美洲大蠊提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及作用机制

目的 探讨美洲大蠊提取物对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡的影响并探讨其相关机制.方法 取对数生长期状态良好的SMMC-7721细胞分为三组,观察组常规培养24h后加入美洲大蠊提取物,使终浓度分别为300、100、33.3 μg/mL,顺铂组加入顺铂20 μg/mL作用细胞48 h,对照组不做任何处理.采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化;分光光度法检测Caspase-3活性变化.结果 观察组和顺铂组细胞抑制率明显高于对照组,IC50为100 μg/mL,并呈现时间一剂量依赖关系(P＜0.05);观察组和顺铂组细胞凋亡率明显高于对照组,呈现剂量依赖性(P＜0.05).凋亡过程中线粒体膜电位下降,Caspase-3活性升高(P＜0.05).结论 美洲大蠊提取物具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖并诱导其凋亡作用,线粒体途径可能是其诱导肝癌细胞凋亡的主要机制之一.     

去甲斑蝥素诱导人肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨去甲斑蝥素（NCTD）对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响。方法用MTT方法检测人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制率。应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果 NCTD对人肝癌细胞SMMC-7721有生长抑制作用,随浓度升高、时间延长作用增强,呈剂量和时间效应关系。流式细胞仪示SMMC-7721细胞的S期细胞明显增多,G0/G1期细胞减少,凋亡率上升（P〈0.05或〈0.01）。结论 NCTD能显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长,其可能与抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡有关。     

NRF2/PI3K通路介导肝癌细胞SMMC-7721出现索拉非尼耐药的机制研究

目的探讨NRF2PI3K通路介导肝癌细胞SMMC-7721出现索拉非尼耐药的机制研究。方法建立肝癌细胞系SMMC-7721耐药细胞株SMMC-7721-SR,构建NRF2-siRNA转染肝癌细胞,并给与10μmol/L索拉非尼处理48 h。采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测NRF2、Keap1、ARE、p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平。Real-Time PCR检测NRF2、Keap1、ARE、p-PI3K和p-Akt基因表达水平。结果索拉非尼明显抑制肝癌细胞SMMC-7721的存活率,促进肝癌细胞SMMC-7721凋亡发生(P0.05)。索拉非尼对SMMC-7721细胞促凋亡作用明显强于SMMC-7721-SR细胞(P0.05)。SMMC-7721-SR细胞中NRF2蛋白水平及mRNA表达明显高于SMMC-7721细胞,Keap1、ARE、PI3K和Akt蛋白水平及mRNA表达明显增加(P0.05)。索拉非尼明显上调SMMC-7721细胞中NRF2蛋白水平及mRNA表达(P0.05)。抑制NRF2 mRNA表达并给予索拉非尼处理后,SMMC-7721-SR细胞存活率明显降低,凋亡率显著升高,Keap1、ARE、p-PI3K和p-Akt蛋白水平及mRNA表达明显降低(P0.05)。结论索拉非尼激活NRF2后诱导肝癌细胞SMMC-7721出现耐药;抑制NRF2可逆转肝癌细胞SMMC-7721对索拉非尼的耐药情况。     

黄芪水提物对体外培养人肝癌细胞增殖及代谢的影响

目的研究中药黄芪(AMB)提取物对体外培养的人肝癌细胞的抑癌活性.方法AMB经粉碎、浸提、超速离心、减压浓缩、冷冻干燥得AMB提取物.人肝癌SMMC-7721细胞经AMB提取物处理不同时间后以MTT法测其对人肝癌SMMC-7721细胞线粒体代谢活性的影响,以细胞记数法观察了其对细胞增殖的影响.结果①AMB提取物明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长,降低线粒体代谢活性;②经AMB提取物处理24 h后的人肝癌细胞,即使更换为正常培养基,其线粒体代谢活性及细胞增殖与对照相比仍差异显著.结论中药AMB提取物含抑癌活性物质,能抑制体外培养的肝癌细胞增殖和降低线粒体代谢活性.     

