量最高,为（2102.55±123.27）ng/L（P<0.01）。10 mol/L 白藜芦醇预处理细胞1 h,可抑制P.e-LPS诱导的MIP-2 蛋白的表达,蛋白水平从（1805.33±67.54）ng/L降低到（813.82±47.21）ng/L,差异显著（P<0.01）。结论 P.e-LPS 可诱导成骨细胞表达和分泌MIP-2,白藜芦醇对P.e-LPS诱导的MIP-2蛋白分泌发挥抑制作用。     

AMPK/NF-κB参与牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导的人牙周韧带细胞的炎症反应

目的:探索牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide, PgLPS)刺激对人牙周韧带细胞(human periodontal ligament cells, hPDLCs)引起炎症反应的机制的影响。方法:体外培养hPDLCs,以PgLPS梯度浓度进行干预，CCK-8法检测细胞活性，qRT-PCR法检测细胞IL-6、IL-8、AMPK、NF-κB mRNA的表达水平，ELISA法检测上清IL-6、IL-8的浓度，Western Blot法检测细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)、核转录因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、核转录因子抑制蛋白α(inhibitor of NF-κBα,IκBα)的蛋白活性。结果:与对照组相比，PgLPS刺激能提高细胞IL-6、IL-8分泌，降低细胞p-AMPK表达，增强p-IκBα、p-NF-κB表达，且均呈现浓度依赖性(P<0.05);AMPK、NF-κB、IL-6和IL-8的核酸表达水平(mR...     

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对成骨细胞p38丝裂原活化蛋白激酶和细胞外信号调节激酶1、2表达的影响

目的:探讨牙髓卟啉单胞菌(P.e)脂多糖(LPS)对小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞ERK1/2和p38表达的影响。方法:用10μg/mL的P.e-LPS分别作用于成骨细胞0、5、15、30、60、180 min,应用蛋白质印迹技术检测成骨细胞内磷酸化ERK1/2和p38表达水平的变化。采用SPSS11.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果:10μg/mL的P.e-LPS刺激后,成骨细胞内p38迅速被活化,5～30 min为激活高峰(P<0.01),60 min后基本恢复至正常水平;ERK1/2磷酸化水平在P.e-LPS刺激5 min后明显增加,15 min后磷酸化水平最高(P<0.01),30 min后磷酸化水平下降。结论:P.e-LPS可诱导成骨细胞MC3T3-E1的p38和ERK1/2蛋白表达增强,Pe-LPS可能通过p38和ERK1/2对成骨细胞发挥作用。     

白藜芦醇减轻LPS诱导的牙周膜细胞损伤并抑制TLR4/NF-κB活化

目的:探究白藜芦醇(RES)对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜细胞(hPDLCs)损伤的保护作用.方法:体外培养并鉴定hPDLCs,将培养的hPDLCs随机分为5组:对照组、LPS(10 μg/ml)+RES(0、30、60、90tμmol/L)组,MTT法检测各组细胞增殖能力,ELISA检测各组细胞分泌TNF-α/IL-6水平,PCR和Western blot检测各组细胞TLR4/NF-κB mRNA和蛋白表达.结果:分离培养的hPDLCs抗波丝蛋白表达阳性,抗角蛋白表达阴性.与对照组比,LPS处理后细胞增殖能力明显降低,细胞分泌TNF-α/IL-6水平和TLR4/NF-κB mRNA和蛋白表达明显增加;30～90 μmol/L白藜芦醇预处理后,细胞增殖能力增加(P＜0.05),细胞分泌TNF-α/IL-6水平、TLR4/NF-κB mRNA以及蛋白表达则下调(P＜0.05),均呈现一定的浓度依赖性.结论:白藜芦醇可抑制TLR4/NF-κB活化并减轻LPS诱导的牙周膜细胞损伤.     

牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导小鼠成骨细胞表达白细胞介素-23

目的：探讨牙髓卟啉单胞菌（P．e）脂多糖（LPS）对小鼠成骨细胞 IL-23mRNA 和蛋白表达的影响,以及磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）信号通路是否参与了该过程。方法：采用 real-time PCR 和 Western blot 法检测 P．e LPS 诱导 MC3T3-E1细胞表达IL-23mRNA 和蛋白的情况,以及用 PI3K 信号通路抑制剂 LY294002预处理细胞后,IL-23mRNA 和蛋白表达的变化。结果：P．e LPS 刺激 MC3T3-E1细胞后,IL-23mRNA 的表达增加具有浓度依赖性和时间依赖性（P ＜0．05）,IL-23蛋白的表达增加具有时间依赖性（P ＜0．05）;LY294002预处理细胞后,P．e LPS 诱导的 IL-23mRNA 和蛋白的表达均显著降低（P ＜0．05）。结论：P．e LPS 能诱导小鼠成骨细胞表达 IL-23mRNA 和蛋白,PI3K 信号通路可能参与了此过程。     

PPARγ在脂多糖刺激牙周膜细胞中调控NF-κB信号通路的作用研究

目的:探讨PPARγ在牙周炎中调控作用机制。方法:组织块法培养健康人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells, hPDLCs)并鉴定。细胞处理分为以下4组,A组:对照组;B组:脂多糖(lipopolysaccharide,LPS )刺激组;C组:罗格列酮对照组,即二甲基亚砜(dimethylsulfoxide, DMSO)处理组;D组:罗格列酮处理组。免疫印迹法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor γ,PPARγ)和核因子κB(nuclear factor κB, NF-κB) p65胞核、胞浆及总蛋白含量,细胞免疫荧光检测NF-κB p65表达部位。实时定量PCR和酶联免疫法检测白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)RNA和蛋白表达。结果:LPS刺激下,胞核PPARγ表达降低NF-κB p65表达升高,相应的IL-1β和TNF-α RNA及蛋白表达量均升高。同时加入罗格列酮后,胞核PPARγ表达升高NF-κB p65表达降低,且IL-1β和TNF-α RNA及蛋白表达量均降低。差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:PPARγ通过下调NF-κB信号通路抑制脂多糖刺激下牙周膜细胞炎症因子RNA表达和蛋白分泌,进而调节牙周炎症反应。     

不同卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞CD14、TLRs表达的影响

目的:研究牙髓卟啉单胞菌(P.e)和牙龈卟啉单胞菌(P.g)脂多糖(LPS)对成骨细胞表达CD14和TLRs的影响。方法:10μg/mLP.e-LPS和P.g-LPS刺激MC3T3-E1细胞,应用RT-PCR检测不同时间(0、1、3、6、12及24h)后,细胞CD14、TLR2及TLR4 mRNA表达的变化;流式细胞术检测P.e-LPS和P.g-LPS作用24h后,细胞表面CD14、TLR2和TLR4的表达。采用SPSS11.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果:P.e-LPS作用1h后,MC3T3-E1细胞CD14和TLR4 mRNA的表达量明显增加,TLR2 mRNA的表达量随着P.e-LPS作用时间的增加并无明显变化。P.g-LPS作用于MC3T3-E1细胞后,其CD14、TLR2、TLR4 mRNA的表达量均明显增加;流式细胞术分析显示,P.e-LPS作用24h后,与未加LPS组相比,CD14和TLR4蛋白的表达量均显著增加,但TLR2蛋白的表达量无显著增加。P.g-LPS作用24h后,细胞CD14、TLR2、TLR4蛋白的表达均显著增加(P<0.05)。结论:P.e-LPS可能是通过CD14和TLR4受体对成骨细胞发挥作用,而P.g-LPS对成骨细胞的刺激作用则可能依赖于CD14、TLR2和TLR4受体。     

脂多糖刺激小鼠成骨细胞表达白细胞介素-23的实验研究

目的:研究小鼠成骨细胞能否在细菌毒素产物脂多糖刺激下表达白介素-23(IL-23).方法:分别以小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)及小鼠成骨前体细胞系MC3T3-El体外诱导为成骨细胞后,加以l0ng/ml LPS刺激,采用ELISA法检测IL-23的蛋白表达.并采用RT-PCR方法检测脂多糖刺激下小鼠BMSCs诱导成骨...     

