HPLC测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的方法学探讨

目的:探讨钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的HPLC含量测定方法.方法:采用RP-HPLC,对钩藤中钩藤碱和异钩藤碱的HPLC含量测定方法学进行考察,同时采用HPLC-ESI-MS研究钩藤碱和异钩藤碱在加热过程中的化学成分转化情况.结果:钩藤碱在0.064～5.100 mg线性关系良好,精密度良好;当样品采用同流提取时,平均加样回收率87.51％～88.83％,提取回收率12.60％;当样品采用超声提取时,平均加样回收率99.48％ ～ 103.2％,提取回收率47.08％.异钩藤碱在0.064～5.110 mg线性关系良好,精密度良好;当样品采用回流提取时,平均加样回收率107.9％～113.9％,提取回收率40.00％,当样品采用超声提取时,平均加样回收率97.00％～99.59％,提取回收率51.03％.质谱分析结果表明回收率不合格的原因是钩藤碱在提取过程中大部分转化为异钩藤碱,有一小部分转化为未知成分;异钩藤碱在提取过程中转化为钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱及22-O-β-D-glucopyranosyl isocorynoxeinic acid4种成分.结论:HPLC测定钩藤中钩藤碱和异钩藤碱宜采用超声提取法,并应注意同收率问题.     

反相HPLC法测定大鼠组织中异钩藤碱含量

目的建立测定大鼠组织中异钩藤碱的方法。方法应用甲醇沉淀蛋白,然后氮吹仪吹干甲醇复溶后用反相HPLC法直接测定。以WatersTM RP18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)为固定相,前置保护柱为WondasilC18(4.0mm×10mm,5μm),甲醇-水(70∶30)含0.03%的三乙胺为流动相,流速为0.8mL/min,检测波长为254nm。卡马西平做内标。结果异钩藤碱在大鼠组织中的含量标准曲线方程为:Y=48.558X+0.2076(n=6),r=0.9996,在0.16～16.0μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.66%,RSD=1.56%。结论该方法灵敏、快速、简便,专一性和重复性好。     

HPLC测定钩藤药材中钩藤碱、异钩藤碱的含量

目的：用HPLC法建立钩藤药材中钩藤碱（Rhynchophylline）、异钩藤碱（Isorhynchophylline）的含量测定方法,用于钩藤药材的质量控制。方法：色谱柱为Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以甲醇：水=65：35（V/V,含0.01mmol/L三乙胺,冰醋酸调PH7.0）为流动相,流速为1.0 ml.min-1,在245nm检测波长下,测定钩藤药材中钩藤碱、异钩藤碱含量。结果：钩藤碱及异钩藤碱的回归方程分别为Y=1.0E＋6x-21142和Y=1.1E＋6x-13566,线性范围分别为0.254～1.524μg和0.216～1.296μg,相关系数分别0.9999和0.9999。结论：本法正确、简便、快速,对于控制和评价钩藤药材的品质有重要意义。     

钩藤中钩藤碱、异钩藤碱的提取与含量测定

目的 研究和探讨钩藤药材中钩藤碱与异钩藤碱的最佳提取与含量测定方法.方法 采用Phenomenex C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm),以甲醇-0.01 mmol·L-1三乙胺水溶液(70:30,冰醋酸调pH 7.0)为流动相;流速:0.5 mL·min-1;柱温:30℃;进样器温度:5℃;检测波长为245 nm,测定和考察钩藤不同时间的水煎液和不同条件下甲醇冷浸超声提取液中主要有效成分钩藤碱和异钩藤碱含量的变化.结果 钩藤碱回归方程Y=76.7170X-0.0727(r=0.999 8),在2.5～80.0μg·mL-1范围内线性关系良好,平均加样回收率99.84%～116.91%,RSD小于8.8%;异钩藤碱回归方程Y=87.4729X-0.3666(r=0.999 7),在2.0～80.0μg·mL-1范围内线性关系良好,平均加样回收率87.08～104.97%,RSD小于7.3%;甲醇冷浸超声提取液中钩藤碱与异钩藤碱的提取率大约是水煎液中的十倍.在甲醇提取工艺中,影响提取率的因素从大到小依次为超声时间、甲醇用量、冷浸时间,经正交实验优选的最佳提取工艺为用20倍质量的甲醇,冷浸24h,超声60min.结论 钩藤药材中有效成分钩藤碱与异钩藤碱的提取,采用甲醇冷浸超声法优于水煎法.该含量测定方法快速、简便、准确,可为评价钩藤药材的质量提供依据.     

