EGCG对胰腺癌细胞PANC-1生长的抑制作用及机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人胰腺癌细胞株PANC-1生长的影响及可能作用机制。方法采用不同浓度的EGCG处理PANC-1细胞,以四唑氮蓝还原法(MTT)观察处理后细胞的生长情况;流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞周期调节蛋白p27 mRNA表达水平的变化;Western-Blot检测p27蛋白水平的表达。结果 EGCG处理后PANC-1细胞生长明显抑制,并且呈现时间、剂量依赖性;G0/G1期的细胞比例明显增高,S期的细胞比例则明显降低;细胞周期调节蛋白p27的mRNA水平和蛋白表达水平随着EGCG浓度的增加而升高。结论 EGCG可以明显抑制胰腺癌PANC-1细胞的生长;其可能机制为上调细胞周期调节蛋白p27的表达水平,导致细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制细胞周期从G1期向S期的转化,最终影响细胞增殖。     

表没食子儿茶素没食子酸诱导人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因去甲基化及转录

本研究旨在探讨表没食子儿茶素没食子酯酸（epigallocatechin-3-gallate．EGCG）诱导人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因去甲基化及转录激活的可能机制。以生长曲线、MTT法检测EGCG对CA46细胞生长和增殖的抑制作用；利用流式细胞仪DNA含量分析法探讨EGCG对CA46细胞周期的影响；采用巢式甲基特异性PCR法（nested—methylation specific PCR，n-MSP）及DNA克隆测序分析法检测EGCG作用前后CA46细胞p16基因甲基化状态；应用RT—PCR检测p16、DNA甲基转移酶（DNMT3A、DNMT3B）基因mRNA的表达。结果表明：与对照组相比，3组不同浓度EGCG均能明显抑制CA46细胞生长，G0／G1期细胞增加；不同浓度EGCG作用48小时后p16基因甲基化程度减弱；未处理组细胞p16基因呈微弱表达，未用药组、不同浓度EGCG（6、12、24）μg／ml处理组条带灰度值与β-actinl比值分别为（0．05±0．01）、（0．19±0．03）、（O．39±0．10）、（0．85±0．09），各处理组p16基因mRNA表达明显高于未用药组，其差异有显著意义（P〈0．05）；与对照组相比，EGCG作用48小时后CA46细胞甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达均下降。结论：EGCG可能通过抑制甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B和（或）直接对p16基因去甲基化，使p16基因mRNA表达上调，恢复其活性，从而实现其时细胞周期的调控功能，将细胞阻滞于G0／G1期，抑制CA46细胞的增殖     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人急性单核细胞白血病细胞株U937的作用及机制研究

本研究探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人急性单核细胞白血病细胞株U937的作用。采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测EGCG对U937细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测EGCG对U937细胞周期的影响;采用RT-PCR、Westren blot法分别检测p16mRNA、蛋白的表达;采用nMSP法检测U937细胞p16甲基化状态变化;采用RT-PCR法检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA的表达。结果表明:EGCG可以剂量依赖性和时间依赖性地抑制U937细胞增殖(r=0.71),且呈剂量依赖性诱导G0/G1期细胞阻滞;EGCG可以呈剂量依赖性上调U937细胞p16mRNA、蛋白的表达;EGCG可以呈剂量依赖性减弱U937细胞p16甲基化程度;EGCG可以剂量依赖性地下调U937细胞DNMT3A、DNMT3B mRNA表达,而对DNMT1mRNA的表达无影响。结论:EGCG在体外通过抑制DNMT3A、DNMT3B和(或)直接使异常高甲基化的p16启动子CpG岛DNA去甲基化,恢复p16mRNA水平和蛋白水平的表达,调控U937细胞阻滞于G0/G1期,抑制U937细胞的增长。     

ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病细胞周期的调控作用

本研究探讨ERK和P38信号转导途径对慢性髓系白血病（CML）细胞周期的调控作用。以RT-PCR、Western blot和FCM方法分别检测CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、p38、cyclin D2、cyclin E、p27的mRNA表达及蛋白表达（其中ERK和P38为磷酸化ERK和磷酸化P38）及细胞周期分布,并分析其相关关系。结果表明：CML患者白血病细胞和K562细胞中ERK、P38、cyclin D2、cyclin E的mRNA表达和蛋白表达增高,P27的表达降低,且cyclin D2蛋白表达与cyclin E、ERK和P38蛋白表达呈正相关（P〈0.01）,与P27蛋白表达呈负相关（P〈0.01）。G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,与对照组相比有显著性差异。结论：CML中P38、ERK mRNA表达和活性增加,激活下游的cyclin D2、cyclin E和P27等细胞周期调控因子,致使G0/G1期缩短,细胞快速通过G1/S转换点进入S期,加速细胞周期进程和细胞增殖,导致CML的发生。     

miR-27a通过调控Sprouty2促进胰腺癌细胞PANC-1的生长

目的探讨miR-27a在胰腺癌细胞生长过程中的作用及相关机制。方法应用RT-PCR检测胰腺癌组织中miR-27a的表达水平;应用CCK-8生长曲线和软琼脂克隆形成实验检测miR-27a对胰腺癌细胞PANC-1生长能力的影响;应用双荧光素酶报告基因实验和Westernblot筛选miR-27a的靶基因。结果 (1)相比较于癌旁正常胰腺组织,胰腺癌组织中miR-27a表达显著上调;(2)抑制胰腺癌细胞PANC-1内源性miR-27a能够显著下调癌细胞的生长活性;(3)miR-27a能够直接调控Sprouty2基因3'UTR中的MRE序列;(4)抑制PANC-1细胞内源性miR-27a能够显著上调Sprouty2蛋白35%。结论 miR-27通过调控胰腺癌细胞PANC-1中Sprouty2蛋白表达发挥癌基因功能。     

丙戊酸钠对Kasumi-1细胞细胞周期的阻滞作用及其机制探讨

目的 研究组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂丙戊酸钠(VPA)对白血病细胞系Kasnmi-1细胞周期的影响并探讨其分子机制.方法 不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞不同时间,碘化丙锭染色流式细胞术分析细胞周期的变化.RT-PCR及Western blot方法 分析细胞周期蛋白D1(cyclin D1)及周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21 WAF1/CIP mRNA或蛋白水平变化.结果 ①VPA抑制Kasumi-1细胞的细胞周期,使其阻滞于G0/G1期.3 mmol/L VPA处理3 d,G0/G1期细胞由(50.7±2.8)%上升至(80.7±1.7)%.②以3 mmol/LVPA处理Kasumi-1细胞不同时间,与对照组比较,3 mmol/L VPA组cyclin D1 mRNA表达水平下调;以不同浓度VPA处理Kasumi-1细胞3 d,结果 发现随着VPA药物浓度增加cyclin D1 mRNA表达水平降低,呈现剂量依赖性.③VPA诱导p21WAF1/CIP mRNA表达明显增加,呈现时间及剂量依赖性.不同浓度VPA处理细胞3 d时,随着用药浓度的增加,p21WF1/CIP蛋白相对表达水平增加,3 mmol/L VPA处理细胞2 d与0 d比较,p21 WAF1/CIP蛋白相对表达水平明显增加(2.498±0.240对0).结论 VPA可以通过对cyclin D1及周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21WAF1/CIP调节使Kasumi-1细胞周期阻滞于G0/G1期.     

miR-214靶向RASSF5基因调节口腔癌细胞CAL27生长活力的实验研究

目的研究miR-214靶向Ras相关区域家族5(RASSF5)基因对口腔癌细胞CAL27生长活力的调节作用。方法收集邢台市人民医院手术切除的口腔癌组织和癌旁组织,检测miR-214、RASSF5的表达水平;培养口腔癌细胞CAL27,分为转染阴性对照(NC)模拟物的NC模拟物组、转染miR-214模拟物的miR-214模拟物组,检测细胞生长活力、细胞周期分布及细胞周期基因的表达水平。结果口腔癌组织中miR-214的表达水平明显高于癌旁组织,RASSF5的mRNA表达水平明显低于癌旁组织(P 0.05),且口腔癌组织中miR-214的表达水平与RASSF5的mRNA表达水平呈负相关(P 0.05); miR-214模拟物组口腔癌细胞CAL27细胞的生长活力值及S期、G2/M期比率均明显高于NC模拟物组,G0/G1期比率明显低于NC模拟物组且细胞中RASSF5、p53、p21的mRNA表达水平明显低于NC模拟物组,Cyclin D1、Cyclin E的mRNA表达水平明显高于NC模拟物组(P 0.05)。结论 miR-214通过靶向抑制RASSF5基因的表达能够增强口腔癌细胞CAL27的生长活力。     

