喉癌p53基因点突变研究

目的 探讨喉癌组织p53基因点突变的频率、特征。方法 选用P53蛋白表达阳性的喉癌标本22例，正常喉组织2例，采用聚合酶链反应－限制性内切酶片段长度多态性（PCR－RFLP）、单链构象多态性（SSCP）及DNA直接测序法分析p53基因第7外显子第249位密码子的点突变。结果 在22例喉癌中有3例发生突变，分别位于248、250及254密码子，表现 为碱基C的丢失和A→T颠换，但无249密码子突变。结论 在喉癌中p53基因第7外显子的第249位密码子的突变可能并不常见。     

结直肠癌 K-ras 基因突变检测及其意义

目的：研究结直肠癌中K-ras基因突变率及突变类型,探讨结直肠癌K-ras基因野生型及突变型与患者临床参数的关系;通过基因测序,指导临床靶向药物用药。方法随机选取哈尔滨医科大学附属第三医院结直肠外科2008年9月至2010年3月收治的100例结直肠癌患者组织标本通过手术室取材、组织标本DNA提取、逆转录PCR、凝胶电泳、胶回收、直接测序等技术筛选K-ras基因突变标本进行统计分析,从中得出突变率及突变类型。结果共筛选出了34例（34％）K-ras基因突变标本,其基因突变均发生在第一外显子的第12及第13密码子。结果表明：第一外显子的第12密码子GGT突变为GAT或GTT;第一外显子第13密码子由GGC突变为GGT。其中并未发现第二外显子第59及第61位发生突变,及第一外显子12位13位同时突变。结论 K-ras基因结直肠癌中约有34％发生突变。在K-ras基因突变类型与患者的病期、病理类型、肿瘤的浸润深度、发病部位等因素无关。     

BRAF基因突变检测在甲状腺乳头状病变中的临床意义

目的探讨BRAF基因在甲状腺乳头状病变中的突变情况及临床意义。方法提取石蜡肿瘤组织中DNA,采用直接测序法分析24例甲状腺乳头状癌和30例甲状腺不典型乳头状腺瘤石蜡组织中BRAF基因突变的情况。结合临床资料进一步分析。结果 24例甲状腺乳头状癌,16例发现BRAF基因15外显子第600位密码子A/T杂合（V600E）,突变率为66.7%（16/24）。而30例甲状腺不典型腺瘤中未发现V600E病理性突变（0/30）。结论 BRAF V600E位点突变仅见于甲状腺乳头状癌,具有一定的特异性,可以用于帮助临床甲状腺乳头状增生良恶性的鉴别。     

宿主p53基因多态性与HPV16 感染、宫颈癌发生发展的相关性

［摘要］目的　研究宿主p53基因多态性（p53基因第4外显子72 位密码子,rs1042522）与HPV16 感染、宫颈癌发生发展的相关性．方法　采用TaqMan SNP Genotyping Assays 方法进行p53基因多态性（p53基因第4外显子72 位密码子）分析．结果　p53基因第4外显子72 位密码子的基因型频率和等位基因频率在病例组与HPV16感染组、对照组之间差异有统计学意义（P＜0.01）;但基因型频率和等位基因频率在对照组与HPV16感染组之间无统计学差异,P值分别为0.924和0.870．结论　p53基因第4外显子72 位密码子突变与HPV16感染无明显相关性,但是该突变与宫颈癌的发生有相关性．     

宿主p53基因多态性与HPV16感染、宫颈癌发生发展的相关性

目的 研究宿主p53基因多态性（p53基因第4外显子72位密码子,rs1042522）与HPV16感染、宫颈癌发生发展的相关性.方法 采用TaqMan SNP Genotyping Assays方法进行p53基因多态性（p53基因第4外显子72位密码子）分析.结果 p53基因第4外显子72位密码子的基因型频率和等位基因频率在病例组与HPV16感染组、对照组之间差异有统计学意义（P＜0.01）;但基因型频率和等位基因频率在对照组与HPV16感染组之间无统计学差异,P值分别为0.924和0.870.结论 p53基因第4外显子72位密码子突变与HPV16感染无明显相关性,但是该突变与宫颈癌的发生有相关性.     