HPLC法测定钩藤不同部位中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱含量

目的考察钩藤药材净钩、藤枝、带钩茎枝三种不同入药部位中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量,寻找钩藤新药源。方法采用HPLC法,以钩藤中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量为指标,测定钩藤药材净钩、藤枝、带钩茎枝中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量。色谱条件:C_(18)柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-水=63∶37(v/v,含0.002 mmol/L三乙胺,冰乙酸调pH 7.5)为流动相;流速1.1 mL/min;检测波长:254 nm。结果藤枝中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量略高于净钩、带钩茎枝。结论钩藤的藤枝具有潜在药用开发价值。     

HPLC法测定不同产地钩藤中异钩藤碱和钩藤碱的含量

目的：建立高效液相色谱测定不同产地的钧藤中异钩藤碱和钩藤碱的方法。方法：采用Diamonsil—C18色谱柱,流动相为甲醇：0．2％氨水（65：35）,检测波长245nm。结果：线性范围0．08805—0．8805μg和0．04076-0．4076μg,相关系数为0．9996和0．9997,平均回收率异钩藤碱为97．03％,钩藤碱为98．95％,RSD分别为1．79％和2．55％。结论：高效液相色谱法可为钩藤质量控制标准的制定提供相应的依据。     

黔产钩藤药材不同采收期及不同加工方法有效成分含量对比研究

目的：测定不同采收期及不同加工方法黔产钩藤药材中钩藤碱和异钩藤碱的含量,并考察钩藤碱和异钩藤碱在不同采收期的含量变化。方法：采用RP-HPLC法,KromosilC18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱;流动相以甲醇-0.2%氨水溶液（65：35）,流速：1.0mL/min,柱温35℃,进样器温度5℃,检测波长为245nm,结果：不同采收期钩藤药材中钩藤碱和异钩藤碱含量有显著变化。以10月～1月份,采集的样品中钩藤碱和异钩藤碱含量较高;不同加工方法钩藤碱和异钩藤碱含量也有所不同。结论：1.以10月～1月份采集的样品含量较高,符合中国药典规定钩藤药材在秋、冬二季采收。2.阴干和晒干的药材含量较高。为黔产钩藤药材提供了最佳加工方法。     

不同产地及不同采收期钩藤中异钩藤碱的含量分析

目的：研究不同产地及不同采收期钩藤中异钩藤碱的含量。方法应用HPLC测定8个不同产地及不同采收期钩藤中异钩藤碱含量,采用Waters Symmetry C18色谱柱(250 mm34.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.01 mol/L醋酸铵缓冲液(pH 8.0)(60∶40),柱温25℃,进样体积20μl,流速1.0 ml/min,检测波长246 nm。结果不同产地及不同采收期的钩藤中异钩藤碱含量不同,其中含量最高的地区为宁明县;含量最高的采收时间为每年9月至次年2月。结论不同产地钩藤药材异钩藤碱的含量不同,每年9月至次年2月采收的钩藤中异钩藤碱含量较高。     

中药钩藤不同药用部位异钩藤碱含量分析

目的：测定钩藤的不同药用部位中异钩藤碱的含量。方法应用高效液相色谱法(HPLC)测定8批不同产地钩藤的不同药用部位中异钩藤碱含量。采用Waters Symmetry C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-0.01 mol/L醋酸铵缓冲液（pH 8.0）（60∶40）,柱温25℃,进样量20μl,流速1.0 ml/min,检测波长246 nm。结果8批不同产地钩藤药材中均能检测出异钩藤碱,但产地间差异较大;不同药用部位中异钩藤碱的含量：主杆＞带钩茎枝＞无钩茎枝＞无茎枝钩＞叶。结论钩藤不同药用部位大部分含异钩藤碱成分,为扩展钩藤植物的药用部位提供试验依据。     

