SARS病毒基因检测结果与患者病情、病程和体液免疫的关系研究

目的:研究严重急性呼吸综合征患者的病情、病程和特异性抗体产生对SARS病毒基因阳性检出率的影响.方法:采用巢式反转录PCR检测健康人,发烧非SARS患者,不同时期和不同病情SARS患者以及存不存在特异性抗体的SARS患者痰标本中的SARS病毒核酸即RNA.结果:巢式RT-PCR检测SARS患者痰标本中的SARS病毒RNA的敏感度为60.0 %.6 d～10 d组阳性检出率最高,为100 %,高于11 d～25 d组,而11 d～25 d组的阳性检出率又高于＞25 d组(P＜0.01);病情轻组比病情重组的阳性检出率高(P＜0.05);抗体阴性组比抗体阳性组检出率高(P＜0.05).结论:SARS病毒基因检测阳性率在轻病情组比重病情组高,住院时间短组比住院时间长组高,血清特异性抗体阴性组比阳性组高.     

SARS病毒基因和特异性抗体检测效果评估

目的 :评估严重急性呼吸综合征 (SARS)病毒基因检测和特异性抗体检测效果。方法 :采用巢式反转录PCR检测健康人、普通发热患者、不同时期 SARS患者痰标本中的 SARS病毒核酸即 RNA;采用酶联免疫吸附试验(EL ISA)法检测上述几组血清标本中的特异性抗体 Ig G和 Ig M。结果 :SARS患者住院 6 d～ 5 7d期间 ,采用巢式 RT-PCR检测痰 SARS病毒基因 ,5 6例患者中 34例阳性 ,阳性率 6 0 .7% ;而采用间接 EL ISA检测血清抗 SARS病毒抗体 ,5 6例患者中 32例阳性 ,阳性率为 5 7.1%。两种方法均阳性的有 15例 ,均阴性的有 6例。2种病原学诊断方法检测2 0例正常人和 15例发热非 SARS患者 ,结果均为阴性。住院 6 d～ 13d组 (92 .3% )巢式 RT- PCR基因阳性率明显高于 EL ISA特异性抗体阳性率 (7.7% ) ;住院 >35 d组巢式 RT- PCR基因阳性率 (36 .8% )则明显低于 EL ISA特异性抗体阳性率 (94 .7% ) (P<0 .0 1)。结论 :痰中 SARS病毒基因检测可用于 SARS的早期诊断 ,这对于提前确诊和治疗SARS患者 ,以及尽早排除疑似病例具有非常关键和现实的意义。血清特异性抗体检测可用于流行病学调查 ,但对SARS早期诊断和鉴别没有意义。     

SARS病毒基因和特异性抗体检测效果评估

目的:评估严重急性呼吸综合征(SARS)病毒基因检测和特异性抗体检测效果.方法:采用巢式反转录PCR检测健康人、普通发热患者、不同时期SARS患者痰标本中的SARS病毒核酸即RNA;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上述几组血清标本中的特异性抗体IgG和IgM.结果:SARS患者住院6 d～57 d期间,采用巢式RT-PCR检测痰SARS病毒基因,56例患者中34例阳性,阳性率60.7 %;而采用间接ELISA检测血清抗SARS病毒抗体,56例患者中32例阳性,阳性率为57.1 %.两种方法均阳性的有15例,均阴性的有6例.2种病原学诊断方法检测20例正常人和15例发热非SARS患者,结果均为阴性.住院6 d～13 d组(92.3 %)巢式RT-PCR基因阳性率明显高于ELISA特异性抗体阳性率(7.7 %);住院>35 d组巢式RT-PCR基因阳性率(36.8 %)则明显低于ELISA特异性抗体阳性率(94.7 %)(P<0.01).结论:痰中SARS病毒基因检测可用于SARS的早期诊断,这对于提前确诊和治疗SARS患者,以及尽早排除疑似病例具有非常关键和现实的意义.血清特异性抗体检测可用于流行病学调查,但对SARS早期诊断和鉴别没有意义.     