氯化两面针碱对肝癌细胞增殖的抑制作用及机制探讨

目的探讨氯化两面针碱（NC）对体外培养的肝癌SMMC-7721细胞（以下简称肝癌细胞）DNA聚合酶6催化亚基基因P125蛋白的影响。方法取对数生长期的SMMC-7721肝癌细胞分为给药组和对照组,给药组分别予0．15、0．30、0．60mg／L的NC作用10d。采用集落形成试验观察SMMC-7721细胞的增殖抑制作用;Westernblot法检测P125蛋白表达。结果与对照组相比,给药组NC作用后肝癌细胞集落形成数量明显减少（P〈0．05）,并呈现剂量依赖性。给药组P125蛋白表达明显降低,呈剂量依赖性。结论NC可明显抑制肝癌细胞增殖,其作用机制之一可能是从蛋白水平抑制P125表达。     

雷公藤甲素对小鼠实验性结肠炎Th17／Treg的调节作用

目的探讨雷公藤甲素对三硝基苯磺酸（TNBS）诱导的结肠炎小鼠肠道Th17／Treg平衡的调节作用。方法40只BALB／c小鼠随机分为4组：对照组、模型组、雷公藤甲素低剂量组和高剂量组。模型组、雷公藤甲素低剂量组和高剂量组用TNBS诱导小鼠结肠炎模型,造模后,雷公藤甲素低剂量组和高剂量组分别腹腔注射35肛g·kg^-1·d^-1、70μg·kg^-1·d。雷公藤甲素,模型组每天腹腔注射生理盐水。对照组用50％乙醇溶液灌肠后每天腹腔注射生理盐水。2周后处死各组小鼠,评估各组小鼠结肠组织的大体和组织学评分,实时荧光定量RT-PCR检测结肠组织IL-17、RORC和Foxp3mRNA表达水平。结果雷公藤甲素低剂量和高剂量组小鼠结肠组织大体和组织学评分显著低于模型组（P〈0．05）,结肠组织IL-17、RORCmRNA表达显著低于模型组（P〈0．05）,Foxp3mRNA表达显著高于模型组（P〈0．05）,雷公藤甲素低剂量、高剂量组与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论雷公藤甲素可能通过下调RORC表达抑制Th17细胞分化、IL-17产生,上调Foxp3促进Treg细胞形成,从而调节结肠炎小鼠Th17／Treg平衡,抑制肠道炎症。     

抗人VEGF发卡状核酶基因的构建及其对肝癌细胞VEGF蛋白表达的影响

利用计算机辅助设计合成针对人VEGF的发卡状核酶（RZ）,定向亚克隆于真核表达载体pcDNA3．1^＋中,转染肝癌细胞SMMC-7721,RT—PCR鉴定。ELISA法和MTT法检测SMMC-7721细胞对照组、SMMC-7721／pcDNA3．1^＋空载体对照组和SMMC-7721／RZ基因转染组细胞VEGF表达和增殖情况,流式细胞术检测各组细胞周期和凋亡情况。结果为SMMC-7721／RZ基因转染组细胞VEGF表达水平和细胞增殖速率显著低于SMMC-7721细胞对照组和SMMC-7721／pcDNA3．1’空载体对照组。MC-7721／RZ基因转染组细胞出现凋亡峰,其凋亡率达11．O％,而细胞对照和空载体细胞对照均末出现。认为SMMC-7721／RZ转基因细胞株的成功构建和生物学特性的初步研究为进-步建立裸鼠人肝癌模型及评价RZ对体内肝癌生长的抑制作用奠定了-定的基础。     

复方苦参注射液对肝癌细胞增殖及自噬的影响

目的研究复方苦参注射液抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖及诱导其自噬的作用,为复方苦参注射液用于肝癌治疗提供依据。方法复方苦参注射液(终浓度为0、0.5、1、2、4 mg/m L)处理人肝癌细胞SMMC-7721 48 h,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;用RT-PCR及Western-blot方法检测LC3及SQSTM1的转录水平和蛋白表达水平。结果复方苦参注射液可显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,作用呈浓度依赖性;RT-PCR方法检测到LC3及SQSTM1的转录水平均上调;Western-blot法检测到LC3蛋白表达上调,SQSTM1蛋白表达下降。结论复方苦参注射液可显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721并诱导细胞发生自噬现象。     