HPLC测定安神养血口服液中3种生物碱延胡索乙素、钩藤碱和异钩藤碱含量

目的:深入研究安神养血口服液(钩藤、金不换、制何首乌、首乌藤、松针)含量测定方法,为该药质量标准研究和完善提供科学依据。方法:HPLC测定该药中3种生物碱延胡索乙素、钩藤碱和异钩藤碱含量,色谱柱:依利特Kromasil C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相:甲醇-水(55∶45)(含0.01 mol/L三乙胺,用冰醋酸调pH值至7.5),柱温:25℃,15 min前检测波长为281 nm,15 min后为254 nm,流速1.0 mL/min。结果:延胡索乙素、钩藤碱、异钩藤碱平均回收率分别为98.47%,99.04%,98.75%,延胡索乙素在进样量0.01μg～0.10μg范围内、钩藤碱在进样量0.16μg～1.6μg范围内,异钩藤碱在进样量0.12μg～1.2μg范围内与峰面积呈良好线性关系。结论:该方法简便、快速和准确,可用于该药质量控制。     

HPLC法测定不同产地钩藤中钩藤碱的含量分析

目的：建立测定钩藤中钩藤碱含量的方法,并比较三种不同产地钩藤中钩藤碱的含量。方法：采用高效液相色谱法测定钩藤碱的含量,色谱柱：250-4lichrocartC18（250mm×4·6mm,5μm）;流动相：甲醇-水（70：30）（含0·01mol·L-1的三乙胺,用冰醋酸调pH为7·5）,检测波长：254nm。流速：1ml·min-1。结果：钩藤碱在0·0049~0·0588mg·ml-1范围内呈现良好的关系（r=0·9999）。平均回收率为99·77%,RSD为1·04%。产自广东省连南、福建省三明吉口、江西的钩藤中钩藤碱的含量分别0·037%、0·033%、0·011%。结论：该方法简便、灵敏、准确、可靠,具有良好的重复性和回收率;产自广东省连南的钩藤中钩藤碱含量最高。     

钩藤中钩藤碱、异钩藤碱的提取与含量测定在预后中的应用分析

目的:探讨钩藤中钩藤碱、异钩藤碱的提取与含量测定在预后中的应用。方法:采取水煎液以及甲醇提取液的方式对钩藤中的钩藤碱及异钩藤碱进行提取,并使用高效液相色谱系统分别对其提取的含量进行测定。结果:在2.5~80μg/m L的范围内钩藤碱的线性关系良好,此时的回归方程为Y=76.717 0X-0.072 7(r=0.999 8),RSD8.7%;在2.0~80μg/m L的范围内异钩藤碱的线性关系良好,此时的回归方程为Y=87.472 9X-0.366 6(r=0.999 7),RSD7.3%。甲醇提取液的方式所提取钩藤碱和异钩藤碱的含量高于水煎液的方式,并且使用二十倍质量的甲醇量,24 h的冷侵时间以及60 min的超声时间最合适。结论:使用甲醇进行提取在用于钩藤中钩藤碱及异钩藤碱中作用优异,对其质量的控制性好,重复性高,操作方法简单,可提高预后,值得在临床上应用推广。     

RP-HPLC测定市售钩藤中钩藤碱的含量

目的:建立反相高效液相色谱测定市售钩藤中钩藤碱的方法。方法:KromosilTMC18柱;检测波长254nm;柱温:30℃;流速:1mL.min-1;流动相:甲醇:水(0.01mol/L三乙胺,冰醋酸调pH7.2)=70∶30;进样量:20μL。结果:在0.244～1.22μg范围内线性关系良好,r=0.9997,平均回收率为100.13%。6批市售钩藤药材钩藤碱含量为0.1349～0.2107mg/g。结论:市售钩藤药材中钩藤碱含量变化较大。该方法简便,结果准确,可有效控制钩藤质量。     