六亚甲基二乙酰胺对HL-60细胞细胞周期及其调节蛋白表达的影响

六亚甲基二乙酰胺(hexamethylene bisecetamide,HMBA)是一种极性诱导分化剂，已应用于临床治疗急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征(MDS)，但其诱导髓系白血病细胞分化的机制尚不清楚。本研究观察了HMBA对HL—60白血病细胞细胞周期及其调节蛋白表达的影响，以探讨其药理机制。用流式细胞术检测HMBA对HL—60细胞细胞周期分布和细胞周期蛋白D、E及p27表达的影响。用RT—PCR研究HMBA对细胞周期负性调控分子CKI p15，p16，p27基因mRNA表达的影响。结果表明，HMBA主要使HL—60细胞阻滞于G0/G1期，经HMBA处理后HL-60细胞胞浆内细胞周期蛋白E蛋白表达显降低，而细胞周期蛋白D和p27蛋白表达则显增高；未经HMBA处理的HL-60细胞p15，p16 mRNA均无表达；3mmol／L HMBA处理24小时后p15 mRNA出现弱阳性条带，48小时和72小时后出现强阳性条带，p16 mRNA则在48小时后出现弱阳性条带，72小时后出现强阳性条带；p27 mRNA在未经处理和处理后24，48和72小时后均出现强阳性条带，阳性程度无明显差异。结论：HMBA的药理机制之一可能是通过下调细胞周期蛋白E，上调p27蛋白的表达，同时使得p15，p16基因mRNA重获表达。阻滞HL—60细胞周期于G1期，从而发挥其抗增殖作用。     

RNA特异性干扰bcr-abl融合基因联合p27基因克隆对K562细胞的影响

本研究旨在探讨RNA干扰抑制慢性髓系白血病bcr-abl融合基因表达,以及RNAi和p27基因克隆联合作用对K562细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用。以细胞系K562为研究对象,合成并转染针对K562细胞bcr-abl融合基因融合位点的21nt siRNA,应用Northern blot法检测bcr-abl融合基因的表达,Western blot法检测BCR-ABL蛋白及凋亡相关蛋白BCL-xL的表达;同时应用RT-PCR扩增p27基因,构建P27-pcDNA3.1载体,转染p27基因入缺失p27基因的K562细胞,经筛选得到G418抗性的K562细胞株;经Western blot证实有P27蛋白表达后,联合应用RNA干扰及p27基因克隆,通过MTT法及流式细胞仪等检测联合作用后对K562细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用。结果表明,RNA干扰组K562细胞bcr-abl融合基因的表达水平明显下降,转染24小时时有18.4%的K562细胞发生凋亡,细胞凋亡相关蛋白BCL-xL的表达水平下调,出现明显的G1期阻滞;表达外源性P27蛋白的P27-pcDNA3.1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株。流式细胞仪检测显示,G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少;RNA干扰与p27基因克隆联合作用于K562细胞后,凋亡细胞比例明显上升(33.4%)。MTT法显示,细胞存活率较单纯p27-K562细胞组及RNA干扰-K562细胞组均明显下降(p0.01和p0.05)。结论:特异性siRNA分子可以抑制bcr-abl融合基因的表达,诱导K562细胞分化或凋亡。RNA干扰联合p27基因克隆对抑制K562细胞增殖及促凋亡方面具有协同作用。     

As_2O_3诱导急性淋巴细胞白血病细胞系Molt4细胞p15基因表达的研究

目的　探讨砷剂与甲基化的关系。方法　先用甲基化特异的PCR检测急性T淋巴细胞白血病细胞系Molt4细胞p15基因甲基化 ,然后用RT PCR方法检测用As2 O3 处理或未处理Molt4细胞的p15基因mRNA表达 ,用流式细胞仪检测细胞周期并绘制生长曲线。结果　Molt4细胞p15基因发生甲基化 ,p15mRNA不表达 ,Molt4细胞与As2 O3 一起培养后 ,p15基因mRNA重新表达 ,G0 G1 期细胞明显增多 ,Molt4细胞生长受到抑制。结论　As2 O3 能够去p15基因甲基化 ,激活p15基因的mRNA表达 ,恢复p15基因的细胞周期负调节功能。     

