菊三七组织培养的研究

目的　探讨菊三七诱导愈伤组织的过程 ,为快速繁殖幼苗奠定基础。方法　以菊三七的根、茎、叶为外植体 ,采用 MS培养基 ,附加不同的植物激素进行实验。结果　以菊三七的叶片为外植体 ,在培养基 MS 1.0 mg/ LNAA 4 .0 m g/ L 6- BA上 ,愈伤组织诱导率可达 64%。愈伤组织在适宜的分化培养基上 ,成苗率可达 86.7%。结论　通过诱导愈伤组织的途径 ,可以达到快速繁殖菊三七的目的     

藏药马尿泡离体快繁技术研究

目的 通过对马尿泡组织培养技术的研究,为马尿泡的快速繁殖提供技术支撑。方法 以马尿泡野生植株上的休眠芽为外植体,将它们接种到一系列含有不同激素的培养基中。结果 外植体野生芽不易进入正常萌发生长阶段,一旦进入正常阶段,能迅速进入生长状态,诱导野生芽分化的最适培养基是MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L,且侧芽要比主芽分化得快,增殖率明显高于主芽的增殖率。25 d转接1 次,增殖倍数在5倍以上。最适生根培养基是1/2 MS+IBA 0.5 mg/L,诱导生根率达96%。无菌苗幼叶诱导愈伤组织最适培养基是MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L,诱导率达100%。结论 一方面建立了稳定高效的马尿泡再生体系,另一方面通过组织培养达到了其种质资源的保存。     

桔梗离体培养和快速繁殖方法研究

目的:采用植物组织培养技术方法进行快速繁殖,为桔梗的人工栽培及优良品种选育奠定基础.方法:以桔梗的茎、叶为外植体,通过组织培养方法诱导丛生芽.结果:MS 6-BA1.0mg/L NAA0.5mg/L能较好地诱导桔梗茎段、叶片产生丛生芽,诱导率分别达100%,83.3%.结论:以桔梗茎段诱导丛生芽效果最好,诱导率高达100%.     

穿心莲不同外植体离体培养的研究

【目的】探讨采用植物组织培养技术进行穿心莲快速繁殖的方法，为工厂化育苗提供依据。【方法】以穿心莲不同外植体为材料，诱导丛生芽的产生。【结果】以全子叶—子叶节为外植体时出芽率最高，为100％，半子叶—子叶节次之，出芽率为90％以上。6-苄基氨基嘌呤(BA)浓度以0．5-1．0mg／L为适宜，有利于芽的增殖和生长。外植体苗龄对出芽无明显的影响。根的诱导以MT(Murashige and Tucker)为基本培养基，附加1mg／L萘乙酸(NAA)或吲哚丁酸(IBA)效果较好，接种10d，生根率高达61．9％。【结论】通过穿心莲不同外植体离体培养，建立了良好的离体繁殖体系。     

异甜菊醇在大鼠离体肝灌流中的药代动力学研究

目的研究异甜菊醇在大鼠肝脏内的代谢情况。方法给予SD大鼠离体肝灌流（112）行异甜菊醇的初步药动学研究（体外试验）。分离5只大鼠肝脏然后用含有异甜菊醇的介质进行循环灌流,在时间为0、1、3、5、10、15、20、25、30、40、50、60rain时收集灌流液样品,每间隔10min收集胆汁样品,样品用HPLC—UV分析。尿液（前面实验收集）、灌流液和胆汁样品用β-葡萄糖醛酸酶（1-3U／μL）培养再进行HPLC—UV分析。结果40～50min后的灌流液中,HPLC法检测不到异甜菊醇,而胆汁中完全没有检测到。灌流液和胆汁分别经过β-葡萄糖醛酸酶／硫酸根培养后,色谱方法与灌流液的一样保持不变,胆汁样品中得到了明显的异甜菊醇峰。60min中的药动学参数正T1/2、AUClast、Vz（ods）、CLH、EH（肝脏提取率）和回收率（R0-60代谢率）分别为：（17．82±2．5）min、（258．18±33．2）min·μg／mL、（425．35±32．1）mL、（17．7±2．2）mL／min、（0．59±0．07）和（18．08±2．5）。结论经过40—50min灌流后异甜菊醇主要在肝脏中积累,以葡萄苷酸化形式从胆汁排泄,很可能大部分经过胆汁排泄慢慢的消除到粪便中。     

巴戟天离体培养及植株再生的研究

以巴戟天无菌苗的茎尖、带节茎、无节茎为材料进行离体培养。结果表明 :外植体表面消毒采用70 %乙醇预处理 30s ,再用 0 .1%的升汞浸泡 10～ 15min ,效果较好。茎尖和带节茎培养 ,于含有 6-苄基氨基嘌呤 ( 6-benzylaminopurine。BA)的MurashigeandTucker (MT)培养基上 ,均能直接出芽 ,带节茎出芽率最高 ,为 97.5%。适宜的BA浓度为 1mg·L- 1,BA浓度升高 ,出芽率下降。根的诱导 ,以MT加 0 .2～0 .5mg·L- 1的萘乙酸 (naphthleneaceticacid ,NAA)培养基较好 ,生根率可达 80 .0 %以上     

