前房内连续注入1%甲基纤维素建立兔眼慢性高眼压模型

前房内连续注入１％甲基纤维素建立兔眼慢性高眼压模型湖南医科大学附属第二医院眼科贾莉君，蒋幼芹，吴振中，刘湘平由于直接给实验动物的前房内加压灌注生理盐水法可控制眼压升高的梯度和加压时间，不少作者用此法建立实验性急性高眼压模型，以研究视网膜、视乳头等组织...     

兔慢性长期性高眼压模型建立

目的 建立家兔长期稳定性慢性高眼压模型.方法 将14只兔随机分为A、B两组,每组7只兔(14只眼).A组把长3 mm、宽2 mm的一次性输液管片从角巩膜缘植入前房;B组向前房内注入玻璃酸钠0.2 ml,术后不同时段对两组高眼压模型进行观察.结果 A组兔眼眼压术后7 d开始升高,持续升高至实验结束(观察2个月),平均眼压(32±4.37)mm Hg,最高峰值(35±3.58)mm Hg,模型建立成功率92%;B组100%兔眼眼压升高,但只能持续1～2 d,出现周边角膜膨出、角膜变形等并发症;3 d时无1眼眼压升高.结论 兔角巩膜缘植入一次性输液管材料能建立慢性长期性高眼压模型.     

复方卡波姆溶液诱导慢性实验性兔高眼压模型研究现状

青光眼动物模型为青光眼的发病、治疗和预后的研究提供了良好的平台.由于兔源易于获得,兔眼房水外流通道与人相同,兔青光眼模型的应用研究较多.本文就复方卡波姆溶液诱导的慢性兔高眼压模型的研究现状做全面的综述如下.     

苯妥英钠对慢性高眼压兔视神经的保护作用

目的　观察苯妥英钠对慢性高眼压兔视网膜神经节细胞（ｒｅｔｉｎａｌｇａｎｇｌｉｏｎｃｅｌｌ,ＲＧＣ）及视神经的保护作用。方法　３０只新西兰白兔随机分为３组:高眼压组、高眼压治疗组与正常眼压组,每组１０只。每天高眼压治疗组给予苯妥英钠灌胃。高眼压造模成功后４周时摘除３组兔眼球标本分别做ＨＥ染色和ＴＵＮＥＬ标记,观察ＲＧＣ的细胞密度和凋亡细胞数量,用透射电子显微镜观察视网膜细胞凋亡情况。结果　节细胞层凋亡细胞:正常眼压组（０．４０±０．１５）×１０－２μｍ－２,高眼压组（３．４０±０．６２）×１０－２μｍ－２,高眼压治疗组（１．７５±０．２８）×１０－２ μｍ－２;内核层:正常眼压组（０．９５±０．２４）×１０－２ μｍ－２,高眼压组（１８．７０±２．４１）×１０－２μｍ－２,高眼压治疗组（８．７５±１．０３）×１０－２μｍ－２。高眼压组和高眼压治疗组与正常眼压组比较,ＲＧＣ密度减小、各层凋亡细胞数量增多（均为Ｐ＜０．０５）;高眼压治疗组与高眼压组比较,ＲＧＣ密度大、凋亡细胞数量少（均为Ｐ＜００５）。电镜下高眼压组与高眼压治疗组均观察到凋亡小体。结论　苯妥英钠对慢性高眼压ＲＧＣ和视神经有保护作用。     

慢性高眼压对兔眼视神经的影响

本实验对２２只（４４只眼）健康成年青紫蓝兔的视神经乳头，在持续不同时间的高眼压状态下，分别进行了光镜和电镜的观察。     

兔眼慢性高眼压下内核层细胞改变

目的　观察兔慢性高眼压下内核层细胞的改变。方法　 10只中国家兔 ,每只兔一眼前房注入 2 5 %甲基纤维素 0 2ml,另眼注射生理盐水 0 2ml作为对照眼 ,每周注射 1次。 4周后取眼球作光镜及电镜检查 ,观察神经节细胞及内核层细胞改变。结果　模型眼节细胞及内核层细胞出现变性、灶状坏死、数目减少。对照眼节细胞平均 (17 90±2 33) /10格 ,内核层细胞 (14 5 0± 2 12 ) /格 ;模型眼节细胞 (8 0 0± 1 6 3) /10格 ,内核层细胞 (11 10± 1 79) /格 ,模型眼和对照眼的节细胞及内核层细胞计数均有明显的差异。结论　兔眼内核层细胞在慢性高眼压下出现变性、死亡、数目减少。     

