甲基化特异性PCR检测肺癌p16基因甲基化及其临床意义

目的:探讨甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSPCR)在肺癌临床诊断中的应用价值.方法:选取56例肺部疾病住院患者手术切除的病变肺组织和相应的支气管肺泡灌洗液(BALF)及痰标本,其中32例为肺癌,24例为良性肺部疾病.标本经一般处理,PCR扩增后,产物经电泳EB染色,紫外灯下观察.结果:32例肺癌组织标本中,14例(43.8%)在p16基因启动子区域呈现异常甲基化,其中9例(64.3%)在相应的BALF中检测出甲基化存在,5例(35.8%)在相应的痰标本中也检测出甲基化存在.24例良性肺部疾病,其中肺囊肿10例,肺结核14例,手术切除标本和BALF及痰标本中均未检测出p16基因甲基化存在.结论:MSPCR技术对肺癌患者BALF及痰标本中的异常甲基化检测具有高度特异性,是一项有潜力的肺癌早期诊断新技术.     

痰标本p16和MGMT基因甲基化对肺癌的诊断价值

目的：分析肺癌患者痰标本中p16和MGMT基因启动子区甲基化的改变情况,评价该指标作为肺癌辅助诊断分子标志物的价值。方法：运用甲基化特异性PCR技术,检测77例原发性肺癌患者痰标本和部分对应肿瘤组织(53例),以及30例正常对照者痰标本中p16和MGMT基因启动子区域的甲基化改变。结果：49例(63．6%)肺癌患者痰标本中检测到了pi6基因异常甲基化,34例(44．2%)检测到了MGMT基因异常甲基化,77例患者痰标本中2个基因中至少有1个基因出现甲基化为64例(83．1%),对肿瘤的检出灵敏度较高。长期吸烟史是影响肺鳞状细胞癌痰标本p16(P=0．001)基因启动子区甲基化的因素。随TNM分期增高,肺鳞状细胞癌患者痰标本中p16基因甲基化比例增高(P=0．021)；随TNM分期增高,肺腺癌患者痰标本MGMT基因甲基化比例增高(P=0．023)。对照组正常人痰液标本未发现p16和MGMT基因启动子区甲基化。结论：痰标本中p16和MGMT基因甲基化是临床肺癌辅助诊断的有效生物标志物之一。     

CT扫描与痰液肿瘤标志物检测对周围型肺癌的早期诊断价值

目的：研究CT扫描与肺活检后痰液脱落细胞的端粒酶活性和p16甲基化检测对早期周围型肺癌的诊断意义。方法：用PCR－TRAP－ELISA半定量及PCR－TRAP银染定性法、甲基化相关的PCR法，前瞻性检测55例经CT扫描而发现的肺部孤立性结节（直径≤30mm)、并疑诊为早期周围型肺癌的患者（T1N0M0），行CT导向肺活检（纤维支气管镜肺活检33例，经皮肺针刺活检22例）后24h内痰液脱落细胞端粒酶活性及p16甲基化状态，并将检测结果与组织病理进行对照研究。结果：CT扫描对周围型肺癌诊断的敏感性为100％，但特异性只有61．8％（34／55）。端粒酶活性的敏感性为79．4％，特异性为90．5％，准确性为83．6％；p16甲基化的敏感性为32．4％，特异性为100％，准确性为58．2％，3者联合检测的敏感性为86．1％，特异性为90．5％，准确性为87．3％。对照组端粒酶阳性率9．5％（2／21），无1例检测到p16甲基化。结论：CT扫描与端粒酶活性、p16甲基化联合可弥补痰液的细胞学检查的不足，提高肺癌痰检的敏感性，有助于周围型肺癌早期诊断和肺部孤立性结节的鉴别诊断。     