PDTC对LPS刺激的人牙周韧带细胞的作用研究

目的:探讨核转录因子(nuclear factor kappa B,NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithioearba-mate,PDTC)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的人牙周韧带细胞的干预作用。方法:采用组织块法分离培养人牙周韧带细胞(human periodontal ligament cells,HPDLCs)。实验分为对照组与实验组,对照组细胞以含10μg/ml LPS的培养基培养;实验组分别以PDTC10、100、1 000μmol/L预处理细胞30 min后,加入含相同浓度LPS的培养基培养。ELISA检测细胞上清液中炎性细胞因子IL-1β、IL-8分泌量的改变。免疫荧光检测干预前后细胞内NF-κB的核转移改变。结果:PDTC抑制HPDLCs增殖,10μmol/L PDTC预处理对HPDLCs分泌IL-1β和IL-8无影响,其余2种浓度均可抑制IL-1β和IL-8的分泌,1 000μmol/L PDTC的抑制作用更强,与其它各组相比差异具有显著性(P<0.05)。免疫荧光显示PDTC预处理后细胞核NF-κB的表达明显减弱或消失。结论:PDTC可以抑制LPS刺激的HPDLCs分泌IL-1β与IL-8和细胞内NF-κB的核转移,说明NF-κB信号通路在牙周病的发生过程中具有重要作用,阻断该通路可能成为牙周病药物治疗的一种新策略。     

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞表达MCP-1的影响

目的: 探讨牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,P.endodontalis)脂多糖对小鼠成骨细胞表达单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein-1, MCP-1)mRNA和蛋白的影响,以及是否有p38丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路和核因子κB（Nuclear Factor-κB, NF-κB）信号通路的参与。方法: 以不同质量浓度的P.endodontalis脂多糖(0~50 mg/L)刺激MC3T3-E1细胞24 h;以20 mg/L P.endodontalis脂多糖作用于细胞不同时间（0~48 h）后,采用实时反转录PCR和酶联免疫吸附测定检测MCP-1mRNA和蛋白的表达。采用p38MAPK抑制剂SB203580和NF-κB抑制剂BAY11-7082分别预处理细胞1 h,检测其对P.endodontalis脂多糖刺激MC3T3-E1细胞后MCP-1mRNA表达的影响。采用SPSS 13.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验。结果: 不同质量浓度的P.endodontalis脂多糖（0~50 mg/L）刺激MC3T3-E1细胞后,MCP-1的mRNA表达和蛋白分泌呈剂量依赖性;观察时间内（0~48 h）,20 mg/L P.endodontalis脂多糖作用于MC3T3-E1细胞后,MCP-1 mRNA的表达和蛋白分泌呈时间依赖性;10 mol/L的SB203580和BAY11-7082分别预处理细胞1 h,可以降低P.endodontalis脂多糖诱导MCP-1 mRNA的表达,且SB203580的抑制作用强于BAY11-7082。结论: P.endodontalis脂多糖可能通过激活p38MAPK和NF-κB信号通路诱导成骨细胞表达MCP-1mRNA和蛋白。     

牙髓卟啉单胞菌内毒素对成骨细胞表达IL-1βmRNA和IL-6 mRNA的影响

目的:研究牙髓卟啉单胞菌(P.e)内毒素(LPS)对成骨细胞表达炎症因子白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的影响,探讨P.e-LPS参与根尖周病变牙槽骨吸收的病理机制.方法:应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),检测在不同浓度P.e-LPS (0～50μg/mL)和不同作用时间(0～24h),P.e-LPS诱导成骨细胞表达IL-1βmRNA和IL-6 mRNA的水平.应用SPSS11.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnett t检验.结果:当P.e-LPS浓度大于5μg/mL,作用1h后,与0μg/mL和0h组比较,IL-1βmRNA和IL-6 mRNA的表达水平均显著提高(P＜0.01),表明P.e-LPS诱导成骨细胞表达IL-1βmRNA和IL-6 mRNA具有剂量和时间依赖性.结论:P.e-LPS诱导成骨细胞表达IL-1βmRNA和IL-6 mRNA,是加速根尖病变的重要毒力因子.     

CD-14和Tool样受体在牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导成骨细胞白细胞介素6表达中的作用