慢性高眼压条件下兔眼视盘及神经纤维层的改变

目的探讨慢性持续性高眼压条件下，兔眼视盘结构和神经纤维层的异常变化。方法12只新西兰白兔随机分为对照组和高眼压组；高眼压组兔眼前房注入0．3％复方卡波姆溶液制作成慢性高眼压模型，对照组仅作前房穿刺。1、2、3、4周时用海德堡视网膜断层扫描仪(Heidelberg retinal tomography，HRT)测量兔眼的视盘面积、盘沿面积、神经纤维层(retinal nerve fiber layer，RNFL)厚度。结果对照眼和模型眼间各参数差异有非常显著性(P值分别为0．001，0．000，0．1300)，沿盘面积和神经纤维层厚度随高眼压持续时间的延长有进行性降低的趋势(P值分别0．001、0．000)。结论HRT可以较早期、准确、动态的检测慢性高眼压视乳头和神经纤维层的变化。     

前房不同部位注射复方卡波姆诱导兔慢性青光眼模型的实验研究

目的 通过评价前房不同部位注射复方卡波姆建立兔慢性青光眼模型的效果,探讨此模型的最佳注药部位.方法 将20只兔随机分为模型Ⅰ、Ⅱ组,右眼为模型眼,分别用复方卡波姆制作慢性高眼压模型.模型Ⅰ组将复方卡波姆缓慢注射在前房瞳孔区,模型Ⅱ组缓慢注入周边房角.左眼为对照眼,前房内均注入生理盐水.兔眼在造模前测量3日眼压值作为基础眼压,造模后2次/d测量,仔细观察眼压的变化规律及持续时间,并对诱发的高眼压模型观察8周.直接检眼镜观察视盘凹陷,光镜观察视网膜的组织形态学改变,视网膜各层组织厚度变化并进行图像分析,评价2组模型的造模效果.结果 Ⅰ组平均眼压(27.2±1.2)mmHg,持续时间为25～53d,Ⅱ组平均眼压(39.6±2.4)mmHg,持续时间为22～28d.光镜下显示模型眼视乳头凹陷均扩大和加深,2组视网膜神经纤维层均变薄,Ⅱ组比Ⅰ组变薄更明显,两组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 复方卡波姆诱导兔慢性青光眼模型时注射在前房瞳孔区比周边房角所建立的模型效果更理想,更易于控制和实用.     

金丝桃素对慢性高眼压兔视网膜神经节细胞保护作用的组织学观察

目的:探索金丝桃素对慢性高眼压兔视网膜神经节细胞的影响.方法:取成年家兔20只,后房内注射a-糜蛋白酶,建立兔慢性高眼压模型.造模成功的兔眼在10d后玻璃体内分别注入金丝桃素0.1mL或生理盐水0.1mL,1次/wk,连续2wk.另用4只正常兔做空白对照.最后光镜电镜观察视网膜神经节细胞的结构变化及视网膜内层平均厚度的变化.结果:生理盐水对照组节细胞数量减少,部分严重变性,染色质边集,线粒体、内质网等细胞器严重肿胀,视网膜内层平均厚度变薄.金丝桃素治疗组节细胞形态结构较生理盐水对照组损伤轻微,节细胞数量稍有减少,部分变性,染色质边集,线粒体、内质网肿胀较轻.视网膜内层平均厚度轻度变薄,与生理盐水对照组相比有显著性差异(P＜0.01).结论:金丝桃素作为一种特异性的蛋白激酶C抑制剂,对慢性高眼压下兔视网膜神经节细胞有保护作用.     