溪黄草离体培养和快速繁殖

目的：探讨溪黄草Isodon serra (Maxim).Kudo离培养的过程,为优良品种的快速繁殖奠定基础。方法：以溪贡草无菌苗的带节茎为外植体,采用MT基体培养基,附加不同植物激素进行试验。结果：培养基中附加激素BA有利于芽的发生;适宜的BA浓度为1mg/L,出芽率高达100％,且出芽数量多;基本培养基以完全的MT成分为好;生根据培养选择MT＋0．2mg/L NAA,生根率为100％,试管苗移栽,成活率为90％,结论,通过溪黄草离体培养的研究,获得了较高的植株再生频率,建立了有效的组织培养再生体系。     

指(肢)体离断伤现场的急救处理

指 (肢 )体离断伤后 ,再植是否成活主要取决于两大方面 :一是肢体伤残程度 ,损伤性质。二是医疗水平和技术环境。但是 ,指 (肢 )体离断伤后 ,现场的急救处理也是很重要。在我们的日常接诊中 ,就有很多断指 (肢 )的患者 ,因在基层 (包括现场 )处理不当 ,延误或失去了治疗时机 ,给患者造成了终生的痛苦。仅就这个问题 ,谈点我们的看法。首先要注意伤员有无休克情况 ,有无其他部位的合并损伤。如有休克或其他危及生命的创伤 ,迅速以抢救休克和保护重要器官 ,维持生命体征为主。一般现场急救包括止血、包扎、保存断指 (肢 )及迅速转送等 4个方面…     

番茄离体培养的形态发生

对番茄下胚轴、子叶、叶柄不同类型外植体离体培养中有关细胞启动、分裂、分化以及器官发生作了细胞组织学观察,结果表明：番茄不同类型外植体在不同样的培养条件下,愈伤组织生长表现明显差异：下胚轴、子叶诱导产生愈伤组织时,细胞启动早,生长快,分裂方式基本为无丝分裂;下胚轴诱导愈伤组织形成时,细胞不规划的无丝分裂少于子叶,故下胚轴离体培养得到正常芽的比例高于子叶;番茄离体培养中不定芽通常发生在愈伤组织的周边区,也可起源于维管组织结节周围,形成层状细胞。不定根则由茎中柱鞘处发生。     

Effects of Carpobrotus edulis Extract on Oxidative Stress and 158N Oligodendrocyte Death

Objective Age-related diseases, including neurodegenerative diseases, are associated with oxidative stress and lipid peroxidation, and increase the levels of cholesterol auto-oxidation products such as 7β-hydroxycholesterol(7β-OHC). Thus, it is imperative to identify agents that can prevent 7β-OHC-induced side-effects. Methods We evaluated the potential protective effects of Carpobrotus edulis ethanol-water extract(EWe) on murine oligodendrocytes(158 N) cultured in the absence or presence of 7β-OHC(20 μg/mL, 24 h). The cells were incubated with EWe(20-200 μg/mL) 2 h before 7β-OHC treatment. Mitochondrial activity and cell growth were evaluated with the MTT assay. Photometric methods were used to analyze antioxidant enzyme [catalase(CAT) and glutathione peroxidase(GPx)] activities and the generation of lipid and protein oxidation products [malondialdehyde(MDA), conjugated diene(CD), and carbonylated proteins(CPs)]. Results Treatment with 7β-OHC induced cell death and oxidative stress(reflected by alteration in CAT and SOD activities). Overproduction of lipid peroxidation products(MDA and CDs) and CPs was also reported. The cytotoxic effects associated with 7β-OHC were attenuated by 160 μg/mL of EWe of C. edulis. Cell death induced by 7β-OHC treatment was ameliorated, GPx and CAT activities were restored to normal, and MDA, CD, and CP levels were reduced following C. edulis extract treatment. Conclusion These data demonstrate the protective activities of C. edulis EWe against 7β-OHC-induced disequilibrium in the redox status of 158 N cells, indicative of the potential role of this plant extract in the prevention of neurodegenerative diseases.     

小鼠早期胚胎的体外培养研究

目的 寻求一种体外稳定培养早期胚胎的方法。方法 比较了不同培养基(M16、G1、CZB)从受精卵到囊胚的培养效果，并对CZB做了加糖与不加糖、加BSA与15％FBS的比较研究。对体外形成的囊胚做细胞记数以评估胚胎的质量。结果 CZB无论加糖还是不加糖，均能有效克服2-细胞阻滞(70．0％～84．6％)，加糖CZB囊胚形成率(46．1％～50．0％)更高。受精卵一直在无糖CZB中培养与第3d后转入加糖CZB培养的桑椹胚和囊胚形成率无显著性差异。CZB中加BSA和15％FBS的培养效果相当。体外培养形成的囊胚较体内发育有迟滞现象，但是细胞记数无显著性差异。结论 对于昆明小鼠早期胚胎的体外培养，CZB是较M16、G1更适合的培养基，且CZB中从一开始就应该加糖。CZB中加BSA足可取代FBS，其培养的胚胎无明显异常。     