肺癌患者组织样品中p16基因的异常甲基化

目的 分析肺癌患者组织样品中p16基因启动子区域异常甲基化的改变情况,评价该指标作为辅助临床诊断的分子标记物的价值。方法 运用甲基化特异性PCR技术,检测51例原发性肺癌患者的肿瘤组织、外周血血浆和痰标本中p16基因启动子区域的异常甲基化改变。结果 在43例肿瘤组织、36例血浆和39例痰标本中检测到了p16基因异常甲基化。凡在肿瘤组织检出p16基因甲基化阳性的病例,其血浆和(或)痰标本也为阳性;而肿瘤组织p16基因甲基化阴性的病例,其血浆和痰标本也为阴性。将血浆和痰标本的p16甲基化分析与痰细胞学检查相结合,可以发现92．2％的肺癌病例。结论 利用半巢式甲基化特异性PCR进行的血浆和痰标本p16基因甲基化分析,有可能成为辅助肺癌诊断的分子生物学指标。     

非小细胞肺癌病人痰标本p16和MGMT基因的异常甲基化

痰脱落细胞学检查以其方例、无创的特点成为目前诊断肺癌的最基本手段之一,然而它的敏感性比较差。近年来分子肿瘤学的理论和技术进展为我们提供了利用分子病理学标志物发现早期肺癌的可能。研究表明,某些基因的异常甲基化是肺癌中常见的分子水平改变;其包括p16INK4a(p16)和O^6甲基鸟嘌呤－DNA甲基转移酶（O^6-methyl-guanine-DNA methyltransferase,MGMT)。在这项研究中,我们从肺癌病人的痰标本脱落细胞中分离制备DNA,检测了p16和MGMT这两个基因的启动子区的甲基化状态。采用甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP)的方法,我们对71例非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC)病的痰标本进行了分析。所有被检NSCLC病人均有明确的组织病理学诊断,其中,肺鳞癌39例,肺腺癌25例,腺鳞癌7例。这71例病人的痰标本仅有31例（43．6％）被细胞学检查诊断为癌。我们的分析资料显示：在71例痰标本中p16基因的高甲基化检出率为83．1％（59／71）,MGMT的高甲基化检出率为59．2％（42／71）。在被测痰细胞DNA中,这两个基因（其中一个或两者）的启动子区异常甲基化的综合检出率高达90．1％（64／71）;而且与相应肿瘤组织中这两个基因的甲基化状态存在很好的符合率。这项研究结果表明,利用MSP技术检查痰脱落细胞DNA中p16和MGMT两基因的异常甲基化是一项敏感、无创、易行的方法。它将有助于非小细胞肺癌早期发现,以及肺癌高危人群的筛查。     

96.非小细胞肺癌病人痰标本p16和MGMT基因的异常甲基化

痰脱落细胞学检查以其方便、无创的特点成为目前诊断肺癌的最基本手段之一,然而它的敏感性比较差。近年来分子肿瘤学的理论和技术进展为我们提供了利用分子病理学标志物发现早期肺癌的可能。研究表明,某些基因的异常甲基化是肺癌中常见的分子水平改变;其中包括p16INK4a(p16)和O6甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（O6-methyl-guanine-DNA methyltransferase,MGMT)。在这项研究中,我们从肺癌病人的痰标本脱落细胞中分离制备DNA,检测了p16和MGMT这两个基因的启动子区的甲基化状态。采用甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP)的方法,我们对71例非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）病人的痰标本进行了分析。所有被检NSCLC病人均有明确的组织病理学诊断,其中,肺鳞癌39例,肺腺癌25例,腺鳞癌7例。这71例病人的痰标本仅有31例（43.6％）被细胞学检查诊断为癌。我们的分析资料显示：在71例痰标本中p16基因的高甲基化检出率为83．1％（59/71）,MGMT的高甲基化检出率为59.2％（42／71）。在被测痰细胞DNA中,这两个基因（其中一个或两者）的启动子区异常甲基化的综合检出率高达90．1%（64／71）;而且与相应肿瘤组织中这两个基因的甲基化状态存在很好的符合率。这顶研究结果表明,利用MSP技术检查痰脱落细胞DNA中p16和MGMT两基因的异常甲基化是一项敏感、无创、易行的方法。它将有助于非小细胞肺癌早期发现,以及肺癌高危人群的筛查。     

