不同治法方药抑制肝癌H22荷瘤小鼠瘤细胞增殖的实验研究

目的:观察比较活血化瘀方、清热祛湿方和养阴柔肝方3种不同治法中药复方对H₂₂荷瘤小鼠瘤细胞增殖的影响。方法:采用皮下接种肝癌H_{22P<0.01),3个给药组之间两两比较差异亦具有统计学意义(P<0.01)。结论:3种治法中药复方在抑制瘤细胞增殖方面以活血化瘀方作用最为显著;3者均可以明显抑制肝癌细胞CyclinD1表达,推断3种方法能够抑制肝癌细胞增殖活性的分子机制,可能是通过降低肝癌细胞内CyclinD1的阳性表达,阻断CyclinD1-CDK4-Rb通路,降低细胞周期转换速度实现的。}     

珠子参抑制小鼠肝癌及诱导细胞凋亡的研究

目的：观察珠子参对小鼠H22肝癌的抑制作用及其机理。方法：建立小鼠肝癌实体瘤和腹水瘤模型，观察珠子参对荷瘤小鼠抑瘤率和生命延长率，放免法（RIA）检测实体瘤小鼠血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量，流式细胞仪技术（FCM）检测肿瘤细胞凋亡并进行周期分析。结果：珠子参能显著抑制肿瘤生长，抑瘤率达44．89％，且能明显延长荷瘤小鼠生命；珠子参组小鼠血清中TNF—α浓度高于正常对照组，而比模型对照组低（P〈0．05）；FCM分析显示，珠子参各组G0／G1期和S期细胞（%）减少，而G2／M期细胞和凋亡细胞（％）增加。结论：珠子参对H22肝癌小鼠具有良好的抑瘤作用，其作用机制可能与珠子参阻止G2／M期细胞转换而影响癌细胞在细胞周期中的进程，干扰S期DNA合成以及诱导小鼠肝癌细胞凋亡有关；此外珠子参能明显抑制荷瘤小鼠TNF—α水平的异常增高，使其维持在一定水平而发挥抗肿瘤、调节机体免疫力等作用。     

小黄蘑多糖对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用研究

目的 探讨小黄蘑多糖对小鼠肝癌H22移植性实体瘤的抑制作用及其机制.方法 将H22瘤株接种于小鼠,制备移植性实体瘤模型.将60只小鼠随机分为6组:对照组,模型组,环磷酰胺(200 mg/kg)阳性对照组,小黄蘑多糖低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)组,于小鼠接种H22瘤株第2天开始连续ig给药10d,每天1次.观察给药后小鼠体质量变化,计算肿瘤抑制率、胸腺及脾脏指数;测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-2(IL-2)、血管内皮生长因子(VEGF)和白蛋白(Alb)的水平;测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化物酶(CAT)活性以及还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)的量;测定白细胞数.结果 小黄蘑多糖抑瘤率高于30％;与环磷酰胺组相比,小黄蘑多糖各组显著提高小鼠体质量、胸腺指数以及IL-2和白细胞的水平,降低VEGF的水平,不同程度地提高肝组织中SOD、GSH-Px、CAT活性和GSH的量,降低MDA的量.结论 小黄蘑多糖对H22荷瘤小鼠有一定的抑瘤作用,其机制可能与通过提高机体的抗氧化能力、调节免疫功能、抑制肿瘤组织血管生成有关.     

川牛膝多糖对小鼠肝癌细胞H22抑制作用研究

观察川牛膝多糖对小鼠肝癌细胞H     

灵芪胶囊对H22荷瘤小鼠COX-2蛋白表达的影响

[目的]研究灵芪胶囊(LQC)的抗肿瘤作用的机制。[方法]以免疫组化方法检测荷瘤小鼠血管生成因子环氧化酶-2(COX-2)、表达的变化,研究LQC对肿瘤血管生成的抑制作用。[结果]LQC能够下调血管生长因子COX-2的表达而抑制肿瘤生长。[结论]LQC通过影响COX-2的表达,抑制肿瘤新生血管生成,发挥抗肿瘤作用。     

蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠肝癌细胞凋亡的影响

[目的]探讨醇溶性蟾蜍毒素对H22荷瘤小鼠肝癌细胞凋亡的影响。[方法]用乙醇溶解蟾蜍分泌物原浆,采用减压蒸馏等方法进一步部分分离纯化,获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物(EET),将其作用于H22荷瘤小鼠模型,计算肿瘤抑制率,应用光、电镜法观察H22肝癌细胞凋亡的变化。[结果]蟾蜍毒素组和氟脲嘧啶组的肿瘤抑制率分别是25.6%和30.8%(P<0.05),与对照组比较,肿瘤团块较小,细胞体积较小,异型性不明显,病理性核分裂较少,间质血管较少,坏死现象较轻。电镜下可见凋亡小体形成。[结论]蟾蜍毒素可通过诱导H22荷瘤小鼠肝癌细胞凋亡来达到抗肿瘤的作用。     

白花蛇舌草和半枝莲微粉配伍对小鼠H22肝癌细胞PCNA表达的影响

目的探讨白花蛇舌草和半枝莲微粉配伍对小鼠H22肝癌细胞PCNA表达的影响,初步探讨其抗H22肝癌的机理。方法建立H22肝癌移植性肿瘤小鼠模型,连续给药10 d后,取瘤称重,计算抑瘤率;用免疫组化法观察对小鼠H22肝癌细胞PCNA表达的影响;并比较白花蛇舌草和半枝莲配伍微粉与普通粉药效的差异。结果与模型对照组比较,白花蛇舌草和半枝莲配伍各组H22肿瘤均明显减小,抑瘤率均大于30%,PCNA表达显著减少。与普通粉组相比,微粉3组H22肿瘤重量和PCNA表达均明显减少;微粉1组无统计学差异。结论白花蛇舌草和半枝莲微粉配伍能够抑制小鼠H22肝癌移植瘤的生长,其机制可能与影响肿瘤细胞的周期,抑制细胞增殖有关。同等抑瘤效果时微粉约为普通粉用量的1/2。     

龙葵碱对H22荷瘤小鼠细胞膜流动性和膜蛋白水平的影响

目的观察龙葵碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性和膜蛋白水平的影响。方法采用荧光探针DPH标记法测定肿瘤细胞膜流动性，考马斯亮蓝法测定肿瘤细胞膜蛋白水平。结果龙葵碱可显著降低H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性，降低H22小鼠肿瘤细胞膜蛋白水平。结论龙葵碱是通过影响肿瘤细胞膜的流动性和肿瘤细胞膜上的蛋白水平恢复细胞的正常生理活性而达到抗肿瘤作用。     

芝麻素对肝癌H22细胞增殖及H22荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

目的观察芝麻提取物芝麻素对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响及其对H22荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用。方法用MTT法检测不同质量浓度的芝麻素对小鼠肝癌H22细胞体外增殖的影响;同时将移植H22瘤株的昆明种小鼠分成:模型组(生理盐水)、环磷酰胺(30 mg/kg)组、芝麻素高、低剂量(150、15 mg/kg)组、观察芝麻素对荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果芝麻素在体外对H22肝癌细胞的增殖有显著的抑制作用,以8、16、32μg/mL组在48 h的抑制率最显著;芝麻素在体内对H22肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用,芝麻素低剂量组的小鼠皮下瘤质量较模型组低(P<0.05),但仍比环磷酰胺组高(P<0.05),芝麻素高剂量组和模型组比较无显著差异(P>0.05)。结论芝麻素有明显抑制肝癌H22细胞增殖的作用。     

H22肝癌荷瘤小鼠辨证论治操作规程的研究

目的构建早期常见证候肝癌荷瘤小鼠的辨证论治及疗效评价的操作规程。方法采用小鼠计量化辨证方法,从大量荷瘤小鼠中筛选出邪毒壅盛、气虚、肿瘤居中等证候荷瘤小鼠,分为对照组与治疗组,对治疗组进行对症治疗;综合带瘤生存时间等计量化辨证指标,对辨证论治方案进行评价。结果构建起早期常见证候肝癌荷瘤小鼠的辨证论治及疗效评价的操作规程,观察到3种辨证论治方案在带瘤生存期及常见证候等方面的疗效差异。结论所构建的肝癌荷瘤小鼠的辨证论治及疗效评价的操作规程是可行的。     

