抑制基质金属蛋白酶的抗癌中药研究进展

基质金属蛋白酶是肿瘤侵袭转移的关键蛋白,研制抑制基质金属蛋白酶的抗癌中药是开发抗肿瘤中药的一个新兴领域。目前研究对象主要包括单味中药、中药单体、复方中药。抑制基质金属蛋白酶的抗癌中药研究刚刚开始,其机理的研究还很不完善,更缺乏系统的探讨。随着研究方法的不断改进,实验技术的不断提高,这一新方法必将取得丰硕成果。     

生肌玉红胶原抑菌与调节创面金属蛋白酶的实验研究

目的:观察生肌玉红胶原的抑菌与调控创面金属蛋白酶而促进慢性创面愈合的作用机制。方法:采用试管法与平皿法实验以评估生肌玉红胶原强度,以大鼠感染性创面测定创面肉芽组织中羟脯氨酸、MMPs(MMP-1、MMP-2、MMP-9)含量,以电子照相法采用Image J软件分析测定创面面积。结果:生肌玉红胶原显著抑制外科临床常见细菌与耐药菌生长,对各种细菌的最小抑菌浓度为0.25 g/m L,抑菌范围为10.5~19.5 mm;在大鼠感染性慢性创面造模后3d起生肌玉红胶原显著抑制创面肉芽MMP1、MMP2及MMP9含量(P0.01),其中以MMP9表达影响疗效最显著;在造模后第7、15天生肌玉红胶原组创面羟脯氨酸含量显著高于对照组与胶原组(P0.05)。造模后第3~15天,生肌玉红胶原组创面面积显著小于对照组与胶原组(P0.05),造模后15 d,胶原组创面面积亦显著小于对照组(P0.05)。结论:生肌玉红胶原通过抑制外科临床常见细菌与耐药菌感染,降低创面金属蛋白酶分泌,促进肉芽羟脯氨酸合成而加速慢性创面愈合。     

清肝活血方对酒精性肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶的调控作用

目的 通过观察清肝活血方及其拆方对酒精性纤维化大鼠基质金属蛋白酶-2、9( MMP-2,9)和1型基质金属蛋白酶抑制物( TIMP-1)的调控作用,探讨清肝活血方及其拆方治疗酒精性肝纤维化的作用机制.方法 雄性SD大鼠随机分为空白对照组、CCl4组(各10只)和造模组(110只).造模组用白酒为主的复合因素进行干预.8周后造模组随机分为模型组(25只)、清肝活血方组、清肝方组及活血方组各15只,在实验第4、8、10周各取8只模型大鼠做病理分析以监测模型进展,余大鼠在造模中死亡.各治疗组分别加用相应药物灌胃,分别为4.75、1.50、3.25 g/kg.12周末处死大鼠,采用蛋白印迹法、荧光定量PCR、免疫荧光法检测MMP-2、MMP-9、TIMP-1蛋白及mRNA表达.结果 与空白对照组比较,模型组MMP-2、MMP-9、TIMP-1表达明显升高(1.81±0.28vs.0.53 ±0.04,1.60 ±0.16vs.0.45±0.05,1.20±0.02vs.0.35±0.07,P＜0.01).与模型组比较,清肝活血方及其拆方组TIMP-1表达均降低(0.56±0.05、0.67±0.02、0.70±0.02vs.1.20±0.02),MMP-2、MMP-9表达提高(4.18±0.53、2.70±0.40、2.38±0.22vs.1.81±0.28;3.31 ±0.06、2.56±0.20、1.87±0.05vs.1.60±0.16,P＜0.05,P＜0.01),全方组调控优于各拆方组(P＜0.05,P＜0.01).结论 清肝活血方及其拆方治疗酒精性肝纤维化的作用机制可能与调控MMP-2、9有关.     

