blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因PCR扩增用于鲍曼不动杆菌检测的可行性评价

目的分析blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因PCR扩增用于鲍曼不动杆菌检测和鉴定的可行性。方法PCR扩增105株不动杆菌的blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因,并对检测的特异性进行评估。结果PCR检测82株鲍曼不动杆菌blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因均阳性,但其中1株PCR产物比预期大（1 664 bp）;测序发现blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因中包含一段1 308 bp的插入序列。不动杆菌属其他菌株blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因PCR检测均阴性。若以353 bp扩增带作为blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因PCR阳性标准,检测的敏感度和特异度分别为98.9%和100%;若以出现PCR扩增条带为阳性标准,则检测的敏感度和特异度均为100%。结论blaOXA-51-like碳青霉烯酶基因PCR扩增用于检测鲍曼不动杆菌特异性较高,但如果仅从扩增片段长度判断,存在出现假阴性的可能。     

泌尿生殖道标本中沙眼衣原体的直接检测及基因分型

应用聚合酶链反应（PCR）和限制性片段长度多态性（RFLP）分析，建立了沙眼衣原体（Ct）直接检测及基因分型的方法。与细胞培养法比较，评价其检测的敏感性。400份性病门诊患者的泌尿生殖道标本同时用培养和质粒PCR检测Ct，结果29份标本培养阳性，其中28份标本质粒PCR阳性，另有5份培养阴性的标本质粒PCR阳性。对培养和质粒PCR阳性的标本进一步做主要外膜蛋白基因（ompl）PCR或ompl巢式PCR，结果32份标本omplPCR或ompl巢式PCR阳性。将阳性标本的ompl产物用AluI和MspI等限制性内切酶酶切，产生的酶切带谱与标准株带谱比较，以鉴定阳性标本的基因型。结果E型为13份标本，F：6、G：4、D：3、J：2、K：2、H：1、非典型：1。研究表明：PCR－RFLP可直接检测及基因分型泌尿生殖道标本中的Ct，为一种敏感的血清分型替代方法。     

云南临沧HIV阳性者血液中弓形虫SAGSAG2基因位点分析

目的初步了解云南临沧HIV阳性者血液中弓形虫的基因型特征。方法运用巢式PCR法对弓形虫SAG2基因的两个片段分别进行基因提取、扩增,然后对PCR产物进行回收纯化、酶切及测序,并与弓形虫基因I型标准株进行对比鉴定。结果从170份HIV阳性者全血样本中分别扩增出35个弓形虫SAG2基因(241、221 bp),从其中扩增阳性的全血样本中各选择4份分别进行酶切,扩增出目的基因片段,进一步从酶切样本中选择2份与弓形虫基因标准株RH株进行对比,酶切SAG2基因(241 bp)显示血液样本基因型为Ⅰ型或Ⅱ型,酶切SAG2基因(221 bp)确定基因型均为Ⅰ型。结论初步确定云南临沧HIV阳性者弓形虫基因型以Ⅰ型为主。     

间日疟原虫裂殖子表面蛋白的等位基因型检测

目的　建立一种间日疟原虫裂殖子表面蛋白 1(PvMSP-1)基因型检测技术。　方法　设计针对PvMSP 1ICB5～ICB6多态区的引物进行PCR ,其产物用PvuⅡ内切酶消化、琼脂糖凝胶电泳检测 ,鉴别我国间日疟原虫现场分离株基因型。　结果　 98份间日疟血样经套式PCR扩增均出现大小约为 40 0bp(Belem型 )或 470bp(Sal-1型 )的特异性片段。酶切消化后 ,45份 470bp样本出现 12 0bp和 3 5 0bp酶切片段 ,为Sal-1型 ;40份 40 0bp的样本中 3份仅出现 1条 40 0bp片段 ,为Belem型 ;3 5份出现 12 0bp和 2 80bp两种酶切片段 ,为Ⅲ重组型 ;2份 12 0bp和 2 40bp片段 ,为朝鲜型。结论　套式聚合酶链反应-限制性片段长度多态性 (PCR-RFLP)技术可用于检测我国间日疟原虫的 3种PvMSP-1等位基因型。     