脑神经生长素治疗兔急性高眼压视神经损伤

目的 观察脑神经生长素(cranial nerve growthine,CNG)对兔眼急性高眼压视神经损伤的治疗作用。 方法 健康成年新西兰大耳白兔(体重2.5～3.0 kg)30只,随机分为5组,每组6只,一只眼前房内灌注生理盐水使眼压升高到50 mm Hg(1 mm Hg＝0.133 kPa),并维持6 h,另一只眼为自身对照眼。每组3只兔制成高眼压模型眼后肌肉注射CNG0.2 ml/d作为治疗组,其余3只兔为实验组。5组兔分别于制造模型眼后1、3、7、15、30 d处死。用辣根过氧化物酶(horserdish peroxidase,HRP)组织化学染色法和透射电镜技术观察CNG对急性高眼压视神经顺行轴浆运输和超微结构的影响,定量分析CNG的药物疗效。 结果 7 d后,治疗组HRP反应物积分光密度(39.79±2.29)较实验组(25.17±1.03)明显增多,差异有显著性意义(P＜0.01);治疗组视神经轴突变性较实验组轻,15 d后,部分轴突结构恢复正常,线粒体增多,30 d后,轴突结构基本正常。 结论 CNG可改善急性高压眼视神经轴浆运输状况,促进视神经结构的恢复。 (中华眼底病杂志,2000,16:88-90)     

金丝桃素对兔慢性高眼压视网膜谷氨酸含量的影响

目的研究蛋白激酶C（PKC）特异性抑制剂金丝桃素（hypericin）对兔慢性高眼压视网膜谷氨酸含量的影响。方法取29只成年家兔，后房内注射α-糜蛋白酶，建立兔慢性高眼压模型，以眼压≥30mmHg为造模成功。造模成功兔眼10d后玻璃体内分别注入0．1ml金丝桃素或生理盐水。另用3只正常兔作空白对照。用高效液相色谱法测定不同时间点的视网膜谷氨酸含量。结果正常免视网膜谷氨酸含量为（1．71×10^-5±0．23×10^-5）mmol／g，慢性高眼压免视网膜谷氨酸含量比正常免显著升高（P〈0．05）。慢性高眼压兔金丝桃素处理4d后视网膜谷氨酸含量为（8．53×10^-5±1．06×10^-5）mmol／g．同期生理盐水处理后为（11．31×10^-5±0．10×10^-5）mmol／g，二者差异有统计学意义（P〈0．05）。结论慢性高眼压兔视网膜谷氨酸含量显著升高，可能与视网膜神经节细胞的损伤有关。金丝桃素玻璃体腔注射能显著降低免慢性高眼压模型视网膜谷氨酸含量。     

米诺环素对兔慢性高眼压视网膜组织损伤的保护作用

目的 探索米诺环素对兔慢性高眼压下视网膜组织损伤的保护作用.方法 成年家兔48只,随机分为正常组、高眼压组和高眼压治疗组,后2组每只兔右眼前房内注射3g/L复方卡波姆溶液0.1mL,造慢性高眼压模型.造模成功后,治疗组口服米诺环素胶囊50mg/(kg·d).每周相同时间点测眼压,第28d对所有动物视网膜相应部位行光学相干断层扫描(OCT)后处死各组动物,检测视网膜超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量,并进行组间比较分析.结果 后两组右眼比较,各时间点眼压差异无统计学意义(P＞0.05).治疗组OCT检查法测得的视网膜厚度及SOD值明显高于高眼压组;NO和MDA明显低于高眼压组(P＜0.05).结论 米诺环素可以维持慢性高眼压作用下的视网膜厚度,调控SOD、NO、MDA对慢性高眼压下兔视网膜组织起到保护作用.

Abstract：

Objective To observe the protective effect of Minocycline in chronic ocular hypertenstion models.Methods Forty-eight rabbits were randomly divided into three groups:control,chronic ocular hypertension,and Minocycline group.The right eye of chronic ocular hypertension and Minocycline group were used to build chronic ocular hypertension model by posterior chamber injection in right eye of 0.l ml of 3g/L Carbomer solution.After modeling,Minocycline group rabbits took Minocycline every day 50mg/kg.The intraocular pressure (IOP) was monitored every week at the same time point.The retinal thickness was measured by OCT at 28 days after feed the medicine.Then the animals were sacrificed.The contents of malondiadehyde (MDA),superoxide dismutase (SOD) and NO in retina were assayed and compared among groups.Result The IOP in chronic ocular hypertension,and Minocycline group increased and they had no obvious difference (P ＞0.05).The retinal thickness and the level of SOD in retinal tissue in chronic ocular hypertension group was markedly lower than that in Minocycline group (P ＜0.05),the content of MDA and NO were obviously higher than that in Minocycline group (P ＜0.05).Conclusions Minocycline can protect retinal neurons by maintaining regulating retinal thickness and production of SOD,MDA,NO in chronic ocular hypertension rabbits model.     