新疆3个家系HCM基因突变检测分析

目的：研究家族性肥厚型心肌病（HCM）的主要致病基因β肌球蛋白重链（MYH7）突变位点。方法：对3个HCM家系成员的MYH7基因3~23外显子及附近上下游序列采用DHPLC及直接测序分析。结果：P、L、Y三个家系的先证者具有MYH7基因错义突变,测序结果显示：发现三个家系患者MYH7基因均有一定的突变。P家系21号患者MYH7基因测序结果分析发现外显子3存在密码子Thr63第三位密码子c〉t转换及19号内含子第90位的a〉g的转换。L家系发现外显子3存在Thr63第三位密码子c〉t转换,并且,第14外显子有单碱基突变,造成Thr 441M et,在中国人中是首次发现。Y家系其他成员测序结果发现携带有第8外显子最后一位碱基存在t〉c突变。结论：MYH7基因在HCM家系中具有较高的突变率,不同突变基因型以及基因突变携带个体在临床表型上有所差异。采取基因突变检测和分析,有利于对HCM家族成员的诊断、患病风险预测及疾病早期预防和治疗。     

50例胃肠道问质瘤患者c-kit及PDGFR-a基区检测及突变分析

目的研究分析胃肠道间质瘤（GIST）中c—kit基因及PDGFRct基因突变特点与规律。方法用PCR扩增和基因测序的方法检测50例胃肠道间质瘤组织中c—kit基因第9、11、13外显子和PDGFRA基因第12、18外显子的序列。结果在50例成功检测序列的GIST中共检测到c—kit基因突变32例,PDGFRot基因的突变共检测到2例。结论①大部分的GIST存在c—kit基因的突变,在无c—kit基因突变的GIST中有一部分存在PDGFRα基因的突变。②c—kit基因突变主要集中在第11号外显子。突变的方式频率由高到低依次为点突变、缺失突变和串联重复插入。③胃GIST中c—kitexonll突变率较小肠、结直肠及胃肠道外GIST的突变率高。     

检测粪便c-ki-ras2基因点突变筛查大肠癌

目的：研究大肠癌患者粪便c-ki-ras2基因外显子1第12位密码子点突变情况,探讨检测粪便c-ki-ras2基因点突变对筛查大肠癌的价值.方法：提取2005年于广州市第一人民医院就诊的25例大肠癌患者粪便、肿瘤组织和癌旁组织黏膜的DNA,结合限制性内切酶Mva Ⅰ,用普通聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）及突变富集型聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（mutant-enriched PCR-RFLP）,分析c-ki-ras2基因外显子1的12位密码子第一、二位碱基是否存在点突变;用同样方法分析正常对照组17例.特异性分析采用经克隆测序已知突变型（12GGT→AGT）及野生型（12GGT）的c-ki-ras2外显子1片段.取同期住院的166例胃肠道疾病患者大便潜血试验（FOBT）检查结果作对照.结果：25例大肠癌患者粪便中,突变富集型PCR-RFLP检出7例k-ras基因点突变（28%）,其中6例在相应组织中也检出突变,粪便与组织DNA检测结果高度一致（Kappa=0.896,P＜0.01）.正常人粪便未检出突变,两组相比差异有显著性（P＜0.05）.癌旁黏膜均未发现突变.普通PCR-RFLP只检出其中3例（12%）.c-ki-ras2点突变更多见于左半结肠癌,与结肠其他部位相比差异有显著性（P＜0.05）.肠癌患者与其它胃肠道疾病者FOBT阳性率无差异,分别为58%、46%（P＞0.05）.结论：粪便c-ki-ras2基因点突变检测特异性达100%,比FOBT（50.6%）高,但单个基因的检测敏感性较FOBT低（28% vs 51.2%,P＜0.05）,粪检基因诊断大肠癌有一定应用前景;突变富集型PCR-RFLP较普通PCR-RFLP有更高的检出率.     