目的 探讨CD-14和Tool样受体（Toll like receptors,TLR）在牙髓卟啉单胞菌（Porphyromonas endodontalis,Pe）脂多糖诱导小鼠成骨细胞白细胞介素6(IL-6)表达中的作用。方法用10 mg/L的Pe-脂多糖分别作用于小鼠成骨细胞MC3T3-E1不同时间,未加Pe-脂多糖的MC3T3-E1为空白对照组。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验检测细胞IL-6基因和蛋白的表达,RT-PCR和流式细胞术检测细胞表面CD-14、TLR-2及TLR-4基因和蛋白的表达变化。抗小鼠CD-14、TLR-2及TLR-4抗体预处理细胞后,采用RT-PCR法检测Pe-脂多糖诱导细胞IL-6mRNA表达的变化。应用SPSS 11.0统计软件对结果进行单因素方差分析Dunnett-t检验。结果Pe-脂多糖作用于细胞后,与空白对照组比较细胞IL-6 mRNA和蛋白的表达明显增加,6h时IL-6表达[(36.534±0.574) ng/L]显著高于空白对照组[(11.696±0.672)ng/L)],P＜O.01;空白对照组中CD-14和TLR-4 mRNA呈弱表达,CD-14和TLR-4的阳性细胞率分别为(39.038±3.131)％和( 11.438±0.385)％,加入Pe-脂多糖后CD-14和TLR-4 mRNA表达明显增加,CD-14和TLR-4的阳性细胞率分别增加至(62.407±1.800)％和(21.367±2.271)％,但TLR-2的表达未见明显变化;中和抗体实验证明CD-14或TLR-4抗体均可部分抑制细胞IL-6 mRNA的表达,TLR-2抗体则无此作用。结论Pe-脂多糖作用于成骨细胞MC3T3-E1诱导其炎症因子IL-6的产生依赖于CD-14和TLR-4受体,与TLR-2无关。     

IGF-1对体外培养髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的：：研究IGF-1对IL-1β诱导的颞下颌关节软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法：组织块培养法分离培养人髁突软骨细胞,通过细胞形态观察和免疫细胞化学染色进行鉴定。将培养的细胞分为：对照组、IL-1β组(10μg/L)、 IL-1β+IGF-1组(0、1、10、50、100μg/L), MTT法检测各组细胞增殖能力变化,流式细胞仪检测细胞周期分布以及细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞中凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-3以及p38 MAPK/NF-κB蛋白表达变化。结果：人髁突软骨细胞生长状态良好,甲苯胺蓝染色胞质呈深蓝色,II型胶原呈阳性表达。与对照组比较,IL-1β组细胞增殖能力、Bcl-2/Bax比值明显降低,早凋与晚凋细胞百分数、Caspase-3、p38 MAPK/NF-κB蛋白表达均明显增加;与IL-1β组比较,1~100μg/L IGF-1预处理组细胞增殖能力、Bcl-2/Bax比值逐渐上升(P<0.05),细胞凋亡率、Caspase-3、p38 MAPK /NF-κB蛋白表达则逐渐下调(P<0.05),均呈现一定的浓度依赖性。结论：IGF-1可抑制IL-1β诱导的髁突软骨细胞凋亡并减轻p38 MAPK/NF-κB的活化。     

古曲抑菌素A对脂多糖诱导人牙髓细胞炎症反应的影响

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）对脂多糖（LPS）诱导人牙髓细胞（hDPC）炎症反应的影响。 方法采用酶组织块法体外分离培养hPDC,按处理因素不同分为空白对照组、LPS组（1 μg/ml）、TSA（25或50 nmol/L预处理）+LPS（1 μg/ml）组,实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）和ELISA检测促炎因子白细胞介素（IL）-6、IL-8 mRNA及蛋白表达量,Western blot检测NF-κB信号通路关键信号蛋白IKKα/β、p65及IκB-α磷酸化程度的变化。IL-6、IL-8 mRNA及蛋白表达采用方差分析,NF-κB信号通路Western blot结果采用独立样本t检验。 结果TSA（25 nmol/L）预处理能显著降低LPS刺激引起的IL-6、IL-8 mRNA与蛋白表达（F_{IL-6 mRNA}= 22.538,P_{IL-6 mRNA}= 0.002;F_{IL-8 mRNA}= 20.253,P_{IL-8 mRNA}= 0.002;F_IL-6蛋白= 9.327,P_IL-6蛋白= 0.007;F_IL-8蛋白= 9.6894,P_IL-8蛋白= 0.011）;LPS刺激能激活NF-κB信号通路中关键蛋白p-IKKα/β、p-p65和p-IκB-α的表达,而TSA预处理可降低IKKα/β（t_{30 min}= 6.437,P_{30 min}= 0.003;t_{60 min}= 6.386,P_{60 min}= 0.003;t_{120 min}= 4.368,P_{120 min}= 0.012）和IκB-α磷酸化程度（t_{15 min}= 3.822,P_{15 min}= 0.019;t_{30 min}= 4.467,P_{30 min}= 0.011）。 结论TSA可显著抑制LPS刺激下hDPC促炎因子的分泌,同时降低IKKα/β和IκB-α磷酸化程度,提示TSA可能通过降低NF-κB信号通路活性抑制牙髓炎症发展。     