肺癌血清p16基因启动子畸变甲基化检测

[目的]检测肺癌患者血清DNA中p16基因启动子畸变甲基化,并探讨其在肺癌早期诊断和预后评价中的作用。[方法]收集新鲜的肺癌组织及其对应的血清标本69例,肺良性疾病患者标本25例,健康人血清标本10例。采用PCR技术分别检测肿瘤组织DNA和血清游离DNA中p16基因启动子畸变甲基化的状况。[结果]28.99%(20/69)肺癌组织出现p16高甲基化;出现高甲基化的组织标本相对应的20例血清中有15例(75%)出现p16基因高甲基化。肺良性疾病患者及正常人的血清、DNA中均未见p16基因高甲基化。血清p16基因高甲基化与肺癌TNM分期及分化程度密切相关(P<0.01或P<0.05)。[结论]非小细胞肺癌血清中p16基因甲基化状况的检测,可能有助于非小细胞肺癌的早期诊断或预后评估。     

NSCLC患者血清中p16、DAP基因甲基化的研究

目的：探讨p16、死亡相关蛋白激酶（death-associated protein kinase,DAP）基因的异常甲基化作为非小细胞肺癌（NSCLC）患者诊断的基因标志物的可行性。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）法检测30例NSCLC患者肿瘤组织及对应血清中p16、DAP基因的异常甲基化，结果：NCSLC肿瘤中60．0％（18／30）检测出至少一个基因启动子呈甲基化改变，在18例肿瘤组织检测到异常甲基化的患者中，50．0％的患者（9／18）在血清中检测到相应的改变。所有的癌旁组织、健康对照组的血清中及正常肺组织均未检测到p16、DAP的甲基化，结论：检测NSCLC患者血清中p16、DAP基因异常甲基化有可能成为肺癌诊断的分了标志物。     

检测痰脱落细胞p16基因甲基化对周围型肺癌的诊断价值

目的　探讨检测痰脱落细胞p16基因甲基化对周围型肺癌的诊断价值。方法　应用甲基化特异性PCR(methylation specificPCR ,MSP)对 5 0例周围型肺结节患者及 2 0例正常人痰脱落细胞p16基因甲基化改变进行检测 ,将检测结果与术后病理报告相对照。结果　周围型肺癌痰脱落细胞 p16MSP阳性率( 2 7/ 44 ,61.4%)明显高于良性周围型肺结节 ( 1/ 6,16.7%)及正常人 ( 3 / 2 0 ,15 .0 %) ( χ2 值分别为 4.2 81和11.869,P <0 .0 5 ) ,良性周围型肺结节 p16MSP阳性率与正常人无显著性差异 ( χ2 =0 .13 6,P >0 .0 5 )。鳞癌和腺癌患者痰脱落细胞 p16MSP阳性率无显著性差异 ( χ2 =3 .416,P >0 .0 5 )。如果以痰脱落细胞 p16MSP阳性作为判断肺结节恶性的标准 ,其诊断周围型肺癌的阳性预测值为 96.4%,阴性预测值 2 2 .7%,灵敏度 61.4%,特异度 83 .0 %。结论　检测痰脱落细胞 p16基因甲基化对周围型肺癌具有辅助诊断价值     

p16基因5′-CpG岛甲基化对肺癌的早期诊断价值

目的　检测 p16基因在肺癌患者癌组织及相应痰液脱落细胞中甲基化状态 ,以探讨其在肺癌早期诊断中的价值。方法　采用甲基化敏感的核酸内切酶 Sma 、Sac 酶切基因组 DNA,对 5 6份肺癌组织及相应痰液、6 0份非恶性病变肺组织及 2 8份痰液进行 PCR分析。结果　 p16基因在肺癌组织中甲基化率为 30 .4% (17/5 6 ) ,相应的痰液中为 2 8.6 % (16 /5 6 ) ,两组差异无显著性 (χ2 =0 .0 430 ,P=0 .836 )。 6 0份非恶性病变肺组织甲基化率为 3.3% (2 /6 0 ) ,2 8份痰液无 1份发现 p16基因甲基化。结论　肺癌组织及相应的痰液脱落细胞 p16基因 5′- Cp G岛甲基化率相似 ,即痰液脱落细胞 p16基因甲基化状态可以反映肺癌组织 p16基因甲基化状态。因此 ,检测痰液脱落细胞 p16基因甲基化状态有助于肺癌的早期诊断     