益气除痰方对肺癌系列基质金属蛋白酶表达的影响

目的 研究益气除痰方对人肺腺癌A549细胞及LEWIS肺癌小鼠肿瘤组织基质金属蛋白酶MMP1、MMP2、MMP9、MMP14等促肿瘤转移因子表达的影响.方法:培养A549细胞,20%益气除痰方含药血清干预,划痕实验分析细胞侵袭、转移能力的改变,RT-PCR检测其对A549肺癌细胞MMPl、MMP2、MMP9、MMP14 mRNA基因表达的影响.建立C57BL/6)小鼠Lewis肺癌模型,治疗组每日予益气除痰方3.0 g·kg-1,处理,灌胃21d后,处死,检测肿瘤体积、重量、肺转移灶,并用免疫组化法比较各组肿瘤组织MMP2、MMP14的表达.结果:20%益气除痰方含药血清可抑制A549细胞的侵袭和转移能力,并能降低MMP2、MMP14转录水平基因的表达,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01),MMP1、MMP9 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05);益气除痰方3.0 g·kg-1组LEWIS肺癌小鼠肿瘤体积、重量、肺转移灶数明显降低,肿瘤组织MMP2,MMP14的表达降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:益气除痰方能抑制肺腺癌A549细胞的侵袭和转移,降低MMP2,MMP14 mRNA转录水平的表达;能抑制LEWIS肺癌小鼠肿瘤肺转移,降低其肿瘤组织MMP2,MMP14的表达,抗转移可能是益气除痰方治疗肺癌的作用机制之一.     

丹参对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶和骨桥蛋白基因表达及细胞增殖的影响

目的：探讨丹参（SAL）对氧化低密度脂密度（ox-LDL)诱导体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）基质金属蛋白酶（MMP）和骨桥蛋白（OPN）基因表达的影响，以提示SAL抑制VSMC增殖和迁移的作用机理。方法：应用Northern,Western印迹和斑点杂交检测SAL对MMP-2，MMP-9和OPN表达的影响；采用^3H-TdR掺入实验，检测VSMC增殖活性。结果：SAL或复方丹参（SALC）注射液对ox-LDL诱导的MMP-2和MMP-9表达以及OPN的合成与分泌具有明显的下调作用。且可显著抑制VSMC的DNA合成；将ox-LDL与SAL或SALC注射液共孵育1h后再处理VSMC，ox-LDL对上述基因表达和VSMC增殖的诱导作用基因消化。结论：SAL抗VSMC增殖与迁移的作用与其调整基质代谢有关。     

赤芍川芎有效部位对兔动脉粥样硬化基质金属蛋白酶的影响

目的 观察芎芍胶囊（XSC,赤芍川芎有效部位）对兔动脉粥样硬化模型中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)表达水平的影响。     

针刀松解颈周腧穴对大鼠退变颈椎间盘细胞外基质金属蛋白酶-1、3及其抑制因子-1基因表达的影响与髓核超微结构观察

目的:通过观察针刀松解颈周腧穴对大鼠退变颈椎间盘细胞外基质金属蛋白酶-1、3(MMP-1、MMP-3)及其抑制因子-1(TIMP-1)基因表达的影响及髓核超微结构,探讨其缓解颈椎间盘退变的作用机制。方法:参照动静力失衡性大鼠颈椎间盘退变造模方法,将造模成功大鼠随机分为模型组、颈周腧穴组、夹脊穴组、药物组,并设空白对照组,每组15只。夹脊穴组取C2-7椎旁夹脊穴,颈周腧穴组取颈周的双"脑空"穴、"脑户"穴、"大椎"穴、双"曲垣"穴、双"天宗"穴,进行针刀干预,每5d治疗1次,各治疗3次;药物组采用布洛芬胶囊+颈复康颗粒灌胃,每天1次,治疗10d。各组继续喂养20d后处死采集标本,用定量多聚酶链反应检测大鼠颈椎间盘MMP-1、MMP-3及TIMP-1的基因表达,并在电镜下行髓核超微结构观察。结果:MMP-1、MMP-3的基因表达检测,模型组高于空白组(P0.05),颈周腧穴组、夹脊穴组、药物组低于模型组(P0.05),颈周腧穴组、夹脊穴组低于药物组(P0.05);TIMP-1的基因表达检测,模型组低于空白组(P0.05),颈周腧穴组、夹脊穴组高于模型组及药物组(P0.05)。髓核超微结构观察:椎间盘髓核退变程度为空白组颈周腧穴组/夹脊穴组药物组模型组。结论:针刀松解颈周腧穴可通过调控MMP-1、MMP-3及TIMP-1的基因表达,影响椎间盘细胞外基质的合成和降解,从而延缓椎间盘退变。     