塞来昔布联合 NK 细胞对裸鼠人肝癌皮下移植瘤生长的影响

目的：观察塞来昔布联合NK细胞对裸鼠人肝癌细胞SMMC-7721皮下移植瘤生长的影响,并探讨其可能的作用机制。方法选择裸鼠40只,制备人肝癌细胞SMMC-7721移植瘤模型,随机分为对照组、NK细胞组、塞来昔布组及联合干预组各10只。 NK细胞组瘤内注射NK细胞悬液0．6 mL,每7 d注射1次,共注射5次;塞来昔布组从接种后第3天起给予塞来昔布100 mg/kg灌胃,每天1次,连续35 d;联合干预组同时给予塞来昔布和NK细胞,给药剂量及途径与单用组相同;对照组灌胃和瘤内注射等量生理盐水。35 d后切取移植瘤组织计算体积,称取瘤质量,并计算抑瘤率;TUNEL法评价肿瘤细胞凋亡情况,免疫组化法检测肿瘤内VEGF、Bax、Bcl-2、caspase-3、Ki-67、NF-κB的阳性表达。结果联合干预组移植瘤体积、肿瘤质量均明显低于单用组（ P均＜0．05）,抑瘤率、凋亡指数明显高于单用组（ P均＜0．05）。联合干预组移植瘤中VEGF、Bcl-2、NF-κB、Ki-67表达明显低于单用组（ P均＜0．05）,Bax、caspase-3表达明显高于单用组（P均＜0．05）。结论塞来昔布联合NK细胞可明显抑制裸鼠人肝癌细胞SMMC-7721皮下移植瘤的生长;其作用机制可能是通过促进凋亡级联通路上Bax、caspase-3的表达,抑制VEGF、Bcl-2、NF-κB、Ki-67的表达而实现。     

原花青素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的作用

目的探讨葡萄籽提取物原花青素（PA）对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响。方法取对数生长期人肝癌细胞SMMC-7721,分别加人20、40、60mg／L的PA培养24h后,采用MTI＂法检测细胞增殖抑制率、流式细胞仪分析细胞凋亡率,并测定细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）和活性氧簇（ROS）等指标。结果20、40、60mg／L的PA对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制率分别为（22．7±1．8）％、（38．6±1。9）％、（47．6±2．5）％,细胞凋亡率分别为（19．7±5．1）％、（29．7±2．9）％、（48．5±4．5）％,两者均随PA浓度的升高而增高（P均〈0．01）;与对照组比较,各剂量组人肝癌细胞SMMC-7721中MDA、ROS水平逐渐下降（P〈0．05）;SOD活力逐渐上升（P〈0．05）。结论PA在体外可呈浓度依赖性抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖及凋亡,其作用机制可能与清除ROS、提高SOD的活性、降低脂质过氧化反应等有关。     

脂质体法转染人肿瘤坏死因子-α基因对裸鼠人肝癌移植瘤的抑制效应及其机制

背景：外源性肿瘤坏死因子（TNF）-α联合化疗药物对肿瘤的疗效较单独应用更佳,为肿瘤治疗提供了新的方向。目的：对裸鼠人肝癌移植瘤模型行脂质体介导的TNF-α基因瘤内转染,研究肝癌移植瘤的生长抑制情况及其机制。方法：经脂质体介导,以真核表达质粒pSVK3-TNF-α分别转染人肝癌细胞株SMMC-7721和裸鼠皮下SMMC-7721细胞移植瘤。测定SMMC-7721细胞的TNF-α浓度,甲基噻唑基四唑（MTT）法测定细胞杀伤率,流式细胞仪和原位末端标记（TUNEL）法检测细胞周期和凋亡情况。结果：TNF-α转基因治疗裸鼠人肝癌移植瘤结束第5d,移植瘤体积为（75.28±35.35）mm^3,显著低于对照组的（326.45±103.64）mm^3（P〈0.05）。TNF-α基因体外转染SMMC-7721细胞24、48、72h后,基因转染组每106个细胞的TNF-α表达量分别为（1680±187）pg、（1702±205）pg和（1650±164）pg,细胞杀伤率分别为（37.1±2.4）%、（79.4±4.3）%和（84.2±4.6）%。基因转染72h后,SMMC-7721细胞增殖指数为（30.5±3.2）%,显著低于对照组的（46.1±3.9）%（P〈0.05）;凋亡指数为（10.0±2.1）%,显著高于对照组的（2.7±0.4）%（P〈0.01）。结论：脂质体介导的TNF-α基因转染裸鼠人肝癌移植瘤可明显抑制肿瘤生长,其机制可能为影响肿瘤细胞生长周期以及诱导肿瘤细胞凋亡。     