CT扫描与痰液肿瘤标志物检测对周围型肺癌的早期诊断价值

目的 :研究CT扫描与肺活检后痰液脱落细胞的端粒酶活性和p16甲基化检测对早期周围型肺癌的诊断意义。方法 :用PCR TRAP ELSA半定量及PCR TRAP银染定性法、甲基化相关的PCR法 ,前瞻性检测 5 5例经CT扫描而发现的肺部孤立性结节 (直径≤ 30mm)、并疑诊为早期周围型肺癌的患者 (T1N0 M0 ) ,行CT导向肺活检 (纤维支气管镜肺活检 33例 ,经皮肺针刺活检 2 2例 )后 2 4h内痰液脱落细胞端粒酶活性及p16甲基化状态 ,并将检测结果与组织病理进行对照研究。结果 :CT扫描对周围型肺癌诊断的敏感性为 10 0 % ,但特异性只有 6 1 8% (34/ 5 5 )。端粒酶活性的敏感性为 79 4 % ,特异性为 90 5 % ,准确性为 83 6 % ;p16甲基化的敏感性为 32 4 % ,特异性为 10 0 % ,准确性为 5 8 2 % ,3者联合检测的敏感性为 86 1% ,特异性为 90 5 % ,准确性为 87 3%。对照组端粒酶阳性率 9 5 % (2 / 2 1) ,无1例检测到p16甲基化。结论 :CT扫描与端粒酶活性、p16甲基化联合可弥补痰液的细胞学检查的不足 ,提高肺癌痰检的敏感性 ,有助于周围型肺癌早期诊断和肺部孤立性结节的鉴别诊断     

中国非小细胞肺癌患者血清DAPK基因、p16基因启动子甲基化的分析(英文)

目的分析65名中国南京军区南京总医院的非小细胞肺癌(NSCLC)住院患者血清中DAPK、p16启动子区域甲基化的改变状况及其临床意义。方法运用甲基化特异性PCR技术,检测65例NSCLC患者血清DAPK、p16基因启动子区域甲基化的改变情况,并分析与临床病理资料的关系。结果 NSCLC患者血清DAPK基因甲基化检出率为30．8％(20/65),p16基因甲基化检出率为43．1％(28/65),而正常对照组和良性肺部疾病组血清未检出DAPK基因、p16基因甲基化,DAPK基因、p16基因甲基化检出率与NSCLC病理类型、分期及转移状态无明显关系。结论 DAPK基因、p16基因检出启动子区域异常甲基化是NSCLC早期辅助诊断的分子标志物之一。     

检测外周血中p53基因突变诊断肺癌微转移的临床意义

目的 探讨检测肺癌患者外周血中p53基因突变的诊断意义。方法 应用PCR－SCCP方法，对28例肺癌患者，8例良性肺疾病患者和10例健康人外周血中的p53基因突变进行检测。结果 在28例肺癌患者外周血标本中，4例检测出p53基因突变，阳性率为14．29％。其中鳞癌1例，腺癌1例，小细胞癌2例；Ⅱ期患者1例，Ⅲ期1例，Ⅳ期2例。8例良性肺疾病患者和10例健康人的外周血均未检测出p53基因突变。结论 检测外周血中p53基因突变有助于肺癌的诊断和肺癌病理分期。     