华蟾素通过调控基质金属蛋白酶抑制人胃腺癌细胞MGC-803侵袭与迁移

目的:探讨华蟾素对人胃腺癌MGC-803细胞的侵袭与迁移的影响及其分子机制。方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测华蟾素(10,20,40,80,160,320 mg·L~(-1))对人胃腺癌MGC-803细胞增殖的抑制影响;transwell小室法检测华蟾素对MGC-803细胞侵袭与迁移能力的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测经华蟾素作用后的MGC-803细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2),基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1),基质金属蛋白酶抑制因子-2(tissue inhibitors of metalloproteinases-2,TIMP-2)的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测经华蟾素处理后的MGC-803细胞中MMP-2,MMP-9,TIMP-1,TIMP-2的mRNA表达情况。结果:(1)MTT比色法结果显示,与空白组比较,华蟾素(10,20,40,80,160,320 mg·L~(-1))对胃腺癌MGC-803细胞的增殖具有显著抑制作用(P0.01),并且华蟾素对MGC-803细胞的抑制作用呈浓度和时间依赖。(2)transwell实验结果显示,与空白组比较,华蟾素(10,20,40 mg·L~(-1))对胃腺癌MGC-803细胞的侵袭与迁移能力具有不同程度的抑制作用(P0.05)(3)Real-time PCR和Western blot实验结果显示,与空白组比较,华蟾素(10,20,40 mg·L~(-1))能够下调MMP-2,MMP-9蛋白和mRNA的表达,上调TIMP-1,TIMP-2蛋白和mRNA的表达。结论:华蟾素能明显抑制胃腺癌MGC-803细胞的侵袭与迁移,其机制可能与上调TIMP-1,TIMP-2的转录水平,进而下调MMP-2,MMP-9蛋白水平有关。     

肺气肿肺气虚证模型大鼠肺组织中基质金属蛋白酶表达的变化

目的:观察基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9在肺气肿肺气虚证模型大鼠支气管和肺组织中的表达,探讨基质金属蛋白酶在肺气肿肺气虚证发病中的变化。方法:将SD大鼠90只随机分为对照1个月、2个月、3个月组和模型1个月、2个月、3个月组,采用气管内注入脂多糖(LPS)和烟熏双因素复合制作肺气肿肺气虚证大鼠模型,采用免疫组织化学染色SABC方法,检测肺组织中MMP-2和MMP-9的表达。结果:模型组大鼠支气管和肺组织中MMP-2和MMP-9在造模1个月后开始表达,并逐步升高,至造模3个月时表达明显增多,表达强度明显增强,各个月模型组与同时段对照组相比,均有显著差异。结论:MMP-2和MMP-9在肺气肿肺气虚证模型大鼠支气管和肺组织表达增多,活性增强。在肺气肿形成、发展、炎症持续方面起了重要作用,是肺气肿肺气虚证发病的主要机制之一。     

中药抑制基质金属蛋白酶治疗慢性肾脏病的研究进展

细胞外基质过度沉积是损害肾组织导致慢性肾脏疾病的重要原因。基质金属蛋白酶(MMPs)是参与细胞外基质降解的重要的蛋白酶系统。大量实验证明多种肾脏疾病的发生、发展与基质金属蛋白酶异常相关,而多种中药单体及中药复方可以从多靶点、多层次来抑制基质金属蛋白酶,从而平衡细胞外基质的作用,治疗慢性肾脏病。对慢性肾脏病发病机制及中药抑制基质金属蛋白酶相关实验进行综述,旨在为临床研究及应用提供理论依据。     