超声联合微泡抑制血管平滑肌细胞增殖机制的研究

目的观察超声联合微泡对血管平滑肌细胞(VSMCs)周期分布及细胞周期调节蛋白激酶(CDK2)和抑制物p27表达的影响,探讨超声联合微泡抑制VSMCs增殖的作用机制。方法体外培养的VSMCs经血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激后,以低频连续波超声(频率1MHz、声强为0.3W/cm2)联合脂质微泡(1μl/ml)辐照VSMCs60s。分别用流式细胞仪、免疫细胞化学法检测细胞周期分布和细胞周期调控蛋白CDK2、p27的表达。结果与对照组比较,PDGF-BB刺激组细胞G0～G1期细胞比例下降而S期细胞比例增高(P<0.01),CDK2表达上调而p27表达降低(P<0.01);与PDGF-BB组相比,超声联合微泡组G0～G1期细胞比例增高,S期细胞比例降低(P<0.01),CDK2表达下调而p27表达增高(P<0.01)。结论超声联合微泡下调CDK2蛋白和上调p27蛋白的表达,阻滞细胞周期进程,可能是抑制VSMCs增殖的机制之一。     

As2O3诱导急性淋巴细胞白血病细胞系Molt4细胞p15基因表达的研究

目的 探讨砷剂与甲基化的关系。方法 先用甲基化特异的PCR检测急性T淋巴细胞白血病细胞系Molt4细胞p15基因甲基化,然后用RT－PCR方法检测用As2O3处理或未处理Molt4细胞的p15基因mRNA表达,用流式细胞仪检测细胞周期并绘制生长曲线。结果 Molt4细胞p15基因发生甲基化,p15 mRNA不表达,Molt4细胞与As2O3一起培养后,p15基因mRNA重新表达,G0－G1期细胞明显增多,Molt4细胞生长受到抑制。结论 As2O3能够去p15基因甲基化,激活p15基因的mRNA表达,恢复p15基因的细胞周期负调节功能。     

肌醇5'磷酸酶基因突变对K562细胞周期蛋白和Akt磷酸化的影响

目的 从分子水平探讨肌醇5'磷酸酶(SHIP)基因突变对人白血病细胞系K562细胞周期及其相关基因表达的影响.方法 应用携带野生型和突变型SHIP及绿色荧光蛋白的慢病毒及空载体慢病毒质粒转染K562细胞,通过流式细胞术检测K562/SHIP细胞转染效率、细胞增殖指数及细胞周期变化;MTT法检测细胞增殖活性改变,实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测SHIP mRNA水平变化,Western blot检测各组K562细胞SHIP、细胞周期蛋白(cyclin)D1、p21WAF1/CIPI、P27KIP1蛋白表达水平及Akt磷酸化变化.结果 野生型SHIP基因能明显抑制K562细胞增殖,并产生明显的G0/G1期阻滞[G0/G1期细胞分别为(34.2±7.8)%和(0.7±8.3)%,P<0.01];但SHIP基因点突变并未影响K562细胞增殖及细胞周期改变[G0/G1期细胞分别为(33.4±4.2)%和(36.3±6.7)%,P>0.05].Western blot结果发现转染野生型SHIP基因后K562细胞Akt磷酸化和cyclin D1表达水平明显下降(P<0.01),p21WAF1/CIPI、p27KIP1表达增高,而突变型SHIP基因对Akt磷酸化水平和细胞周期蛋白表达几乎没有影响(P>0.05).结论 ①野生型SHIP基因通过下调K562细胞Akt磷酸化水平,进而抑制其下游cyclin D1表达,上调p21WAF1/CIPI和p27KIP1基因表达,导致细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制K562细胞增殖;②SHIP基因突变体(TTC→CTC,Phe→Leu)丧失了对K562细胞的增殖抑制作用,提示SHIP基因对K562细胞增殖的负调控作用有赖于其基因结构和功能正常.     