肝细胞癌相关基因CTNNB1的3号外显子突变研究

【摘要】目的 探讨CTNNB1基因3号外显子突变与肝细胞癌（HCC）发生的相关性。方法 收集100例HCC患者的肿瘤组织及配对远端正常组织样本200份,采用直接测序的方法筛选突变情况;免疫组化法对筛选到突变的患者检测其肿瘤及正常组织中CTNNB1基因编码蛋白（β catenin）表达情况,并进一步分析CTNNB1基因3号外显子突变与患者临床病理特征之间的关系。结果 CTNNB1基因3号外显子错义突变3例 (3%),分别引起第32、36位密码子编码氨基酸改变。免疫组化结果显示,3例突变患者的肿瘤组织中β catenin蛋白表达明显强于配对正常组织(P＜005)。CTNNB1基因3号外显子突变与患者临床病理特征未见显著相关性（P＞005）。结论 CTNNB1基因3号外显子突变存在于HCC患者中,可能与HCC的发生相关。     

179例胃间质瘤临床病理特征及基因突变类型分析

目的 分析胃肠间质瘤（GIST）患者临床病理特征、基因突变类型和突变位点特征。方法 回顾性收集2009年9月至2015年2月四川大学华西医院收治的179例行基因检测的GIST患者并分析其各临床病理资料的特征。结果 所有患者中,肿瘤原发于胃88例（49.2%）,小肠70例（39.1%）,结直肠7例（3.9%）,其它部位14例（7.8%）;其中CD117、CD34、DOG-1阳性率分别为为94.4%、74.9%、93.3%。GIST患者基因突变c-kit突变最为常见,共151例（84.4%）,其次为PDGFRα突变8例（4.5%）,野生型20例（11.2%）。c-kit突变中,外显子11以缺失突变、点突变及缺失+插入突变为主（92.2%）;外显子9突变共有6例（30%） A502-Y503复制突变及14例（70%）Y403-F504插入突变;外显子13突变为1例K642Q点突变,外显子17突变为2例N822K点突变。在6例PDGFRα外显子18突变患者中,分别有5例和1例发生点突变和缺失突变,点突变中3例为D842V突变。在GIST的基因分型中,PDGFRα突变患者DOG-1阳性率低于c-kit突变及野生型患者（ P=0.007）,而在c-kit各突变类型中,点突变患者CD34患者阳性率低于其它突变类型（ P<0.001）,点突变和插入突变患者中高危患者比例低于缺失突变和缺失+插入突变（ P=0.006）。结论 胃和小肠是GIST最常见的发病部位;c-kit外显子11是GIST最常见的基因突变类型;GIST基因突变率高且突变类型多样,不同患者需提供个体化治疗。     

EGFR、PDGFRA和VEGFR2在结肠癌中的表达及变异分析

目的  探讨受体酪氨酸激酶表皮生长因子受体（EGFR），血小板源性生长因子受体α多肽（PDGFRA）和血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）在30例结肠癌中的过表达及基因突变情况。方法  收集该院确诊为结肠癌的30例组织标本，免疫组织化学检测组织标本中EGFR，PDGFRA和VEGFR2表达情况，PCR-SSCP检测标本中EGFR（外显子18-21）和PDGFRA（外显子12、14和18）的基因突变情况。 结果 收集该院确诊为结肠癌的30例组织标本，免疫组织化学显示EGFR的阳性表达率为43.3%（13/30），但是EGFR热点区域（外显子18-21）未检测到激活突变。而在17例患者（56.7%）中检测到EGFR外显子20的密码子787（Q787Q）的一处无义碱基替换（CAG>CAA）。PDGFRA在所有恶性细胞中阳性表达，热点区域也未发现激活突变，但是9例标本中的12号外显子的密码子567发生CCA>CCG无义突变；4例标本中的18号外显子的密码子824发生GTC>GTT无义突变。在2例标本中还发现，14号内含子有两处碱基改变IVS14+3G>A和IVS14+49G>A，4例标本中的18号内含子存在IVS18-50insA改变。有22例（73.3%）中VEGFR2阳性表达，且VEGFR2表达与肿瘤未转移呈正相关（P =0.038）。结论  结肠癌中虽然EGFR和PDGFRA过表达，但是未检测到激活突变，而VEGR2也在结肠癌中过表达，其表达与肿瘤未发生转移有关。本研究结果为未来结肠癌治疗提供可能的方向。