四逆散药对及全方对刀豆蛋白A活化的小鼠脾细胞移动和粘附能力的影响

目的：考察四逆散药对及全方对刀豆蛋白A(Con A)活化的小鼠脾细胞移动和粘附能力的影响并就药对和全方的作用进行比较。方法：明胶酶谱分析检测基质金属蛋白酶的活性和结晶紫染色法检测细胞粘附能力。结果：四逆散药对及全方体外给药能明显抑制Con A活化的小鼠脾细胞分泌基质金属蛋白酶-2和9以及粘附Ⅰ型胶原的能力，但对正常小鼠脾细胞分泌基质金属蛋白酶-2和9无明显影响。在三个药对中，以柴胡-芍药的作用最为显著，并与四逆散全方的作用较为一致。结论：四逆散对体外过度活化的脾细胞移动和粘附能力有抑制作用，全方的这种作用主要由柴胡-芍药所担当。     

山楂消脂胶囊对非急性期冠心病痰瘀证患者超敏C反应蛋白及基质金属蛋白酶的影响

目的 观察山楂消脂胶囊对非急性期冠心病痰瘀证患者的血清超敏C反应蛋白(Hs-CRP)、基质金属蛋白酶2 (MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的影响,以探讨其稳定动脉粥样硬化斑块的作用.方法 将符合诊断标准的110例非急性期冠心病痰瘀证患者随机分为2组.对照组(54例)予基础治疗+血脂康,治疗组(56例)予基础治疗+山楂消脂胶囊,2组均不用他汀类调脂药,疗程6个月.观察2组患者急性心血管事件(MACE)发生率,同时测定治疗前后Hs-CRP、MMP-2、MMP-9、痰浊证计分、血瘀证计分以及MACE发生后各指标的变化.结果 山楂消脂胶囊组的血瘀证、痰浊证计分较治疗前明显降低,优于对照组(P＜0.01),MACE发生率与对照组比较,无统计学意义(P＞0.05).山楂消脂胶囊组可明显降低Hs-CRP、MMP-2、MMP-9,与治疗前比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 山楂消脂胶囊可通过改善冠心病患者的痰浊血瘀状态,抗炎症反应,降低细胞外基质中的MMP-2、MMP-9水平的表达,稳定冠状动脉粥样硬化斑块,减少非急性期冠心病痰瘀证患者MACE的发生.     

抗纤Ⅰ号方药对实验性肝纤维化大鼠组织Ⅰ、Ⅲ型胶原基质金属蛋白酶及其抑制因子mRNA表达的影响

目的:从分子水平研究抗纤Ⅰ号方剂治疗肝纤维化的作用机理。方法:利用CCl4、高脂饮食和乙醇等综合因素制造大鼠肝纤维化模型。模型成功后将大鼠随机分为肝纤维化模型组、中药和西药治疗组。分别治疗42 d后,检测各组大鼠肝组织病理学变化、血清肝功能和肝纤维化指标、免疫组化检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的变化、半定量PCR检测肝组织MMP1、TIMP-1 mRNA表达量的变化。结果:中药组肝组织病理学变化明显优于模型组和西药治疗组;血清肝功能指标中药治疗组ALT和AST(108±24,142±23)显著低于模型组(242±34,248±20)和西药对照组(123±39,216±25,P<0.05);肝纤维化指标中药治疗组HA和LN(270±79,62±10)显著低于模型组(769±67,109±26)和西药对照组(346±62,79±13,P<0.05);中药治疗后能够明显减少肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原以及TIMP-1 mRNA的表达量,但MMP1的表达量无显著差异。结论:抗纤Ⅰ号通过下调TIMP-1mRNA减弱对MMP1的抑制作用,使Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解增强而使肝纤维化逆转。     

三七超微粉与细粉中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rb1的含量比较研究

目的测定三七超微粉中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rb1的含量,为三七超微粉质量评价提供依据。方法采用高效液相法,Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水二元梯度洗脱;流速:1 mL.min-1;检测波长:203 nm;柱温:25℃。结果三七超微粉中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的平均含量均高于三七细粉,两者间的含量有显著性差异。结论超微粉质量优于细粉。本实验的含量测定方法简便、准确,可为三七超微粉的质量控制提供一定的参考依据。     