MK-801对大鼠慢性高眼压视网膜神经节细胞的保护作用

目的：探讨MK-801对大鼠慢性高眼压视网膜神经节细胞(retinal ganglial cells, RGC)的保护作用。 方法：制备SD大鼠慢性高眼压模型,36只SD大鼠随机分为空白对照组、慢性高眼压＋生理盐水对照组、慢性高眼压＋MK-801处理组,各组12 只。观察并比较各组大鼠在不同时间点（处理后1, 4, 7和10d）谷氨酸含量、视网膜总厚度和内层厚度、RGC数目及RGC凋亡情况。 结果：在各时间点,慢性高眼压大鼠（MK-801处理组和生理盐水对照组）视网膜谷氨酸含量均较空白对照组高（P<0.05）; MK-801处理组视网膜谷氨酸含量比同期生理盐水对照组明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）。HE染色表明MK-801处理组和空白对照组视网膜总厚度和内层厚度均大于生理盐水对照组（P＜0.05）,RGC数目高于生理盐水对照组（P＜0.05）。MK-801处理组RGC 层凋亡阳性细胞的表达少于生理盐水对照组。 结论：MK-801可通过阻断谷氨酸介导的神经毒性作用,对慢性高眼压RGC起到保护作用。     

佛司可林类似物激动腺苷酸环化酶及抑制免高眼压探讨

目的：从滇产毛喉鞘蕊花植物中提取到3个佛司可林类似物,即异佛司可林、去酰基佛司可林、1－乙酰基佛司可林,体外测定它们激动腺苷酸环化酶活性,并观察去酰基佛司可林及1－乙酰基佛司可林对水负荷兔高眼压的影响。方法：体外测定激动腺苷酸环化酶活性用蛋白质结合放免法、气动式眼压计察兔眼压。结果：异佛司可林体外激动腺苷酸环化酶活性与佛司可林相当,去酰基佛司林林稍弱,1－乙酰基佛司可林无活性。1％去酰基佛司可林及1－乙酰基佛司可林滴眼液滴兔眼,能抑制水负荷造成的兔高眼压,抑制率最高分别达6.0％及10.9％,作用持续至少3h。结论：研究表明异佛司可林及去酰基佛司可林具有体外激动腺苷酸环化酶活性的作用,而去酰基佛司可林及1－乙酰基佛司可林具有抑制水负荷兔高眼压的作用。     

Experimental reactivation of ocular herpes simplex in rabbits

Latent herpes simplex virus (HSV) is known to reside in the trigeminal ganglia. Our studies show that the temporay retrobulbar disruption of trigeminal nerve function in chronically infected animals caused a striking decrease in the number of positive HSV cultures obtained during the 20 weeks immediately following surgery. We found that the stereotaxic interruption of intracranial trigeminal nerve function prior to initial HSV infection dramatically reduced the incidence of peripheral recurrence of HSV. Stereotaxic stimulation of the trigeminal ganglion in chronically infected animals produced a significant increase in positive cultures within two days. But, direct neurosurgical stimulation of the trigeminal ganglion proved strikingly effective, producing 83% positive cultures at the eye within 48 hours of operation. These studies further substantiate the premise that the trigeminal ganglion serves as a reservoir for latent ocular HSV in rabbits. They also suggest that the transmission of latent HSV from the trigeminal ganglion to its infectious form in the peripheral ocular tissues somehow involves the trigeminal nerve.     

Pattern electroretinograms in ocular hypertension

The authors recorded pattern electroretinograms at different spatial frequencies in 16 patients affected with ocular hypertension. In 12 of these subjects the electroretinograms dropped in amplitude around 2 cycles/degree. The authors attributed this finding to ocular hypertension, hypothesizing ischemic damage at the head of the optic nerve with consequent fiber atrophy and degeneration of ganglion cells.     