云南临沧HIV阳性者血液中弓形虫SAG2 基因位点分析

目的 目的 初步了解云南临沧HIV阳性者血液中弓形虫的基因型特征。方法 方法 运用巢式PCR法对弓形虫SAG2基 因的两个片段分别进行基因提取、 扩增, 然后对PCR产物进行回收纯化、 酶切及测序, 并与弓形虫基因I型标准株进行对 比鉴定。结果 结果 从170份HIV阳性者全血样本中分别扩增出35个弓形虫SAG2基因 （241、 221 bp）, 从其中扩增阳性的全 血样本中各选择4份分别进行酶切, 扩增出目的基因片段, 进一步从酶切样本中选择2份与弓形虫基因标准株RH株进 行对比, 酶切SAG2基因 （241 bp） 显示血液样本基因型为Ⅰ型或Ⅱ型, 酶切SAG2基因 （221 bp） 确定基因型均为Ⅰ型。结 结 论 论 初步确定云南临沧HIV阳性者弓形虫基因型以Ⅰ型为主。     

云南临沧HIV阳性者血液中弓形虫SAG2 基因位点分析

目的 目的 初步了解云南临沧HIV阳性者血液中弓形虫的基因型特征。方法 方法 运用巢式PCR法对弓形虫SAG2基 因的两个片段分别进行基因提取、 扩增, 然后对PCR产物进行回收纯化、 酶切及测序, 并与弓形虫基因I型标准株进行对 比鉴定。结果 结果 从170份HIV阳性者全血样本中分别扩增出35个弓形虫SAG2基因 （241、 221 bp）, 从其中扩增阳性的全 血样本中各选择4份分别进行酶切, 扩增出目的基因片段, 进一步从酶切样本中选择2份与弓形虫基因标准株RH株进 行对比, 酶切SAG2基因 （241 bp） 显示血液样本基因型为Ⅰ型或Ⅱ型, 酶切SAG2基因 （221 bp） 确定基因型均为Ⅰ型。结 结 论 论 初步确定云南临沧HIV阳性者弓形虫基因型以Ⅰ型为主。     

铜绿假单胞菌的基因诊断

目的 早期诊断铜绿假单胞菌感染。方法 采用聚合酶链反应（PCR）检测铜绿假单胞菌OprⅠ基因片段,用HaeⅢ和PvuⅡ酶切鉴定,测序分析。结果 培养阳性的96份标本均扩增到249bp片段,培养为其他菌及阴性的127份均未发现预期扩增片段,经HaeⅢ和PvuⅡ酶切分别得到49bp和112bp小片段,测序分析其序列与基因库序列比较同源性达100%。结论 检测铜绿假单胞菌OprⅠ基因片段,可作为铜绿假单胞菌感染的早期诊断。     

辽宁丹东间日疟原虫裂殖子表面蛋白1等位基因型分析

用套式PCR方法扩增辽宁丹东地区间日疟原虫裂殖子表面蛋白1(MSP-1)基因ICB5-ICB6片段,经PvuⅡ酶切和琼脂糖凝胶电泳,对产物进行序列分析。结果显示,11份镜检确诊的间日疟患者血液标本经套式PCR扩增均出现大小约为470 bp(Sal-1型)或400 bp(Belem型)的特异性片段。经PvuⅡ内切酶消化后,其中5份血样(470 bp),出现120和350 bp酶切片段,为Sal-1型;其余6份血样(400 bp)中,1份出现400 bp片段,为Belem型,1份出现120和280 bp两种酶切片段,为重组Ⅲ型,4份出现120和240 bp两种酶切片段,为朝鲜型。辽宁省丹东地区的间日疟原虫PvMSP-1基因存在3种不同的等位基因型,以Sal-1型和朝鲜型为主,但无不同等位基因型的混合感染。     