人食管鳞癌细胞的体外培养及生物学性状

目的研究人食管鳞癌细胞的体外培养及生物学性状。方法自原发食管鳞癌组织中获取标本,应用消化培养法培养出可连续传代的肿瘤细胞,对培养的细胞进行形态学观察、免疫组织化学鉴定;MTT法测定细胞数,绘制生长曲线和计算细胞倍增时间,平板克隆实验以测定平板克隆形成率、流式细胞仪测定细胞周期分布。结果30例患者的肿瘤组织有6例成功体外培养出肿瘤细胞,培养出的细胞符合鳞癌特性;细胞生长具有平台期,细胞倍增时间（33．12±6．10）h,平板克隆形成率（15．73±4．46）％;（77．57土6．57）％细胞处于细胞增殖的G0、G1期,少数细胞处于活跃的增殖期。结论人食管鳞癌细胞成功获得了体外培养;肿瘤细胞的增殖能力不同,只有少数细胞增殖活跃。     

人主动脉夹层血管平滑肌细胞的培养和鉴定

目的 建立人主动脉夹层(AD)血管平滑肌细胞(VSMC)体外培养的方法。 方法 以AD患者手术时切除的血管为原料,用组织块贴壁法进行VSMC的体外原代和传代培养,倒置显微镜观察细胞的生长情况,考马斯亮蓝染色、α-SMA及Ⅷ因子免疫荧光染色和透射电镜检测鉴定细胞。 结果 7～10 d原代细胞从组织块边缘迁移出来,3～4周细胞生长至融合,可进行传代。原代和传代的细胞生长良好,倒置显微镜下见细胞呈长梭形,有多个突起。细胞呈“峰谷状”生长,具有典型的VSMC特征。考马斯亮蓝染色和透射电镜下均可见细胞内有大量沿长轴生长的肌丝,α-SMA免疫荧光染色强阳性,Ⅷ因子免疫荧光染色阴性,证明所培养的细胞为VSMC。细胞传代至第6代以后开始出现老化现象。 结论 应用组织块贴壁培养的方法可成功地在体外培养人AD的VSMC,为今后研究AD的发病机制提供良好的实验基础。     

免疫磁珠法分选人脑胶质瘤干细胞的体外培养及鉴定

目的:旨在从人脑胶质瘤组织和细胞株中分离脑胶质瘤干细胞、进行体外培养并对其干细胞特性加以鉴定,以期对后续个体化敏感药物化疗奠定基础。方法:采用以CD133为标志的免疫磁珠法从人脑胶质瘤组织和细胞株中分离脑胶质瘤干细胞并进行体外培养,通过免疫荧光技术检测干细胞标志物CD133、Nestin,干细胞特性加以鉴定。结果:新鲜人脑胶质母细胞培养得到悬浮生长的肿瘤干细胞球,其能在体外自我更新、增殖,形成新的克隆性细胞球,保持连续稳定的传代,能表达神经干细胞表面标志物CD133。在含血清培养基中能够分化为与原肿瘤组织相似的贴壁生长的细胞。结论:胶质母瘤细胞株中存在的一小部分CD133+胶质瘤细胞具有干细胞的属性,并能稳定传代增生。     

小鼠心脏神经嵴细胞的体外培养及其生物学特性

目的体外培养和鉴定心脏神经嵴细胞,探讨其生物学特性。方法取8·5d小鼠胚胎枕中部至第3体节神经管,组织块法无血清条件培养获心脏神经嵴细胞,采用转录激活因子2α(AP-2α)作为其生物学标记物,观察其迁移、分化等生物学特性。结果从胎鼠神经管中分离培养的细胞AP-2α表达阳性,具有迁移特性,传代后以含血清培养基培养后能自然分化成神经元和神经胶质细胞。结论体外培养可成功获得心脏神经嵴细胞,且具有迁移特性和多向潜能分化能力。     

人咽缩肌细胞体外复合培养的研究

目的 探索人咽缩肌细胞体外培养的条件,观察其在相应的生物支架上生长情况,为体外构建人下咽肌组织瓣做前期研究.方法 取9例下咽癌志愿者癌旁正常的咽缩肌组织进行原代培养,当细胞传代至第4代时,将细胞接种于改性的1mm3平面或立体凹槽聚氨酯(polyurethane,PU)生物支架上进行复合培养.通过倒置相差显微镜、免疫荧光和电镜观察鉴定细胞的形态及增殖、分化的状况.结果 咽缩肌最佳的体外培养条件是37℃、5％ CO2孵箱环境,选择DMEM培养基并添加20％胎牛血清,采用组织块培养法可获得足够数目成活的咽缩肌细胞,此细胞在接枝丝素蛋白的凹槽PU支架上增殖分化良好并具备定向生长的能力,从而模拟了体内生长的状况.结论 组织块培养法获得的咽缩肌细胞与接枝丝素蛋白的凹槽PU支架复合培养时其生长状况佳,这为体外构建下咽组织瓣提供了一定的基础.