金丝桃素对兔急性高眼压视网膜的保护作用

目的 探讨蛋白激酶C抑制剂金丝桃素对兔急性高眼压视网膜谷氨酸含量的影响以及对视网膜的保护作用.方法 将新西兰大白兔随机分成处理组、对照组和正常组.处理组向玻璃体腔内注射0.1 mL的金丝桃素,对照组向玻璃体腔内注射0.1 mL生理盐水,48 h后经前房灌注升高眼压达100 mmHg(1 kPa=7.5 mmHg),持续90 min,24 h后取材.正常组不做上述处理直接取材.高效液相色谱法检测视网膜谷氨酸含量;光镜、电镜观察视网膜超微结构的变化,并采用医学图像分析系统计数视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGC)、测量视网膜总厚度及内层厚度;TUNEL法检测视网膜细胞的凋亡.结果 处理组、对照组和正常组视网膜谷氨酸含量分别为(56.6±2.1)×10-6 mmol·g-1、(84.1±2.7)×10-6 mmol·g-1和(17.1±2.3)×10-6 mmol·g-1,处理组视网膜谷氨酸含量明显低于对照组(P＜0.05);3组长450 μm视网膜片段的RGC数分别为(22.30±0.83)、(15.50±0.56)和(25.50±0.67),处理组和正常组RGC数均明显高于对照组(P＜0.05),而RGC层及内核层内凋亡的细胞数明显少于对照组.结论 金丝桃素能减缓兔急性高眼压视网膜谷氨酸水平的升高、减轻RGC的凋亡,对视网膜具有一定的保护作用.     

金丝桃素对兔急性高眼压视网膜谷氨酸含量的影响

目的:探讨蛋白激酶C抑制剂金丝桃素对兔急性高眼压视网膜谷氨酸含量的影响。方法:新西兰大白兔35只,随机挑选3只为空白对照组,16只为金丝桃素处理组、16只为生理盐水对照组。分别向玻璃体腔内注射0.1mL的金丝桃素(金丝桃素处理组)和生理盐水(生理盐水对照组),并分别于12,24,48h和72h后经前房灌注升高眼压达100mmHg(1kPa=7.5mmHg),持续90min,24h后取材。用高效液相色谱法测定不同时间点的视网膜谷氨酸含量。结果:急性高眼压兔视网膜谷氨酸含量比正常兔显著升高(P<0.05)。急性高眼压兔金丝桃素预处理48h后视网膜谷氨酸含量最低,为(5.66±0.21)×10-5mmol/g,同期生理盐水对照后为(8.41±0.27)×10-5mmol/g,二者差异有显著性(P<0.05)。结论:金丝桃素玻璃体腔注射能降低兔急性高眼压视网膜谷氨酸含量,对视网膜的有一定的保护作用。     

两种慢性高眼压大鼠模型视网膜结构和眼压变化的评估

目的 评估两种慢性高眼压大鼠模型的升眼压效果和视网膜结构的改变.方法 分别通过前房内注射微珠(微珠组)和结扎3支巩膜上静脉(结扎组)的方法制作两种慢性高眼压大鼠模型(每组6只).使用TonoPen眼压计测量大鼠眼压,模型制作当天及其后每周测量大鼠眼压,大鼠右眼为实验眼,左眼为对照眼(假手术眼).采用荧光金上丘逆标的方法标记视网膜神经节细胞并计数;使用免疫荧光标记的方法观察大鼠视网膜结构的改变.结果 造模后1-8周微球组和结扎组大鼠眼压均升高;其中结扎组眼压为(27.20±1.83) mmHg(1 kPa=7.5 mmHg),其对照眼眼压为(19.80±1.35) mmHg(P=0.001,n=6);微珠组眼压为(27.40±1.88) mmHg,其对照眼眼压为(19.40±1.00) mmHg(P=0.000,n=6).造模后8周,巩膜上静脉结扎组视网膜神经节细胞丢失37.9％、39.6％和33.5％(均为P=O.000,n=6),前房内注射微珠组丢失37.3％、39.4％和32.3％(均为P=0.000,n=6),两组视网膜神经节细胞的丢失数量比较差异均无统计学意义(P =0.855、0.949、0.634,n=6).高眼压模型8周后,相较于对照组,微珠组和结扎组视网膜神经节细胞核数量均有明显减少,组织厚度变薄,但两组间差异无统计学意义[对照组厚度(7.32±0.39) μm,结扎组厚度(4.97±0.33)μm,微珠组厚度(5.00 ±0.31) μm].前房内注射微珠组在部分组织切片可发现微珠污染.结论 巩膜上静脉结扎和前房内注射微珠均可以使大鼠眼压稳定增高.巩膜上静脉结扎具有实施方便和价格低的优势,并且没有微珠污染的缺点.