5-Aza-CdR对肝癌细胞DAPK基因甲基化的影响

目的探讨去甲基化药物5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC-7721中死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子CpG岛甲基化的影响。方法不同浓度(0.5μmol/L、5.0μmol/L、50.0μmol/L)5-Aza-CdR处理人肝癌细胞株SMMC-772172小时后,用焦磷酸测序法检测处理前后DAPK基因启动子CpG岛甲基化水平。以未经处理的人肝癌细胞株SMMC-7721作为对照组。结果未经5-Aza-CdR处理的肝癌细胞SMMC-7721细胞株DAPK基因启动子高度甲基化,平均水平为76.71%。经3种不同浓度药物处理72小时后,各组间甲基化平均水平分别为78.29%、77.57%和66.00%,各组间甲基化水平差异均有统计学意义(F=39.71,P<0.01)。其中,50.0μmol/L处理组细胞甲基化水平最低,与其他各组差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 SMMC-7721细胞株DAPK基因启动子区呈高度甲基化状态;5-Aza-CdR能够逆转人肝癌细胞SMMC-7721DAPK基因启动子区域的甲基化状态。     

土三七水煎剂所致肝小静脉闭塞病大鼠模型的建立

目的通过观察不同浓度土三七水煎剂所致的大鼠肝脏病理学变化，建立一种模拟临床患者服药所致肝小静脉闭塞病（HVOD）的动物模型。方法土三七2100g水煎制成浓度为1．5g/ml土三七生药煎剂，SD大鼠76只随机分为A、B、C、D四组，A、B、C组每组20只，分别以土三七水煎剂高（15g·kg^-1·d^-1）、中（7．5g·kg^-1·d^-1）、低（3．75g·kg^-1·d^-1）浓度灌胃，D组16只以温开水灌胃作为对照，各组大鼠雌、雄各半。每日测量大鼠体重并记录异常表现，灌胃1周和2周后各组大鼠分别处死各半，肝脏标本行病理检查，HE及Masson染色，光镜下参照Deleve评分标准判定病变及严重程度。结果土三七高、中、低浓度组分别有83．3％（15／18）、75．0％（15／20）、40．0％（5／20）出现了肝小静脉闭塞病病理表现；相同剂量下雌性较雄性更易发病，雌、雄鼠造模成功率分别为79．3％（23／29）和41．3％（12／29）（P=0．003）。结论土三七水煎剂灌胃可以成功建立HVOD大鼠模型，剂量和大鼠性别与造模成功率直接相关。     

长期血浆内皮素-1水平升高对异丙肾上腺素慢性致室性心律失常作用的影响

目的探讨长期血浆内皮素-1（ET-1）水平升高对异丙肾上腺素（ISO）慢性致室性心律失常（VA）作用的影响。方法雄性新西兰大耳兔60只,采用随机数字法分为对照组、血浆ET-1升高组（ET-1组）、ISO组及ET-1±ISO组,每组15只。所有动物连续14d经耳缘静脉注射药物,对照组注射0.9％NaCl（1ml·kg^-1·d^-1）,ET-1组注射ET-1（10μg·kg^-1·d^-1）、ISO组注射ISO（300μg·kg^-1·d^-1）、ET—I±ISO组同时注射ET-1与ISO（剂量及方法同前）。药物注射7d后,在整体心脏Langendorff灌流条件下行离体电生理研究,分别记录和测量左心室前游离壁（LAF）心外膜单相动作电位（MAP）、有效不应期（VEItP）,并构建动作电位恢复性（APDR）曲线。对所有离体心脏于LAF处,行程控增频电刺激以观察动作电位时限（APD）电交替的发生,猝发快速电刺激用以进行VA的诱发。结果与对照组相比,ISO组90％MAP[MAPD90,（164．91±13．14）ms对（144．13±8．02）ms]、VERP[（144．06±13．73）ms对（129．50±7．65）ms]、APDR曲线最大斜率[Smax,（1．51±0．16）对（0．87±0．12）]、诱发APD电交替的最大起搏周长（PCL）中位数（170ms对130ms）和VA诱发率（86．67％对13．33％）均增大（P均〈0．01）,VERP／MAPD90变化不明显（P〉O．05）。ET-1组MAPD。[（169．41±13．97）ms对（144．13±8．02）ms]、AP—DR曲线Smax[（1．47±0．18）对（0．87±0．12）]、诱发APD电交替的最大PCL中位数（160ms对130ms）及VA诱发率（66．67％对13．33％）均增大（P均〈0．01）,而VERP／MAPD。显著减小[（0．80±0,05）对（0．90±0．04）,P〈O．01],VERP变化不明显（P〉0．05）。ET-1±ISO组各项电生理指标结果与对照组相比均差异无统计学意义（P均〉0．05）;与ISO组相比,ET-1±ISO组MAPD90[（147．66±9．68）ms对（164．91±13．14）ms]、VERP[（130．60±10．75）ms对（144．06±13．73）ms]、APDR曲线Smax[（0．94±0．14）对（1．51±0．16）]、诱发APD电交替的最大PCL中位数（140ms对170ms）及VA诱发率（40．00％对86．67％）均减小（P均〈0．01）,VERP／MAPD。变化不明显（P〉0．05）。结论长期血浆ET-1水平升高可减弱ISO对心脏电生理特性的慢性损害,从而起到抗VA作用。     