一种快速检测患者血液标本猪链球菌方法的研究

目的建立一种快速检测患者血液标本中猪链球菌的方法。方法收集患者血液标本。提取细菌金基因组DNA；根据猪链球菌6个特异基因设计引物，采用PCR技术对这些基因进行检测，并对PCR扩增阳性的基因产物进行序列分析验证，并分析该方法诊断猪链球菌病的特异性和敏感性。结果取唾液链球菌等6种链球菌进行验证，该检测方法的特异性为100％。模拟标本（细菌含量〉10^3个／ml）的敏感性为100％，血培养阳性病人标本的敏感性为100％。通过对90份血培养阴性临床标本的检测，9份PCR结果阳性，序列分析结果证实扩增片段为目的基因。结论该方法灵敏、特异、快速。可直接用于患者血液标本的猪链球菌特异性基因的检测，为猪链球菌感染的早期诊断提供实验室依据。     

云南大理HIV阳性者感染弓形虫表面抗原SAG1和SAG3基因位点的初步分析

目的通过分析云南大理HIV阳性者感染弓形虫表面抗原SAG1和SAG3基因位点,鉴定该地区HIV阳性者感染弓形虫的基因型。方法自云南省艾滋病防治机构收集大理HIV阳性者全血样品291份,运用巢式PCR技术对血样DNA进行弓形虫SAG1和SAG3基因的扩增,扩增产物分别用限制性内切酶Sau96Ⅰ、HaeⅡ和NciⅠ酶切,并对扩增阳性的产物序列进行测定与分析。结果291份HIV阳性者血样中,成功扩增出弓形虫SAG1基因64份,SAG3基因42份,产物分别为390 bp和225 bp。扩增产物经酶切后电泳,结果显示,64份SAG1基因均得到2个片段,分别为350 bp和50 bp,42份SAG3基因均得到约200 bp大小的条带,与弓形虫基因Ⅰ型标准株(RH株)结果一致。从酶切的标本中选择多份进行测序,结果与基因Ⅰ型标准株SAG1基因序列(登录号为GQ253073)和SAG3基因序列(登录号为JX218225.1)进行比对分析,发现序列一致性分别为99.98%~100%和99.96%~99.98%。结论云南大理HIV阳性者感染弓形虫为基因Ⅰ型。     

模拟抗原表位基因测定及合成多肽的血吸虫病诊断价值的研究

目的测定能用于血吸虫病诊断及疗效考核的噬菌体展示肽基因序列,研究合成多肽抗原的血吸虫病诊断价值.方法扩增目的噬菌体,制备和纯化噬菌体DNA,对目的噬菌体中外源性肽的基因序列进行测定和演绎氨基酸序列分析.根据血清反应强度和演绎氨基酸序列选择2个噬菌体的展示肽段进行人工多肽合成.以合成的多肽为抗原,建立血吸虫病诊断方法,检测急、慢性血吸虫病人血清,观察方法的敏感性及特异性;同时检测治疗前及治愈后的血吸虫病人血清,观察该合成抗原的血吸虫病疗效考核价值.结果测定了14个噬菌体展示外源肽的基因序列,序列分析表明,其中有6个噬茵体的外源肽基因序列完全相同,其余8个噬菌体展示肽的基因序列不相同.分析演绎氨基酸序列,发现1个噬菌体展示肽中的3个连续的氨基酸(GVK)残基与血吸虫23 kDa分子氨基酸残基相同.合成多肽抗原检测急、慢性血吸虫病人血清,敏感性分别为92.3%和91.1%,与华支睾吸虫病人血清的交叉反应率为7.5%,检测健康人血清,特异性为95.5%.检测治愈后0.5年的同一病人血清,阴转率为55.3%,治愈后1年的病人血清中IgG抗体的阴转率为63.2%.结论 9个具有血吸虫病诊断价值的噬菌体展示表位的基因序列被确定,并证明了合成多肽抗原有较好的血吸虫病诊断及疗效考核价值.     