超高效液相色谱法测定钩藤中的钩藤碱和异钩藤碱的含量

目的:用超高效液相色谱法同时测定钩藤中的钩藤碱和异钩藤碱的含量。方法:以ACQUITYUPLCR BEH130C18(2.1mm×100mm,1.7μm)为色谱柱,乙腈-0.01mol/L三乙胺水溶液(45:55,冰醋酸调pH7.0)为流动相,检测波长为245nm,流速0.2mL/min。结果:钩藤碱在0.052-0.309μg具有良好的线性关系,r=0.9997,平均回收率为98.3%,RSD为0.88%,异钩藤碱在0.060μg-0.363μg具有良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为97.7%,RSD为1.29%。结论:该方法简便快捷、精密度高、结果准确。可用于钩藤的质量控制。     

高效液相色谱法测定安神养血口服液中钩藤碱和异钩藤碱含量

目的:建立安神养血口服液的含量测定方法.方法:运用HPLC测定安神养血口服液中钩藤碱和异钩藤碱含量.色谱柱:依利特Kromasil C18柱(5μm,4.6mm×250mm);流动相:甲醇-水(55: 45)(含0.01mol/L三乙胺,用冰醋酸调pH值至7.5);柱温:25℃;检测波长:254nm; 流速:1.0mL/min.结果:钩藤碱的平均回收率为99.04%,异钩藤碱为98.75%.钩藤碱在进样量0.12～1.20μg 范围内线性关系良好(r1=0.9999),异钩藤碱在进样量0.08～0.80μg 范围内线性关系良好(r2=0.9993).结论:该方法简便、快速、准确,可用于安神养血口服液的质量控制.     

薄层扫描法测定复方钩藤片中钩藤碱的含量

采用薄层色谱法测定复方钩藤片中钩藤碱的含量。钩藤碱点样量在0．498～7．976μg范围内呈良好的线性关系，相关系数为0．9964，平均回收率为97．83％(n=5)。本操作方法可靠，简便，数据准确。     

HPLC法测定四神颗粒剂中异补骨脂素的含量

目的：建立四神颗粒中异补骨脂素的质量标准.方法：采用高效液相色谱法（HPLC法）对四神颗粒中异补骨脂素进行含量测定,以C18化学硅胶为固定相,以甲醇-乙腈-0.025mol/L磷酸（10：30：60）为流动相.结果：平均加样回收率为95.7%,RSD为0.8%.结论：方法可靠,操作简便,重现性好,可用于该产品的质量控制.     

HPLC 法测定异长春花碱脂质体中药物的含量

目的:建立以高效液相色谱法测定异长春花碱脂质体中主药含量的方法。方法:色谱柱为Kromasil C1(84.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.06 mol.L-1磷酸二氢钾缓冲液(pH3.0)(35︰65),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为215 nm,柱温为30℃。结果:异长春花碱检测浓度的线性范围为2.08～20.8μg.mL-(1r=0.9999)。平均加样回收率为98.64%(RSD=1.09%)。结论:本方法简便、准确、重现性好,可用于该制剂的含量测定。     

RP-HPLC检测大鼠大血管中异钩藤碱的含量

目的: 建立测定大鼠大血管中异钩藤碱含量的方法。 方法: Wista大鼠灌胃钩藤水煎液后取出大血管,液氮研磨,用乙醇沉淀组织匀浆中的蛋白质,取上清液用氮气吹干,加甲醇复溶后取上清液直接进样,用高效液相色谱仪测定。RP18 Waters^TM 色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相甲醇-水（70∶30）,三乙胺调pH 8.0,流速 0.8 mL·min^-1,检测波长254 nm,异钩藤碱保留时间约为12 min,柱温 30℃。 结果: 大血管中异钩藤碱的质量浓度在0.04~20.0 mg·L^-1,大鼠峰面积之比Y与异钩藤碱的质量浓度X具有较好的线性关系,回归方程为Y=4.644 1X+0.161 2（R²=0.999 2）;平均提取回收率为99.34%,RSD<8.0%。 结论: 方法简便、稳定、易行,可以用于测定大鼠大血管中异钩藤碱的含量。     

HPLC法测定止痒颗粒中盐酸小檗碱的含量

止痒颗粒由栀子、黄柏、龙胆、生地黄等药味组成,具有清热解毒、利湿祛风、凉血止痒的功效,临床上用于湿热、风热、血热导致的荨麻疹、丘疹性荨麻疹、夏季皮炎、湿疹等皮肤搔痒症.