严重急性呼吸综合征病毒基因检测和特异性抗体检测的诊断意义分析

目的探讨严重急性呼吸综合征病毒基因检测和特异性抗体检测的诊断意义和价值。方法采用巢式反转录PCR和ELISA法分别检测健康人、普通发热患者、SARS密切接触医务人员及不同时期SARS患者痰标本中SARS病毒核酸和血清标本中特异性抗体IgG和IgM。结果SARS患者住院1～58d期间,采用巢式RT-PCR检测痰SARS病毒基因,52例患者中33例阳性,阳性率63.5%;而采用间接ELISA检测血清抗SARS病毒抗体,52例患者中30例阳性,阳性率为57.7%。2种方法均阳性的有15例,均阴性的有6例。2种病原学诊断方法检测20例正常人、15例发热非SARS患者和20例SARS密切接触医务人员,结果均为阴性。住院1～13d组(92.9%)巢式RT-PCR基因阳性率明显高于ELISA特异性抗体阳性率(7.1%);住院37～58d组巢式RT-PCR基因阳性率(47.4%)则明显低于ELISA特异性抗体阳性率(94.7%)(P<0.01)。结论痰中SARS病毒基因检测可用于SARS的早期诊断,这对于提前确诊和治疗SARS患者,尽早排除疑似病例具有非常关键和现实的意义。血清特异性抗体检测可用于流行病学调查,但对SARS早期诊断和鉴别没有意义。     

SARS病毒基因检测结果与患者病情关系的研究

1　材料和方法1.1　痰标本　留取 2 0例健康人 ,15例发烧非SARS患者和 72例不同病情SARS患者痰标本 ,用生理盐水稀释后 ,取5ml放入无菌管中 ,保存于 - 2 0℃。标本使用前置 95℃水浴中灭活 0 .5h ,才可用于RNA提取。1.2　试剂　本试验使用湖州数康生物科技有限公司提供的非典型肺炎病毒检测试剂盒 (巢式RT PCR) ,批号 0 30 5 0 1。PCR扩增仪型号为TC - 2 5 H。1.3　方法　检测 2 0例健康人 ,15例发烧非SARS患者和72例SARS患者痰标本中SARS病毒RNA。操作步骤详见试剂盒说明书。1.4　SARS患者病情诊断标准　①轻 :一般情况…     

多重巢式和定量PCR联合应用提高SARS病毒检测率

目的寻求一种可靠、可行的对急性严重呼吸道综合征病毒的早期诊断方法.方法应用多重巢式PCR联合荧光实时定量方法,对广州地区91份确诊和疑似病例标本、25份健康志愿者标本同时进行检测.结果25份健康志愿者标本经两种方法检测均为阴性.91份确诊和疑似病例标本经多重巢式PCR方法检测,阳性标本数53例,总阳性检测率58.24%;荧光实时定量PCR检测阳性标本数68例,阳性检出率74.73%;两种方法联合,阳性标本数76例,阳性检出率83.52%.结论多重巢式PCR联合荧光实时定量方法可进一步提高SARS病毒的阳性检出率,也为今后应对可能发生的其它突发性传染病病毒的检测提供分子诊断基础.     

多重巢式和定量PCR联合应用提高SARS病毒检测率

目的寻求一种可靠、可行的对急性严重呼吸道综合征病毒的早期诊断方法。方法应用多重巢式PCR联合荧光实时定量方法，对广州地区91份确诊和疑似病例标本、25份健康志愿者标本同时进行检测。结果25份健康志愿者标本经两种方法检测均为阴性。91份确诊和疑似病例标本经多重巢式PCR方法检测，阳性标本数53例，总阳性检测率58．24％；荧光实时定量PCR检测阳性标本数68例，阳性检出率74．73％；两种方法联合，阳性标本数76例，阳性检出率83．52％。结论多重巢式PCR联合荧光实时定量方法可进一步提高SARS病毒的阳性检出率，也为今后应对可能发生的其它突发性传染病病毒的检测提供分子诊断基础。     

广东地区SARS标本检测方法的对比研究

目的比较和评价严重急性呼吸综合征的检测方法。方法采用巢式RT-PCR和实时荧光定量PCR检测病人咽痰标本，采用ELISA方法检测血清IgG抗体，同时采用细胞培养技术对咽痰标本进行病毒分离，并对检测结果进行统计学分析。结果两种RT-PCR检测结果完全一致；巢式RT-PCR与荧光定量PCR检测比较，两种检测方法之间的吻合度较强，检测结果基本一致；比较PCR方法和ELISA方法检测病毒基因和IgG抗体，结果发现PCR方法与ELISA方法之间的吻合度很弱，两种方法对于临床诊断具有互补性；采用细胞培养(Vero-E6细胞株)方法，分离了13株SARS-CoV毒株。结论采用巢式RT-PCR和实时荧光定量PCR、ELISA IgG抗体检测和细胞培养技术对于SARS临床诊断、研究、预防和控制具有重要意义，目前的诊断技术已稳定可靠；但确诊周期过长，同时须防止标本污染和实验室污染。     