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??OBJECTIVE To investigate the effects of Rhaponticum uniflorum extract (RUE) on angiogenesis and apoptosis of H₂₂ transplanted tumor tissue in mice. METHODS Mice bearing H₂₂ hepatoma cells were randomly assigned into 5 groups: model, high, medium and low dose RUE, and 5-fluorouracil (5-Fu) group. The intervention was lasted for 10 d. The pathological changes were detected with hematoxylin & eosin (HE) staining, the apoptosis of hepatoma cells were determined by DNA laddering method, the microvessel densities (MVD) were detected using immunohistochemical assay, and the protein expression of vascular endothelial growth factor (VEGF), vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR2) and hypoxia-inducible factor-1?? (HIF-1??) were detected by Western blot method. RESULTS RUE treatment reduced the cell proliferation, aggravated the necrosis of transplanted tumor tissue, reduced DNA fragmentation of H₂₂ hepatoma cells, decreased MVD of tumor tissue, and down-regulated the protein expression of VEGF, VEGFR2 and HIF-1?? of the transplanted tumor tissue, as compared with the model group. CONCLUSION RUE could exhibit anti-angiogenic and pro-apoptotic effects against H₂₂ hepatoma cells in mice, and its anti-angiogenic mechanism is probably related to down-regulation of VEGF, VEGFR2 and HIF-1?? proteins.     

荷H22肝癌阴虚证小鼠病证结合动物模型的研制

目的:建立荷H22肝癌阴虚证病证结合动物模型。方法:实验小鼠随机分成两组,病证模型组先用糖皮质激素法制备阴虚证模型,随后两组同时接种H22肝癌细胞悬液,完成造模。观察记录实验动物符合阴虚证的一般外在表现、体重、毛发情况、二便情况等指标,进行量化评价及分析,第11日处死小鼠,观察比较两组肿瘤生长情况。结果:阴虚病证模型组小鼠较病模组明显表现出阴虚症状,体重增长较病模组明显减慢,肿瘤生长较快。结论:建立了荷H22肝癌阴虚证小鼠的病证结合动物模型,为中医药防治肝癌研究提供平台。     

消癥散对荷H22移植性肝癌细胞小鼠VEGF、Cyclin-D1表达的影响

目的观察消癥散对荷H22移植性肝癌细胞小鼠的抑瘤作用及其机制。方法选择昆明种雄性小白鼠120只,造模成功实体瘤小鼠(60只),腹水瘤小鼠(60只),空白组(10只)。随机将实体瘤小鼠和腹水瘤小鼠分为模型组,消癥散低、中、高剂量组,5-氟脲嘧啶(5-Fu)组,5-Fu+消癥散中剂量组各6组,每组10只。接种H22肝癌细胞24h后按体重给药,每日1次,连续给药10天。实体瘤组小鼠停药24h后,称重并处死动物,剥取瘤块称重,计算肿瘤生长抑制率,采用免疫组化学法检测血管内皮生长因子(VEGF)和细胞周期蛋白D1(Cyclin-D1)表达水平。记录腹水瘤组小鼠生存天数,计算生命延长率。结果消癥散对各组实体瘤小鼠有明显的抑瘤作用,与模型组比较,除消癥散低剂量组外,其余各组差异均有统计学意义(P<0.01);消癥散能够降低瘤组织中VEGF、Cyclin-D1的表达水平,与模型组相比,除消癥散低剂量组外,其余各组差异均有统计学意义(P<0.01);消癥散能够延长腹水瘤小鼠的生存期,与模型组相比,消癥散中剂量组差异有统计学意义(P<0.05),5-Fu组和5-Fu+消癥散中剂量组差异有统计学意义(P<0.01)。结论消癥散对荷H22移植性肝癌细胞小鼠有抑瘤和延长生存期的作用,抑制肿瘤生长的机理可能与下调VEGF、Cyclin-D1的表达水平有关。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠H22肿瘤细胞凋亡及p53和Caspase-3基因表达的影响