Fascin shRNA通过Notch1信号通路调控结直肠癌细胞的生长

目的:研究聚束蛋白(Fascin)shRNA对结直肠癌细胞生长的影响。方法:结直肠癌细胞HT29感染FascinshRNA和shRNAcontrol慢病毒,real-timePCR和Western印迹法分别测定细胞中FascinmRNA和蛋白的表达水平,同时用Western印迹法检测细胞中的Notch1蛋白水平。用Notch1信号通路抑制剂DAPT处理下调Fascin后的HT29细胞,MTT测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期,Western印迹法检测周期蛋白p27、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达水平。结果:Fascin shRNA慢病毒感染后的细胞中Fascin转录和表达水平均降低,而shRNA control慢病毒感染对细胞中的Fascin表达水平没有影响。沉默Fascin的细胞增殖能力降低,细胞G0/G1比例升高,细胞中Cyclin D1蛋白水平降低,p27蛋白水平升高。沉默Fascin能够降低细胞中Notch1蛋白水平,并且Notch1信号通路抑制剂DAPT可以协同沉默Fascin,进一步抑制结直肠癌细胞增殖,阻滞结直肠癌细胞周期,减少CyclinD1蛋白表达,促进p27蛋白表达。结论:FascinshRNA通过抑制Notch1信号通路阻碍结直肠癌细胞增殖,将细胞周期阻滞在G0/G1期。     

短发夹RNA靶向抑制环氧化酶-2基因表达对肺癌细胞A549增殖的影响

目的评价短发夹RNA（shorthairpinRNA，shRNA）靶向肺癌细胞A549环氧化酶-2（COX-2）基因表达的抑制作用，并观察对肺癌细胞A。生长和细胞周期的影响。方法将抑制COX-2基因的shRNADNA模板插入到真核表达载体pGenesil-1的U6启动子下游，构建靶向抑制COX-2基因的重组表达载体pshRNA-COX-2。将试验分为3组：未转染肺癌细胞A549组、阴性对照HK组和pshRNA-COX-2转染组。用脂质体Lipofectamine^TM 2000转染肺癌细胞A549逆转录（RT）-PCR和免疫印迹法（Wb）分别检测COX-2基因mRNA和蛋白表达情况，流式细胞术检测细胞周期，细胞计数检测细胞生长变化。结果与阴性对照组相比，pshRNA-COX-2重组表达载体抑制COX-2mRNA及蛋白表达的抑制率分别为72．2％和48．6％；G0-G1期细胞由63．7％上升为71．0％，S期细胞由26．5％下降为20．0％；细胞生长明显减慢。结论pshRNA-COX-2重组表达载体能显著抑制肺癌细胞COX-2表达，引起G0-G1期细胞增多，S期细胞减少，从而抑制肺癌细胞生长。     

丙戊酸钠对Molt-4细胞增殖的影响及其作用途径探讨

目的 观察丙戊酸钠(VPA)对人急性T细胞白血病细胞系Molt-4细胞增殖和细胞周期的影响,并探讨其对Molt-4细胞p15INK4B基因甲基化状态的影响.方法 不同浓度VPA作用Molt-4细胞后,用MTr法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期的变化,半巢式甲基化特异PCR(MSP)法检测p15INK4B基因甲基化状态,RT-PCR方法检测p15基因、DNA甲基转移酶DNMT-1、DNMT3A、DNMrT3B mRNA的表达.结果 VPA可明显抑制细胞增殖,影响Molt-4细胞周期分布,5.0mmol/L VPA作用Molt-4细胞48 h,G0/G1期细胞为(66.87±3.31)%,S期细胞为(8.47±2.56)%,与未加VPA组相比,S期细胞明显下降,G0/G1期细胞明显升高(P＜0.05).经VPA作用后Molt-4细胞p15基因甲基化程度明显下降,p15基因表达水平明显增加,DNMT-1、DNMT3B mRNA表达水平下降,以DNMT-1下降较明显.结论 VPA可能通过抑制甲基转移酶DNMT-1和(或)DNMT3B表达使p15INK4B基因去甲基化,使p15基因表达上调,从而抑制Molt-4细胞增殖,使细胞周期阻滞于G0/G1期.     