丙肝病毒核心抗原的检测在诊断丙肝中的意义

目的：通过分别检测丙肝病毒抗体（HCV-Ab）、丙肝病毒核心抗原（HCV-cAg）和定量检测HCV-RNA,探究丙肝病毒核心抗原检测对于丙型肝炎诊断的意义。方法对36例丙肝抗体阳性患者和120例丙肝抗体阴性患者同时检测HCV-Ab、HCV-cAg和HCV-RNA。丙肝抗体检测采用间接ELISA法,丙肝核心抗原检测采用双抗体夹心ELISA法,丙肝HCV-RNA检测采用荧光PCR法定量检测。结果36例丙肝抗体阳性组中,HCV-cAg阳性28例,HCV-RNA阳性25例。120例丙肝抗体阴性的门诊肝炎患者中HCV-cAg阳性有2例,HCV-RNA阳性有1例。结论 HCV-cAg检测可以缩短HCV抗体检测窗口期,特异性高,操作简便,可将二者联合起来,提高丙型肝炎病毒的检出率及准确度。     

血清学方法检测SARS病毒抗体的效果比较

目的比较血清学方法(间接ELISA法和双抗原夹心ELISA法)对严重急性呼吸综合征(SARS)患者特异性抗体的检出情况。方法采用间接法和双抗原夹心法分别检测健康人、肺炎患者、肺结核患者、SARS密切接触医务人员和不同时期的SARS患者血清中的特异性抗体水平。结果双抗原夹心法的阳性检出率为64．4％。间接法的阳性检出率为57．5％。双抗原夹心法检测92例健康人有4例阳性，38例SARS密切接触医务人员有2例阳性，而间接法检测健康人和SARS密切接触医务人员均为阴性。结论两种方法检测抗SARS病毒特异性抗体具有较高的一致性。间接法检测SARS特异性抗体的特异性好于双抗原夹心法。     

反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒

目的 探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法 对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA，用巢式PCR外侧下游引物进行反转录，以反转录产物为模板，进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMDl8-T载体后进行测序鉴定。结果 被检样品扩增出特异片段，经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒。Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异。结论 反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列，证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法。     

反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒

目的探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA,用巢式PCR外侧下游引物进行反转录,以反转录产物为模板,进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行测序鉴定。结果被检样品扩增出特异片段,经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒。Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异。结论反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列,证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法。     

SARS冠状病毒多聚酶基因临床检测方法的建立

目的 分析SARS冠状病毒广东株多聚酶基因片段的异质性。建立RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法，为SARS的快速诊断提供依据。方法 合成针对SARS冠状病毒多聚酶基因区段的特异性引物，从广东省SARS病人及疑似病人标本中提取RNA，经反转录和巢氏PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析，并将序列与SARS冠状病毒和其他已知冠状病毒进行同源性分析。结果 从多例SARS病人痰、咽拭子或血液标本中得到RT-PCR阳性片段，随机选取其中8例经克隆和DNA序列分析证实均为SARS冠状病毒序列(同源性100％)，而所有阴性参照标本RT-PCR均为阴性。克隆片段BNll09与已知冠状病毒在核苷酸和氨基酸水平进行分析显示，该片段与牛冠病毒(bovinecoronavirus，BCV)和鼠肝炎病毒(murine hepatitis virus，MHV)同源性最高，在氨基酸水平上同源性高达75％。结论 SARS冠状病毒多聚酶基因片段BNll09的保守性极强，适合建立RT-PCR法检测SARS冠状病毒。     

SARS冠状病毒多聚酶基因临床检测方法的建立

目的分析SARS冠状病毒广东株多聚酶基因片段的异质性,建立RT-PCR检测SARS冠状病毒的方法,为SARS的快速诊断提供依据。方法合成针对SARS冠状病毒多聚酶基因区段的特异性引物,从广东省SARS病人及疑似病人标本中提取RNA,经反转录和巢氏PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析,并将序列与SARS冠状病毒和其他已知冠状病毒进行同源性分析。结果从多例SARS病人痰、咽拭子或血液标本中得到RT-PCR阳性片段,随机选取其中8例经克隆和DNA序列分析证实均为SARS冠状病毒序列(同源性100%),而所有阴性参照标本RT-PCR均为阴性。克隆片段BNI109与已知冠状病毒在核苷酸和氨基酸水平进行分析显示,该片段与牛冠病毒(bovinecoronavirus,BCV)和鼠肝炎病毒(murinehepatitisvirus,MHV)同源性最高,在氨基酸水平上同源性高达75%。结论SARS冠状病毒多聚酶基因片段BNI109的保守性极强,适合建立RT-PCR法检测SARS冠状病毒。     