Pharmacokinetic study of ginsenosides Rb1 and Rg1 in rat by ELISA using anti-ginsenosides Rb1 and Rg1 monoclonal antibodies

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) systems using anti-ginsenoside Rb1 (G-Rb1) and Rg1 (G-Rg1) monoclonal antibodies (MAbs) were established for pharmacokinetic investigations of G-Rb1 and G-Rg1 in rat serum. The systems not only allowed sensitive detection of G-Rb1 at the level as low as 20 ng/ml and of G-Rg1 at 300 ng/ml, but showed strong capacity for detecting the two agents in a broad concentration range (20 to 400 ng/ml for G-Rb1 and 0.3 to 10 microg/ml for G-Rg1, respectively). In this respect, these assay systems are superior to other methods using thin-layer chromatography (TLC) or high-performance liquid chromatography (HPLC). In addition, another advantage of these immunoassays is the comparably low quantities of specimen required; as little as 5 microl of serum suffices the need for determination of ginsenosides. We report in this article the application of this immunoassay in pharmacokinetic study of G-Rb1.     

高效液相色谱法测定三七中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1,Rb1的含量

目的测定三七药材中三七皂苷的含量.方法采用高效液相色谱法C18色谱柱,乙腈∶水(15∶85-12 min30∶70-45 min15∶85 v/v)梯度洗脱,检测波长203 nm.结果三七R1在72.8～109 μg*ml-1的范围内(r＝0.999 1),人参Rg1在68.8～860 μg*ml-1的范围内(r＝0.999 2),Rb1在62.8～785 μg*ml-1的范围内(r＝0.999 8),线性关系良好.平均回收率大于98%,方法的变异系数小于3.0%.结论方法简便,快速,准确,重现性好,可用于三七药材中三七皂苷的含量测定.     

Notch1和细胞间黏附分子-1在原发性肝癌细胞中的作用

目的探讨Notch1和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在原发性肝癌中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学SP法检测34例原发肝癌组织、14例癌旁正常肝组织中Notch1和ICAM-1的表达情况。结果原发性肝癌组织中Notch1和ICAM-1表达定位于细胞核和/或细胞质,Notch1的表达低于癌旁正常肝组织,ICAM-1的表达明显高于癌旁正常肝组织(P<0.05)。二者的表达与性别、年龄、肿瘤大小等没有相关性(P均>0.05),与淋巴结转移、组织分化及癌栓等有关(P均<0.05);二者之间阳性表达呈明显负相关(P<0.05)。结论 Notch1和ICAM-1的表达与原发性肝癌的发生、发展和转移密切相关。     

HPLC-ELSD法测定通迪胶囊中三七皂苷R_1和人参皂苷Rg_1、Rb_1的含量

目的:采用HPLC-ELSD法测定通迪胶囊中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Rb1的含量。方法:色谱柱DiamonsilC18(150mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-水,梯度洗脱0～5min,乙腈20%～25%;5～20min,乙腈25%～45%;流速:1.0mL.min-1;柱温:25℃;漂移管温度:70℃;载气流速2.0L.min-1。结果:三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Rb1进样量分别在0.3～1.5μg(r=0.9997),1.5～7.5μg(r=0.9998)和1.5～7.5μg(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为101.8%、102.1%、103.6%;RSD分别为1.6%、2.1%、1.8%。结论:HPLC-ELSO法结果准确,便于操作,可用于通迪胶囊的质量控制。     

人参皂甙Rb1和Rg1对幼小鼠性腺和副性腺的影响

幼年小鼠皮下注射人参皂甙Ｒｂ１６ｍｇ／ｋｇ、Ｒｇ１２５和５０ｍｇ／ｋｇ连续１４天,结果Ｒｂ１能能使正常雌性小鼠子宫及雄性小鼠精囊明显增重,Ｒｇ１也可使正常雄性小鼠精囊明显增重,但却不能阻止去势小鼠副性腺的萎缩。提示人参皂甙本身无性激素样作用,对副性腺的增重作用需要有性腺的存在