     

胃肠道间质瘤分子靶向治疗继发性耐药基因突变的研究

目的探讨胃肠道间质瘤(GIST)患者酪氨酸激酶受体(KIT)和血小板源性生长受体(PDGFRA)基因突变的特点,以及伊马替尼的继发耐药机制。方法对98例GIST患者肿瘤组织进行DNA抽提、聚合酶链反应(PCR)扩增和直接测序,检测KIT基因外显子9、11、13、17和PDGFRA基因12、18外显子突变;并对伊马替尼继发耐药的65例患者进行2次检测。结果 98例患者中,KIT突变79例(80.6%),其中外显子11突变61例(62.2%),外显子9突变18例(18.4%);PDGFRA突变3例(3.1%)。不同性别、年龄以及晚期GIST患者和潜在恶性的GIST患者间突变比较差异无统计学意义(P>0.05);而不同部位GIST的KIT外显子11突变发生率差异有统计学意义(P<0.05)。65例继发耐药病例中,4例患者发生二次突变,表现为KIT基因第17外显子密码子第2467位点的T为G所替换(T2467G),导致823密码子编码氨基酸由酪氨酸转变为天冬氨酸。结论 KIT基因突变在GIST患者中常见,不同部位间KIT外显子11突变发生率差异有统计学意义。伊马替尼继发耐药可能与KIT基因第17外显子密码子第2467位点T为G所替换(T2467G)相关。     

肺腺癌表皮生长因子受体基因突变及临床意义

目的研究肺腺癌组织中表皮生长因子受体(EGFR)第18、19、21外显子基因突变频率和类型及其与临床特征的关系。方法收集90例肺腺癌患者肿瘤组织石蜡包埋标本,提取DNA,聚合酶链反应扩增EGFR外显子18、19、21序列,进行基因测序分析,结合患者临床资料分析EGFR基因突变频率和类型以及临床特点。结果 90例肺腺癌组织中未检测到18外显子突变;检测到19外显子突变11例(12.2%),其中碱基缺失突变10例,包括2 235核苷酸到2 249核苷酸缺失3例,2 240核苷酸到2 248核苷酸缺失1例,2 240核苷酸到2 253核苷酸缺失2例,2 240核苷酸到2 257核苷酸缺失3例,1例同时检测到2 240核苷酸到2 248核苷酸和2 251核苷酸到2 262核苷酸2个片段碱基的缺失,另1例为P741L错义突变;21外显子突变18例(20.0%),表现为碱基的替换突变,其中14例为L858R,L858M、A722V、K875R、Q787Q各1例。不同性别、年龄、肿瘤直径、临床分期、分化程度及有无淋巴结转移者之间比较,EGFR基因19、21外显子突变率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论肺腺癌肿瘤组织中EGFR外显子突变热点集中在19、21外显子,不同外显子的突变频率和类型不同;EGFR基因突变与患者的性别、年龄、肿瘤直径、临床分期、分化程度及淋巴结转移等临床特征无相关性。     