目的 研究扶正抑瘤颗粒(FYK)对小鼠H22肿瘤细胞生长的抑制作用,及其对细胞凋亡和p53、Caspase-3基因表达的影响。方法 用体内实验观察FYK对H22瘤株的抑瘤率,流式细胞术测定细胞凋亡率和细胞周期,反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定野生型p53(Wtp53)和Caspase-3的mRNA表达情况。结果 12g／kg、24g／kg FYK均能显著抑制小鼠H22肿瘤细胞的生长,最高抑瘤率为51．24％(P<0．01)。流式细胞术检测表明,FYK显著提高H22肿瘤细胞的凋亡率,最高为15．84％(P<0．01);肿瘤细胞阻滞在G0／G1期,S期细胞比率降低;RT-PCR实验表明,FYK可显著上调p53和Caspase-3 mRNA的表达水平。结论 FYK能显著抑制小鼠H22肿瘤细胞生长,其抗肿瘤机制与诱导细胞凋亡,调控细胞周期,促进Wt p53与Caspase-3基因的表达有关。     

裴氏肝癌方对小鼠移植性肝癌H22作用的研究

目的:探讨中药裴氏肝癌方治疗原发性肝癌的作用。方法:将52只小鼠随机分为裴氏肝癌方高剂量组(56 g/kg)10只、裴氏肝癌方低剂量组(28 g/kg)10只、5-Fu组(0.02 g/kg)10只、复方斑蝥组(0.25 g/kg)10只及模型对照组12只。裴氏肝癌方两剂量组及复方斑蝥组按0.02 mL/g灌胃给药,5-Fu注射液按0.01 mL/g剂量腹腔注射给药,模型对照组以等容积的蒸馏水灌胃,1 d 1次,共11次。观察动物体质量等一般情况,检测血ALT、AST、TP、ALB及瘤重,计算抑瘤率、胸腺指数及脾脏指数。结果:裴氏肝癌方两剂量组体质量增加,但与模型对照组对比,差别无统计学意义。裴氏肝癌方高剂量组、5-Fu组瘤重与模型对照组对比,差别有统计学意义(依次为P<0.05,P<0.01)。裴氏肝癌方高剂量组动物血清ALT、AST较模型对照组降低,TP、ALB较模型对照组升高,其中AST及ALB与模型对照组对比,差别有统计学意义(P<0.01)。5-Fu组血清ALT、TP、ALB与模型对照组对比,差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。裴氏肝癌方高剂量组及5-Fu组胸腺指数与模型对照组对比,差别有统计学意义(P<0.01);各药物组的脾脏指数与模型对照组对比,差别均无统计学意义(P>0.05)。结论:裴氏肝癌方对荷瘤小鼠原发性肝癌有抑制作用。     

解氏肝癌2号方对肝癌H22荷瘤小鼠作用的研究

目的研究解氏肝癌2号方对肝癌H22荷瘤小鼠的抗肿瘤及免疫调节作用。方法建立H22肝癌小鼠模型,随机分为模型组、解氏肝癌2号方组、中药半枝莲组和白细胞介素-2(IL-2)组共4组,每组10只,并予第2天始给予相应药物灌胃。第15天处死小鼠,取出肿瘤,称取瘤质量,计算抑瘤率、胸腺指数、脾指数等指标,并通过免疫组化的方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达情况。结果 1解氏肝癌2号方组与IL-2组体质量增加更为明显。2解氏肝癌2号方组的抑瘤率与中药半枝莲组相仿,二者均显著高于IL-2组。3解氏肝癌2号方组与IL-2组的胸腺指数和脾脏指数无明显差异,均明显高于中药半枝莲组及模型组。4解氏肝癌2号方组Bcl-2水平与中药半枝莲组相仿,低于模型组和IL-2组,模型组最高;而Bax水平正好相反,解氏肝癌2号方组与中药半枝莲组均高于模型组和IL-2组,模型组最低。结论解氏肝癌2号方能明显改善小鼠的一般生活状态,增加小鼠体质量,对肿瘤有明显抑制作用,并且下调肝癌H22荷瘤小鼠的凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,上调Bax的表达,能够明显改善机体免疫功能,减轻恶性肿瘤对机体的损害,减轻病痛,使人体与癌肿长期共存,互不侵犯。本实验为临床"带瘤生存"理念提供了坚实的理论基础。     