内镜下Oddi括约肌测压的临床意义

为观察胆石症、胆囊切除术后等胆系疾病及功能性消化不良（ＦＤ）、糖尿病胃轻瘫（ＤＧＰ）等非胆系疾病Ｏｄｄｉ括约肌（ＳＯ）功能变化，通过内镜采用灌注式高分辨多道胃肠功能测定仪，对１５例胆系疾病患者、１３例非胆系疾病患者进行Ｏｄｄｉ括约肌测压。结果显示，胆系疾病组的胆总管压力、ＳＯ基础压及蠕动波振幅明显高于非胆系疾病组（６．８６±０．６３ｋＰａ与１．２７±０．１０ｋＰａ，Ｐ＜０．０１；７．３１±０．９５ｋＰａ与１．８７±０．１６ｋＰａ，Ｐ＜０．０１；３２．００±１．２ｋＰａ与２４．１４±１．５ｋＰａ，Ｐ＜０．０５）；同时，非胆系疾病组的十二指肠压、ＳＯ蠕动频率及间期较胆系疾病组明显降低、减慢及延长（１．４２±０．２６ｋＰａ与０．３０±０．１０ｋＰａ，Ｐ＜０．０１；３．６±１．２次／分与２．２±０．４次／分，Ｐ＜０．０５；７．４±１．２秒与１１．０±１．８秒，Ｐ＜０．０５）。结果显示，无论是胆系疾病还是ＦＤ及ＤＧＰ等非胆系疾病均有ＳＯ功能紊乱，但表现形式相反，对指导临床诊断与治疗有一定价值。     

钉螺3种酶的酶谱分析

本研究用淀粉凝胶同工酶电泳法比较了安徽及云南两省的钉螺的酸性磷酸酶（ＡｃＰ，ＥＣ３．１．３．２）、过氧化物酶（Ｐｏ，ＥＣ１．１１．１．７）及酯酶（Ｅｓｔ，ＥＣ３．１．１．１）的电泳带型。ＡｃＰ及Ｐｏ的同工酶中ＡｃＰ１、ＡｃＰ２及Ｐｏ１、Ｐｏ２由单态位点编码。Ｅｓｔ的同工酶由４个位点编码，其中Ｅｓｔ３在安徽的钉螺中为１条电泳快带，相对迁移率（Ｒｆ）为０．３６２±０．０２７；在云南的钉螺中为１条电泳慢带，Ｒｆ为０．３４０±０．０３６。     

骨代谢指标测定在骨质疏松诊治中的应用价值

目的 比较妇女绝经前后骨代谢指标的变化，研究各指标在骨质疏松症治疗后的变化率，对各指标在骨质疏松症诊治中的应用作出初步评价。方法 48例绝经前妇女、48例绝经后妇女测定10项骨代谢指标．45例绝经后骨质疏松症患者．治疗前、治疗6个月后分别测定10项骨代谢指标，观察其变化率。12名绝经后妇女，每两个月测定10项骨代谢指标。共观察一年。结果 绝经后妇女骨代谢指标明显升高，绝经后骨质疏松症患者经抗吸收治疗后．大部分骨代谢指标明显降低，血清骨形成指标比尿骨吸收指标长期个体内的变异要小。结论 绝经后骨质疏松症患者骨转换加快，部分血清骨代谢指标优于尿骨代谢指标，尤以血清骨形成指标N—mid骨钙素和血清骨吸收指标CTX为优。     

五例尸检法乐氏四联症的解剖形态观察

本文报告5例未经心内手术矫治的法乐氏四联症,对其心脏解剖形态及合并畸形,作了详细的观察和描述。