安徽省皖南地区甲状腺乳头状癌患者BRAF和K-ras基因突变的调查

目的:调查安徽省皖南地区甲状腺乳头状癌（PTC）的主要基因突变。方法:收集PTC石蜡包埋组织33例,进行DNA提取,聚合酶链反应法扩增和基因测序检测鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1基因（BRAF）中的缬氨酸（V）被谷氨酸（E）替代（V600E）和K-ras基因的12和13密码子基因突变。所有患者术前均采用发光免疫法检测血清总三碘甲状腺原氨酸、游离三碘甲状腺原氨酸、总四碘甲状腺原氨酸、游离四碘甲状腺原氨酸和促甲状腺激素。结果:33例样本中有13例检测出BRAF基因V600E突变,突变率39.4%;而K-ras基因的12和13密码子没有发现突变;BRAF基因V600E突变与患者性别、年龄和肿瘤直径无关;BRAF基因突变患者血清总三碘甲状腺原氨酸、游离三碘甲状腺原氨酸和促甲状腺激素水平均低于基因非突变患者（P<0.05～P<0.01）,基因突变患者血清游离四碘甲状腺原氨酸水平明显高于非突变患者（P<0.01）,而两者总四碘甲状腺原氨酸水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论:BRAF基因V600E突变是皖南地区PTC患者的高发基因突变。     

PIK3CA基因在乳腺癌不同分子亚型中突变的研究

目的探讨PIK3CA基因在乳腺癌不同分子亚型中突变的关系。方法选取200例乳腺癌患者组织标本,其中luminal A、luminal B、HER-2过表达型、besal-like型各50例。提取DNA,用紫外光分光光度仪来测定浓度及含量,对exon9及exon20进行PCR扩增,扩增产物纯化后测序,另取20例乳腺腺病组织标本用作为对照,与基因库序列对比分析其突变的情况。结果200例乳腺癌组织中发现突变64例,突变率32％,其中exon9突变26例（40％）,exon20突变38例（60％）,在乳腺癌分子亚型中：luminal A型中22例（44％）,luminalB型中16例（32％）,HER-2过表达型20例（40％）,besal—like型6例（12％）,突变分布有统计学意义（P〈0．05）。在20例良性对照组中均没发现突变。PIK3CA基因突变与乳腺癌肿瘤患者肿瘤大小、年龄、淋巴结状态之间无明显相关性（P〉0．05）。结论PIK3CA基因在乳腺癌不同分子亚型中的突变有差异,与乳腺癌其他临床病理特征之间无明显相关性。     

散发性大肠癌K—ras基因点突变研究及其临床病理意义

目的观察散性大肠癌K—ras基因12、13密码子点突变情况,探讨其与临床病理特征的关系。方法对2005～2009年问浙江省肿瘤医院确诊的140例大肠痛进行回顾性分析,并提取石蜡标本中癌组织DNA,经PCR扩增后应用焦磷酸测序技术检测K—ras基因第12、13密码子点突变情况。结果K—ras基因突变率397％（55／140）,12密码子突变率78．2％（43／55）,13密码子突变率21．8％（12／55）。共发现7种突变类型,包括12密码子（GGT→AT、GGT→AGT、GGT→TGT、GGT-→GTT、GGT→CGT、GGT→GCT）和13密码子（GGC→GAC）,以12密码子（CGT→GAT）最常见,占突变总数41．8％（23／55）。K—ras基因突变与性别、年龄、大体类型、瘤体、原发部位、病理亚型、组织学分级、浸润深度、转移、Duke’S分期、脉管侵犯均无相关性（P〉0．05）;第12与13密码子突变在原发部位、淋巴结转移上差异有统计学意义（P〈0．05）。结论散发性大肠癌中K—ras基因突变率为39．7％,12密码子（GGT→GAT）突变是最常见类型。特定位点的突变与一些临床病理参数密切相关,其中12密码子突变在结肠癌中的发生率高,并易出现淋巴结转移。通过K—ras基因检测有助于指导临床开展大肠癌个体化治疗。     