儿科患者与医务人员血清冠状病毒(变异株)抗体检测

目的本次严重急性呼吸综合征(SARS)流行中,儿童发病率低、症状轻,推测儿童可能存在保护性抗体.对儿科非SARS患者及医务人员进行血清冠状病毒(变异株)抗体检测,试剂盒为北京华大吉比爱生物技术有限公司冠状病毒(变异株)IgG抗体检测试剂盒(国药试字2003004批号20030501).方法用酶联免疫吸附法(ELISA),检测2001及2003年的168例非SARS患儿的血清标本,及与这些患儿有密切接触的171份医务人员血清标本,以86份成人非感染非医务人员血清标本做对照.结果非SARS患儿2001年77份血清标本阳性32例(41.56%),2003年91份阳性36例(39.56 %),医务人员抗体阳性2例(1.17%),成人对照为0%.儿童冠状病毒(变异株)抗体阳性率有随年龄增长逐渐下降的趋势.抗体滴度中位数在2003年患儿(0.200)、2001年患儿(0.170)、医务人员(0.019)及非感染成人(0.054)间存在极显著性差异.结论在非SARS患儿中冠状病毒(变异株)抗体阳性率高达40%,显著高于成人,与其密切接触的医务人员抗体阳性的检出率与对照组无明显差异,抗体滴度无升高.     

SARS-CoV抗体实验诊断中的假阳性原因分析

目的：探讨严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(SARS-CoV)抗体在SARS病原学诊断中的假阳性问题。方法：应用酶联免疫吸附试验(EUSA)和荧光定量RT-PCR技术检测了16l例非SARS患者SARS-Cov抗体的阳性率。结果：59例正常对照中，IgG抗体的阳性率为3．4％(2／59)；40例肿瘤患者中，IgG抗体阳性率为17．5％(7／40)；3l例自身免疫病患者中，IgM抗体和IgG抗体阳性率分别为6．5％(2／31)和22．6％(7／31)，IgG抗体和IgM抗体同时阳性为6．5％(2／31)；3l例系统性红斑狼疮(SI正)患者中，IgM抗体和IgG抗体阳性率分别为29．0％(9／31)和58．1％(18／31)，IgG抗体和IgM抗体同时阳性为22．6％(7／31)。IgM和IgG抗体诊断SARS的假阳性率分别为6．8％和21．1％，两种抗体同时诊断SARS的假阳性率为5．6％。经RT—PCR证实上述阳性均为假阳性。结论：两种抗体同时测定可降低诊断的假阳性率，提高诊断的特异性。出现假阳性的原因可能与包被的抗原有关。     

RT-PCR对SARS患者粪便SARS冠状病毒RNA的连续测定及其临床意义

目的采用RT-PCR方法,观察SARS冠状病毒(SARS-associatedcoronavirus,SARS-CoV)在SARS患者粪便中的排出状况。方法以2003年5月16日至23日在本院住院的46例临床确诊SARS患者为研究对象,连续留取粪便标本共103份,提取RNA后采用14对SARS-CoV特异性引物,对每份标本同时进行7次套式RT-PCR扩增,只要有1次RT-PCR结果阳性即判定该标本为阳性。结果在46例患者中,有17例(37.0%)患者的粪便SARS-CoV套式RT-PCR扩增结果为阴性,29例(63.0%)为阳性。粪便SARS-CoVRT-PCR结果阳性时SARS患者的病程为(31.76±10.78)d(12～64d),其中最长1例为64d,系2次连续留取的粪便标本均为阳性、每次标本用2个不同引物RT-PCR扩增结果均为阳性。结论SARS-CoV在患者粪便中排出的时间可长达发病后64d,平均32d,对SARS患者恢复期的消毒隔离应该予以足够的重视。     

BNX小鼠生物学特性及其应用

本文综述了T、B和NK细胞联合免疫缺陷BNX小鼠的培育，详细介绍其一般的生物学特性及其在血液学、肿瘤学、免疫学和微生物学等方面的应用。