血浆中检测FHIT、p16、MGMT和RASSF1A基因甲基化在肺癌诊断中的价值

目的:探讨血浆中脆性组氨酸三连体基因(fragile histidine triad,FHIT)、p16基因、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因(O6-methyl-guanine-DNA methyltransferase,MGMT)及信号转导通路基因(rasassociation domain family1A,RASSF1A)等抑癌基因启动子异常甲基化及其联合检测在肺癌筛查及早期诊断中的价值。方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specifi c PCR,MSP)法,检测53例肺癌组织和对应的血浆标本以及24例肺良性病变组织中FHIT、p16、MGMT和RASSF1A4种基因启动子区甲基化状态。结果:肺癌组织中FHIT、p16、MGMT和RASSF1A基因启动子区甲基化检出率分别为39.6%(21/53)、49.1%(26/53)、35.8%(19/53)和18.9%(10/53);其对应的血浆标本中这4个基因的甲基化检出率分别为35.8%(19/53)、49.1%(26/53)、28.3%(15/53)和17.0%(9/53),两组标本甲基化检出率存在着较好的一致性(P>0.05)。24例肺良性病变组织标本和血浆标本中分别有同1例(0.04%)出现p16基因甲基化,与肺癌组比较差异有统计学意义(P<0.05)。4项指标联合检测可显著提高肺癌检测的敏感度(73.6%)和特异度(95.8%)。p16基因在血浆中甲基化检出率与患者吸烟指数有明显相关性(P<0.05)。结论:血浆中多个肺癌相关基因甲基化联合检测有望成为肺癌筛查、早期诊断简便有效的指标。     

p16基因甲基化对非小细胞肺癌发病的影响

目的探讨p16基因甲基化对非小细胞肺癌发病的影响。方法原发性肺癌患者47例及同期无呼吸系统疾病又未患任何肿瘤同性别者94例作对照,采用甲基化特异性PCR等技术,检测p16基因甲基化。结果p16基因甲基化在肺癌组织和正常肺组织中检出率分别为44.7%(21/47)和17.0%(8/47),两者有显著差异(P<0.05)。37例非小细胞肺癌吸烟者中有21例肺癌组织发生p16基因甲基化,而10例非小细胞肺癌非吸烟者中无一例肺癌组织发生p16基因甲基化。p16基因甲基化与年龄、饮酒、肺癌病理分型及肺癌临床分期之间均无明显的相关性(P>0.05)。结论p16基因甲基化与非小细胞肺癌发生的关系非常密切,p16基因甲基化与吸烟有关。检测p16基因甲基化与否,可能有助于肺癌的诊断。     

肺癌患者外周血血浆中p16基因异常甲基化的检测

目的 分析肺癌患者外周血血浆中p16基因启动子区异常甲基化发生情况,探讨血浆中p16基因异常改变作为肺癌临床辅助诊断分子生物学标志物的可能性。方法 利用半巢式甲基化特异性PCR技术,检测了137例肺癌患者血浆和112例相对应肿瘤组织DNA p16基因的异常甲基化情况。结果 在血浆和肿瘤组织中的p16基因甲基化检出率分别为75．2％和80．4％;其中鳞癌、腺癌、腺鳞癌和小细胞肺癌患者血浆标本的阳性率分别为77．9％,65．1％,75．1％和91．7％。血浆DNAp16基因甲基化仅在肿瘤组织存在同样甲基化的病例中被检出。血浆和肿瘤组织中,p16基因的甲基化异常改变与肿瘤的分期、分型无明显相关性。结论 分析血浆DNA的p16基因异常甲基化有可能成为辅助肺癌诊断的有效方法之一。     

肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A基因

摘 要：［目的］ 评估肺泡灌洗液（BALF）中SHOX2和RASSF1A基因甲基化联合检测（任意阳性）在肺癌诊断中的临床价值。［方法］收集经病理确诊的580例患者,其中肺癌261例,良性肺部疾病293例,非肺部的恶性肿瘤26例。将良性肺部疾病和非肺部的恶性肿瘤患者共319例作为对照组。对全部580例患者的BLAF样本,采用实时荧光PCR（RT－PCR）与测序法检测BALF中SHOX2和RASSF1A两种基因甲基化情况,比较两种检测方法的一致性。以病理诊断为金标准,对277例具有细胞学结果的患者(肺癌组130例,对照组147例),比较采用RT－PCR法SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测与细胞学检测对肺癌诊断的敏感性和特异性。［结果］ RT－PCR法与测序法两种方法检测580例患者BLAF样本SHOX2基因和RASSF1A基因甲基化结果的一致率分别是97.5%和98.0%。580例BLAF样本采用RT－PCR法检测SHOX2和RASSF1A基因甲基化任意阳性对肺癌诊断的敏感性和特异性分别是74.3%和87.1%。在277例有细胞学结果的患者中,RT－PCR法SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测任意阳性对肺癌诊断的敏感性和特异性分别为83.2%和92.5%,与细胞学检测（44.6%和98.6%）相比,敏感性显著提高,但特异性有所降低,差异均有统计学意义（P<0.01,P<0.05）。基因甲基化联合检测（任意阳性）阳性率在细胞学发现癌细胞组为98.2%（57/58）,结果未明组为100.0%（35/35）,未发现癌细胞组为37.8%（14/37）。［结论］ 采用RT－PCR法进行BALF中SHOX2和RASSF1A基因甲基化联合检测,可以作为肺癌细胞学检查的补充,特别是在细胞学检测结果未明或阴性时。     