炎症因子通过核因子κB通路促进口腔鳞状细胞癌转移的体外研究

目的 探讨炎症因子与核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)信号转导通路在口腔鳞状细胞癌转移中的意义.方法 应用口腔鳞状细胞癌低转移细胞系Tca8113和高转移细胞系Tb为研究对象,通过蛋白质印迹法和荧光素酶报告基因法检测口腔鳞状细胞癌细胞系中NF-κB通路活性.用NF-κB抑制因子α(inhibitor of kappa B alpha,IκBa)抑制质粒第32、36位丝氨酸磷酸化位点被丙氨酸替代的质粒(pBabe-SR-IκBa)和NF-κB通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrolidinedithiecar bamate,PDTC)抑制信号转导通路活性,并用侵袭小室实验(TransweH)检测口腔鳞状细胞癌高转移系Tb细胞侵袭能力的变化.此外,通过酶联免疫吸附法检测pBabe-SR-IκBα和PDTC抑制信号转导通路后,肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白介素(IL)-1a、IL-6、IL-8和粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)等炎症因子的分泌.结果 蛋白质印迹法检测显示:高转移Tb细胞中磷酸化IκBα和磷酸化p65的表达量明显高于低转移细胞系Tea8113,分别为Tea8113细胞的3.19倍和6.81倍.荧光素酶(luciferase)报告基因结果显示,Tb细胞NF-κB的启动子活性为Tca8113的2.12倍(P<0.01),并对TNF-α更为敏感.转染pBabe-SR-IκBα和应用PDTC抑制NF-κB通路后,对Tb细胞的体外侵袭能力抑制率分别为21.9%和69.3%.此外,酶联免疫吸附试验法显示通路抑制后,TNF-α、IL-1α、IL-6、IL-8和GM-CSF等炎症因子的分泌也明显降低.结论 TNF-α、IL-1α、IL-6、IL-8和GM-CSF等炎症因子可能通过NF-κB通路促进口腔鳞状细胞癌细胞转移.     

转化生长因子β3对脂多糖诱导的成骨细胞中IL-6表达的影响

目的:探讨转化生长因子β3 (transforming growth factor β3,TGF-β3)对成骨细胞内炎性细胞因子IL-6表达的影响,及其发挥抗炎作用的机制.方法:20 μg/mL牙髓卟啉单胞菌脂多糖(lipopolysaccharide of Porphyromonas endodontalis,Pe-LPS)刺激人成骨肉瘤细胞系MG63,构建成骨细胞炎症模型.取不同浓度(5～20 ng/mL)的人重组蛋白生长因子TGF-β3和TGF-β1,分别与20 μg/mL P.e-LPS共同作用于MG63细胞24 h后,利用实时荧光定量PCR检测细胞内IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测培养液上清中IL-6的表达水平.以10 ng/mL TGF-β3预处理细胞30 ain后,再与20 μg/mL P.e-LPS共同作用20 min,Western印迹法检测细胞内ERK1/2蛋白磷酸化的表达.采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:实时荧光定量PCR结果显示,单独20 μg/mL P.e-LPS作用下,MG63细胞内IL-6的表达显著增高(P＜0.01);TGF-β1在低浓度条件下(5～10 ng/mL)对IL-6的表达无显著作用,仅在20 ng/mL时可显著抑制IL-6的表达(P＜0.05).不同浓度的TGF-β3与Re-LPS共同作用均可显著抑制IL-6的表达(P＜0.01).ELISA结果显示,10～20 ng/mL TGF-β3可在蛋白水平上对IL-6有显著抑制作用(P＜0.05).单独P.e-LPS作用时,可使MG63细胞内ERK1/2蛋白的磷酸化水平升高(P＜0.01);而当TGF-β3与P.e-LPS共同作用时,ERK1/2的磷酸化被抑制(P＜0.05).结论:相同浓度条件下,TGF-β3比TGF-β1对成骨细胞炎症的抑制作用更为显著,ERK1/2信号机制参与了TGF-β3的抗炎过程.