白附子混悬液对H22荷瘤小鼠抗肿瘤作用的免疫调节机制研究

[目的]研究白附子混悬液对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用,探讨其抗肿瘤作用的免疫学机制。[方法]采用H22荷瘤小鼠模型为研究对象,用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测小鼠血清中白介素-2(IL-2)和白介素-4(IL-4)水平;用流式细胞术(FACS)法分析对CD4+,CD8+T细胞的调节作用。[结果]白附子混悬液能够上调荷瘤小鼠血清IL-2细胞因子的表达,降低IL-4水平,可以使CD4+T细胞表达升高,CD8+T细胞表达降低。[结论]白附子混悬液能够通过调节荷瘤机体异常免疫功能状态而发挥抗肿瘤作用。     

白芥子挥发油对小鼠肝癌H22移植性肿瘤的抑制作用及其机制研究

目的 探讨白芥子挥发油对肝癌H₂₂移植性肿瘤的抑制作用及其机制。方法 建立小鼠肝癌H₂₂移植性肿瘤模型。造模24 h后小鼠分成5组：模型组,环磷酰胺（25 mg/kg）阳性对照组,白芥子挥发油低、中、高剂量（20、40、80 mg/kg）组,采用腹腔给药或原位注射给药,观察白芥子挥发油对H₂₂荷瘤小鼠肿瘤质量、生存期的影响;HE染色法以及吖啶橙（AO）染色观察肿瘤细胞形态的变化;免疫组化法检测肿瘤细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果 白芥子挥发油显著延长H₂₂荷瘤小鼠生存期并抑制肿瘤生长（P＜0.01）;上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达。白芥子挥发油对H₂₂细胞的抑制作用呈良好的剂量相关性,但高剂量组毒副作用明显。结论 白芥子挥发油能够抑制H₂₂荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长,其机制可能与上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达,进而诱导细胞凋亡有关。     

人参皂甙Rg3对H22荷瘤小鼠免疫微环境的影响

[目的]探讨人参皂甙Rg3对H22荷瘤小鼠免疫微环境的影响。[方法]60只雌、雄昆明种小鼠随机分为生理盐水组(A组,5mL/kg)、华蟾素组(B组,5mL/kg)、低剂量人参皂苷Rg三组(C组,0.2mg/kg)、中剂量人参皂苷Rg3组(D组,1.0mg/kg)、高剂量人参皂苷Rg3组(E组,2.0mg/kg),每组12只,H22荷瘤模型建立后24h开始灌胃给药治疗,1次/d,连续8d,观察小鼠初始重量、处死重量、瘤体重量、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+等指标变化。[结果]各组荷瘤小鼠初始重量比较无统计学意义(P>0.05),处死重量、瘤体重量、B组、C组、D组、E组与A组比较分别比较差异均具有统计学意义(P<0.05);抑瘤率、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、存活小鼠生存时间,B组、C组、D组、E组均高于A组,生存时间以D组最长。[结论]不同剂量人参皂甙Rg3改善了H22荷瘤小鼠肿瘤所致的免疫抑制,其中以人参皂甙Rg3 1.0mg/kg剂量抑瘤效果最佳,小鼠生存时间最长,为临床应用提供了试验依据。     

蒺藜皂苷对H2O2诱导PC12细胞凋亡保护作用及其机制研究

目的探讨蒺藜皂苷(gross saponin of Tribulus terrestris,GSTT)对H2O2诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(pheochromocytoma cells,PC12)凋亡的保护作用及其机制。方法实验分为对照组、模型组及蒺藜皂苷高(GSTT1)、低(GSTT2)剂量组。用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax。结果与模型组比较蒺藜皂苷组随着剂量的增加PC12细胞存活率提高(P<0.001),凋亡比率下降(P<0.01),线粒体膜电位回升(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.05),而Bax的表达降低(P<0.05)。结论蒺藜皂苷可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制线粒体途径的细胞凋亡有关。