不同标本肿瘤标志物联合检测对肺癌的诊断价值

目的：检测血液、痰液、支气管肺泡灌洗液（BALF）、胸腔积液四种标本中癌胚抗原（CEA）、癌抗原125（CA125）、癌抗原199（CA199）和细胞角蛋白21—1片段（CYFRA21—1）的浓度,探讨不同标本肿瘤标志物（TM）联合检测在肺癌诊断中的意义。方法：采用化学发光免疫分析法检测52例肺癌和46例肺部良性病变患者血液、痰液、BALF、胸腔积液中CEA、CA125、CA199和CYFRA21—1的浓度。结果：52例肺癌患者血液、痰液、BALF、胸腔积液中四种TM联合检测的阳性率分别为69．2％、90．4％、88．5％和82．1％;而46例肺部良性病变患者的阳性率分别为19．6％、26．1％、23．9％、21．7％。经统计学检验两组问四种标本TM联合检测阳性率差异有统计学意义（P〈0．05）。肺癌组不同标本之间TM联合检测的阳性率差异有统计学意义（P=0．02）;痰液和BALF标本TM联合检测较血液临床意义更大（P=0．01;P=0．02）。联合两个或三个标本检测与单个血液标本检测相比,其差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：不同标本肿瘤标志物CEA、CA125、CA199和CYFRA21—1联合检测对肺癌的诊断具有一定的意义。联合不同标本检测四种TM能提高肺癌诊断的敏感性。     

肺癌患者痰液端粒酶活性检测的临床研究

目的 :分析研究肺癌患者痰液端粒酶活性表达的临床意义。 方法 :运用端粒酶PCR -TRAP酶联免疫吸附试验(ELISA)测定法对30例肺癌患者及25例肺部良性疾病患者(对照组)的痰液进行端粒酶活性检测。 结果 :肺癌患者痰液标本中端粒酶活性阳性率为56.7 %(17/30) ,肺部良性疾病患者(对照组)的痰液标本端粒酶活性阳性率为24 %(6/25) ,二者经统计学处理 ,有显著性差异(P<0.05)。 结论 :检测肺癌患者痰液端粒酶活性有助于肺癌与其它良性肺部疾病的诊断及鉴别诊断 ,且具有方法相对简便、无创、标本易得等优点     

SFRP1基因甲基化及其蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达

目的探讨SFRP1基因甲基化及其蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法用免疫组化SP法和甲基化特异性PCR法检测60例非小细胞肺癌组织,21例肺良性疾病肺组织中SFRP1基因甲基化及SFRP1蛋白的表达情况。结果肺癌组织SFRP1基因甲基化阳性高于肺良性疾病肺组织,差异有显著性(P=0.001);SFRP1基因甲基化与非小细胞肺癌细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05);非小细胞肺癌中SFRP1蛋白阳性率低于肺良性疾病肺组织,差异有显著性(P=0.004);SFRP1蛋白表达与非小细胞肺癌临床分期、细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05);SFRP1甲基化和SFRP1蛋白表达缺失存在相关性(P=0.002)。结论 SFRP1基因甲基化可能是导致SFRP1蛋白表达降低的重要机制,进而导致非小细胞肺癌的发生发展。