拉米夫定耐药株感染者基因型、HBV DNA及多聚酶P区基因变异的关系

目的分析拉米夫定耐药株感染者的基因型、HBVDNA及多聚酶P区基因变异的关系。方法应用PCR扩增和直接测序法检测83例拉米夫定耐药患者HBV基因型、HBVDNA及多聚酶P区的基因变异。结果83例拉米夫定耐药患者B基因型26例,C基因型57例,B型YIDD变异率69．2％（18／26）、YVDD变异率30．8％（8／26）,C型YIDD变异率63．2％（36／57）、YVDD变异率33．3％（19／57）,B、c基因型发生YMDD变异模式无统计学差异（P〉0．05）;B型rtM204I突变率53．8％（14／26）,综合变异率46．2％（12／26）,C型rtM2041变异率26．7％（15／57）,综合变异率73．7％（42／57）,B、C基因型变异位点类型有统计学差异（P〈0．05）;耐药变异时c型HBVDNA水平（6．60±1．42）lg拷贝／毫升高于B型（5．88±1．46）1g拷贝／毫升,YIDD变异时c型（6．40±1．48）lg拷贝／毫升、B型（5．68±1．32）1g拷贝／毫升,YVDD变异时C型（6．18±1．87）1g拷贝／毫升、B型（6．82±1．45）lg拷贝／毫升;rtM204I变异时B型（6．12±1．45）lg拷贝／毫升、C型（5．57±1．45）lg拷贝／毫升（P〉0．05）;综合变异时c型（6．68±1．51）lg拷贝／毫升,B型（5．76±1．57）lg拷贝／毫升（P〈0．05）。结论c基因型拉米夫定耐药发生率高于B型;基因型与变异位点类型有关,与YMDD变异模式无关;耐药变异时HBVDNA水平c型高于B型,与综合变异有关,与YMDD变异模式无关。     

肺癌表皮生长因子受体基因测序分析

目的：探讨中国人肺癌患者表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）基因突变状态。方法用基因测序的方法检测了416例肺癌肿瘤细胞标本EGFR基因第18、19、21外显子,并检测了其中11例EGFR第20外显子区域。23例肺癌患者血液标本作为对照。结果416例肿瘤标本中共发现118例（28.37%）EGFR基因突变,其中19外显子缺失突变占46.09%,21外显子点突变占42.19%,并发现了4例EGFR第20外显子区域突变（4/11）。23例肺癌患者血液标本均未发现突变。肺腺癌的突变率为32.52%,比鳞癌（12.96%）（P=0.004）、其他类型癌（13.89%）（P=0.021）增高,差异有统计学意义。EGFR基因突变在女性患者中（36.72%）所占比例比男性患者高（22.18%）（P=0.001）。结论女性、肺腺癌患者EGFR突变率高,提示可能在表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂的治疗中获益。     

DNA直接测序技术检测EGFR基因及突变分析

目的：探讨非小细胞肺癌（NSCI,C）患者表皮生长因子受体（EGFR）基因突变的情况及EGFR-TKI的治疗效果。方法：从94例晚期NSCLC患者的肿瘤组织中提取DNA,采用DNA直接测序技术检测EGFR基因18、19、20、21外显子的突变情况。对EGFR基因突变可评估患者采用TKI口服治疗（吉非替尼250mg／d、厄洛替尼150mg／d）,评价客观有效率（RR）、疾病控制率（DCR）及无疾病进展时间。结果：94例患者中39例（41．5％）存在EGFR基因突变,其中27例外显子19突变．2例外显子20突变,9例外显子21突变、1例外显子18突变。女性患者突变率显著高于男性（56．1％vs30．2％．P〈0．05）;腺癌患者突变率高于非腺癌患者（48％／）815．8％,P〈0．05）;不吸烟者突变率显著高于吸烟者（50．8％vs20．7％,P〈0．05）。16例患者口服TKI后部分缓解5例、疾病稳定7例、疾病进展PD4例,客观有效率为31．2％,疾病控制率为75．0％,截至随访结束,仍有14例患者生存,无疾病进展时间为（11．3l±4．44）个月,1年生存率为43．8％,、结论：DNA直接测序检测晚期NSCLC患者EGFR基因突变具有高度敏感性,以EGFR基因突变结果为依据,应用TKI治疗晚期NSCL C疗效明显。