甲基乙二醛对胰腺癌鼢LNC-1细胞增殖及凋亡蛋白表达的影响

目的：探讨甲基乙二醛（MGO）对胰腺癌 PANC-1细胞增殖影响及其作用机制。方法培养PANC-1细胞,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测MGO对PANC-1细胞增殖的影响;Hoechst33258染色细胞后显微镜下观察MGO处理后PANC-1细胞形态变化,Western blot检测凋亡家族蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达变化。结果 MTT检测发现MGO对人胰腺癌PANC-1有明显的抑制作用,且在一定程度上呈剂量时间依赖性;MGO处理48 h后的PANC-1细胞在Hoechst33258染色后荧光显微镜下呈现典型的凋亡细胞核固缩表现;Western blot检测表明MGO能显著降低Bcl-2蛋白表达量而提高Bax和Caspase-3蛋白表达量。结论 MGO能够有效抑制人胰腺癌PANC-1细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能是通过作用凋亡信号通路调控凋亡家族蛋白Bcl-2,Bax 和Caspase-3表达进而诱导PANC-1细胞凋亡。     

小干扰RNA抑制PTTG基因对人胰腺癌细胞PANC-1侵袭能力的影响

目的研究P1TG基因沉默对胰腺癌细胞侵袭力的影响,探讨其与胰腺癌细胞侵袭性的关系及调控机制。方法阳离子脂质体转染PITG siRNA对PANC-1中的PITG基因进行干扰;利用RT-PCR和Western blot技术检测其基因沉默效应;通过Transwell小室法测定PANC-1细胞侵袭能力的改变。结果转染PTTG siRNA后,PANC-1细胞中PTTG的mRNA转录和蛋白表达受抑,显著低于未经处理的PANC-1细胞（P〈0．01）。利用PITGsiRNA对PITG进行RNA干扰后,PANC-1细胞的侵袭能力下降。结论设计的PITGsiRNA能有效抑制体外培养PANC-1细胞中PTIG的mRNA转录和蛋白表达水平,实现其基因沉默效应。P1TG与人胰腺癌的侵袭能力密切相关,其表达水平下降导致细胞侵袭能力降低。     

热休克蛋白90抑制剂诱导Kasumi-1细胞凋亡和分化的机制探讨

目的探讨热休克蛋白90（HSP 90）抑制剂17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素（17AAG）诱导白血病细胞生长抑制、分化和凋亡作用.方法应用MTT比色法观察17AAG对白血病细胞系Kasumi-1细胞的生长抑制作用,用流式细胞术分析细胞周期和分化抗原的表达,用Annexin V标记、DNA凝胶电泳和流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot检测干细胞因子受体（KIT）蛋白水平,RT-PCR测定c-kit mRNA水平.结果17AAG明显抑制Kasumi-l细胞的生长,半数抑制浓度（IC50）为0.62 μmol/L;17AAG诱导Kasumi-1细胞凋亡呈时间、剂量依赖性,17AAG处理24 h早期凋亡细胞增加,48 h晚期凋亡细胞增加,早期凋亡细胞减少.17AAG可诱导Kasumi-1细胞髓系分化抗原CD11b及CD15表达增加,并呈剂量和时间依赖性.经17AAG作用后细胞阻滞于G0/G1期,伴有S期细胞减少.Western blot检测发现17AAG可降低KIT水平,处理2 h开始减少,处理20 h后KIT基本消失,但c-kit mRNA水平并未受影响.结论HSP 90抑制剂17AAG通过降解KIT蛋白抑制Kasumi-1细胞生长,使细胞阻滞于G0/G1期,诱导其发生凋亡及部分分化.     

丙戊酸钠抑制人多发性骨髓瘤U266细胞增殖及组蛋白乙酰化调控的研究

本研究探讨丙戊酸钠（valproic acid sodium,VPA）对U266细胞增殖的抑制作用及对组蛋白乙酰化修饰调控的影响。采用CCK-8法检测VPA对U266细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测VPA作用前后U266细胞周期的变化,半定量RT—PCR检测VPA作用后U266细胞中组蛋白去乙酰化酶1（HDAC1）mRNA的表达变化,Western blot方法检测VPA作用后HDAC1及组蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平的变化。结果表明,VPA对U266细胞增殖的抑制作用呈时间一浓度依赖性;2．5mmol／L的VPA处理细胞48小时后,细胞周期检测显示G0／G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降,细胞被阻滞在G0／G1期（P〈0．05）;RT—PCR证实VPA能够抑制HDAC1mRNA的表达水平;Western blot方法证实不同浓度VPA作用细胞48小时后HDAC1蛋白水平降低,组蛋白H3、H4乙酰化表达水平提高。结论：VPA能够抑制U266细胞增殖,使细胞阻滞于G0／G1期,这可能与VPA抑制HDAC1表达,上调组蛋白H3、H4乙酰化水平有关。