合并感染与否的2型糖尿病患者CSII应用的胰岛素剂量比较

对伴与不伴感染的2型糖尿病（T2DM）患者行连续皮下胰岛素输注（CSII）治疗,发现感染组平均胰岛素用量（0．67±0．24U·kg^-1·d^-1）,较非感染组（0．60±0．18U·kg^-1·d^-1）高（P〈0．05）;主要为基础率高,餐前量在两组间无统计学差异（P〉0．05）;影响血糖达标和胰岛素用量的主要因素是感染、血糖水平和体质指数。     

福辛普利对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护作用

目的探讨福辛普利对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护机制。方法制备大鼠糖尿病模型并分别给予不同剂量福辛普利灌胃。12周后检测血糖、血清肌酐、肾重指数,观察肾小球体积、肾小球基底膜变化,测定肾小球平均截面积（MGA）和肾小球平均体积（MGV）。结果DM组及不同剂量福辛普利组间血糖、血清肌酐均无统计学差异;与DM组相比,5mg·kg^-1·d^-1组肾重指数降低（P〈0．05）,10mg·kg^-1·d^-1组肾重指数明显降低（P〈0．01）,各福辛普利组MGA和MGV均缩小（P均〈0．01）。结论早期应用福辛普利在一定程度上可减轻糖尿病大鼠肾脏的损伤。     

盐酸决奈达隆对家兔体重和甲状腺功能及肝功能的影响

目的研究决奈达隆不同剂量对家兔体重、甲状腺功能及肝功能的影响,探讨其安全性。方法选择新西兰兔27只,随机分为对照组（n=7）,决奈达隆低剂量组[n=9,50mg/（kg^-1·d^-1）,LDR],决奈达隆高剂量组[n=11,100mg/（kg^-1·d^-1）,HDR],专业灌胃器灌胃每日一次,对照组给予等量生理盐水,4周后,观察家兔一般状况、体重,耳缘静脉取血测总T4,总T3,丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）、谷氨酰转肽酶（γ-GGT）、碱性磷酸酶（ALP）。结果 LDR组及HDR组各出现2例体重负增长,但三组之间体重增长无差异,三组ALT水平分别为：（20.43±4.23）IU/L,（21.67±5.07）IU/L和（36.82±18.00）IU/L,HDR与对照组之间存在统计学意义（P〈0.05）,与LDR以及LDR与对照组之间无统计学意义;三组ALP水平分别为（143.14±50.9）IU/L,（109.22±38.6）IU/L和（153.82±40.55）IU/L,HDR与LDR之间存在统计学意义（P〈0.01）,三组间T3,T4,T4/T3,AST,γ-GGT水平均无统计学意义,剂量水平和T3、T4、ALT水平无相关性。结论在家兔模型中决奈达隆高剂量组可导致轻度ALT水平异常,可能抑制体重增长,但对甲状腺功能无明显影响。     

膈下逐瘀汤加减方对人肝癌细胞bax、bcl-2、P53基因表达调控的影响

目的：探讨膈下逐瘀汤加减方（GXZY）时人肝癌细胞bax、bcl-2、P53基因表达调控的影响。方法：制备5组试验血清：不合药物血清（无药血清组），阳性对照药物复方斑蝥胶囊含药血清（阳性血清组）和GXZY低、中、高浓度含药血清（5％血清组、10％血清组、15％血清组）。检测各组药物血清及对照血清对sMMC-7721细胞增殖、细胞周期、肝癌相关基因（bax、bcl-2、P53）表达的影响。结果：GXZY各血清组与阳性血清组抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖、调控癌基因与抑癌基因、促进癌细胞凋亡均具有显著统计学意义（P〈0．05或P〈0．01），其中GXZY高浓度血清组的作用优于阳性血清组。结论：膈下逐瘀汤加减方能够抑制人肝癌细胞增殖，促进细胞凋亡。